Document pBODbQ7jXxog2K6BnYDNnx12d

FINAL REPORT STSTUUDDYYTTIITTLLEE A A DDEEVVEELLOOPPMMEENNTTAALL TTOOXXIICCIITTYY SSTTUUDDYY OOFF 331133440011 IN IN RATS RATS \ EEPPAAGGUUIIDDEELLIINNEENNUUMMBBEERR | -~ CREAN) 40 CFR 798.4900 \ SSTTUUDDYYDDIIRREECCTTOORR Donald G. Stump, Ph.D. Donald G. Stump, Ph.D. STSTUUDDYYIINNIITTIIAATTEEDDOONN OOccttoobbeerr 1100,, 11999966 STSTUUDDYY CCOOMMPPLLEETTEEDD OONN MMaayy 3300,, 11999977 PPEERRFFOORRMMIINNGGLLAABBOORRAATTOORRYY 1407 George Road W WIILL RReesseeaarrcchh LLaabboorraattoorriieess,, IInncc.. 1407 George Road AAsshhllaanndd,, OOHH 4444880055--99228811 LLAABBOORRAATTOORRYYSSTTUUDDYYNNUUMMBBEERR WWIILL--115577001166 SSPPOONNSSOORRPPRROOJJEECCTTNNUUMMBBEERR `GGPP9966--003322 SSPPOONNSSOORR pPaaggee 1toorfs5s8 59! --WeWIlLL--eRREESS--EEAARR--CCHH--LLAABB--OORRAA--TTOOR--RIIEESS--,,IINNC--C.. AAS--Suubb--ssidiia--rdyooiff--GaGrrerea--yatt LLaa--kkeess--CChheem--micicaa--ll CCoor--rpo)roar--taitioonn,--, AAssh--hllaannd--d,,OOH--H44448--80055----99228811--((4411--99)) 22--8899--88--770000 EExSxh1hi0bib2iitt M_MND1062651 2792 3M_MN01062651 State of Minnesota v. 3M Co., Court File No. 27-CV-10-28862 22779922..00000011 waLs7016 WIL-157016 ity Stef 213401 A Developmental Toxicity Study of 313401 in Rats STATEMENT OF NO DATA CONFIDENTIALITY CLAIMS STATEMENT OF NO DATA CONFIDENTIALITY CLAIMS y NNoo ccllaaiimm ooff ccoonnffiiddeennttiiaalliittyy iiss mmaaddee ffoorr aannyy iinnffoorrmmaattiioonn ccoonnttaaiinneedd iinn tthhiiss ssttuuddyy oonntthheebbaassiiss | o is fulingwithin the scope of FIFRA 10XXA) ) o ( J its falling within the scope of FIFRA 10(d)(1)(A), (B) or (C). -~ Director of Regulatory Affairs Director of Regulatory Affairs ((ttiittllee)) 2c? 22779922..00000022 awotos2652 3M MN01062652 `WWIILL--115577001166 `ADA Deevelvopmeentall TToooxxicicipittyySStmtuuddyeyooffn3311334t40011iainnRRlaattss CCOO1MVPILPLIIAANNCCEE SSTTAATTEEMMEENNTT `TThhiiss ssttuuddyy,, ddeessiiggnnaatteedd W WIILL--115577001166,, wwaass ccoonndduucctteedd iinn ccoommpplliiaannccee wwiitthh tthhee UUnniitteedd SSttaatteess ( EEnnvviirroonnmmeennttaall PPrrootteeccttiioonn AAggeennccyy 0(~EPPAA)) GGoooodd LLaabboorraattoorryy PPrraaccttiiccee SSttaannddaarrddss ((4400 CCFFRR PPaarrtt | 116600)),, OOccttoobbeerr 1166,, 11998899;;tthhee JJaappaanneesseeMMiniinsisttrryyooff AAggrriiccuullttuurree,, FFoorreessttrryyaanndd FFiisshheerriieess ((MMAAFFFF)) | | GGoooodd LLaabboorraattoorryy PPrraaccttiiccee SSttaannddaarrddss ((5599 NNoohhSSaann NNoo.. 33885500)),, AAuugguusstt 1100,, 11998844;; tthhee OOrrggaanniizzaattiioonn +~~foorr EEccoonnoommiicc CCooooppeerraattiioonn aanndd DDeevveellooppmmeenntt ((OOFE_C2DD)) PPrriinncciipplleess ooff GGoooodd LLaabboorraattoorryy PPrraacctit~i--c-e~ " [CC((8800)) 3300 ((FFiinnaall)) AAnnnneexx 22)],, 11998811;; tthhee SSttaannddaarrdd OOppeerraattiinngg PPrroocceedduurreess ooff WWIILL RReesseeaarrcchh LLaabboorarattoorriieess,, IInncc..;;aannddtthheepprrotoocotlaassoaapcppprrooovvleeddbbyytthheessppoonnssoorr.. TThheepprroottooccooll ffoorr tthhiiss ssttuuddyy wwaass designed ttoo bbee iinn aaccccoorrddaannccee wwiitthh tthhee UUnniitteedd SSttaatteess EEnnvviirroonnmmeennttaall PPrrootteeccttiioonn AAggeennccyy ((EEPPAA))-| FFeeddeerraall IInnsseeccttiicciiddee,, FFuunnggiicciiddee aanndd RRooddeeanttiicciiddee AAcctt ((FFIIFFRRAA)) PPeessttiicciiddee AAsssseessssmmeenntt GGuuiiddeelliinneess | ((SSuubbddiivviissiioonn FF,, sseerriieess 8833--33)),, 4400 CCFFRR 779988..44990000;; tthhee OOFE.C/2DD GGuuiiddeelliinneess ffoorr TTeessttiinnggooffCChhememiciaclasls,, | HHeeaalltthh EEffffeeccttss TTeesstt GGuuiiddeelliinneess,, SSeeccttiioonn 441144,, MMaayy 1122,, 11998811;; aanndd tthhee JJaappaanneessee MMAAFFFF | AAggrriiccuullttuurraall CChheemmicicaall LLaawwss aanndd RReegguullaattiioonnss TTeessttiinngg GGuuiiddeelliinneess ffoorr TTooxxiiccoollooggyy SSttuuddiieess (5J9 `NNoohhSSaann NNoo.. 44220000)),, JJaannuuaarryy 2288,, 11998855.. --~ Fold % Mp DDoonnaallSddtuGGd..y SSDtiturumemcppt,,orPPhh..DD.. Study Director TT ApplaanuSubmier ApplicantlSubmitter (3Bu/e47 Date Yevd ~aattee DDaattee + 52% 22779922..00000033 S3MM_MMNNO011006622665533 `WIL-157016 `DAA DeevelvopmeentallTToxooixciicpittyySSmttuuddyyeooffn331133t440011iainnRRaltatss FFLLAAGGGGIINNGG SSTTAATTEEMMEENNTT (T(Thhiissppaaggee wwaass iinntteennttiioonnaallllyy lleefftt bbllaannkk;; cclliieenntt wwiilll iinnsseerrtt aapppprroopprriiaattee ssttaatteemmeenntt..)) + 524 22779922..00000044 W3M_MNMON100160622665544 wiLisTol6 WIL-157016 AD A De evelv opme ental lTTooxo ixciciip ttyy. SSm ttuuddyyeooffn 331133t 440011ia innRRal attss T`TAABBLLEE OOFF CCOONNTTEENNTTSS PPaaggee 1. SSuummmmaarryy I. Objective 188 0. SOtbujdeyctDiveesign u10 IV.ExSpteurdiymDenestiagln Procedures 211 A Inroducion Experimental Procedures 12 BA.. "IntrToadunecdtCioosnntrtol Aricles 12 B. Test and Control Articles 12 11. . TTeessttAArtriticclleeIIddeenntitiffiiccaattiioonn 1122 2. Vehicle Control Arle Litfcaion 2. Vehicle Control Article Identification 12 3. Preparation 5 3. Preparation 13 44.. AAddmminiinsitstrraattiioonn 1133 C. Animal RecandeAcicimpatiton 1 55.. SSaammpplliinngg aanndd AAnnaallyysseess 1144 C. Animal Receipt and Acclimation 14 DD.. AAnniimmaall HHoouussiinngg 1155 E. Dit, Drinking Water and Mainicnance is E. Diet, Drinking Water and Maintenance 15 F. Environmental Conditions 1s F. Environmental Conditions 15 Breeding Procedures 6 GG.. AAssssiiggnnmmeenntt ooff AAnniimmaallss ttoo TTrreeaattmmeenntt GGrroouuppss aanndd Breeding Procedures 16 HH.. MMaatteermnaall OObbsseerrvvaattiioonnss DDuurriinngg GGeessttaattiioonn 1166 2. Body WeigandhGrtavsid Uterine Weights wv 11.. CClliinniiccaall OObbsseerrvvaattiioonnss aanndd SSuurrvviivvaall 1166 2. Body Weights and Gmvid Uterine Weights 17 I. Gestion Day 20 Laparohystescomy wv 33.. FFoooodd CCoonnssuummppttiioonn 1177 I. Gestation Day 20 Laparohysterectomy 17 JJ.. FFeettaall MMoorprphhoolologgiiccaall EExxaammiinnaattiioonn 1188 KK.. SSttaattiissttiiccaall AAnnaallyysseess 1199 LL.. DDaattaa RReetteennttiioonn 22O0 5 5 22779922..00000055 awotos2655 3M MN01062655 WWIILL--115577001166 PPaaggee V.Vo RReessuullitss 221 - AA.. CClliinniiccaall OObbsseerrvvaattiioonnss aanndd SSuurrvviivvaall 221 BB.. BBooddyy WWeeiigghhttss aanndd GOrraavviidd UUtteerriinnee WWeeiigghhttss 221 CC.. FFoooodd CCoonnssuummppttiioonn 222 DD.. NNeeccrrooppssyy DDaattaa 223 EE.. GGeessttaattiioonn DDaayy 2200 LLaappaarroohhyysstteerreeecttoommyy DDaattaa 223 FF.. FFeettaall MMoorprphhoolologgiiccaall DDaattaa 223 11. . FEx_t,xetremnaall MMaallffoorrmmaattiioonnss aanndd VVaarriiaattiioonnss 224 22.. VViisscceerraall MMaallffoorrmmaattiioonnss aanndd VVaarriiaattiioonnss 224 33.. SSkkeelleettaall MMaallffoorrmmaattiioonnss aanndd VVaarriiaattiioonnss 22%4 44.. SSuummmmaarryy ooff EExxtteerrnnaall,, VViisscceerraall aanndd SSkkeelleettaall EExxaammininaattiioonnss 225 VI. DDiissccuussssiioonnaannddCConocnlculussiioonnss 226% VIL KKeeyy SSttuuddyy PPeerrssoonnnneell aanndd RReeppoorrtt SSuubbmmiissssiioonn 2283 VIL QQuuaalliittyy AAssssuurraannccee UUnniitt SSttaatteemmeenntt 3300 IX. RReeffeerreenncceess 3311 % [2 22779922..00000066 33MM_MMNND011006622665566 WIL157016 WIL-157016 ADA DeevelvopmeentallTToooxxiicciiptt-ySStmtuudd,yeooffn331133t440011iainnRRaltasts IINNDDEEXX OOFF TTAABBLLEESS RPaaggee 11.. SSuummmmaarryyooffMMataeterrnnaall SSuurrvviivvaall aanndd PPrreeggnnaannccyy SSitattuuss 333 22.. SS(DuuammimlmyaarEryxyaoomfifnCCaltliiinnoiinccsaal)l FFiinnddiinnggss:: TToottaall OOccccuurrrreennccee//NNoo..ooffAAnniimmaallss 3 (Daily Examinations) 34 33.. MMeeaann BBooddyy W Weeiigghhttss ((GGrraammss)) DDuurriinngg GGeessttaattiioonn 33s5 44.. Mean Body Weight Changes (Grams) During Gestion Mean Body Weight Changes (Grams) During Gestation 337 55.. MMeeaann GGrraavviidd UUtteerriinnee WWeeiigghhttss aanndd NNeett BBooddyy WWeieigghhtt CChhaannggeess ((GGrraammss)) ~~ 3399 66.. MMeeaann FFoooodd CCoonnssuummppttiioonn DDuurriinngg GGeessttaattiioonn ((GGrraammss//AAnniimmaall//DDaayy)) "40 77.. MMeeaann FFoooodd CCoonnssuummppttiioonn DDuurriinngg GGeessttaattiioonn ((GGrraarmnss//KKgg//DDaayy)) 42 8. SummaryofMean Fetal Data a the Scheduled Necropsy " 8. Summary of Mean Fetal Data at the Scheduled Necropsy 44 99.. SS(uu%mmPmmeararrLyyoiotffe)MMeeaann FFeettaall DDaattaa aatt tthhee SScchheedduulleedd NNeeccrrooppssyy 45 45 (% Per Litter) 1100.. Number Number ooff FFeettuusseess aanndd LLiittteerrss wwiitthh MMaallffoorrmmaattiioonnss -- SSuummmmaarryy 448 1111.. MMeeaannLiLtittteerrPPrrooppoortrtiioonnss ooff MMaallffoorrmmaattiioonnss -- SSuummmmaarryy ((%%PPeerrLLititeterr)) 049 1122.. NNuummbbeerr ooff FFeettuusseess aanndd LLiitttteerrss wwiitthh VVaarriiaattiioonnss -- SSuummmmaarryy 53 53 1133.. MMeeaann LLiittteerr PPrrooppoorrttiioonnss ooff VVaarriiaattiioonnss -- SSuummmmaarryy ((%% PPeerr LLiitttteerr)) 454 a-7- ga 22779922..00000077 M3M_MNMON100160622665577 W`WIILL--115577001166 A Developmental Toxicity Study of 313401 in Rats I. SSUUIMVIMMAARRYY The test article, 313401, in the velicle, 1% carboxymethylcelulose (CMOY0.1% - `TThheeppootetennttiiaallmmataeterrnnaalltotoxixciciittyyaannddddeevveellooppmmeennttaall ttoxoicxityioofcf33i1133t4400y11 wweerree eevvaalluuaatteedd.. The test article, 313401, in the vehicle, 1% carboxymethylcellulose (CMC)/0.1% aly from gestion ppoollyyssoorrbbaattee 8800,, wwaass days 6 through aaddmmininiisstteerreedd ttoo 1S.tthhrreeee Dosage ggrroouuppss ooff 2255 levels were 4, 16 and 32 mg/kg/day bbrreedd CCrrll:C:CDD((SSDD))BBRR rraattss oonnccee addamiliynifsrtoemredgeasttaatidoonsedavyoslu6mtehroofughml1k5g.. DAosacgoneculervreelnst wcoenrtero4l, g1r6ouapndco3m2pomsge/dkgof/d2a5y abdremdinfiesmtearleedsarteacediovseed vtohlumveeicolfe5, m1l%/kgC. MCA/c0o.n1c%urrpeonltycsoornbtarotle g3r0o,uponcoampcoosmepdaroafbl2e5 breregdimfeenmaa1le5smrUekcgei.vedThteherouvteehoifcles,dm1i%nisCiMtiCo/n0.w1a%s oproallybsoyrgbaastteric80i,ntoubnataionc,omCplairnaibcalel regimen at 5 ml/kg. The route of administration was oral by gastric intubation. Clinical `oobbsseerrvvaattiioonnss,, bbooddyy wweeiigghhttss aanndd ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn wweerree rreeccoorrddeedd.. OOnn ggeessttaattiioonn ddaayy 2200,, aa llaappaarroohhyysstteerreecctotommyy wwaass ppeerrffoorrmmeedd oonn aallll aanniimmalasls.. TThhee uutteerrii aanndd oovvaarriieess wweerree eexxaammiinneedd and and the the numbers numbers ooff ffeetuusseess,, ceaarrllyy aanndd llaatte rreessoorrppttiioonns,, otottaall iimmppllaannitaattiioonnss aanndd ccoorrppoorraa lutea were recorded. lutea were recorded. MMeeaann ggrraavviidd uutteerriinnee wweeiigghhttss aanndd nneet bbooddyy wweeiigghhtt cchhaannggeess wweerree calculated calculated ffoorr ecaacchh ggrroouupp.. TThhee ffeettuusseess wweerree wweeiigghheedd,, sseoxxeedd aanndd