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Study Sponsor: Issue Date: Document Reference No.:
ELF ATOCHEM 22-Apr-99 95/SAEK/0432/CKE
AR226-3120
Algae Inhibition Author(s): H. Thiebaud
Coll: C. Kae'
English Translation of Report Summary for DuPont Chemical Solutions Enterprise . 27-Jan-03
Sanitized. Does not coni*" Tsnn
Company
TECHNICAL SUMMARY
.. The determination of growth inhibition (chronic toxicity) of fresh water algae Pseudokirchneriella subcapitata (previously called Raphidocels subcapitata and Selenastrum capriconutum) exposed to
tBttor 72 hours, was effected using the operating procedure described in standard NF EN 28692.
The method consists in exposing the algae to a range of f l m i H concentrations dissolved in water. The toxic effect observed is inhibition of cell multiplication after 72 hours.
The study was carried out in 100 ml Erlenmeyer glass flasks, closed with carded cotton packed in gauze, containing 50 ml of the test solution seeded with an alga suspension in sufficient quantity to obtain 10 cells/ml at the start of the test. The test flasks were incubated at 22.2 0.5C under continuous agitation and lighting. The alga concentration was measured each day of the test. Physical and chemical analyses were effected at the start and the end of the test.
The concentration of substance under study which causs a 50 % rduction, either of th growth (CE50b) or of the growth (CE50r) is determined. The NOEC (No Observed Effect Concentration), which corresponds to the highest concentration tested which does not create a significant effect relative to a control, is determined by a statistical analysis test (Dunnett test). The results of the study are :
Nominal inhibiting concentration and NOEC (mg/l)
Value
Cl at 95 %
CEsob - 72 h CE10b - 72 h NOECb
CE50r - 7 2 h CR10r - 72 h NOECr
Integral biomass 9.6 2.4 1.9
Growth rate 23 4.6 9.4
3-22 0.18-6
14-45 1.9-8 "
Cl : confidence interval ND : indeterminate
The study was carried out without analysis of the test solutions. Thus, the substance under study being a preparation composed of several water soluble components, the method of NF EN ISO 28692 was used rather than method C3 of the appendix to Directive 92/69/EEC. This method allows the study to be carried out without analysis of the test solutions, expressing the results based on nominal concentrations.
The inhibiting and NOEC concentrations presented in the above table were calculated using nominal oncentrations.
Sanitized. Uces no! contain TSCA
Visual observations allowed verifying the appearance of the solutions at test : the test solutions were clear, colorless and homogeneous during the test. No precipitation observed at the end of the test. Microscopic examination showed that the appearance of the algae at the end of the test was normal compared to observations made on the control solution : monocellular algae in the form a moon crescent of average size 5-10 //m . The pH variation during the test in the control series was 0.52 units. ThP validitv criteria of the study were respected : the density ratio (R) measured in the control solution was greater than 16 (R = 71); the pH of the control solutions did not vary by more than 1.5 units during the test. The present study was carried out according to the Good Practice principles of the OCDE laboratory.
jS&jnpany Sanitized. Does not contain TSCA CBf
I
t i r A t o c n e m o .m .
DCRD Centre d'Application de Levallois
Service Analyse Environnement
conformit aux BPL de l'O C D E dlivre par le GIPC en date du 8/3/93. reconduite le 27/11/98
Levaliois, le 22/04/99
Rfrence Squentiel Etude numro
RAPPORT D'ETUDE
TITRE :
INHIBITION DE LA CROISSANCE DES ALGUES
AUTEUR(S) :
H. THIBAUD ; Coll. C. KAE
RESU M E D O C U M E N TA IR E :
.......
Dtermination de l'inhibition de la croissance (toxicit chronique) du i
^ v i s - - v i s des algues d'eau douce Pseudokirchnenella subcapitata sur 72
heures en suivant le mode opratoire dcrit dans la norme N F EN 28692
(reproduisant intgralement la norme ISO 8692) Cette tude est real,see
conformment aux principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de I OCDE.
MOTS CLES Toxicit chronique, algues, NF EN 2S592
D E S T IN A T A IR E S : M. DEVAUX (DFO) DOC FICHIER TECH
Copies ! :
Chef de Service, Responsable des Archives,
Secrtariat, Service cotoxicit et Sret des Produits (DSEP)
A
iJ appon comprend 29 ps-gss 2' 2- feuiiiss no.* unpins--
Company Sanitized. Does not contain T S C R
. - jjborooris Ureoei/gr8ricao.nicarimr!bj3sii^saTsaLSX5aimearESS5aAtocrern
rcDCor:oertn'a TM ovesxsfarmde ngrspnnusTra?-
___t , m r n n a r r t w n fir . nsoe l i 2s
Centre d'Application de Levallois
RESUME TECHNIQUE
La dtermination de l'inhibition de la croissance (toxicit chronique) des algues d'eau douce Pseudokirchneriella subcapitata (prcdemment nomme Raphidocdis subcapiiata et Selemstrum capricornutum) exposes au M B B V i pendant 72 heures, a ete ralise en suivant le mode opratoire dcrit dans la norme NF EN 28692.
La mthode consiste exposer les algues une gamme de concentrations du g g g l solubilis dans l'eau de dilution. L'effet toxique observ est lmhibtion de la
multiplication cellulaire au bout de 72 heures.
L'tude a t ralise dans des fioles erlenmeyer en verre de 100 ml, bouches a l'aide de coton card emball dans de la gaze, contenant 50 ml de solution d'essai ensemencee par une suspension d'algues en quantit suffisante pour obtenir 10 cellules/ml en dbut d'essai. Les flacons d'essai ont t incubs 22,2 0,5 C sous agitation et clairage continu. La concentration algale a t mesure chaque jour d'essai. Des analyses
physico-chimiques ont t ralises en dbut et en fin d essai.
