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Study Sponsor: Issue Date: Document Reference No.: ELFATOCHEM 14-Dec-95 95/SAEK/1372/AMP AR226-3033 Bacterial Growth Inhibition Author(s): A.M. Petit H. Thiebaud English Translation of Report Summary for DuPont Chemical Solutions Enterprise 27-Jan-OS aespEssr TECHNICAL SUMMARY Determination effected using of growth inhibition of Pseudomonas putida bacteria b^_ the operating procedure described in proposed standard ISO/DIS 1_07_12__(fffdoc 118AfnorT90B). The method consists in exposing the bacteria for 16 hours to a range of concentrations of the substance being studied. The inhibiting effect observed on Pseudomonas putida is determined by comparing the cell growth at various dilutions of the substance with the cell growth obtained for a culture under the same conditions but which does not contain the test substance. The cell growth is determined by turbidimetry using a spectrophotometer. The percent cell growth inhibition H is given by the relation : H=((Bk-Bn)/(Bk-BO))x100 where Bk and Bn are the turbidities, respectively, in the control and test flasks (after deduction of non-inoculated whites) and BO is the turbidity at t = 0 in the control flasks. Under the test conditionsi^^^^^--------presents a: CEso 16 h = 140 mg/1, with a confidence interval at 95 % =130-160 mg/l and a CEio -16 h = 79 mg/1, with a confidence interval at 95 % =67-90 mg/1 The reference substance, 3,5-dichlorophenol, has a CEso -16 h equal to 14 mg/l and a CEio -16 h equal to 6.6 mg/l The validity criteria mentioning that the inoculum used in the control grew by at least a factor of 60X for the duration of the test was respected (growth factor = 216). A. M. PETIT H. THIEBAUD Elf Atochem S.A. DCRD Centre d'Application de Levallois Service Analyse Environnement Levallois, Ie 14/12/95 Reference : 95/SAER/1372/AMP Sequentiel: 814020 RAPPORT D'ETUDE TITRE: U----------------J----D1ETERMINATION DE [.INHIBITION DE LA CROISSANCE DES BACTERIES PSEUDOMONAS PUTIDA AUTEUR(S): H THIEBAUD ; Coll. A.M. PETIT RESUME DOCUMENTAIRE : DetermQatjonjje 1'inhibitjgn de la croissance des bacteries Pseudomonas putida papJIJBl------Nen suivant Ie mode operatoire decrit dans la methode duprojet de norme fSOTDIS 10712 (cf. doc 118 AfnorT90 B). MOTS CLES : ISO/DIS 10712 Mnhibition de la croissance des bacteries Pseudomonas putida; DESTINATAIRES : M. DEVAUX (DCFS) DOC RCHIER TECH (M. TAISNE) Copies : Chef de Service. Responsable des Archives, Laboratoire d'ecotoxicologie (copie coll.). Secretariat. Service Ecotoxicite et Surete des Produits (DSEP) RESUME TECHNIQUE La determination dej'mhibition de la croissance des bacteries Pseudomonas putida par Ie ..d^BHHHEJa ete realisee en suivant Ie mode operatoire decrit dans Ie projet de norme ISO/DIS 10712 (cf. doc 118 Afiior T90 B). La methode consiste a exposer pendant 16 heures les bacteries a une gamine de concentrations de la substance etudiee. L'effet inhibiteur sur Pseudomonas putida est determine par comparaison de la croissance cellulaire des diverses dilutions de substance avec la croissance cellulaire obtenue pour une culture realisee dans les memes conditions mais ne contenant pas de substance d'essai. La croissance des bacteries est mesuree par turbidimetrie avec un spectrophotometre. Le pourcentage d'inhibition de la multiplication cellulaire, H, est donne par : H = Bk - Bn)/(Bk - B0))x 100 avec Bk et Bn, les turbidites respectivement dans les flacons temoins et dans les flacons d'essai (apres deduction des blancs non inocules) et BO, la turbidite a t = 0 dans les flacons temoins. Dans les conditions de l'etude|flHBIII------Q}resente une : CE 5o-16h = 140 mg/1. avec un intervalle de confiance a 95 % egal a 130 - 160 mg/1, et une CE in-16h = 79 mg/1. avec un intervalle de confiance a 95 % egal a 67 - 90 mg/1. La substance de reference, le 3.5-dichlorophenol, presente une CE 5o-I6h egaie a 14 mg/1 et une CE )o-16 h egale a 6.6 mg/1. Le critere de validitc mentionnant que I'inoculum utilise dans le temoin s'est multiplie par au moins un facteur 60 pendant la duree de 1'essai a etc respecte (facteur de croissance = 216). A. M. PETIT "fr*,c-afrin avrmvw ffWAfnrhfSm 3/3 Substance etudiee Substance de reference Pemandcur dc I'clude: Dirccieur dc I'clude Rcaltsaiion.lcchnKLuc Dale du debul dc I'cssai Dale dc la redaction du rapporl d'c'.ude : Norn: 3-5 DICHLOROPHENOL Reference lot: ALDRICH M. DEVAUX (DCFS) H. THIEBAUD A M. PETIT 4/10/95 14/12/95 Prcpiiralion dc I'cchamillon : Lc jour de I'cssai. unc solution mere a lg/l dans Ie milieu d'essai esl preparee. Mesurcs dcs pH Conccmration <l mg/1 30X mg/1 pH en debut d'essai 6.01 7 pH en fin d'essai 6.43 7.66 Organiisnicjcsi I'scuthm-inas putida : Inslitui PASTEUR 1(13281 MalcncI Gamine dc concentrations Vcrrcne sleriliscc (Eriens de 50 ml) Spcctropholometrc Perkin -Elmer lambda 5 Agilaleur ihennoslalc 21C */-1C Volume (ml) Solunon mere ou solution mere dilucc dc la substance 3.08 2.2 147 105 0.75 0 (facicur dc dilution cntrc parentheses) Eau 4.92 5.80 6.53 6.95 7.25 8 Milieu d'essai 1 1 1 1 1 1 Inoculum 1 1 1 1 I 1 Concentration (ing/I) 308 220 147 105 75 0 . Bo@ net a8 Twa e^ Ce document estnoUspmpiiSSInepeut are ncopS. ni cofnmuniqii6 S des fefs sans autorisafcn ffl^aresse da'/ltochem.