eexxaammiinneedd ffoorr eexxtteerrnaall,, ssoofftt sue tissue aanndd sskkeelleettaall mmaallffoorrmmaattiioonnss aanndd vvaarriiaattiioonnss.. AAllll mmaatteerrnnaall aanniimmaalls ssuurrvviivveedd tootthhee sscchheedduulleedd nneeccrrooppssyy oonn ggeessttaattiioonn ddaayy 2200;; n1o0 tteesstt aarrttiiccllee--rreellaatteedd iinntteerrnnaall ff'imnddiinnggsswweerreeoobbsseerrvveedd.. CClliinniiccaall oobbsseerrvvaattiioonnss rreelaatteeddttootetessttaartrtiicle administration were not apparent at any dos level. A reduced mean body weight gain administration were not apparent at any dose level. A reduced mean body weight gain occurred in the 32 me/ke/day group durin gestion days 9-12 and 6-16. During the occurred in the 32 mg/kg/day group during gestation days 9-12 and 6-16. During the was 72% otfh control group gain. Foodconsumpion was inibied inthe 32 mg/kg/day eennttiirree ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd((ggeessttaattiioonnddaayyss 66--1166)),, bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp was 72 % of the control group gain. Food consumption was inhibited in the 32 mglkg/day ggrroouupp dduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122,, 1122--1166 aanndd 66--1166.. FFoooodd ccoonnssuummppttiioonn ((gg//aanniimmaall//ddaayy)) ffoorr tthhee eennttiirree ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 66--1166)) wwaass rreedduucceedd bbyy 99%% iinn tthhee 3322 mmgg/lkkgg//ddaayy roup when compared t the control group value. group when compared to the control group value. Fetal ticity occurred in conjunction with the moderate maternal (oxiiy noted at Fetal toxicity occurred in conjunction with the moderate maternal toxicity noted at aaddoossee lleevveell ooff 3322 mmgg//kkgg//ddaayy.. AA rreedduucceedd mmeeaann ffeettaall bbooddyy wweeiigghhtt wwaass oobbsseerrvveedd iinn tthhee 3322 me/kgiday group. mg/kg/day group. IInntrraauutteerriinnee ggrroowwtthh aanndd ssuurrvviivvaall wweerree uunnaaffffeecciteedd bbyy tteesstt aarrttiiccllee administrationa administration at ddoosse lleevveellssooff 4 4 aanndd 1166 mmgg//kkgg//cdaayy.. TThhee mmaallffoorrmmaattiioonnss oobbsseerrvveedd iin tthhee ttrreeaatteedd ggrroouuppss wweerree ccoonnssiiddeerreedd ttoo bbee ssppoonnttaanneeoouuss iinn oorriiggiinn.. AAnn iinnccrreeaasseedd iinncciiddeennccee ooff auribued to the tet aril. `oonnee ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonn,, bbeenntt rriibbss,, wwaass oobbsseerrvveeddiinntthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp aanndd wwaass attributed to the test article. -8- 52% aM_No10E2658 3M MN01062658 22779922..00000088 WWIILL--11S577001166 IInnccoonncclluussiioonn,, nnoo mmaatteerrnnaall ttooxxiicciittyy oorr ddeevveellooppmmeennttaall ttooxxiicciittyy wwaass nnoteodaatttdoosseeelelevdveellss ooff 44aanndd 1166 mmgg//kkgg//ddaayy.. MMaatteerrnnaall ttooxxiicciittyy wwaass eexxpprreesssseedd aattaaddoossee lleevveellooff 3322 mmgg//kkgg//ddaayy bbyy aa rreedduucceedd mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn dduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122 aanndd rreedduucceedd ffoooodd `ccoonnssuummppttiioonn dduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122 aanndd 1122--1166.. DDeevveellooppmmeennttaall ttooxxiicciittyy wwaass eexxhhiibbiitteedd bbyy aa rreedduucceedd mmeeaann ffeettaall bbooddyy wweeiigghhtt iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp aanndd bbyy aann iinnccrreeaasseedd iinncciiddeennccee ooff oonnee sskkeelleettaall vvaarriiaanntt ((bbeenntt iribbss)) iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp.. FFeettaall ttooxxiicciittyy ooccccuurrrreedd iinn ccoonnjjuunnccttiioonn wwiitthh tthhee mmooddeerraattee mmaatteermnaall ttooxxiicciittyy pprreevviioouussllyy nnootteedd aatt tthhiiss ddoossee lleevveell.. BBaasseedd oonn tthhee rreessuullttss ooff tthhiiss ssttuuddyy,, aa ddoossee lleevveell ooff 1166 mmgg//kkgg/fddaayy wwaass ccoonnssiiddeerreedd to bbee tthhee NNOOAAE~LI. ((nnoo oobbsseerrvvaabbllee aaddvveerrssee eeffffeecctt lleevveell)) ffoorr mmaatteermnaall ttooxxiicciittyy aanndd ddeevveellooppmmeennttaall toorxiicciittyy.. 9 -9- S19 22779922..00000099 33MM_MMNN0011006622665599 WW'IILL--I15S7001166 o O~TIV~ TThhee oobbjjeeccttiivvee ooff tthhee ssttuuddyy wwaass ttoo ddeetteerrmmiinnee tthhee ppootteennttiiaall mmaatteerrnnaall ttooxxiicciittyy aanndd ddeevveellooppmmeennttaall ttooxxiicciityy ooff 331133440011 iinn tthhee CCrrll:C:CDD((SSDD))BBRR rraatt.. TThhee sseelleecctteedd rroouuttee ooff aaddmmininisisttrraattiioonn wwaass oorraall ssiinnccee tthhiiss iiss tthhee iinntteennddeedd rroouuttee ooff cclliinniiccaall aaddmmininisisttrraattiioonn ffoorr tthhee hhuummaann.. TThhee aanniimmaall mmooddeell wwaass sseelleecctteedd oonn tthhee bbaassiiss ooff aavvaaiillaabbiilliittyy ooff hhiissttoorriiccaall ccoonnttrrooll ddaattaa aanndd ssuusscceepptitibbiilliittyy ooff tthhee ssppeecciieess ttoo kknnoowwnn ddeevveellooppmmeennttaall ttooxxiiccaannttss.. 10 -10- - 53 33MM_MMNN0011006622666600 22779922..00001100 WWIILL--115577001166 : II. STUDYDESIGN STUDY DESIGN Acclimation Period Utrsed Feies Paired vit : Untreated Females Paired with reed Resident Ves Untreated Resident Males Aonii2ml2adslsFOoObobsdseerCrvvoeenddmuDDmaapliliyy:o;oBBRooeddcyyorWWdeeeiidgghhttss and a Approprin ners Food Consumption Recorded at Appropriate Intervals 22(5514MM)aaTttreeeddatFPeeedmmOsanleecsse/GGrDrooiuuypp f(1r-o4m) GTerseattieodnODnacyesD6a1il5y from Gestation Days 6-15 LLaappasrroethnyysGseteersreeuecitooonnmiieDesas yePe2t0rof,orrnmeedd ravioUnsGriesotnatiWoenigDhatys 2R0e;corded Gravid Uterine Weights Recorded EExxtteerrnnaFallolFFleetoaleldMMoboyrrppFhbroeolsolhggiDiciaesl eEEexxiaaommniinanteiosn Followed by Fresh Dissection Heads from OncHolf tfhe Heads from One-Half of the FessinEachGroup Seconed Fetuses in Each Group Sectioned or Sof Tie Evasion for Soft Tissue Evaluation Heds from Oneaof tlhe Heads from One-Half of the FeteinEachGroup Examied Fetuses in Each Group Examined by 4 Mion Stic by a Mid-Comal Slice Al Fetal arcIs Prepared sod All Fetal Carcasses Prepared and Sine to Steal Evemiouion Stained for Skeletal Examination ae-11- <3l 22779922..00001111 M_MND1062651 3M MN01062661 W WIILL--115577001166 IIVV.. EEXXPPEERRIIM MEENNTTAALLPPRROOCCEEDDUURREESS AA.. IINNTTRROODDUUCCTTIIOONN `TThhee eexxppeerriimmeennttaall pphhaassee ooff tthhee ssttuuddyy wwaass iinniittiiaatteedd wwiitthh tthhee aassssiiggnnmmeenntt ooff mmaatteedd rraattss ttoo ttrreeaattmmeenntt ggrroouuppss oonn DDeecceemmbbeerr 1177,, 11999966,, aanndd ccoonncclluuddeedd wwiitthh tthhee llaasstt laparohysterectomy laparohysterectomy oonn JJaannuuaarryy 1100,, 11999977;; tthhee ddoossiinngg ppeerriioodd wwaass ffrroomm DDeecceemmbbeerr 2233,, 11999966,, ttoo JJaannuuaarryy 55,, 11999977.. DDoossee lleevveellss wweerree sseelleecctteedd bbaasseedd oonn tthhee rreessuullttss ooff aa preliminary preliminary rraannggee--ffiinnddiinngg ssttuuddyy wwiitthh 331133440011 ((WWIILL--1155770011551)).. BB.. TTEESSTT AANNDDCCOONNTTRROOLLAARRTTIICCLLEESS 11. . TTEESSTTAARRTTIICCLLEEIIDDEENNTTIIFFIICCAATTIIOONN TThhee tteesstt aarrttiiccllee,, 331133440011,, wwaass rreecceeiivveedd ffrroomm GGrriiffff'imn CCoorrppoorraattiioonn,, VVaallddoossttaa,, `GGeeoorrggiiaa,, oonn OOccttoobbeerr 33,, 11999966,, aass ffoolllloowwss:: IIddeenntitiffiiccaattiioonn CoNNntooa..inooeffrs Containers RReecceeiivveedd, DDeessccrriippttiioonn ExpirSSaaatmmipolpnele:D: at33e11:33446002118/97 ExpirLLAaooNttitFoNN:noo.D9.:6:a0t22e12:42L76-241228/97 [[WWIILALNLL#oo:gg 9NN6oo0..143371147700A4)] Gro1s1 sBBowotetttilegeht: 1385g Gross weight: 138.5 g LiLgigphhottwyydeeelllrlooww powder SSttaabbiilliittyy aanndd ppuurriittyy ddaattaa ffoorr tthhee tteesstt aarrttiiccllee wweerree tthhee rreessppoonnssiibbiillittyy ooff tthhee ssppoonnssoorr.. TThhee tteesstt aarrttiiccllee wwaass 9933..229977%% ppuurree.. FFoorr tthhee ppuurrppoosseess ooff ddoossee calculations, calculations, tthhee tteesstt aarrttiiccllee wwaass ccoonnssiiddeerreedd ttoo bbee 110000%% 331133440011.. TThhee tteesstt aarrttiiccllee wwaassststoorreeddaatt rroooomm tteemmppeerraattuurreeaannddwwaassccoonnssiiddeerreedd ssttaabbllee uunnddeerrtthheesseecconodnidtiitioonnss.. AA CCeenrttiiffiiccaattee ooff AAnnaallyyssiiss ffoorr tthhee tteesstt aarrttiiccllee iiss pprreesseenntteedd iinn AAppppeennddiixx AA.. AA oonnee--ggrraamm rreesseerrvvee ssaammppllee ooff tthhee tteesstt aarrttiiccllee wwaass ttaakkeenn oonn OOccttoobbeerr 2244,, 11999966,, aanndd ssttoorreedd iinn tthhee AArrcchhiivveess aatt WWIILLRReseseeaarrcchh LLaabboorarattoorriieess,, IInncc.. 22.. VVEEHHIICCLLEECCOONNTTRROOLLAARRTTIICCLLEEIIDDEENNTTIIFFIICCAATTIIOONN TThhee vveehhiiccllee ccoonnttrrooll aarrttiiccllee uutilti~ zed iinn pprreeppaarraattiioonn ooff tthhee tteesstt mmiixxttuurreess wwaass pprreeppaarreedd uussiinngg ccaarrbbooxxyymmeetthhyylcleclleulllosuelaoansnded ppaollyyssoorrbbaattee 8800 rreecceeiivveedd ffrroomm SSiiggmmaa CChheemmicicaall CCoo..,, SSt.t. LLoouuiiss,, MMisisssoouurrii.. 1-12532 22779922..00001122 33MM_MMNNO011006622666622 WWIILL--115577001166 33.. PPRREEPPAARRAATTIIOONN "TThhee vveehhiiccllee ccoonnttrrooll aanrttiicclei ffoorrmmuullaattiioonnss wweerree pprreeppaarreedd aass ffoolllloowwss.. AA ssuuffffiicciieenntt aammoouunntt ooff 11%% aaqquueeoouuss ccaarrbbooxxyymmetehthylyelceelllluulloossee ((11%% CCMMCC)) wwaass pprreeppaarreedd bbyy hheeaattiinngg ddeeiioonniizzeedd wwaatteerr ttoo aapppprrooxxiimmaatteellyy 7700CC aanndd aaddddiinngg aann aapppprroopprriiaattee aammoouunntt ooffccaarrbbooxxyymmetehtyhlycleclellluulloossee ppoowwddeerr.. TThhee mmiixxttuurree wwaass tthheenn ssttiirrrreedd uunnttiill cclleeaarr.. TThhee aapppprroopprriiaattee aammoouunntt ooff ppoollyyssoorrtbaattee 8800 wwaass ccaallccuullaatteedd ttoo aacchhiieevvee aa 00..11%% ssoolluuttiioonn aanndd aaddddeedd ttoo tthhee 11%% ecaarrbbooxxyymmetehthylycleeelllluulloossee ssoolluuttiioonn aafftteerr rreemmoovvaallooffaann iiddeennttiiccaall aammoouunntt ooff 11%% CCMMCC.. TThhee aapppprroopprriiaattee aammoouunntt ooff tthhee tteesstt aarrttiiccllee,, 331133440011,, wwaass wweeiigghheedd ffoorr eeaacchh ggrroouupp iinnttoo aa ttaarreedd,, pprreeceaalliibbrraatteedd,, pprrooppeerrllyy--llaabbeelleedd ssttoorraaggee ccoonnttaaiinneerr.. AA ssuuffffiicciieenntt aammoouunnttoofftthhee vveehhiiccllee wwaass aaddddeedd ttoo bbrriinngg tthhee vvoolluummee iinn tthhee ccoonnttaaiinneerr t1o0 tthhee ccaalliibbrraattiioonn mmaarrkk.. EEaacchh pprreeppaarraattiioonn wwaass hhoommooggeenniizzeedd oonn aa PPoollyyttrroonn PPTT 66000000 ffoorr aapppprrooxxiimmaatteellyy 22--55 mmiinnuutetess.. FFoorrmmuullaattiioonnss wweerree ppllaacceedd oonn tthhee CCaaffrarmaomToMTM oovveerrhheeaadd ssitisrtreerrss aanndd tthhee pprreeppaarraattiioonnss wweerree ssttiirrrreedd ccoonnttiinnuuoouussllyy tthhrroouugghhoouutt tthhee ssaammpplliinngg aanndd ddiissppeennssiinngg pprroocceedduurreess.. "TThhee ffoorrmmuullaattiioonnss wweerree ddiivviiddeeddiinnttooalailiqquuoottss ffoorr ddaaiillyy ddoossee aaddmminiinsitsrtraattiioonn.. DDaaiillyy aalliiqquuoottss wweerree hhoommooggeenniizzeedd aass nneeeeddeedd.. PPrreeppaarraattiioonnss ffoorr aallll ddoossee ggrroouuppsswweerreepprreeppaarreedd wweeeekkllyy ((DDeecceemmbbeerr 2233 aanndd 3300,, 11999966).). TThhee tteesstt aarrttiiccllee ffoorrmmuullaattiioonnss wweerree ssttoorreedd aatt rroooomm tteemmpperearatuturree.. TThhee. ddoossiinngg pprreeppaarraattiioonnss wweerree vviissuuaallllyy iinnssppeecctteedd ffoorr hhoommooggeenneeiittyy bbyy tthhee ssttuuddyy ddiirreeccttoorr oonn DDeecceemmbbeerr 2233,, 11999966,, aanndd wweerree ffoouunndd ttoo bbee aacccceepptaabbllee ffoorr uussee. 