La concentration en substance tudier qui provoque une rduction de oOA soit de a croissance (CE^bX soit du taux de croissance (CE50r) est detemunee. La NOEC (No Observed Effect Concentration) ou CSEO (Concentranon Sans Effet Observe ), qui correspond la plus forte concentration teste ne crant pas d'effet significatif par rapport au tmoin, est par ailleurs dtermine par une mthode d'analyse statistique (test de
Dunnett). Les rsultats de l'tude sont :
Concentration nominale inhibitrice et NOEC (mg/1)
Valeur
| IC 95 /o
C E l0b-72h NOECk
' CEsnP-72h C E i0r-72h NOECr
IC : intervalle de confiance ND : non dtermin
Biomasse intgrale 9.6
1
2.4 1.9 Taux de croissance 23
i 4-6 i 9-4
3-22 0,18-6
-
- 14-45 1.9-8 -
Company Sanitized. Does not conta'"
Ce cxjcemapt s s resr0 p rx ri^ . li re peci rre recoos. r communnue s oes tiers sers aurcfsaon eroresse rfETAocnerr.
o=oe n ' s * a = " * pncrcgrTM
iuse r" 42=5/33/A - RC342==.DO~ page 2-29
Centre d'Application de Levallois
L'tude est ralise sans analyse des solutions d'essai. En effet, la substance d essai tant une prparation constitue de plusieurs composants solubles dans l'eau, la mthode NF EN ISO 28692 est applique plutt que la mthode C3 de 1 annexe a la Directive 92/69/CEE. Cette mthode permet de raliser l'tude sans analyse des solutions d essai, en exprimant les rsultats sur la base des concentrations nominales.
Les concentrations inhibitrices et NOEC prsentes calcules en utilisant les concentrations nominales en
ci-dessus ont t
Les observations visuelles ont permis de vrifier l'aspect des solutions en dbut et en fin d'essai : les solutions d'essai ont t claires, non colores et homognes au cours de l'essai. Aucune prcipitation n'a t observe en fm d'essai.
Les observations microscopiques ont montr que l'aspect des algues en fin d essai tait normal par comparaison aux observations ralises dans la solution tmoin : algues unicellulaires en forme de croissant de lune de taille moyenne 5-10 pm.
Les variations de pH en cours d'essai dans la srie tmoin a t de 0,52 units.
Les critres de validit de l'tude ont t respects : le rapport de densite (R) mesure dans la solution tmoin est suprieure 16 (R = 71) ; Le pH des solutions tmoins n a pas vari de plus de 1,5 units pendant l'essai.
La prsente tude a t ralise selon les principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de l'OCDE.
(l^fR pany Shtized. o e sffo t conlaln TSCA CB?
Ce 3x n i6rc e s noiie oroan^e. flns peut re ni ccp. ni communaul s des bss sans aUDffescn soresss tuflE 42S5/95/A - RC342S5.DOC page j /29
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Centre d'Application de Levallois
L'tude est ralise sans analyse des
mthode NT
une prparation constitue de plusieurs comp
d l'annexe la Directive
EN ISO 28692 est applique plutt que la m e d d 1 " s solutlons d'essai, 99/69/CEE Cette mthode permet de raliser 1 etude sans analyse
e x p ta a n t les rsultats sur la base des concentrt. nommales.
U s concentrations inhibitrices et NOEC prsentes d a n ^ a b l e a u ci-dessus ont e.e calcules en utilisant les concentrations nonunales en
? *r
essai. Aucune prcipitation n'a t observee en fin dessat.
Les observations tnicroscopiques on, tnonn
^
3 O T : l s = d e ^ o ^ e 5 -.0 Ptn.
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Les vanations de pH en cours d'essat dans la sn ttnotn a t de 0,52 units.
Les en,res de validit de /tude la solution tmoin est suprieure a 16 (R - VI) , Le pti
vari de plus de 1,5 units pendant 1 essai.
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La prsente tude a t raltse selon les prutc.pes de Bonnes Pranpues de Laboratotre de
l'OCDE.
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Ce cccLimer- est i r a P * *
page 3/29
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c it Miocnem sCentre d u p lic a tio n de Levallois
T Fr.H N IC A L SU M M A RY
OECD. .
Algae were exposed a range of concenmnons o B B
^
.. in dilution of cellular
The study was performedl using
S pTFE. bungs and
u p is to n so that the urinal ] ' " " ^ S T a k e n 1 " constantly illuminated. The
were rncubated a, 22.2 *
measurements were canted
algal concentranon was measured daily - tnvs
out at the beginning and the end of the test.
,, en o/n reduction in biomass (EbCso) or m
The concentration of test substance caus g 5
d Effe(;t Concentration (NOEC),
growth rate (E A o ) was. i ,e" 7 f d ^ ' ^ a d o n where no significant effect was
corresponding .0 the taghe O z ^ " V m u n e d using a statistical analytrcal nhserved in comparison to the control, method (Dunnett test). The results were as follows .
Effect r--
concentrations and NOEC (mgd)_
Value
95 % Cl
95 % confident interv al : not determined
Tsca
'C om pany Sanitized. D oes not conla'n
iri=ctsrE2Utcy^^s)SK='3 i 'ECTern'
page 4'2S
Centre d'Application ae Levallois
T, chidv was earned out with no analytical determination o f test concentrations
according"to the
so^uble^chernicals-5 N o l c : hown ,n rhe previous tab,e have been calculated
using the nominal concentrations of
Thp annearance of the test solutions was visually checked at the beginning a^ at ^ " , S o lu ta rw e re found to be clear and colourless over the penod of the test. No
precipitation was observed at the end of the test.