44.. AADDMMIINNIISSTTRRAATTIIOONN TThhee tteesstt mmiixxttuurreess wweerree aaddmmininiisstteerreedd oorraallllyy bbyy ggaavraaggee,, vviiaa aa 1166--ggaauuggee ssttaaiinnlleessss sstteeeell ggaavvaaggee ccaannnnuullaa ((PPooppppeerr aanndd SSoounss,, IInncc..,, NNeeww HHyyddee PPaarrkk,, NNeeww YYoorrkk 1111004400)),, as a single daily dose from gestation days 6 through 15. A dosage volume of 5 as a single daily dose from gestation days 6 through 15. A dosage volume of 5 mmlk/kgg wwaass uusseedd ffoorr aallll ddoossaaggee lleevveellss.. TThheeccoontnrtrooll aanniimmaallss rreecceeiivveedd tthhee vveehhiiccllee,, 11%% CCMMCC//00..11%% ppoollyyssoorrbbaattee 8800,, o0nn aa ccoommppaarraabbllee rreeggiimmeenn aatt S5 mmil//kkgg.. IInnddiivviidduuaall ddoossaaggeess wweerree bbaasseedd oonn tthhee mmoosstt rreecceennttllyy rreeccoorrddeedd bbooddyy wweeiigghhttss ttoo pprroovviiddee tthhee ccoorrrreecctt mmgg//kkgg ddoossee.. TThhee ffoolllloowwiinngg ddiiaaggrraamm pprreesseennttss tthhee ssttuuddyy ggrroouupp aassssiiggnnmmeenntt:: 15 -13- $33 22779922..00001133 33MM_MMNN0011006622666633 WWIILL--11S577001166 Grop Test Dosage Level ConcDDeoonsstaarggaeetion VDDooolssuaggmeee NNuumomfbbeerr Group Test Dosage Level Concentration Volume of BN NNuummbbeerr AAirticcll~ee ~ (mefke/day) ((mmg~//mml)) ((moUl/kke~)) EFeemmaalleess 211 VV3e1ebh4ii0cd0lee 040 2334 33331144330044000011 121646 4 313401 32 000 8 555 222555 0336..2482 5555 ' 2222555 6.4 5 25 55.. SSAMAPLMINGPAANNLDDAAINNAALNLYYSSGEESS PPrriioorr ttootthhee iinniittiiaattiioonnoofdf doosingsoonniDDeeccneemmbgbeerr 1100,, 11999966,, dduupplliiccaattee 1-ml 1-ml aliquots aliquots wweerree ccoolllleecctteedd ffrroommtthheemmididddilee ssttrraattuummoofftthheeccoonntrtrooll group group formulatainodn formulation and from from tthhee ttoopp,, mmiiddddllee ((ffoouurr aalliiqquuoott,ss)) aanndd bbootttioomm strata strata of of each each treated treated group group formulation. One set of these. samples was analyzed for homogeneity. The formulation. second set of One set samples of was these samples combined and wstaosreadnafloyrze8d-dafoyrsthaobimliotgyevneeriitfyi.catTiohn.e second set of samples was combined and stored for 8-day stability verification. TThhee rreessuullttssooffhhoommogoegneenieittyy aannaallyyssiiss ffoorr GGrroouuppss 33 aanndd 44 ppeerrffoorrmmeedd oonn DDeecceemmbbeerr 1100,, 11999966,, wweerree aacccceeppttaabbllee ffoorr uussee aaccccoorrddiinngg ttoo WWIILL SSttaannddaarrdd OOppeerraattiinngg PPrroocceedduureress.. TThhee hhoommooggeenneeiittyy aannaallyyssiiss ooff tthhee GGrroouupp 22 pprreeppaarraattiioonn oonn tthhiiss ddaattee diidd nnoottpprroodudcueacanneyyuussaabblleeddataata.. TThheeccaauusseewwaassddeetermtineedtrtoobbmeereriellaatnteedd1et0otdthhee aammoouunntt ooff aacceettoonniittrriillee iinn tthhee sseeccoonnddaarryy ddiilluuttiioonn.. The Group 2 formulation was The Group 2 formulation was remadeon December 11, 1996, and analyzed for homogeneity and 8-day stability remade on December 11, 1996, and analyzed for homogeneity and 8-day stability on December 19, 1996. On December 18, 1996, an 8-day stability analysis was on December 19, 1996. On December 18, 1996, an 8-day stability analysis was ppeerrffoorrmmeedd oonn tthhee GGrroouupp 33 aanndd 44 ffoorrmmuullaattiioonnss ((pprreeppaarreedd oonn DDeecceemmbbeerr 1100,, 11999966).). OOnntthheeddaayysstthhee ddoossiinngg ffoorrmmuullaattiioonnss wweerree pprreeppaarreedd ((DDeecceemmbbeerr 23 23 and and 30, 30, 1996), 1996), dduupplliiccaattee 11--mml aalliiqquuoottss wweerree ccoolllleecctteedd ffrroomm tthhee mmiiddddllee sstirratauumm of of each each dosing dosing ffoorrmmuullaattiioonn,, iinncclluuddiinngg tthhee ccoonnttrrooll,, and and analyzed analyzed for for concemration. concentration. The The mmeetthhooddoollooggyy aanndd rreessuullttss ooff tthheessee aannaallyysseess aarree presented presented in in Appendix Appendix B. B. The The ddoossiinngg ffoorrmmuullaattiioonnss wweerree hhoommooggeennoeouuss,, stable stable for for 8 days days and and contained contained the the amountsof test article specified in the protocol. amounts of test article specified in the protocol. C. AR ANNIIIMVAIE ALL REC CEIPE TAANNDDI AACCCCLP LIIMMAATT TIIOONN OOnnee hhuunnddrreedd ttwweennttyy--ffiivvee sseexxuuaallllyy mmaattuurree,, vviirrggiinn ffeemmaallee rats, rats, Crl:CD(SDJBR, Crl:CD(SD)BR, wweerree rreecceeiivveedd iinn ggoooodd hheeaalltthh ffrroomm CChhaarrlleess RRiivveerr LLaabboorarattoorriieess,, IInncc..,, PPoorrtaaggee,, MMiicchhiiggaann,, oonn DDeecceemmbbeerr 55,, 11999966.. The animals were approximately 70 days oll. The animals were approximately 70 days old. `UUppoonn rreecceeiipptt,, ceaacchhffeemmaalleewwaassoobbsseerrvveeddbbyy aqualifiedtechnician.Theanimals a qualified technician. The animals were were 14 534 33MM_MMNNO011006622666644 22779922..00001144 WWIILL--115577001166 iinniittiiaallllyy wweeiigghheedd oonn DDeecceemmbbeerr 66,, 11999966.. AAllll aanniimmaallss wweerree uunniiqquueellyy iiddeennttiiffiieedd by by a a MMoonneell mmeettaall ecaarritaagg ddiissppllaayyiinngg tthhee aanniimmaall nnuummbbeerr aanndd housed housed for .for 12 12 days days for for - aacccclliimmaattiioonn ppuurrppoossees.s. DDuurriinngg tthhee aacccclliimmaattiioonn ppeerriioodd,, tthhee aanniimmaallss wweerree oobbsseerrvveedd twice daily for mortality and moribundity. twice _daily for mortality and moribundity. DD.. AANNIIMMAALLHHOOUUSSIINNGG Upon arrival and unl pairing, all animals were individually housed in clean, Upon arrival and until pairing, all animals were individually housed in clean, wire-mesh cages suspended above cage-board. The animals were paired for mating wire-mesh cages suspended above cage-board. The animals were paired for mating iinn tthhee hhoommee ccaaggee ooff tthhee mmaallee.. FFoolllloowwiinngg ppoossiittiivvee iiddeennttiiffiiccaattiioonn ooff mmaattiinngg,, tthhee females were retured to an individual suspended wire mesh cage; nesting material fweamsnaloestrweeqrueirreetduarnsetd htoefaenmainldeisviwduearleseuustpheanndiezdedwpirreiomrestho tchaeged; anteesotinfgexmpaetcetrieadl was not required as the parturition. Animalswere females maintai were euthanized prior to the date nedinaccorwidthtahen*Gcuideefort hoef Ceaxrpeecatnedd parturition. Animals were maintained in accordance with the "Guide for the Care and UUssee ooff LLaabboorraattoorryy AAnniimmalasls"2..*" `TThhee aanniimmaall ffaacciilliittieess aatt WWIILL RReesseeaarrcchh LLaabboorraattoorriieess,, IInncc..,, aarree aaccccrreeddiitteedd bbyy tthhee AAssssoocciiaattiioonn ffoorr AAsssseessssmmeenntt aanndd AAccccrreeddiiatattiioonn ooff LLaabboorraattoorryy AAnniimmaall CCaarree IInntteerrnnaattiioonnaall ((AAAAAALLAACC IInntteerrnnaattiioonnaall)).. EE.. DDIEIETT., DDRRIINNKKIINNGGWWAATTEERRAANNDDMMAAIINNTTEENNAANNCCEE T"Thhee bbaassaall ddiieett uusseedd iinn tthhiiss ssttuuddyy wwaass PPMMII FFeeeeddss,, IInncc.. CCeerrttiiffiieedd RRooddeenntt LLaabbDDiieett~ 55000022.. TThhiiss ddiieett iiss aa cceerrttiiffiieedd ffeeeedd wwiitthh aapppprroopprriiaattee aannaallyysseess ppeerrffoorrmmeedd bbyy tthhee mmaannuuffaaccttuurreerr aanndd pprroovviiddeedd ttoo W WIILL RReesseeaarrcchh LLaabboorarattoorriieess,, IInncc.. MMuuninciciippaall wwaatteerr ssuuppppllyyiinngg tthhee ffaacciilliittyy iiss ssaammpplleedd ffoorr ccoonnttaammiinnaannttss aaccccoorrddiinngg ttoo SSttaannddaarrdd OOppeerraattiinngg PPrroocceedduurreess.. TThhee rreessuullttss ooff tthheessee. aannaallyysseess aarree mmaaiinnttaaiinneedd aatt W WIILL RReesseeaarrcchh LLaabboorarattoorriieess,, IInncc.. CCoonnttaammiinnaannttss wweerree nnoott pprreesseenntt iinn aanniimmaall ffeeeedd oorr wwaatteerr aatt ccoonncceennttrraattiioonnss eexxppeecctteedd ttoo iinntteerrffeerree wwiitthh tthhee oobbjjeeccttiivveessooff thhiiss ssttuuddyy.. DDrriinnkkiinngg wwaatteerr ddeelliivveerreedd bbyy aann aauuttoommaattiicc wwaatteerriinngg ssyysstteemm aanndd tthhee bbaassaall ddiieett wweerree pprroovviiddeedd aadd lliibbiitunumm tthhrroouugghhoouutt tthhee aacccclliimmaattiioonn ppeerriioodd aanndd dduurriinngg tthhee ssttuuddyy.. FF.. EENNVVIIRROONNMMEENNTTAALLCCOONNDDIITTIIOONNSS AAllll aanniimmaallss wweerree hhoouusseedd tthhrroouugghhoouutt tthhee aacccclliimmaattiioonn ppeerriioodd aanndd dduurriinngg tthhee ssttuuddyy in an environmentally-controlled room. Controls were set to maintain a temperature: in an environmentally-controlled room. Controls were set to maintain a temperature ooff 77220 +44FF aanndd aa rreellaattiivvee hhuummiiddiittyy bbeettwweeeenn 3300%% aanndd 7700%%.. RRoooomm tteemmppeerraattuurree aanndd rreellaattiivvee hhuummiiddiittyy wweerree rreeccoorrddeedd ddaalillyy.. TTeemmpeprearattuurreess rraannggeedd ffrroomm 7711..11FF ttoo 72.6F and relative humidity ranged from 31.85% to 47.1% during the study period. 72.6F and relative humidity ranged from 31.8% to 47.1% during the study period. 