"=3TMl; r - = r s r s r r js i" .K .t
shaped cell with an average length of 5-10 pm.
During the test, the control pH varied by 0,52 units.
^ .w ^ H -- = S
the test.
The study was performed according to the pnnctples of Good Laboratory Practice (GLP)
as described by OECD.
.
Sanitized, uo'er. not cohxefn fSCA CQI
Ce < * * * e s a a n . U tssnaxasnoece ^
.- r r p i css iiaf= s rB aLEXsaxT' soresse 3 AtechST:.
r mdor aPt a* M L
^ 2Zh,m k . r c 342SS.DOC page 5,79
tir Aiocnem s- Centre ('Application de Levallois
RAPPORT D'TUDE INHIBITION DE LA CROISSANCE DES ALGUES D'EAU DOUCE
N D'TUDE :
SOMMA fRE
1. a s s u r a n c e q u a l i t
2. SIGNATURES
3. IDENTIFICA TIO NS 3.1. Substance d'essai 3.2. Installation d'essais 3.3. Demandeur de l'tude 3.4. Calendrier 3.5. Archivage
4. O BJEC TIF DE L' TU D E
5. M T H O D E D'ESSAI 5.1. Introduction 5.2. Matriel et produits 5.3. Mode opratoire
6. MODE DE CALCUL 6.1. Calcul des pourcentages d inhibition 6.2. Calcul des rapports de densit (R) 6.3. Calcul des facteurs de croissance (k) 6.4. Calcul des concentrations inhibitrices 6.5. Dtermination des NO EC
7 . R E S U L . A^ servatjons e{ mesures des paramtres physico-chimiques
1.2. Concentrations algales, biomasse, et taux de croissance
7.3. Pourcentages d'inhibition 7.4. Concentations en substance d'essai 7.5. Concentrations inhibitrices e N O =C * 7.6 . Critres de Qualit de l'tude
_
8. CONCLUSIONS
9. A N N E X -S
^ composition de l'eau de dilution
a 2 . Annexe 2 : Pourcentages d'inhibition et courbes de croissance
9 3 Annexe 3 : Concentrations inhibitrices calcules par la me
9 4 Annexe 4 : Bulletin d'analyse de la substance
q nnPP 5 Bulletins d'analyses statistiques
7
8
9 9 9 10 10 10
10
10 10 11 12
15 15 16 16 17 17
18 18 18 19 19 20 20
21
22 24 26 28 29
Sgmpliy SanTIzed. Does ol contain TCPH
Ce - ncx* rrcr. ;_5re;rau=xri oe ce raecorr ries ajiDrs utc ' Etude r* 4285/9S/A - RCj 426=.OOw page 0,2-
"
tir rocnem 3.
.
Centre d`Application de Levallois
i ASSRANr r QUALITE
La prsente tude a t ralise selon les principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de
l'OCDE.
U Service E n --
en,
"
" ,, S C V * Q =n ?e
^ 0 *N^
cX --
r d a e ^ ^ T o T l "mars 1990, pour'les doutantes de comptences
suivants :
- tudes cotoxicologiques sur les organismes aquatiques et terrestres.
- tudes portant sur le comportement dans l'eau, dans le sol et dans 1 au bioaccumulation.
L'Auditeur Qualit du Centre d'Applicadon de Levallois procde des inspectons priodiques et des vrifications en vue :
. d'tablir la concordance de l'tude avec les Principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de l'OCDE,
avec exactitude les donnes crites de l'etude. Les dates correspondant a l'audit de cette tude sont donnes ci-dessous : 16/10/98 - 09/03/98
L'Auditeur Qualit ou son supplant :
<vDate Y>
Signature
^wp'aty Shitee&lBfeS Sl eoffialn YSCK CBS
,
r nuncc ces bars sans a lia
eorssss c?-? Accnem.
Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois
? ^NATURES
miP les informations contenues dans ce rapport concernent
Nous, soussigns, certifion q
i'nhiet de cette tude et refltent avec exactitude
uniquement la substance d essai fa
J j Service .Analyse Environnement du
les rsultats obtenus sous notre responsabilit dans le service .-u y
Centre d'Application de Levallois.
Le Chef du Service Analyse Environnement : M. BOURALY Date Signature fkj
Le Directeur de l'tude : H. THIBAUD
Date /
11 / //
Signature
Ce es: rare nroons. Il ne rs n: ca x.
1. Does no! contain TSC CRf
c ra c g ^ -O -i ritgni.
Elf Atochem b. A. Centre d'Application de Levallois
t in F ,N IlIA XIQN5
t i Substance d'essai Dnomination : NCAS : N' du lot : Date de rception CAL^ N d'enregistrement : Caractristiques principales :
- apparence : liquide brun - puret : . solubilit : compltement soluble 20"C Prcaution d'emploi et de conservation : voir FDS. un e copie du bulletin d'analyse de la substance es. prsente en annexe 4.
n 7 . Installation d'essais
CEn m d TM PLICATION DE LEVALLOIS (CAL) SERVICE ANALYSE ENVIRONNEMENT 95 rue Danton Q9100 l e v a l l o is -p e r r e t nirecteur de l'tudg : H. THIBAUD - Pprcnnnel impliqu dans l'tude .
H. THIBAUD Technicien(s) charg(s) de la ralisation de l'tude : C. KAE Rdacteur du rapport d'tude : C. KAE-
IgSpfiy Sanitized. D oes noicontain TSCA CBI
. RC342c5.DOC sage 9/29
c.n n c u i.1 i c i n
Centre d'Application
de
Levallois
t t n^manHenr de l'tude M .DEVAUX(DFO) N/fnniteur de l'tude : Mme BUREAU (DSEP)
t i Calendrier de l'tude : 20/10/98
. Approbation da plan d'tude par le Moniteur
- Dbut de l'tude : 18/10/98
- Fin de l'tude : 06/11/98 - Rapport d'tude : 22/04/99
-s A A r c h iv a g e
le Service Analyse Environnement pendant Les substances tudies sont conserves dans une dure de 5 ans au maximum. L'ensemble des documents de l'tude est conserv au moins 10 ans.
n R .rF .C T IE Ji= L ^ f f lP
/objectif de c e t t ^ t u d y s ^ e
^okin^nB riella
e;us!!SSK^oiredcntdanslanormeNh " "
5fcM I H ^ E S S l
g 1. Introduction
, nn< la substance d'essai ajoute l'eau de ; ? i . " d o n n e , pendant une priode de 72 heures. U s
" n ^ s o n , pas renouveles pendant l'essai.
}ans des conditions d'essai identiques "
"t ' d ts "effets diffrents sur la
les c o n c e n u a t i o n s ^ d i ^ ^ En consquence, en m.
croissance cL.s algu-s, -
r,,.Hb3sfer=srsaui:,fct''e>DfSSS!23tAmcrem
ce cxcuraarr. e s n a e onB . I ne c e i es* *
oue s a s formei i ^ i
* * ^ * ^ ^ ^ 2 8 5 . 0 0 0 page 10
** ......
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CIT Mtocnem o. Centre d'Application de Levallois
d'essai, chaque concentration correspond un pourcentage d'inhibition de croissance des algues.'La concentration en substance tudier qui provoque une rduction de 50%. soit de*la croissance (CE50b), soit du taux de croissance (CE50r) est, si possible, determinee par calcul. La NOEC'(No Observed Effect Concentration) ou CSEO (Concentration Sans Effet Observ ), qui correspond la plus forte concentration teste qui ne cie pas d'effet significatif par rapport au tmoin, est par ailleurs dtermine par une mthode d'analyse statistique.
L'tude est conduite en deux tapes :
- un essai prliminaire qui sert dterminer la gamme des concentrations pour fessai dfinitif. Cet essai consiste exposer les algues une gamme de concentiations gnralement comprises entre 0,1 et 100 mg/l.
- un essai dfinitif, dont seul le rsultat est retenu.
Si l'essai prliminaire montre une absence de toxicit sur la gamme de concentrations testes, un essai dfinitif peut tre ralis des concentrations suprieures a 100 mg/l si la solubilit de ia substance le permet. Ou alors, il peut tre ralis un essai limite a . mg/l ou la limite de solubilit, si celle-ci est infrieure 100 mg/l.
5.1.2. Rfrences - Norme NF EN 28692 (Mai 1993).
- Plan Qualit n7 : Toxicit chronique vis--vis des algues.
- Plan d'tude du : 14/10/98
5.1.3. Dviations
5.2. Matriel et produits
5 2. i. Matriel L'tude a t ralise dans une armoire de phytoculture qui permet d incuber les flacons d'essai dans des conditions prcises : la temprature est programme a 22 C ; les flacons, disposs sur des plateaux rotation alterne de 20 rpm, sont uniformment clairs en passant devant 8 tubes fluorescents. La temprature releve en continu dans un flacon d'essai a t comprise entre 21 et 23 C.
.'TT'*.
I!re oeut Sre ni cod, rconrrcJnBu dss Ses sans autms3En eorsse cfEli Aiocne.,.
Etude r. 4235/95/A - RC342B5 .DOC Daae i1/2=
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rt contain TSCA C
'Q q B S ^
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.
Centre d'Application de Levallois
au moyen d'un pHmtre Mettlei .es paramtres physico-chimiques ont rt mesuras WTW OXI 538 pour les mesures de roledo 345 pour les mesures de pH et d un oxyme
'nxvene dissous.
.i
oiaaip a t ralise par comDtage au microscope
La dtermination de la concentration g
, ,, , de v i s s e z ) lors de l'essai
d M f Zetpar ^ o f l u r S e ? . ideX lecteur de microp.aques (Cytofluor 2350) dans le cadre de l'essai prliminaire.
Les rcipients pour essa, son, des foies er.eruneyer en vene de .00 tni. bouches Va,de de coton card emball dans de la gaze.
: -> -> Produits et ractifs
Eau : pour la prparation des solutionsi oe t e j
S S
SS
" ^ ) T d e m toTpour la . mJ s son, dilues dans de
'eau ultrapure.
. Ractif biologique : les organismes pour ^ s a i sonHes dgaes
(prcdemment
l^ e '1 T p J 2 c fiu b c 7 p Z , Setenas,mm capricorm,un,) ; la souche unlise a t obtenue auprs du Culture Center of Algae and Protozoa.
. R,c,,fs ch,m,pues : les r a c fs uuiiss pour la p r p a r a i de Peau de drluf on (vorr annexe 1) sont de qualit "pour analyse .
5,3- Mode opratoire
5 3 1 Culture et prci'ltnre des algues
i qa mi chacun d'une culture mre axnique sont
Deux flacons contenant environ 100
phot0priodique de 16 heures
maintenus en permanence a - j
aration continue par de l'air filtre a 0.22
repiques partir des cultures precedentes. chaque semam par deux nouvelles culmres t vrifie avant chaque utilisation par un examen
de " llulS dformes'
4 jours avant le dmarrage d'un essai
d ais 500 ml d'eau
E lis e selon le mme protocole pue celui c r i, -
Cs xzunw.s roers oenz. ilne peui n? ni Uoeore^ OS" ra?Se^?2SSl3SA - RC3426S.DOCce \V2S
rasgra
..