1s -15- 535 22779922..00001155 33MM_MMNN0011006622668655 WWIILL-115577001166 LLiigghhtt ttiimmeerrss wweerree ccaalliibbrraatteedd 1to0 pprroovviiddee aa 1122--hhoouurr lliigghhftf/l122--hhoouurr ddaarrkk pphhoottooppeeririoodd.. AAiirrhhaannddlliinngg uunniittss wweerree sseett ttoo pprroovviiddee aapppprrooxxiimmaatteellyy 1100 ffrreesshhaaiirrcchhaannggeess ppeerr hhoouurr.. [G. ASSIGNMENT OF ANIMAI~ TO TRB_ATMI~NrI" GROUPS AND BPRROOCCEID~UURRE~S AAtt tthhee ccoonncclluussiioonn ooff tthhee aacccclliimmaattiioonn ppeerriioodd,, aalll aavvaziilizabbllee ffeemmaalleess wweerree wweeiigghheedd aanndd eexxaammiinneedd iinn ddeettaaiill ffoorr pphhyyssiiccaall aabbnnoorrmmalailtitiieess.. AAtt tthhee ddiissccrreettiioonn ooff tthhee ssttuuddyy ddiirreeccttoorr,, aanniimmaallss jjuuddggeedd ttoo bbee iinn ggoooodd hheeaalltthh aanndd mmeeeettiinngg aacccceeppttaabbllee bbooddyy wweeiigghhtt rreeqquuiirreemmeennttss ((aa mmiinniimmuummooff 22220 g0g)) wweerree ppllaacceedd iinn aa ssuussppeennddeedd wwiirree--mmeesshh ccaaggee wwiitthh aa rreessiiddeenntt mmaallee ffrroomm tthhee ssaammee ssttrraaiinn aanndd ssoouurrccee ffoorr bbrreeeeddiinngg. RReessiiddeenntt mmaalleess wweerree uunnttrreeaatteedd,, sseexxuuaallllyy mmaattuurree rraattss uutti'dliizzeedd eexxcclluussiivveellyy ffoorr bbrreeeeddiinngg.. TThheessee rraattss wweerree mmaaiinnttaaiinneedd uunnddeerr ssiimmiillaarr llaabboorraattoorryy ccoonnddiittiioonnss a2ss tthhee ffeemmaalleess.. AA bbrreeeeddiinngg rreeccoorrdd ccoonnttaaiinniinngg tthhee mmaallee aanndd ffeemmaallee iiddeennttiiffiiccaattiioonn nnuummbbeerrss aanndd tthhee ddaatteess ooff ccoohhaabbiittaattiioonn wwaass pprreeppaarreedd.. TThhee sseelleecctteedd ffeemmaalleess wweerree aapppprrooxxiimmaatteellyy 1122 wweeeekkss oolldd wwhheenn ppaaiirreedd ffoorr bbrreeeeddiinngg.. PPoossiittiivvee eevviiddeennccee ooff mmaattiinngg wwaass ccoonnffiirrmmeedd bbyy tthhee pprreesseennccee ooffaa ccooppuullaattoorryy pplluugg. oortr thhee pprreesseennccee ooff ssppeerrmm iinn aa vvaaggiinnaall ssmmeeaar.r. EEaacchh mmaattiinngg ppaaiir wwaass cexxaammiinneedd ddaaiillyy.. TThhee ddaayy oonn wwhhiicchh eevviiddeennccee ooff mmaattiinngg wwaass iiddeennttiiffiieedd wwaass tteerrmmeedd ddaayy 00 ooff ggeesstaattiioonn aanndd tthhee aanniimmaallss wweerree sseeppaarraatteedd.. `TThheeeexxppereriimmeennttaall ddeessiiggnn ffoorr WWILI- 15L701-6ccoon1nssiisst5teeddo7offtthh0rreeee31311334640011 ttrreeaatteedd ggrroouuppss aanndd oonnee ccoonnttrrooll ggrroouupp.. TThhee bbrreedd ffeemmaalleess wweerree ccoonnsseeccuuttiivveellyy aassssiiggnneedd iinn aa bblloocckk ddeessiiggnn ttoo ggrroouuppss ccoonnttaaiinniinngg 2255 rraattss eeaacchh bbyy tthhee ffoolllloowwiinngg rraannddoommiizzaattiioonn pprroocceedduurree.. "TThhee ff'itrrsstt mmaatteedd ffeemmaallee aanndd tthhee aapppprroopprriiaattee ggeessttaattiioonn ddaayy 00 ddeessiiggnnaattiioonn wweerree rreeccoorrddeedd aanndd tthhee ffeemmaallee wwaass aassssiiggnneedd (to0 ggrroouupp 11,, tthhee sseeccoonndd mmaatteedd ffeemmaallee wwaass aassssiiggnneedd ttoo ggrroouupp 22,, aanndd tthhee tthhiirrdd 1to0ggrroouupp33,, eettcc.. TThhiiss pprroocceessss wwaass ccoonnttiinnuueedd ddaaiillyy uunnttiill 2255 ffeemmaalleess wweerree ppllaacceedd iinnttoo eeaacchh ggrroouupp.. BBooddyy wweeiigghhtt vvaalluueess rraannggeedd ffrroomm 222233 gg ttoo 226699 gg oonn ddaayy 00ooffggesetsatattiioonn.. HH.. MO MAATTEBERRNNS AALL E OBSR ERVV ATIOANSDT DUURRII INNGGGOGEESSTNTAATTIS IOONN I1.. COCLLIINNBIICCAASLL OEBSRERVVATAIONTSAANNIDDSOSUURRVNVIIVVSAALr. AAlll rraattss wweerree oobbsseerrvveedd ttwwiiccee ddaaiillyy ffoorr mmoorriibbuunnddiittyy aanndd mmorotratalliittyy.. IInnddiivviidduuaall ddeettaaiilleedd cclliinniiccaall oobbsseerrvvaattiioonnss wweerree rreeccoorrddeedd ffrroomm ddaayy 00 tthhrroouugghh 2200 ooff ggeessttaattiioonn (p(rpiroiorrttootetessttaratrtiicclleeaaddmimniinsitsrtraattiioonndduruirinnggtthheeddoossiinnggppereirioodd).). AAninmimaallss wweerree --1166-- - 53 33MM_MMNN0011006622668656 22779922..00001166 W WIILL1-15577001166 oobbsseerrvveedd ffoorr ssiiggnnss ooff ttooxxiicciittyy aapppprrooxxiimmaatteellyy oonnee hhoouurr ffoolllloowwiinngg ddoossiinngg.. NNoo ssiiggnniiffiiccaanntt ffiinnddiinnggss wweerree rreeccoorrddeedd aatttthheesseeoobbseserrvvaattiioonn ppeerriiooddss,, tthheerreeffoorree,, aa ttaabbllee: ssuummmmarairizziinngg tthheessee ddaattaa wwaass nnoot iinncclluuddeedd iinn tthhee rreeppoorrtt.. 22.. BBOODDYYWWEEIIGGHI-TrrSsAANNDDGGRRAAVVIIDDU1T7ErERRI!NNEEWWEEIIGGHHTTSS IInnddiivviidduuaall mmaatteermnaall bbooddyy vw~eieigghhttss wweerree rreeccoorrddeedd oonn ggeessttaattiioonn ddaayyss 00,, 66--1166 ((ddaaiillyy)) aanndd 2200.. AA ggrroouupp mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt wwaass ccaallccuullaatteeddffoorreeaacchhooff tthheesseeddaayyss.. MMeeaann bbooddyy wweeiigghhtt cchhaannggeess wweerree ccaallccuullaatteedd ffoorr ecaacchh ccoorrrreessppoonnddiinngg iinntteerrvvaall aanndd aallssoo ffoorr iinntteerrvvaallss 66--99,, 99--1122,, 1122--1166,, 66--1166 aanndd 00--2200.. GGrraavviidd uutteerriinnee wweeiigghhtt wwaass ccoolllleecctteedd aanndd nncett bbooddyy wweeiigghhtt ((tthhee ddaayy 2200 bbooddyy `wweeiigghhtt mmiinnuuss tthhee wweeiigghhttooff tthhee uutteerruuss aanndd ccoonntteennttss)) aanndd nneett bbooddyy wweeiigghhtt cchhaannggee t(thhee ddaayy 00--2200 bbooddyy wweeiigghhtt cchhaannggee mmiinnuuss tthhee wweeiigghhttoofftthhee uutteerruuss aanndd ccoonntteennttss)) wweerree ccaallccuullaatteedd aanndd pprreesseenntteedd ffoorr ecaacchh ggrraavviidd ffeemmaallee aatt tthhee sscchheedduulleedd llaappaarroohhyysstteerreeccttoommyy.. 33.. FFOOOODDCCOONNSSUUMMPPTTIIOONN IInnddiivviidduuaall ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn wwaass rreeccoorrddeedd oonn ggeessttaattiioonn ddaayyss 00,, 66--1166 ((ddaaiillyy)) aanndd 2200.. FFoooodd iinnttaakkee wwaass rreeppoorrtteedd aass gg//aanniimmaalli/ddaayy aanndd gg//kkggl/ddaayy ffoorr tthhee ccoorrrreessppoonnddiinngg bbooddyy wweeiigghhtt cchhaannggee iinntteerrvvaallss.. 1I.. G GESTE ATIOS NDDAAYT Y2200 LA LAAPPAAT RROOHI-YII YSSTTEERO REECCTTON OMMYY. AAllll mmaatteermnaall aanniimmaallss wweerree eeuutthhaanniizzeedd bbyy ccaarrbboonn ddiiooxxiiddee iinnhfallaattiioonn oonn ggeessttaattiioonn ddaayy 2200.. TThhee tthhoorraacciicc,, aabbddoommiinnaall aanndd ppeellvviicc ccaavviittiieess wweerree ooppeenneedd bbyy aa vveennttrraall mmiiddlliinnee iincinsiocnaaninddtsthheeiccoonontteennnttss eexxaammiinneedd.. IInnaallll iinnssttaanncceess,, tthheeppoossttmmoorrtteemm tfritnnddiinnggss wweerreeccoorrrreellaatteedd wwiitthh tthhee aannitee mmoorrtteerma ccoommmemntesaannnddtaannsyy aabbnonrmoalritimesawwelerreeirerteccoiorrdedeedsd.. `TThhee uutteerruuss aanndd oovvaarriieess wweerree eexxcciisseedd.. TThhee nnuummbbeerr ooff ccoorrppoorraa lluutteeaa oonn eeaacchh oovvaarryy wwaass rreeccoorrddeedd..TThheettrriimmmmeedd uutteerruuss wwaass wweeiigghheedd,,ooppeenneeddaannddtthhee nnuummbebraeannrdd llooccaattiioonn ooff aallll ffeettuusseess,, eeaarrllyy aanndd llaattee rreessoorrppttiioonnss aanndd tthhee ttoottaall nnuummbbeerr ooff iimmppllaannttaattiioonn ssiitteess wweerree rreeccoorrddeedd.. TThhee iinnddiivviidduuaall uweterriinnee ddiissttrriibbuuttiioonn ooff iimmppllaannttaattiioonn ssiitteess wwaass ddooccuummeenntteedd uussiinngg tthhee ffoolllloowwiinngg pprroocceedduurree.. AAllll iimmppllaannttaattiioonn ssiitteess,, iinncclluuddiinngg rreessoorrppttiioonnss,, wweerree nnuummbbeerreedd iinn ccoonnsseeccuuttiivvee oorrddeerr bbeeggiinnnniinngg wwiitthh tthhee lleofft ddiissttaallttootthhee leleffttpprrooxxiimmaall uutteerriinnee hhoorrnn,, nnoottiinngg tthhee ppoossiittiioonn oofftthheeceeerrvviixx,, aanndd ccoonnttiinnuuiinngg ffrroomm tthhee rriigghhtt pprrooxxiimmaall ttoo tthhee rriigghhtt ddiisstaall uweterriinnee hhoormn.. 1-17- S27 22779922..00001177 33MM_MMNNO011006622666677 WIL 157016 WIL-157016 MMaatteemrnaall ttiissssuueess wweerree pprreesseerrvveedd iinn 1100%% nneeuuttrraall bbuuffffeerreedd ffoorrmmaalliinn ffoorr ppoossssiibbllee furs histopathologialexamisation only as indicted by the gross findings. future histopathological examination only as indicated by the gross.findings. Uteri with no macroscopic evidence of dation were opened and subsequently Uteri with no macroscopic evidence of nidation were opened and subsequently placed iinn 1100%% ammmmoonniiuumm ssuulffiiddee sooluutiioonn ffoorr ddeetteeccttiioonnooffeeaarrllyy iimmppllaannttaattiioonn lloossss aass ddeessccrriibbeedd bbyy SSaalleewwsskky"i3.. IInnttrraauutteerriinnee ddaattaa wweerree ssuummmmarariizzeedd uussiinngg ttwwoo mmeetthhooddss ooff ccaallccuullaattiioonn.. AAnn eexxaammppllee `ooffeeaacchh mmeetthhooddooffccaallccuullaattiioonn ffoolllloowwss:: 11. . GGrroouuppMMeeaannLiLtittteerrBaBsaisiss:: Posimplantation LossLiter = Postimplautation Loss/Litter = Nov . Dead Fetus, a No. Dead Fetuses, Resorptions (Early/Late)/Group "No. Gravid Females/Group No. Gravid Females/Group 22.. PPrropoorptioonralLtLitiittteoerrnBBaaassiilss:: S`Suummmmaattiioonn ppeerr GGrroouupp ((%%)) == a= P_Poossttimimppllaannttaattiioonn LLoossss//LLitittteerr ((%%))~* NNoo.. ooff LLiitttteerrss/G/Grroouupp _ResorptNNiooo.n.sDD(eeBaaaddryFFeeTttauuseseeyssL,,iter x 100 RNeos.orIpmtipolnasnt(aEtairolny/SLiaetse/)L/Lititetrer x 100 No. Implantation Sites/Litter J.Jo EFEETTAALL MMOORRPPHHOOLLOOGGIICCAALLEEXXAAMMIINNAATTIIOONN he WILEEaacchh studyffeettuuss number, th femalenumberad thefetus number. wwaass sseexxeedd,,wweieigghheeddaanndd ttaaggggeeddffoorridideentnitfifiiccaattiioonn.. A detailed extemal FFeettaallttaaggssccoonnttaaiinneedd ethxeamWinIaLtisotundyofnuemscbherf,etthues fweamsalceonnudmucbteerdan1d0 tihneclfuedteu,s nbuutmbwears. Anotdeltaimilietdedex1t0e,rnaanl eexxaammiinnaattiioonnooftf heacehyefe,tups awasalndcoaenxdttuecrtneeadl toorifiinccelsu,daen, dbcuatchwfaisndniontg lwimasiteredcotrod,eda.n Cexraomwnin-artuiomnpomfetahseueryeemse,nptaslawteeraendreecxoterrdneadl foorrifilcaetse, raensdorepatcihonf,indifinpgrewseanst,recaondrdetdhe. Crown-rump measurements were recorded for late resorptions, if present, and the ttiissssuueess wweerree ddiissccaarrddeedd.. EEaacchh ffeettuuss wwaass eexxaammiinneedd vviisscceerraallllyy bbyy aa mmooddififiiccaattiioonn ooff tthhee Vessels. Thesexof each fetus was confirmed by intemal examination. Fetal Kidneys `SSttuucckkhhaarrddtt aanndd PPooppppee4 ffrreesshh ddiisssseeccttiioonn tteecchhnniiqquuee ttoo iinncclluuddee tthhee hheeaarrtt aanndd mmaajjoorr bblloooodd vessels. The sex of each fetus was confirmed by internal examination. Fetal kidneys wweerree eexxaammiinneedd aannddggrraaddeedd ffoorr rreennaall ppaappiillllaaee ddeevveellooppmmeenntt bbyy aa mmeetthhoodd ddeessccrriibbeedd iinn WWoooo aanndd HHooaarr'~,. HHeeaaddss ffrroomm aapppprrooxxiimmaatteellyy oonnee--hhaallff ooff tthhee ffeettuusseess iinn eeaacchh lliitttteerr wweerree ppllaacceedd iinn `BBoouuiinn''ss ffiixxaattiivvee ffoorr ssuubbsseeqquueenntt ssoofftt--ttiissssuuee eexxaammiinnaattiioonn bbyy tthhee WWiillssoonn6 sseeccttiioonniinngg tteecchhnniiqquuee.. TThhee hheeaaddss ffrroomm tthhee rreemmaaiinniinngg oonnee--hhaallffoofftthhee ffeettuusseess wweerree eexxaammiinneedd bbyy a8 sf aM_No1062688 3M MN01062668 22779922..00001188 WIL 157016 WIL-157016 aa mmiidd--ccoorroonnaall sslliiccee.. AAllll ccaarrccaasssseess wweerree eevviisscceerraatteedd aannddffiixxeeddiinn 110000%% eetthhyyll aallccoohhooll.. FFoolllloowwiinngg ffiixxaattiioonn iinn aallccoohhooll,, eeaacchh ffeettuuss wwaass mmaacceerraatteedd iinn ppoottaassssiiuumm hhyyddrrooxxiiddee aanndd - ssttaaiinneedd wwitithh AAllzizaarriinn RReedd Sbbyy aa mmeetthhoodd ssimiimlari1t0lotathharatt ddeessccrriibbeedd bbyy DDaawwsosorn'7.. EExxtteemrnaall,, vviisscceerraall aanndd sskkeelleettaall ff'imnddiinnggss wweerree rreeccoorrddeedd aass ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonnss a(alltteerraattiioonnss iinn aannaattoommiicc ssttrruuccttuurree tthhatt aarree ccoonnssiiddeerreedd ttoo hhaavvee nnoo isgigrnififiiccaanntt bbiioollooggiiccaall eeffffeeccttss oonn aanniimmaall hheeaalltthhoorrccoonnfoforrmmitityy,, rreepprreesseennttiinngg sslliigghhtt ddeevviiaattiioonnss ffrroomm nnoorrmmaall)) oorr mmaallffoorrmmaattiioonnss ((tthhoossee ssttrruuccttuurraall aannoommaalliieess tthhaatt aalltteerr ggeenneerraall bbooddyy ccoonnffoorrmmiittyy,, ddiissrruupptt oorr iinntteerrffeerree wwiitthh bbooddyy ffuunnccttiioonn,, oorr mmaayy bbee iinnccoommppaattiibbllee wwiitthh liiff)e.). TThhee ffeetaall ddeevveellooppmmeennttaall ff'imnddiinnggss wweerree ssuummmmarariizzeedd bbyy:: 11)) pprreesseennttiinngg tthhee inincciiddeenncceeooffaa ggiivveenn ffi'mnddiinnggbbootthhaass aappeerrcceennttaaggeeoofftthheennuummbbeerr oofffefettuusseessaanndd tthhee. nnumubmeroobfflleiittttererrss aavvaaiillaabbllee ffoorr eexxaammiinnaattiioonn iinn tthhee ggrroouupp;; aanndd 22)) ccoonnssiiddeerriinngg tthhe lliitttteerr aa5s tthhee bbaassiic wuaniitt ffoorr ccoommppaarriissoonn aanndd ccaallccuullaattiinngg tthhee nnuummbbeerr ooff aaffffeecctteedd ffeettuusseess iinn a3 lliitttteerr oonn aa pprrooppoorrttiioonnaall bbaassiis aass ffoolllloowwss:: `SSuummmmaattiioonn ppeerr GGrroouupp ((%%)) == VAViaifabblfleeeFFeceNttoutu.sseeeossdfLAi/ftftLeecirtsetdG/reLoiurtpte.