-.ri
fSCM-CBi
Clt Miuuncm o. r\.
Centre d'Application de Levallois
dessus pour les cultures mres, Une seule des 2 pr-cultures sert ensemencer les fioles d'essai, la seconde est prpare au cas o la premire venait tre endommage.
Le iour de l'essai environ 50 ml de la pr-culture sont preleves stenlement et transfeies dans un rcipient. La concentration cellulaire de cette ahquote est determinee afi calculer le volume de pr-culture algale ajouter chaque rcipient d essai pour ob
a c tio n alaale de 104 cellules/ml TO. La concentration algale de la pie-cultuie est de 7,83 10* cellules/ml pour l'essai prliminaire et de 6,69 10* cellules/ml poui i essai
dfinitif.
5 3.2. Prparation des solutions
Les solutions de
Idans l'eau de dilution sont prpares le jour de l'essai.
S 3 3. Essai prliminaire
Des volumes adquats d'une sol.ution mere de
100 me/1 dadns ,l.'eau ddee
dilution sont verss dans des fioles jauges de 10.
0 1 UOO mg/1
dilution pour obtenu la gamme de concentrations nominales allant de 0,1 a 100 mgr .
Les solutions d'essai prpares sont ensemences afin d'obtenir une concentration initiale
P) de 104 cellules/ml.
-
Les fioles sont alors bouches avec du coton card emball dans de la gaze et places dans l'armoire de phytoculture.
a s w s 2 = 2 it z rs .s .-
les mmes conditions.
, . 4oh et 77h d'incubation un volume de 200 pl est prlev sous agitation dans
utilise pour le calcul des pourcentages d inhibition .
r H et m dissous sont mesurs la plus forte concentration et dans le tmoin, en d a m d e d a n s la fraction non utilise de la solution d'essai ensemeneee, e. en fin d'essai dans le flacon d'essai ensemence.
Les rsultats obtenus servent dfinir la gamme de concentrations de l'essai finMf. ...
>)
Ur'oracurooe ceiaoattfOE oe n'ssiauoe iseeauss^ra^
,,
. , - ^ v e io1jlaW'tSCP`C*
Eliras r,' 4285i38/A - RCo4aiSti.Jvjv-csos I J.-=
Elf Atochem S. A. Centre 'Application de Levallois
5 1 4 Essai dfinitif
^
Des volumes adquats d'une solution mre d e M M 100 mg:l dans 1 eau de dilution sont verss dans des fioles jauges de 200 nd et completespar de: U jau d dilution pour obtenir la gamme de concentrations nominales allant de 0,9 a 100 mg/l.
Les concentrations sont choisies de manire former une progression gomtrique avec un rapport de 2,2..
La prparation des solutions d'essai est ralise comme dcrit pour l'essai prliminaire. 3 rpliques sont prpares par concentration teste et pour le tmoin.
Les solutions d'essai prpares sont ensemences afin d'obtenir une concentration initiale de 104 cellules/ml.
Les flacons sont alors bouchs avec du coton card emball dans de la gaze et places dans l'armoire de phytoculture.
1 -c'Trerts tmoins (T) contenant l'eau de dilution et l'inoculum algal ainsi que 3 rcipients "blanc" (Bl) contenant seulement l'eau de dilution sont prpars et incu es ans les mmes conditions.
Aprs 24 h 48h et 72h d'incubation, un volume suffisant et infrieur l ml est preleve sous agitation dans chaque rcipient d'essai et introduit dans un tube a hmolyse. Apres chaque^prlvement, les flacons d'essai sont repositionns dans l'armoire de phytoculture L e ^ b e s hmolyse sont conservs l'obscurit. Au moment, du comptage les tub
t aeits manuellement, et une fraction de la solution est prleve afm de dterminer a concentrati^al^ale^ans chaque rcipient d'essai. La concentration mesure est utilise pour le calcul des pourcentages d'inhibition et la dtermination des couibes croissances.
Le pH et l'0 2 dissous sont mesurs toutes les concentranons en dbut d'essai et en nn
d'essai.
5 3.5. Contrle de sensibilit du ractir biologique
La sensibilit du ractif biologique est contrle environ tous 2
f
essai de toxicit avec le dichromate de potassium. La CE50r - /2h e. la C E 50b . -
bichromate de potassium sont dtermines. A titre tndtcanf, les rsultats du
ralis le 09/10/98, ont abouti une CEso, * de 0,98 mg/l et une C ,ob -
'
mg/l.
La recrxrjsaon gs ce rsDaort Ga uos n s oj
__ . .
Eiuds n` 42S5/9S/A RC342=.vOc oage >4.2=
. - .
V -4
t ir A io c n e m 3 . h .
Centre d'Application de Levallois
fi. MO OR DE CALCUL
6.1. Calcul des pourcentages d'inhibition
Les pourcentages d'inhibition ont t calculs en suivant deux modes, 1un utilisant les valeurs de la biomasse intgrale, le second les valeurs des taux de croissance.
Biomasse intgrale
.
La surface comprise entre la courbe de croissance et la ligne horizontale, ou aire sous a
courbe, est calcule l'aide de la formule suivante :
A = --N,------N-,,- xt.
N, + N ,- 2N,,
Nn, +N,, -2N,,
x(tj--
avec :
A, l'aire sous la courbe ;
|
N0, la concentration algale (cell/ml) au dbut de l'essai ;
N[, la concentration algale (cell/ml) au temps t[ (t[),
Nn, la concentration algale (cell/ml) en fin d'essai ( t j ;
t[, le temps (heures) coul entre le dbut de l'essai et le premier jour de mesurage ,
tn, le temps (heures) coul entre le dbut de l'essai et le dernier jour d essai.
Les valeurs de A sont calcules pour chaque rplique des diffrentes solutions d essai et du tmoin. Le pourcentage moyen d'inhibition de la croissance de la biomasse IAj est ensuite calcul pour chaque concentration d'essai l'aide de la formule suivante .
IAl ~
X 100
avec : A -. l'aire movenne sous la courbe de croissance du tmoin .
A , faire moyenne sous la courbe de croissance la concentration d essai i.
Ces valeurs et A^ sont calcules en moyennant les valeurs des aires sous la courbe des rpliques pour chaque concentration d'essai.
Les concentrations efficaces (inhibitrices) pour x % de la population sont notes CE b lorsque les calculs sont raliss partir des pourcentages moyens d'inhibition de la croissance de la biomasse (IA,).
Ce docurrsni es race croores. Il ns ceut are ni eroe, ni osrmunnJ s ostiere sans aig tsacnexprsss fe A io S err, L=rssnx:u=xyioeraKxirtd'u*nes:eunrEaisaLs:omedef3>^TODfxtoraDficiiJrt^a
rjoeS not Contain T S C C81
tude n' 4255/93/A - P.C342E5.DOC page 1o.2S o m p a n y S a n i t i z e * 1-
c tr H io c n e m a . .
Centre d'Application de Levallois
Taux de croissance
.
Les taux de croissance spcifique (p) pour les cultures en phase de cioissance
exponentielle sont calculs pour chaque rplique aux diffrentes concentrations d'essai
avec l'quation :
InN. - InN0
J1 = --------a------------- 2.
o to correspond au dbut de l'essai.
Le pourcentage moyen d'inhibition du taux de croissance spcifique (1^) est ensuite calcul pour chaque concentration d'essai l'aide de la formule suivante .
,,= ^ 0 ^ x 1 0 0
f*C
avec :
p c, le taux de croissance spcifique moyen du tmoin ;
/jt , le taux de croissance spcifique moyen la concentration d essai i.
Les concentrations efficaces (inhibitrices) pour x % de la population sont notes CExr lorsque les calculs sont raliss partir des pourcentages d'inhibition du taux de
croissance spcifique (IjJ.
<L2. Calcul des rapports de densit (RJ
Le rapport de densit (R) calcul pour chaque concentration et pour le tmoin, est gal au rapport des concentrations cellulaires moyennes en fin d'essai (N J et au dbut de 1essai (N0) :
6.3. Calcul des facteurs de croissance (k)
Le facteur de croissance (k) est gal :
o T est le temps en jour.
Ln Nn - Ln N0
k=
T
Le facteur de croissance est l'quivalent d'un taux de croissance moyen par jour d'essai.
ri-r-, i=^reroagreaacrtooaoeisc.elisnaeonsjtfferaarncasos3. rauacantrsr8riLsiragsTs-EoauosslsitiieirEssoearfseaMuairrensfxer.Dsraay^spsSs 2J J^f^-ff^--afililyia--*3 J v `-
- ` =iUde r.` 4285/33/A- RC342e5.DOC page In 'S
J'
-
> (t1*
h
Elf Atochem S. A. Centre d'Appiication de Levallois
6.4. Calcul des concentrations inhibitrices La relation existante entre l'expression de la toxicit (ici 1inhibition de croissance algale) et la concentration de la substance ne suit pas un modle linaire. Par consquent, la mthode de linarisation qui a t employe pour dterminer les concentrations inhibitrices (concentrations efficaces) est la relation Probit/log. 6.5. Dtermination des NOEC La NOEC (No Observed Effect Concentration), ou concentration sans effet observable (CSEO), a t dtermine par analyse statistique en appliquant la mthode de Dunnett l'aide de la version 1.5 du programme tabli par TUS EPA. Deux valeurs de NOEC ont t dtermines :
- La NOECb, calcule par comparaison statistique des valeurs des aires sous la courbe de croissance (A) des rpliques de chaque concentration avec le tmoin ; - La NOECr, calcule par comparaison statistique des valeurs des taux de croissance (p) des rpliques de chaque concentration avec le tmoin.
;e cxxxjrreft e s rare rxrarer. li ne oeufre nicco rr corrmunaLE a oes tere sans aja rssn n presse Atcnerr:. !_r=0TOTLO3noe oe Terrxr, guoe ns.auzrEa a s s x s ferme oe as-sm s g o o szrxrjs nsgra. ...- A ^ 0 * Eiuds n- 4235/9S/A - RC34285.DOC page 17/29
tir Atocnem a. a . Centre d'Application de Levallois
7 RF.SIII.TATS
7.1. Observations et mesures des paramtres phvsico-chimiques
Les observations visuelles ont permis de vrifier l'aspect des solutions en dbut et en fin d'essai : les solutions d'essai ont t claires, non colores et homognes au cours de l'essai. Aucune prcipitation n'a t observe en fin d'essai.
Les observations microscopiques ont montr que l'aspect des algues en fin d essai tait normal par comparaison aux observations ralises dans la solution tmoin : algues unicellulaires en forme de croissant de lune de taille moyenne 5-10 gm.