(r(%) No. of Litters/Group a= NNoo.. VViiaabbllee FFeettuusseess _A_ffecedlLinexr 100 NNoo.. VVAiiaafbfbleleectFFeedet/tLussietestse//rLLiittteerrx 100 K. SSTTAATITSISTTIICCAALLAANNAALLYYSSEESS Ko AAllll aannaallyysseess wweerree ccoonndduucctteedd uussiinngg ttwwoo--ttaaiilleedd tteessttss ffoorr aa mmiinniimmuumm ssiiggnniiffiiccaannccee lleevveell ooff 55%%,, ccoommppaarriinngg eeaacchh ttrreeaatteedd ggrorupottooutthphee vveehhiiccllee ccoonnttrrooll ggrroouupp.. MMeeaannss wweerree pprreesseenntteedd wwiitthh tthhee ssttaannddaarrdd ddeevviiaattiioonn ((SS..DD..)) aanndd tthhee nnuummbbeerr ooff aanniimmaallss ((NN)) uusseedd ttoo ccaallccuullaattee tthhee mmeeaann.. TThhee ffoolllloowwiinngg ssttaattiissttiiccaall tteessttss wweerree ppeerrffoorrmmeedd bbyy aa DDiiggiittaall MMiiccrroVoVAAXX"~ 33440000 ccoommppuutteerr ((wwiitthh aapppprroopprriiaattee pprrooggrraammmmiinngg)) iinn tthhiiss llaabboorraattoorryy aanndd aarree rreeffeerreenncceedd oonn tthhee rreeppoorrtt taabblleess:: 19 - $39 S3MM_MMNNO011006622666699 22779922..00001199 WWIILL--I1S577001166 SSTTAATTIfSSTTIICCAALLTTEESSTT --PAPRARAAMMEETTERE_R - -- `OODnnuenen--ewwtata'yysAAteNNstOO! VVAA wwiitthh ICCmooprlrppaonortraaatiLLouunttsee,aa,,FeTTtooatltaallBody Durmett's test~ `ImWepiglahntsta,tiMoants,emFaeltalBBodoydy W W WCheeaeiiingggghhhetttssss,,aaMMnnaddattW eWererneniaigagllhhtBtNeotdyBody `W`CUWhteeeaiirnggihghnteet sCCW, hehMiaagnnahggtteeesrss,naaaMlnnaddNtGeeGrtmraBaavvloiidddy Food Consumption Uterine Weights, Maternal Food Consumption - Kruskal-Wallis test with - `Mann-Whitney U test* Kruskal-Wallis test with Mann-Whitney U testa LILinittttrteearurtPPerrroionppeooDrratttiiooannss(Coooffnsidering FItthnehetetruaLLsui,ittttetaeersrri,n,teRhReDaatEtahhxteaeprre(Crtthihomaanennsnitdtthhaeeerling. UFneirgn)s, as the Experimental Uni0 L. DDAATTAARREETTEENNTTIIOONN Lo T"Thhee ssppoonnssoorr wwiillll hhaavvee ttiitllee ttoo aalll ddooccuummeenntatattiioonn rreeccoorrddss,, rraaww ddaattaa,, ssppeecciimmeennss oorr ootthheerr wwoorrkk pprroodduucctt ggeenneerraatteedd dduurriinngg tthhee ppeerrffoorrmmaanncceeoofftthhee ssttuuddyy.. AAllll wwoorrkk pprroodduucctt inicnlculuddiinnggrraawwpappapeerrddaattaaaannddssppeecciimmeennss wwililllbbeerreettaaiinneeddiinnththeeAArrchcivhesiaatvt WW eIlsLL RReesseeaarrcchh LLaabboorraattoorriieess,, IInncc.., aass ssppeecciiffiieedd iinn tthhee pprroottooccooll.. `RRaaww ddaattaa iinn mmaaggnneettiicc ffoorrmm,, aa rreetteennttiioonn ssaammpplleeoofftthhee tteesstt aarrttiiccllee aanndd tthhee oorriiggiinnaall ffminaall rreeppoorrtt wwiillll bbee rreettaaii~needd iinn tthhee AArrcchhiivveess aatt WWIILL RReesseeaarrcchh LLaabboorarattoorriieess,, IInncc..,, iinn ccoommpplliiaannccee wwiitthh rreegguullaattoorryy rreeqquuiirreemmeennttss. 20 -20- Yo 22779922..00002200 33MM_MMNN0011006622667700 W`WIILL--115577001166 V. RREESSUULLTTSS A. COCLLIINNBIICCAASLL OEBSRERVVATAIONTSAANINDDSOSUURRVNVIIVVSAALl, SSuummmmaarryy DDaaita:: TTaabblleess 11,, 22 AAllll aanniimmaallss ssuurrvviivveedd ttoo tthhee sscchheedduulleedd nneeccrrooppssyy oonn ggeesstaattioonn ddaayy 2200.. NNoo tteesstt aticle-reated aRicle-related cclliinniiccaall ffiinnddiinnggss wweerree oobbsseerrvveedd iinn tthhe ttrreaatteedd ggrroouupps.s. CClliinniiccaall ssiiggnnss iinntthheettrreaatteeddggrroouuppss,, ssuchuaasshahciairr lhoossss,, ssccaabbbbiinnggaannddrreedd mmataeterriiaallaarroouunnddtthhee nnoossee,, ooccccuurrrreedd ssiimmiillaarrllyy iinn tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp,, iinn ssiinnggllee aanniimmaalls oorir inna mmaasnneerr tthhaatt wwaass nnoott suggestiveof suggestive of a a rreelaattioonnsshhiipp ttoo ttrreeaattmmeenntt.. B.Bo BBOODDYYWWFEIIGGHI-TITSSAANNDDGGRRAAVVIIDDU~ TERINEWWEEIIGGHHTTSS Summary Summary DDaattaa:: TTaabblleess 33,, 44,, 55 MMeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy grooup wwaas siimmiillar ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluuee body weight gain for this group dduurriinngg tthhee ff'itrrsstt tthhrreeee wasddaayyss ooff ddoossiinngg ((ggeessttaattiioonn days reduced during gosation days66--99)).. The 9-12. The mmeeaan difference from the control group value was body weight gain for this group was reduced difference from the control group value was ststically significant during gestation days statistically significant 9-12. The ((p9<<00..0011).). During During tthhee rreemmaaiinnddeerr ooff tthhee ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 1122--1166)),, mmeeaann bbooddyy `wweeiigghhtt ggaaiinn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wwaass ssiimmiillaarr too tthhe coonnttrrooll grrooup vvaluuee.. OOvveerraallll mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn dduurriinngg tthhee eennttirree ttrreeaattmmenntt ppeerriood (ggeessttatiioonn ddaayyss 66-- t11h66e))icinnotnthhtiiosslggrrgooruuoppupwwavaasslussett.aattiissttDiiuccraallillnyygssiitgghnneiiffpiicocasannttttllryye(a(ptm<<e0n0.t.001p1)e)rllioowwdeer(rg((e77s2t2a%tiooofnfcdocanoytnsrtrool1l6):tt2h0ha)an,n mean body weight gain the control group value. mean body weight gain in the 32 mg/kg/day group was During the post-treatment period in the 32 mg/kg/day group was slighty increased; the (gestation days 16-20), slightly increased; the ddiifeferreennccee ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp wwaass ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ((p<<0.00.01)1.). MMeeaann bbooddyy weights weights iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wweerree ggeenneerraallllyy ccoommppaarraabbllee ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp values vvaalluueess values on gestation days 14 tthhrroouugghhoouutt ggeessttaattiioonn;; on gestation days 14 andtthhee and 15.onrgly 15. A statistically significant (9<0.01) decrease in eexxcceeppttiioonnss wweerree ssiiggnniifiiccaannttlyy((p<<00..0055)) reedduced A statistically significant (p<0.01) decrease in net net body body wweeiigghhtt ggaainn wwaass nnootteedd ffoor aanniimmaallss iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp.. MMeeaann ggrraavviidd uweterriinnee wweeiigghhtt aanndd nneett bbooddyy wweeiigghhtt iinn hithis ggrroouupp wweerree ssiimmiillaarr t1o0 tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. T`Thhee ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt eeffffeeccttss oonn bbooddyy wweeiigghhttddaattaaiinntthhee 3322 mmgg/lkkgg//ddaayy ggrroouupp. w`whheenn ccoommppaarreedd ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess aarree pprreesseenntteedd iinn tthhee ffoolllloowwiinngg ttaabbllee:: a1-21- 4 22779922..00002211 W3M_MNMON100160622667711 WWIILL--115577001166 BBooddyy WWeeiigghhtt ~~ GGeessttaitioonn MeMaemasrueremmeenntt. DDaav=e=.~ DDiiffffeerreennccee ffrroomm Ca __._onl tro.~_l EP d Valude BBBooodddyyy wwweeeiiiggghhhttt gggaaaiiinnn 996--111622 BBBooodBddyoyydwwwyeeeiwiigggehhhitgtt hgggtaaaiiinnn 1116466-,:-12126005 NNeett bbBooodddyyy wwweeieigigghhhttt ggaaiinn 20 14, 15 20 llTooowwweeerrr hihlTogiogwhwheeeerrrr lllooowwweeerrr ppp<<<000...000111 pp<<000.011 pppp <<<<000000..001515 p < 0.01 MMeeaann bbooddyy wweeiigghhttss,, bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinnss,, nneett bbooddyy wweeiigghhttss,, nneett bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinnss aanndd ggrraavviidd uutteerriinnee wweeiigghhttss iinn tthhee 44 aanndd 1166 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouuppss wweerree uunnaaffffeecctteedd bbyy tteesstt aanrtiiccllee aaddmminiinsisttrraattiioonn.. SSppoorraaddiicc ssutattiisstticcaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ((pp<<00..0055 oorr pp<<00..0011)) ddiiffffeerreenncceess ffrroommtthheecoc.notnrtrooll ggrroouupp wweerreennootteeddaanndd iinncclluuddeedd lloowweerr mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn iinn tthhee 1166 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp dduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122 aanndd aa lloowweerr mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt iinn tthhiis ggrroouupp oonn ggeessttaattiioonn ddaayy 1144.. HHoowweevveerr,, aaccoorrrreessppoonnddiinngg ddeeccrreeaassee iinn ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn wwaass nnoott oobbsseerrvveedd dduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122,, aanndd tthhee rreedduucceedd bbooddyy wweeiigghhtt wwaass aattttrriibbuutteedd ttoo tthhe5e5 gdedcecrreeaassee iinn bbooddyy wweeiigghhtt rreellaattiivvee ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp oonn ggeessttaattiioonn ddaayy 66 ((pprriioorr ttoo tthhee ssttaarrtt ooff ddoossiinngg)).. TThheerreeffoorree,, nnoo rreellaattiioonnsshhiipp ttoo ttrreeaattmmeenntt wwaass eevviiddeenntt.. AAllll ootthheerr vvaalluueess wweerree ssiimmiillaarr t(o0 tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess;; nnoonnee ooff tthhee ddiiffffeerreenncceess wweerree ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt.. C.Co FFOOOODDCCOONNSSUUMMPPTTIIOONN SSuummmmaarryy DDaattaa:: TTaabblleess 66,, 77 FFoooodd ccoonnssuummppttiioonn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wwaass ccoommppaarraabbllee ttoo tthhaatt iinn tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp dduurriinngg tthhee ff'itrrsstt tthhrreeee ddaayyss ooff ddoossiinngg ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 669-9).). FFoooodd ccoonnssuummppttiioonn,, eevvaalluuaatteedd aass gg//aanniimmaall//ddaayy aanndd gg//kkeg//ddaayy,, wwaass sslliigghhttllyy rreedduucceedd iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp dduurriinngg tthhee rreemmaaiinnddeerr ooff tthhee ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122 aanndd 1122--1166).). TThhee ddiiffffeerreenncceess ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp wweerree ggeenneerraallllyy ssutatitissttiiccaallllyy ssiigguniiffiiccaanntt ((pp<<00..0011 oorr pp<<00..0055)).. WWhheenn tthhee eennttirree ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 66--1166)) wwaass eevvaalluuaatteedd,, ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn wwaass sslliigghhttllyy rreedduucceedd iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp;; tthhee ddiiffffeerreenncceess ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp wweerree ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ((pp <<00..0055)).. DDuurriinnggtthheeppoossttt-rtreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 1166--2200)),, ofooodd ccoonnssuummppttiioonn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wwaass sslliigghhttllyy iinnccrreeaasseedd rreellaattiivvee ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp.. TThhee ddiiffffeerreennccee iinn gg//kkgg//ddaayy vvaalluueess wwaass ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ((pp<<00..0055)).. 