Le pH et la teneur en oxygne dissous ont t mesurs dans les solutions d'essai en debut et en fm d'essai :
Echantillon
Rfrence T 2 f
e
d c b
a
Concentration nominale (me/1) 0 0.9 1.9 4.3 9,4 20,7 45,5 100
PH
TO T72h 8.05 7,53 7.82 7.35 7,86 7,37 7,88 7.42 7,82 7.30 7.75 7,35 7.80 7,35 7.88 7.39
C>2 disso us (mg/l)
T0 T72h 8.0 8.6 7.8 8.5 8.3 8.5 8,1 8.2 8,0 8.2 8.2 8,2 8.0 8.2 8.0 8.0
7.2. Concentrations algales. biomasse, et taux de croissance
L'annexe ~>prsente les concentrations cellulaires de chaque rplique et leur moyenne mesures u moment de l'essai dfinitif 0, 24, 48 et 72 heures. Les valeurs moyennes calcules des aires sous la courbe (A) et des taux de croissance (u) sont prsentes dans cette annexe et rsumes dans le tableau ci-aessous .
*jmsnissir7eDra^.llnB^ranicoe.nicomrm^dsslieresarssu!i^Br.B!i^tfStaiT'. E:uos r.' 42S5/S3/A - EC3423=.u3~ -ge ' --.'2--
,, S i r i ^ 55* tttetf
Eif Atocnem s. a . Centre 'Application de Levallois
Echantillon
T 0
__________ S------------------
f e d
b a
Concentration nominale (mg/l) 0 0.9 1.9 4.3 9.4 20.7 45.5 100
Concentra tion algale moyenne (cellules/ml)
A
TO l.OOE+04 1.00E+04 1.00E+04 1.00E+04 1.00E+04 l.OOE+04 l.OOE+04 1.00E+04
T24h
T48h
1.40E+04 7.57E+04
1.00E+04 7.67E+04
1.20E+O4 7.13E+04
7.00E+03 5.23E+04
1.13E+04] 5.13E+04
9.00E+03 4.30E+04
1.33E+04 2.93 E+04
7.00E+03 2.37E+04
T72h 7.10E-K15 7.57E-KI5 7.35E`K)5 3.46E+05 3.20E+05 6.60E+04 2.67E+04 2.37E+04
I.01E-K17 I.06E-HI7 1.02E-HJ7 4.98E-K16 4.74E+06 1.44E+06 7.44E+05 4.20E+05
A
0.0592 0.060 1 0.0597 0.0492 0.0481 0.0262 0.0 I j6 0.0120
L'annexe 2 prsente par ailleurs les moyennes des rapports de densit (R) et des facteurs de croissance (k) pour chaque concentration d'essai et pour le tmoin. La valeur du rapport moyen de densit dans le tmoin est de 71 ce qui est suprieur a la valeur minimale de 16 (cf. critres de validit).
Les courbes de croissance moyenne chaque concentration et pour le tmoin figurent dans l'annexe 2. Dans la srie tmoin, la cintique prsente bien une phase initiale de latence au dbut de l'essai suivie d'une phase exponentielle de croissance.
7.3. Pourcentages d'inhibition
Les pourcentages moyens d'inhibition calculs partir de la biomasse intgrale (IAi) et des taux de croissance (Ipi) sont prsents dans le tableau ci-dessous .
Echantillon
Rfrence T O f e d
b a
Concentration nominale fme/l) 0 0.9 1.9 4.3 9.4 20.7 45.5
100
[Ai
(%) 0.00 -4.85 -1.47 50,60 52,94 85,70 92,61 95.83
Ijii
(% ) 0.00 -1.49 -0.81 16.86 18.72 55.73 76,99 79.79
f.4. Concentations en substance d'essai
.'tude est ralise sans analyse des solutions d'essai. La substance 'essai tant une irparation constituede plusieurs composants solubles dans 1 eau, la mthode NF EN SO 28692 est applique plutt que la mthode C3 de l'annexe a la Directive 9_/69/CEE. :ette mthode permet de raliser l'tude sans analyse des solutions d'essai, en exprimant es rsultats sur la base des concentrations nominales.
.es concentrations nominales sont utilises pour les calculs des concentrations
nhibitrices.
~
:_2reoraouaon02esraopotltfsioe nsaiasesoussole w r a o s r a s ^ r ^ e . ^ \ s a ntZe<3. D e S
Ei'Jae r. 4265/95/A - RC3425o.DO^ page 1S.29 * r iW 1 0 a n V S a I1
rtconiainTSC A ^'
tir Atocnem s. a . Centre ('Application de Levallois
7.5. Concentrations inhibitrices et NOEC
Les calculs des concentrations inhibitrices (concentrations efficaces) sont prsents en annexe 3. Le bulletin d'analyse statistique pour la dtermination des NOEC est prsent en annexe 5. Les valeurs de CE50, CEl0, et NOEC, sont mentionnes dans le tableau cidessous :
Concentration nominale inhibitrice et NOEC (mg/1)
valeur
IC 95 %
Biomasse intgrale
CE50b"72h CE10b-72h
NOECb
9.6 2.4 1.9
3 -22 0,18-6
-
Taux de croissance
CE50r-72h
C E ,0r-72h
NOECr
IC : intervalle de confiance ND : non dtermin
23 4,6 9.4
14-45 1,9-8
-
7.6. Critres de Qualit de l'tude
7.6.1. Rapport de densit Le rapport de densit R de la solutions tmoin est suprieur 16 en 72h (R = 71).
7.6.2. Variation de pH Le pH des solutions tmoins n'a pas vari de plus de 1,5 units pendant l'essai.
DCLSTTCes mare proonsss. Ilne peut sre ni coos. ri oomrrKrau o s ts s r s sutonssons 2 recror-cooTs de ce e j x h c'ecoe ries autoriseque sas formes teo-ssns c
Ht!urie r.a 42S5/33/A RC34265.DOC page 20.72 ^
itavn T , e d . D n ' C n
tir Atocnem a. m. Centre d'AppNcation de Levallois
s rotvrMSiONS
L'tude de la toxicit chronique (inhibition de la croissance) d i m |H ^ H j f l f t p s - - v i s des algues d'eau douce Pseudokirchneriella subcapitata a permis de dterminer les concentrations inhibitrices et les concentrations sans effets observables prsentes dans le tableau suivant :
Concentration nominale inhibitrice et NOEC (mg/1)
valeur
IC 95 %
CE50b-72h
C E l0 b *72h
NOECk
CE50r-72h C E 10r-72h
NOECr
IC : intervalle de confiance
k '\
ND : non dtermin
Biomasse intgrale 9,6 2,4 1.9
Taux de croissance 23 4,6 9.4
3-22 0,18-6
-
14-45 1,9-8
-
Les critres de validit de l'tude ont t respects.
tSC Cb!