2-22S12 22779922..00002222 S3MM_MMNNO011006622667722 WIL157016 WIL-157016 FFoooodd ccoonnssuummppttiioonn wwaass uunnaaffffeecctteedd bbyy tteesstt aarrttiiccllee aaddmmininisisttrraattiioonn aatt ddoossee lleevveellss ooff 44aanndd 1166 mmgg//kkgg//ddaayy..TThheeo~nnllyystsattaitsisttiiccaallllyysisgignnififiiccaanntt((pp<<00..0011)) ddiiffffeerreennccee ffrroomm tthhee. ccoonnttrrooll ggrroouupp wwaass aann iinnccrreeaassee iinn ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn ((gg//kkge//ddaayy)) iinn tthhee 1166 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp dduurriinngg tthhee ppoosstt--ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 1166:-2200)).. AAllll ootthheerr vvaalluueess (g/animal/cay (g/animal/day aanndd gg//kkgg//dcaayy)) iinn tthhessee ggrroouuppss wweerree ssimiimlairtltooatthhree ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. D. D. NNEECCRROOPPSSYYDDAATTAA At At the the sscchheedduulleedd nneeccrrooppssyy oonn ggeessttaattiioonn ddaayy 2200,, 1no tteesstt aartticc-ler-lrealatteedd iinntteermnaall ffiinnddiinnggss wweerree oobbsseerrvveedd aatt aannyy ddoossee lleevveell,. OOnnee ffeemmaallee ((nnoo.. $599553311)) iinn tthhee 44 mg/kg/day mg/kg/day group group hhaadd cdleeaar fflluuiidd ccoonntteennttss iinn bbootthh uutteerriinnee hhoorrnnss aanndd wwaass nnoonnggrmavvidid,. AAncntohtheerrffeemmaallee ((nnoo.. 5599558877))iinnththiissggrroouupphhaaddddiillatteeddrreennaall ppeellvveess,. FeFmemalaleennoo. 59560 59560 iinn tthhee 1166 mmgg//kkggl/ddaayy ggrroouupp hhaadd aa ccyyssttiicc oovvaarryy.. AAllll ootthheerr ffeemmaalleess wweerree iinntteermnaallllyy nnoorrmmaall.. EE.. GLGEESSATTAATPTIIOAONNDRDAAQYY2H200 YLASPARTOHEYSRTEERECCTTOMOYDMDAATYTAA SSuummmmaarryy DDaattaa:: TTaabblleess 88,, 99 MMeeaann ffeatall bbooddyy wweeiigghhtt iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp ((33..55 gg)) wwaass lsliigghhtllyy rreedduucceedd wwhheenn ccoommppaarreedd ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluuee ((33..77 gg),, bbuutt wwaass eeqquuaall t0otthheeoovveerraallllmmeeaann ffeettaall bbooddyy wweeiigghhtt iinntthheeWWILIT,. hhiissttoorriiccaall ccoonnttrrooll ddaattaa ((33..55 g).). TThhee ddiiffffeerreennccee bbeettwweeeenn tthhee ccoonnccuurrrreenntt ccoonnttrrooll ggrroouupp aanndd tthhe 3322 mmgg//kkgg/lddaayyggrroouupp wwass ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt (90.05). (p<0.05). VViiaabbllee lliittteerr ssiizze,, ffeettaall sseexx rraattiiooss,, ppoossttiimmppllaanntaattiioonn lloossss aanndd tthhee mmeeaann aumbers numbers of of corpora corpora lluutteeaa aanndd iimmppllaannttaattiioonn ssietess iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg/lddaayy ggrroouupp wweerree ssiimmiillaarr 0to tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. IInnttrraauutteerriinnee ggrroowwtthh aanndd ssuurrvviivvaall wweerree uunnaaffffeecctteedd bbyy tteesstt aarrttiiccllee aaddmmininisisttrraattiioonn aatt ddoossee lleevveellss ooff4 aanndd 1166 mmgg/k/kgg//ddaayy.. NNoo ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ddiiffffeerreenncceess ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp wweerree oobbsseerrvveedd.. F. F. FMFEETOTAARLL PMOHRPOHLOLOOGGICIALCDDAAATTLAA Summary Da: Tables 10, 11, 12, 13 The number Summary Data: The number of fetuses Tables 10, of fetuses (ltrs) avaiable 11, 12, 13 (litters) available ffoorr mmoorrpphhoollooggiiccaall eevvaalluuaattiioonn wweerree 33825), 338(25), 2288440(1199)),, 333300(224)) aanndd 337771(2255)) iinn tthhee ccoonnttrrool,, 44,, 1166 aanndd 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouuppss,, rreessppeecctiivveellyy.. x-23 su3 22779922.00002233 W3M_MNMON100160622667733 WVIIILL--115577001166 11.. EEMXXTTEAERRNNLAALLFMAO LFORRMAMTIOANSATANNDDIVVAAORRIIAANTTIIOOSNNSS NNoo eexxtteermnaall ddeevveellooppmmeennttaall mmaallffoorrmmaattiioonnss oorr vvaarriiaattiioonnss wweerree nnootteedd iinn ffeettuusseess - aatt aannyy ddoossee lleevveel,l. 22.. VM VIISSCCAEERRL AALL MFALOFORRMAMTIOANSATANNDDIVVAAORRIIAANTTIIOOSNNSS NNoo vviisscceerraall ddeevveellooppmmeennttaall mmaallffoorrmmaattiioonnss oorr vvaarriiaattiioonnss wweerree nnootedd iinn ffeettuusseess aatt aannyy ddoossee lleevveell.. 33.. SM SKKEI~LALEETTLAALL FMALOFOR RMAMTIOANSATANNDDIVVAO ARRIIAANTTIIOOSNNSS IInn tthhee 1166 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp,, tthhrreeee ffeettuusseess ffrroomm oonnee lliitttteerr ((nnooss.. 5599553377--0011,, -0077 aanndd --0088)) ecaacchh hhaadd ccoossttaall ccaanrtiillaaggee mmaallffoorrmmaattiioonn.. AAllll ooff tthhee mmaallffoorrmmaattiioonnss ccoonnssiisstteedd ooff ffuusseedd lleeftt ccoossttaall ccaarrttiillaaggeess ((nqoo.. 11 ttoo nnoo.. 22)) pprriioorr t(o jjooiinniinngg tthhee sstteernmuumm,, nnoo lleefftccoossttaal ccaarrttiillaaggeeiinnppoossiititonionnoon.. 22 aannddtthheelleefftthahlaflfooffsstteemmeebrbanrnoao.. 11 aattttaacchheedd ttoo tthhee lleefft hhaallff ooff sstteemmeebbrraa nnoo.. 22.. FFeeftuuss nnoo.. $599553377.-0088 aallssoo hhaadd aa vveerrtteebbrraall mmaallffoorrmmaattiioonn tthhaatt ccoonnssiisstteeddooffffuusseedd rfiigghhtt cceerrvviiccaall aarrcchheess ((nnoo.. 66 ttoo nnoo.. 77)).. NNoo ootthheerr sskkeelleettaall mmaallffoorrmmaattiioonnss wweerree oobbsseerrvveedd.. IInnccrreeaasseedd iinncciiddeenncceess ooff sseevveerraall sskkeelleettaall ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonnss wweerree oobbsseerrvveedd iinn ffeettuusseess aatt ddoossee lleevveellss ooff 1166 aanndd 3322 mmgg//kkgg//ddaayy.. TThheessee iinncclluuddeedd tthhee ffoolllloowwiinngg.. OOnnee sskkeelleettaall vvaarriiaanntt,, 1144tthh rruuddiimmeennttaarryy fiibbss,, wwaass nnootteedd iinn aallll ddoossee ggrroouuppss,, iinncclluuddiinngg tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp.. HHoowweevveerr,, tthhee ppeerrcceennttaaggeess iinn tthhee 1166 aanndd 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouuppss ((1133..11 aanndd 1111..33%% ppeerr lliittteerr,, rreessppeeccttiivveellyy)) wweerree iinnccrreeaasseedd wwhheenn ccoommppaarreedd ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluuee ((22..225%% ppeerr lliitttteerr)).. TThhee ddiiffffeerreenncceess ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp wweerree ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ((pp<<00..0011)).. AAnnootthheerr sskkeelleettaall vvaarriiaanntt,, 1144tthh ffuullll rriibbss,, wwaass nnootteedd oonnllyy iinn tthhee 1166 aanndd 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouuppss ((11..00:aanndd 11..22%% ppeerr lliitttteerr,, rreessppeeccttiivveellyy)).. TThhee vvaalluueess ffoorr 1144tthh rruuddiimmeennttaarryy rriibbss aanndd 1144tthh ffuallll rriibbss iinn tthheessee ggrroouuppss wweerree wwiitthhiinn tthhee rraannggee ooff vvaalluueess iinn tthhee WWIILLhihsitsotorriiccaall ccoonnttrrooll ddaattaa ((00..00-:3399..33%% aanndd 00..00--11..33%%,, rreessppeeccttiivveellyy)).. AAnn iinnccrreeaassee iinn tthhee iinncciiddeennccee ooff bbeenntt fiibbss wwaass nnootteedd iinntthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp ((66..77%5% ppeerr lliittteerr)) wwhheenn ccoommppaarreeddttooththee. ccoonnccuurrrreenntt ccoonnttrrooll ggrroouupp ((00..88%% ppeerr lliitttteerr)) aanndd tthhee mmaaxxiimmuumm vvaalluuee iinn tthhee W WIILL hhiissttoorriiccaall ccoonnttrrooll ddaattaa ((44..66%% ppeerr lliittteerr)).. IItt sshhoouulldd bbee nnootteedd tthhaattffoorrmmoosstt ooff tthhee ffeettuusseess iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wwiitthh bbeenntt friibbss,, tthhee vvaarriiaattiioonn wwaass sslliigghhtt,, ooccccuurrrreedd bbiillaatteerraallllyy aanndd aaffffeecctteedd vvaarriioouuss ccoommbbiinnaattiioonnss ooff rriibb nnooss.. 44 tthhrroouugghh 1122.. OOtthheerr sskkeelleettaall vvaarriiaannttss iinn tthhee ttrreeaatteedd ggrroouuppss ooccccuurrrreedd ssiimmiillaarrllyy iinn tthhee ccoonnttrrooll 2-24- Sy 33MM_MMNNO011006622667744 22779922..00002244 W WIILL--115577001166 ggrroouupp,, wweerree oobbsseerrvveedd iinn aa nnoonn ddoossee--rreellaatteedd mmaannnneerr,,oorrwweerree wwiitthhiinn tthhee rraannggee ooff tthhee WWIILL hhiissttoorriiccaall ccoonnttrrooll ddaattaa.. NNoo rreellaattiioonnsshhiipp ttoo ttrreeaattmmeenntt wwaass eevviiddeennt.t. 44. SUMMARY OF EXTERNAL. VISCERAL AND .~KELETAL ~ATION T`Thhee oonnllyy mmaallffoorrmmaattiioonnss oobbsseerrvveedd dduurriinngg tthhiiss ssttuuddyy wweerree iinn 33((11)) ffeettuusseess ters) (litters) iinn tthhee 1166 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp aanndd wweerree ccoonnssiiddeerreedd ttoo bbee ssppoonnttaanneeoouuss iinn oorriiggiinn ssiinnccee nnoo mmaallffoorrmmaattiioonnss wweerree oobbsseerrvveedd iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp.. TThhee oonnllyy ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonn aattttrriibbuutteedd ttoo ttrreeaattmmeenntt wwiitthh tthhee tteesstt aarrttiiccllee wwaass aann iinnccrreeaassee iinn tthhee iinncciiddeennccee ooff bbeeantt rfiibbss iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp.. TThhee iinncciiddeenncceess ooff 1144tthh rruuddiimmeennttaarryy friibbss aanndd 1144tthh ffuullll rriibbss wweerree aallssoo iinnccrreeaasseedd iinn tthhee 1166 aanndd 3322 mg/kg/day mg/kg/day ggrroouupp wwhheenn ccoommppaarreedd t(o0 tthhee ccoonnccuurrrreenntt ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. HHoowweevveerr,, 1n0o ddoossee--rreellaatteedd rreessppoonnssee wwaass nnootteedd aanndd tthhee vvaalluueess wweerree wwiitthhiinn tthhee rraannggee ooff tthhee W WIlLL hhiissttoorriiccaall ccoonnttrrooll ddaattaa ffoorr tthheessee ccoommmmoonn ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonnss.. IInn aaddddiittiioonn,, nnoo iinnccrreeaassee iinn tthhee ttoottaall nnuummbbeerr ooff ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonnss ((%5% ppeerr lliittteerr)) wwaass oobbsseerrvveedd aatt tthheessee ddoossee lleevveellss,, aanndd nnoo ootthheerr eevviiddeennccee: ooff ddeevveellooppmmeennttaall ttooxxiicciittyy wwaass oobbsseerrvveedd iinn tthhee 1166 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp ffeettuusseess. `Therefore, Therefore, n1o0 rreellaattiioonnsshhiipp ttoo ttrreeaattmmeenntt wwiitthh tthhe fteesstt aarrttiiccllee wwaass eevviiddeenntt,. OOtthheerr ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonnss iinn tthhee ttrreeaatteedd ggrroouuppss wweerree oobbsseerrvveedd iinnffrreeqquueennttllyy,, aatt frequencies frequencies ssiimmiillaarr ttoo tthhoossee iinn tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp aanndd//oorr aatt iinncciiddeenncceess tthhaatt wweerree wwiitthhiinn rraannggee ooff tthhee W WIlLL hhiissttoorriiccaall ccoonnttrrooll ddaattaa.. W Whheenn tthhee ttoottaall nnuummbbeerr ooff mmaallffoorrmmaattiioonnss aanndd ddeevveellooppmmeennttaall vvaarriiaattiioonnss wweerree ccoommppaarreedd,, oonn aann iinncciiddeennccee oorr pprrooppoorrttiioonnaall bbaassiiss,, nnoo sstaattiisstticcaaLlllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ddiiffffeerreenncceess ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp were noted. were noted. 25 -25- Ey 22779922..00002255 S3MM_MMNNO011006622667755 W~1IILL--115577001166 VI. DDISICUSSSIOCNAAUNNDDSCCOOSNNCCLILUUSOSIIOONNNSS AAllll mmaatteerrnnaall aanniimmaallss ssuurrvviivveedd ttoo tthhee sscchheedduulleedd nneeccrrooppssyy oonn ggeessttaattiioonn ddaayy 2200.. NNoo cclliinniiccaall ffiinnddiinnggss rreellaatteedd ttoo tteesstt aarrttiiccllee aaddmmininisisttrraattiioonn wweerroe oobbsseerrvveedd aatt aannyy ddoossee lleevveell.. IInn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp,, mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn aanndd ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn ((g/ganfimaanl/diaymaaannddlgg///kkggd//ddaaayyy)) wweerree ssimiimlairtltootathhree ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess dduurriinnggtthheeffiirrsstttthhrreeee: ddaayyssofodf odsosiinngg ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 66--99)).. AA ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt rreedduucceedd mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn aanndd sslliigghhttllyy,, bbuutt ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt rreedduuccttiioonnss iinn ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn ooccccuurrrreedd iinn ththiissggrroouuppdduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122.. TThhrroouugghhoouutt tthhee rreemmaiandienroodffetthhree ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 1122--1166)),, mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayyggrroouupp wwaass ccoommppaarraabbllee ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluuee;; hhoowweevveerr,, ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn rreemmaaiinneedd sslliigghhttllyy lloowweerr tthhaann tthhaatt iinn tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp.. WWhheenn tthhee eennttiirree ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 66--1166)) wwaass eevvaalluuaatteedd,, mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn aanndd ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wweerree ssiiggnniiffiiccaannttllyy rreedduucceedd rreellaattiivvee ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. DDuurriinngg tthhee ppoosstt-ttrreeaattmmeenntt ppeerriioodd ((ggeessttaattiioonn ddaayyss 1166--2200)),, mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn aanndd ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wweerree sslliigghhttllyy iinnccrreeaasseedd wwhheenn ccoommppaarreedd t1o tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. MMeeaann bbooddyy wweeiigghhttss iinn tthhiiss ggrroouupp wweerree ggeenneerraallllyy ssiimmiillaarr ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. AA ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt ddeeccrreeaassee iinn mmeeaann nneett bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn wwaass oobbsseerrvveedd iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp.. MMeeaann nneett bbooddyy wweeiigghhtt aanndd ggrraavviidd uutteerriinnee wweeiigghhtt iinn tthhiiss ggrroouupp wweerree: ssiimmiillaarr ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluueess.. MMeeaann bbooddyy wweeiigghhttss,, bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinnss,, nneett bbooddyy `wweeiigghhttss,, nneett bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinnss,, ggrraavviidd uutteerriinnee wweeiigghhttss aanndd ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn iinn tthhee 44 aanndd 1166 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouuppss wweerree uunnaaffffeecctteedd bbyy tteesstt aarrttiiccllee aaddmmininisisttrraattiioonn.. AAttt htheesscchheedduulleedd nneeccrrooppssyy oonn ggeessttaattiioonn ddaayy 2200,, nnoo tteessttaarrttiiccllee-rellaatteedd iinntteerrnnaall ffiinnddiinnggss wweerree oobbsseerrvveedd aatt aannyy ddoossee lleevveell.. MMeeaann ffeettaall bbooddyy wweeiigghhtt iinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayy ggrroouupp wwaass sslliigghhttllyy rreedduucceedd wwhheenn ccoommppaarreedd ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp vvaalluuee ((ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt)),, bbuutt wwaass wwiitthhiinn tthhee rraannggee oofftthhee WWIILL hhiissttoorriiccaallccoonntrtroollddataata.. VViiaabbllee lliittteer ssiizzee,, ffeettaall sseexx rraattiioo,, ppoossttiimmppllaannttaattiioonn lloossss aannddtthheennuumbmersbooffeccoorrrppoosrraalulutteeaaaannddiimmppllaanntattiaontsiisiottenssiinn tthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayyggrroouupp wweerree uunnaaffffeecctteedd bbyy tteesstt aarrttiiccllee aaddmminiinsisttrraattiioonn.. IInnttrraauutteerriinnee ggrroowwtthh aanndd ssuurrvviivvaall wweerree nnoott aaddvveerrsseellyy aaffffeecctteedd aatt ddoossee lleevveellss ooff 44 aanndd 1166 mmgg//kkgg//ddaayy.. FFeettuusseess ((liiittteerrss)) aavvaaiillaabbllee ffoorr mmoorrpphhoollooggiiccaall eevvaalluuaattiioonn nnuummbbeerreedd 333388((2255)),, 2288441(199)),, 333300(2244)) aanndd 337777(2255)) iinn tthhee ccoonnttrrooll,, 44,, 1166 aanndd 3322 mmeg//kkeg//ddaayy ggrroouuppss,, rreessppeeccttiivveellyy.. -2266-IS 33MM_MMNN0011006622667766 22779922..00002266 wL-is7016 ~rIL-157016 MMaallffoorrmmaattiioonnss wweerree oobbsseerrvveedd iinn 00((00)),, 00((00)),, 33((11)) aanndd 00((00)) ffeettuusseess ((lliitttteerrss)) iinn tthheessee ssaammee ggrroouuppss aanndd wweerree ccoonnssiiddeerreedd ttoo bbee ssppoonnttaannecoouuss iinn oorriiggiinn.. AAnn iinnccrreeaasseedd iinncciiddeennccee ooff oonnee developmental variaion, beat ribs, was Observed in the 32 mg/kg/day group and was developmental variation, bent ribs, was observed in the 32 mg/kglday group and was anrbuted to the est rice. attributed to the test article. In conclusion,no matermal toxicity or developmental toxicity wasnoted at doselevels In conclusion, no maternal toxicity or developmental toxicity was noted at dose levels ooff 44 aanndd 1166 mmgg/k/kgg//ddaayy.. MMatateerrnnaall ttooxxiicciittyy wwaass eexxpprreesssseedd aattaaddoosseelloevveellooff 3322 mmgg//kkgg//ddaayy bbyy 2a rreedduucceedd mmeeaann bbooddyy wweeiigghhtt ggaaiinn dduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122 aanndd rreedduucceedd ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn dduurriinngg ggeessttaattiioonn ddaayyss 99--1122 aanndd 1122--1166.. DDeevveellooppmmeennttaall ttooxxiicciittyy wwaass eexxhhiibbiitteedd bbyy aareredduucceeddmmeeaann ffeettaall bbooddyywweiegighhttiinntthhee 3322 mmgg//kkgg//ddaayyggrroouuppaannddbbyyaannininccrreeaasseedd incidenc of one skeletal variant (bent 1s) in the 32 mg/kg/day group. Feal toxicity incidence of one skeletal variant (bent ribs) in the 32 mg/kg/day group. Fetal toxicity occurred in conjuncion with he moderate matemal oxcity previously ote at his dose occurred in conjunction with the moderate maternal toxicity previously noted at this dose lleevveel.l. BBaasseedd oonn tthhee rreessuullttss ooff tthhiiss ssttuuddyy,, aa ddoossee lleevveell ooff 1166 mmgg//kkgg//ddaayy wwaass ccoonnssiiddeerreedd be the NOAEL (no observable adverse effet level for matemal toxicity and to be the NOAI~.I. (no observable adverse effect level) for maternal toxicity and developmental wxicy developmental toxicity. PDaolldlG. Se&p,YPh.Do. p DonaSltduGdy. DSitruemcpt,orPh.D. Study_Director S(Da3tela7 Date an-277 22779922..00002277 Su MNot062677 3M MN01062677 W`WIILL--115577001166 VVII!L. KKP EEYYSSTE TUUDDYYR PERSS ONNEO LAANNDDN RREEPPOON RRTTSSUE UBBMMISISL SSIIOONN `SSuubbmmitittteeddBByy:: SellY %. e Dold G- Sup PH Donald G. Stump, Ph.D. SutTodcologis, Dordopmentl Staff Toxicologist, Developmental Reprod2 Neortonoctogy Reproductive and Neurotoxicology `Study Dison Study Director Eh <l30k7 Date RRepepoortrtPlrhe~paarraattiioonn:: leithtl /~ ' `SStteepphhaanniiee BB.. GGaallll,, BB..SS.. Report Weer 1 Report Wdter I ReRveivieewweedBByy:: J~pl d.pBoelen, PLD. F. Holson, Ph.D. ga X,~resident, Director Tobne FKoon, 5 ~' John F. Knapp, B.S". ~ MMaannaaggeerr,, `aDDnedevveNeleluoorppommteonextniatacllo,,lRRoegepyprroodduuccttiivvee and Neurotoxieology slein Date s=fofi7 Date sfhaeel7o Date Ct 'e M. Lindsey',, M M..AA.. Manager of Techical Report With Manager of Technical Report g YS Mark DD.. NNeemmeecc,, BB..SS..,, DDA.AB..BT.T.. deinn aannDddirRReeceptporroroddouufcctDtiievvveeeTTlooopxxmiicceoonlltooagglyy ~Se]bf JoarmVeie sceLLP.reSSl schihdaaerrndtdi ,eeinDn,irM Mel 5c.t.So--.r, oAAe fT.TRS.eS.s.-- ach Seriior Vice President, Director of Research 3/Sfaofoy Dafe 5/39/77 Date --tfffre e a-28- suf 22779922..00002288 sw_wnotcezers 3M MN01062678 WWIILL--115577001166 voVI.I. KEY STUDY PERSONNEL AND RP-PORT SUBMISSION ((ccoonnttiinnuueedd)) SSttuuddyySSupueprevrivsisoorrss:: Sally A. Kees, AS. DDSaaanlnliyieellAWW. .K. eSSevvtesed,d,,APP.Shh...DD.. KKeerriinn CClleevviiddeennccee,, BB..SS.. Manager of Vivarium `M DDiiarrneecacttgooerrr ooofffM MVeeitvtaaabbroioullmiissmm aanndd AAnnaallyyttiiccaall CChheemmisisttrryy GGrroouupp SSuuppeerrvviissoorr ooff GGrroossss PPaatthhoollooggyy and Developmental Toxicology Laboratory and Developmntal Toxicology Laboratory 2-29- ye 22779922..00002299 W3M_MNMON100160622667709 W WIILL--115577001166 VVIIIII.. QA QUUAALS LIITTYYS ASSU URAR NCEUA UNNIITTN SSTTAAC TTEEMME EENNTT - Duty of Prue RDaetp)oFrits DaTta) pFinatdiongs lIonDssppaeteecc(tisi)oonno(sfs)) ednspInesPpgheaiesteeexdi me Cli trations 1d 12/17/96 noms iomy WCoartg&eBp 1p2r1956 jvaaem 12/19/96 ane fobetsanie 12/23/96 wom Liptyissercom Visas s16m97s pvarm 1/6/97 031, 34 4497 Sey Foor a Sam 3/20, 21, 24 and 4/4/97 Sah 4d 41 Sod Rare ar Samm 3/21, 24 and 4/4/97 S36 25 tnt 2 27 Degenlo Ai) 42907 pad 4/24, 25 and 28, 29/97 an Dot Repos hii) om Sam 4/28, 29/97 Clinical Observations a~d Body Weights Aaimal Car~ & Equipment Test Material Pmparatioa/ Analysis Laparohyster~tomy/Viseerals Study Records (I-l) Study Records (N-l) Draft Report (w/o Analytical) Draft Report (Analytical) Date(s) Findings Reported to SSttuuddyDDirireocettoorr 12/17/96 12/19/96 12/23/96 1/6/97 4/7/97 4/4/97 4/29/97 4/29/97 Date(s) Findings Reported to MaMpasngageemmeennt t 1/31/97 1/31/97 1/31/97 2/26/97 5/28/97 5/28/97 '3/28/97 5/28/97 "Tis This study study wwaass ccoonndduucctteedd aanndd iinnssppeeccteedd iinn aaccccoorrddaannccee wwiitthh tthhee ccuurrrreennt EEPPAA,, OECD OECD and and MAFF MAFF Good Good LLaabboorrastoorryy PPrraaccttiiccee RReegguullaattiioonns,, hethe SSttaannddaarrdd OOppeerraattiinngg Procedures Procextures of of WIL WIL RReesseeaarrcchh LLaabboorarattoorriieess,, In.Inc., aanndd tthhee ssppoonnssoorr''ss pprroottooccooll aanndd protocol protocol amendments, amendments, with with tthhe ffoolllolwowinign eexxcceeppttiioonn,. TThhee ddaattaa llooccaatteedd iinn AAppppeennddiixx cAAonwwdeuercreet oftthhee the study and rreessppoonnssiibbiilliittyy ooff tthhee ssppoonnssoorr.. QQuuaalliittyy findings rom review of AAssssuurraannccee iinnssppeeccttiioonnss the raw data and draft dduurriinngg report tthhee are documented and ave been reported to the conduct of the study and findings from review documented and have been reported to the study director. of the raw data study director. Aand A statusdraft status report is report are report is submited to management monly submitted to management monthly. finalreportwil beresid atWILResearchLaboratories, Inc. RRaaww ddaattaa iinn mmaaggnneettiicc ffoorrmm,, aa rreetteennttiioonn ssaammppllee ooff tthhee tteesstt aarrttiiccllee aanndd tthhee oorriiggiinnaall f'mal report will be retained at WIL Research Laboratories, Inc. ~ > Lon Gadbavahn KRFin Manager of Quality Assurance DDeebboorraahh LL.. LLititttllee: Manager of Quality Assurance Slzepa DDaattee 30. -30- By 22779922..00003300 Su MNo1062680 3M MN01062680 W WIILL--115577001166 IX. REFERENCES - 1. iW WnIRILLa-t-Is1S.577W00I1155LR((11e99s99e77a))rAAchDDLoaosbseoerRRaatanongrgeie-e-FsFi,innIddniicnn.gg, DDAseehvvleeallnoodpp,mmeOenhntitaoal.l TTooxxiicciittyy SStudtyoouff33d113344y0011 in Rats. WIL Research Laboratories, Inc., Ashland, Ohio. 2. INNnaasttiiitoounntaaell oRRfeessLeeaaabrroccrhhatCCoooruuynncAcinilli((m11a99l9966R))esGGouuuiirddceeesffoo,rrtCthhoeemCmCiasraseaiaonrnnddUoUesnseeLoiofffeLLaSabcboiorernaactteoosrr.yy AAnniimmalalss.. National `IAnAcscataidtdueemtemyyoPPfrrLeesasssb,,orWWaatsaoshrhiyinngAgtntooinmn,,aDlD.R.CC.e.sources, Commission on Life Sciences. National 3. SISmaapllleeawwnsstkkaitii((oKKn3s6lt1nen)l)l,,enVV..aEEm.. ((11996644)) Uterus FdFeaarrrbbeReammteteteth.hooddeeNazzuuumnmynmmaak-krroSoscskhkomop.piissAcerhhceehnniv.NNaaccfhhiwrweeiEisxspeyvroo.nn IP`mPaatpthhloaollnootggaitiiceouunnnstddelPPlehhnaarrammm.. 22U4477t:e:3r3u667s7..der Ratte. Naunyn - Schm. Archiv. fiir Exper. 4.o SSfetttuuuccskkehhsaarurdsdset,,dJJi..nLL.t.eaarnnatddogPPeoonppipcpeiet,,ySSt..eMMs.ti.n(g(1.19988T44e)r)aFFtrroeegssehhnevvsiiissscc,eerrcaaallreecxxinaaommgieinnnaaettsiiioosnnoaofnfdrraMattuatanandgdernraaebbsbbiiistt 44fe::1t1u88s11e--s11u88s88e.d in teratogenicity testing. Teratogenesis, carcinogenesis and Mutagenesis 5. WrWeonooaol,, DdDe..vCCe..loaapnnmddeHHnotoaarir,n, RR.MM.. late ((11997722)) AAppppaarreenntt hhyyddrroonneepphhrroossiiss gestation of rats: The effect aass of aa nnoorrmmaall aassppeecctt ooff methyl salicylate. TrTeeenrraaalttoolldooeggvyyel66o::pm1199e11n--t1199i6n6. late gestation of rats: The effect of methyl salicylate. 6. WPWriilinlsscooinnp,l,e1sJ..GaGn..d ((T11e99c66h55n))iqEEumembsrb.yryo(olWolioglgisicocanal,l Jcc.ooGnn.ssiiaddenerdraatWtiiaoornnkaiinnnytt,eerrJaa.tt,oolleoodggsy.y.). IInn:: TTeerraattoollooggyy:: The University of CPChrhiiincccaaiggpoolesPPrraeensssds,,TCCehchihiccnaaigqgouo,,esII.lllliin(nWooiisisl,,sopppnp.,. J22.5G511.--22a7n77d7..Warkany, J., eds.) The University of 7. DDS.aawwSstsoaoinnn,,TAAe.c.hBBn..ol((.1199212:661))2A3A-1nn2oo4tt.ee oonn tthhee ssttaaiinniinnggooffcclleeaarreedd ssppeecciimmeennss wwiitthh AAlliizzaarriinn RReedd S. Stain Technol. 1:123-124. 8. BBMMDDPP ((11997799)) BBiioommeeddiiccaall. CCoommppuutteerr eds.) University of California Press, PPrrooggrraammss.. ((DDiixxoonn,, WW.J.J.. aanndd BBrroowwnn,, Berkeley, CA, pp. 612, 780, 781. MM..BB..,, eds.) University of California Press, Berkeley, CA, pp. 612, 780, 781. En -31- $37 22779922..00003311 33MM_MMNNO011006622663811 W WIILL--115577001166 `DAA DeevelvopmeentallTToooxxicicipittyy SSmttuuddyeyooffn331133t440011iainnRRlaattss TTAABBLLEESS 11--1133 2 -32- ss2 22779922..00003322 M3M_MNMON100160622660822 [LL rm |3i 2233333 L| [ 8 eeee coo emg || 333g 3 | pogo x) E Ile be esee ceo ih! EE Hl sama Bahn = IsI 255 sls c | oTg r SPSopEEoR iI TREW AgLE TE FiliE il: 3333 $63 22779922..00003333 3M MN01062683 ; I To | J | g& d| Boor eapvesss 3 3 | smn sos 5 E3TE | I[s r SE pl latin t Tgio - 0 ioe: Pig | i{8 | is or g8 a PolElELEEEeTs ftsunnnne gFea Be EAE hd nn i 3344i 3M MN01062684 2792.0034 - i | ! {TREE TE TE TE 2 8 8 a !i |i | y gl~| $5TE3E~NE6FRE3 N6%EoNfE6N% R88%ii 0 [3 3 i in sfka) H18 dh. IRI BE maeaaaggasgl B go o . TTT TTT Th5e: iBE | I lcs TehANA RegegfagataH |Peg 8 2 2 = of 8 8 xedHH EizSy 2 | C E| HEHE : gi 3% HEE HE {akg [582 %3 %3 %3 73 "8 YS GigEe EE fe eo rn oo 2 =z = = = [gaz & ia a a = 3 a a a a Zz ins 3555 555 3M MN01062685 22779922..00003355 - | 8i, || "| 88 #8 6g) i 2= a i || | | | Ie g, wl gEm Agw Eogul]E EoiBE .| I[#] oo EE gE | 15: TEEETS LfTI Riez RggogRoi(gRE B - ag e ae || faitalfts rl eck Dog aan i BRA fe = = {9% lg 78 (+8 36 5% 22779922..00003366 a 3M MN01062686 - | 8Eg g || le ie fe oan be ose i {Rd 8 8 5 3 dd 8 3 | | i i |i || BE us ~ #3 "% "3 "% " <3 "3 og 6E El i Sa | 58 a EI ilge32 bo op BERR Sg i 78 "a "8 "8 TR YS 7 % 5i i] | 25 | l.85 150083 Eo {=ggEs | (a58a i $ & 0w oa $3 8 3 Sz 85 Po nnnnnnsnnnE & | | FEE gi Bl ed nd od od 2d 2d 8d nd za ad [SEE 8 fee 0s ag 2g ow og [533EE i lz 25 2883838 358 3 |2;38 37 onan? - $57 3M MN01062687 22779922..00003377 "risatray a ag || iB"i|g: HN og ag ez uz ana 5 g | os $F 3 R Ek E# o cEhl | bi p) B ES ETE ESE Bust 15553335548 3388 Ssd 2792.0038 3M MN01062688 - | Eli gg greg i i .i | i | | J2 || 93% RgaaYn eRss"e ggge"n e83o. ! ig | | E| | S| 138 gWgSgF | FnTe RgoEo TgFe a-ape a esea55 Be | +8 %? | iIss <E-|! sav ge poge RcEee Rzodegl | , |i sR EET Pg OIi[BeeRBE5 iHi i EEE 5E pLE38 [ig58 39 <7? 22779922..00003399 : auvores 3M MN01062689 | rE i " 5 aE 53 i] 53 a3 a " 3 5 il 52 i | == H3oo agsgaagaqagil ZHE | I|g8e8 no i = 1 gg <8 g& g8 28 48 48 $3 8 aul | il i 2 ssrepnnnnnnydh RTI YTYY i |s88e ls: :zssziazz:s5d 44O0 Sere 3M MN01062690 2792.0040 r"|1 1| : NEoe we Roe Rbe SEe Rbe atl j 64&44& | | | | ) 4% RE SF N% <8 8 93) | woat | 8| 3| CI~! E % E 2 F 5E2 L$2 E42 EE go | : i| BB | ik ce um uk ug aw Ii |: sg gHoi(M8 ls 1s5c5e3 IE] un EE |i Podi| o : HR i 24 BR45 RodBnBd wRd sed Pa oe oe 4 gos ] i{253523838 alS1g82 IE - gia BeEM E38 z2I" 4411 St! 22779922..00004411 Su noicezes 3M MN01062691 = | | } |i 5[8aAN AE RE 4% et B3 Yeg SsEoSng EEE EEE | be Ho | 88 oo Ee gg | 1,58 gBE ae. lags is l a5 #5 #5 "5 = #3 RE g 3 "a i be % J 185, :| [=388 <2-| 9a%0 GeBR RNbR A8p eGnB oGnf aufngof eugk enawTMl i . iE gE | 3m onnnnnnnnnn BF) =F nF ed od od od o of oO G0 (BEES g | dd dd 4d Ed eg HH g 15 5 5 8 3 % B 3 % fe:II II 442 St-z I 3M MN01062692 22779922..000042  | | | ; <8 RE ORE RE RE RE RG i = w o ~ a | | ' | | i5 ofP8T%EKIERKRE I$TIKERYRE gze | ao SE gd oi gZ g2 RE 2 ng ng ke 20307255 ii | EE li n in un ae ek cw #EY|Y BiE i l| i2t8 [222 go R88 RE Hiih unl{?-BEE [i | 12 Do nnBnnnna 2 i g| i sas i $1 24 g4 od nd wd wa ga |QEEE i A 4 3 4 4 4 3 {388 { ls 25 55 35 2:8 4453 St 22779922..00004433 a orcezess 3M MN01062693 _. BN olen, LL ow Cle see _ th] 58 sn2 say "| | LR a | i i S20E8 L|| tgEfg]! a#mg38 e"na8g3t%An8aLe% senaAney!) ilLizC foc pig) mom eom emg oeny og) ih | gr cece caren, [ Dhean eon mse emt NE z | ii "3g gg w2g #28g i i | a) ogg oz3 ozs ub 1 PET EE ARLE i "1 @3% gE 8%% asia 1 fo Bel aE aed en 153 4 i 0 | Bsc Bae pe felis iif 4444 zy 2792.0044 3M MN01062694 = 7] me gz gee ase zee age]| To a Floss a ose oa am | El|| L1l 5 n if I" ame gee gee ose nee send) i i i Hi fi A co I 1Ll Hiet sl ] . le BR EE 5 1 og gla :lR|TEBIas mI s Ifas BI is jB ie feH el e 4455 se 3M MN01062695 2792.0045 Yl |i|foi ORS 92% 2R% 2@S 1 ElI I EE T 2 H2l E INS C - /i i CE Bz | | Fly i i| i, Ela i |f) ea: wa=o a whell 1 ii sl. Ed S 8g {|ZEng .B! o NL b:eetsi le g i] gii= fisorjie oorid= a1li-1FERCle 4466 | 2 3M MN01062696 2792.0046 Eo | = Po | HH i i HOTT BE I 2 Bz | i f1ag: L ls , 1Ll s = ibHi CfOIeI fel 47 57 2792.0047 3M MN01062697 Free EE a! q|t 1: H fg : fal 1 LL soP|lhyLgimEiEDiy I d o| E| gfEgfeRnnbW,.eztl | BE 66 heE 448 Sef 2792.0048 3M MN01062698 15] 4 = 82 i-ieei. 1 EB GE|g|e i 25 || if 0h L| Esgo i i: | E a Ef EH 449 wt 2792.0049 3M MN01006622669999 m 8 giles! TL g8 -leels a ; si 5p|)l0E|E ho HEhLg lly LIN 5E : || IHE EiEeE PogE 55O0 gS 7% 2792.0050 3M MN01062700 givin 28 ss L| l| ani= " 5 i -1e ssa) zevihel| || 1| 8 i Cun fl3 181 LEE foisPPolsy g |h =8i.EI8E : 1 EBEr SIE fPe ies gER s 5511 2792.0051 3M MN01062701 : le gees i || fe mann hel mmm | 1 i Bo gEfEeE UH IE Fl CPnolii ii iid obePcEE:L 1 i iP Eig 5522 S72 2792.0052 3M MN01062702 fSada| I3[]1 . Pfoo=li me go greseeom-ane---i I jam] I mgmanemensw-e| | owl go ge puorssnameemw] | Fee NE 17! go mo wmwmoocoommman| | ig I. ii ef juni 8c 8 gSh EE [[Zao7]] go # go BER |".i go go gs [I 8 EE ga0Hio olLl 3 I. ph LE iol | gE el i kk 1 | EI guarnrmennee | ggzegsmecmommmnai[l8]] gargooscmmenn|di mens i 1g Lopi 8 I. HamEBHT BS ee HH ES ghEiE Be Ll gheeeeRuener | 553 $73 22779922..000053 3M MN01062703 I I I I I I 5 ee] : [Pood HfFLE ooloze|1 Pod l=] 2gEg |i | 4 EE 2 I =f) | 18 do gE ARE i gE gg LPoEly iag2 CBi h Ei 2 | [EE {cE E iG i : | IEEE 5544 SY 22779922..00005544 A 3M MN01062704 SSeT! Fi i wo fale] gE Ld 4 LE ileis S eioi phoHPOEE || e3 | 3 || aEEa|-f Ed P| ne {E318 555 TIT 22779922..00005555 3M MN01062705 - of | | fo ragman LL Co Fleshman mona 5 EB Bdpg amlemzome a03 n2 sae sae onmomnanamgal gffg| HEHBHEELEBEL)58 i on iit 8 be PE} : ciEdeedf peHii HH He Porridge ERIE EEE EE 5566 5% 3M MN01062706 2792.0056 HEINER | 1 Sh i |- HE pi p Ri lIf 5ER& Nb EEo ERtl i kRE i} 57 5--77 7 2792.0057 33MM_MNM0N100160622770077 oll fame PLil Fe Ll [I lols 5 i3 i =23 i0 i | smo oz musRE oa| So | 2g 28 2% es s c |a Rg! i Et : HEHE BEE El a Ha ey. I I L cbEh: ieiE ,Pp eEeEeE BEdG P ElElasEEEEEl ii ef 5588 - SH 22779922..00005588 3M MN01062708