L tjesotcontatn
rrerE sa rare arches. Bre p s i rs ni ooai. mcsrmunbu a des srs ans aeurraxr, expresse dElf Atcsdsra.
LS raortxr-cbance ce rsoran tf ire r. es aatrsae M secs ferme ce fes-sm
roejre!.
Etuce n- 42E5/S5/A EC342S5.00C page 21/29
Elf Atochem 5. A. Centre d'Application de Levallois
9. ANNEXES
9.1. Annexe 1 : Composition de l'eau de dilution
Quatre solutions mres sont prpares par dilution dans 1eau ultra-pure des lments dcrits dans les tableaux suivants (cf paragraphe 4.3 de la norme NF EN 28692) :
Substance
NH4C1 M g C I2.6 H 20 CaCI2.2 H 20 MgS04.7H20 k h 2p o 4
FeClv 6 H 20 (N a,E D TA .2H 20 )
h, bo3 M iiCI2 4H 20
ZnCI2 CoC12.6H20 C uCI2.2 H .,0 N a ,M o 04.2K20
NaHCOj
Concentration dans la solution mre
Concentration finale
Solution mre 1 : macro-nutriments
1.5 g/l
15 mg/1
i.2gn
12 mg/1
1.8 g/l
18 mg/1
1.5 g/l
15 mg/1
0.16 g/I
1,6 mg/1
Solution mre 2 : Fe - EDTA
80 mg/1 100 mg/1
0.08 mg/1 0.1 mg/1
Solution mre 3 : oligo-lments
185 mg/1
415 mg/1 3 mg/1 1,5 mg/1
1-
(1()l m/l 7 mg/1
0.185 mg/1 0,415 mg/1 3 x 10 mg/1 1,5 x IO'3 mg/1
10'5 me/1 7 x IO"3 mg/1
Solution mre 4 : NaHCC>3
50 g/l
50 mg/1
jCempany SanWzd. OoeSrtfddnfn TS6 6$
Sjm s es: notre procr. lins peu: re n ccoe. reccrrvirjniqu des fers sans aucrssxr. e a s s s ciE^tocnam. U rerrausr. ce renccr s x ns; auonss ous s x s formeoe reo-srres tnnrnrerrraie rtsgra.
Elf Atochem 5. a . Centre d'Application de Levallois
Les solutions mres sont prpares par dilution des substances (pesees avec une prcision indique par le nombre de dcimale dans le tableau ci-dessus) dans de leau ultra-pure pralablement strilise l'autoclave. Elles sont ensuite strilises par autoclavage (solutions l. 2 et 3) ou par 'filtration (solution 4) sur membrane (diamtre de pores de 0,22 pm) et stockes l'obscurit 4C.
Pour prparer 0 5 l 2 ou 5 litres d'eau de dilution partir des solutions prcdemment dcrites verser les volumes spcifis dans le tableau ci-dessous dans environ 0,4, 0.8, 1.3 ou 4 litres d'eau ultra-pure. Ajuster 0,5, 1, 2 ou 5 litres avec de l'eau ultra-pure et homogniser. Cette opration est ralise en ambiance stenle autour dun bec Bunsen et avec des pipettes striles jetables.
Eau de dilution (0,5, 1, 2 ou 5 litres)
Volume diluer (ml)
Solution n 1 Solution n 2 Solution n 3 Solution n 4
Eau ultra-pure (QSP)
5 0,5 0,5 0,5 0,5 litre
10 1 1 1 1 litre
20 2 2 2 2 litres
50 5 5 5 5 litres
Aprs quilibrage avec l'air, le pH de l'eau de dilution est d'environ 8. Cette eau de dilution ne peut tre conserve que quelques jours 232C et a 1obscurit.
lig fip B y SillllzecLDoea not contain T TM ^
r p nmoris Sne DSJt &B ri 3 33 2 . niCCrrntTKlL CBS(re STS auu a iil OfESe de oe a x x tfPoe ns Ksise < u tanne de =tuoe n* 4285/9S/A. - SC342S5.DOC page 2 *
Elf Atochem b. A. Centre d'Application de Levallois
9.2. Annexe 2 : Pourcentages d'inhibition et courbes de croissance
Essai de toxicit vis--vis des algues
Feuille de calcul des pourcentages d'inhibition et courbes de croissance
Echantillon :
Date :| 03-nov-98
N d 'tude :
Echantillon Rfrence
T T T
T
g q q
g
f f f f
e e e dd d d c
c
c
b b b b a a a a
Rplicat
N
1 2
3 moy.
1 2
3 moy.
1 2
3
moy.
1 2 3
moy.
1
2 3
moy. 1
2
3
moy.
1
2 3
moy.
1
2 3 moy. 1 2 3 moy. 1 2 3 moy.
Initiales Technicien : CKE
Co ncentration algale (CelUiTll)
TO
T24h
T48h
T72h
1,OE+04 1,90E+04 8.30E+04 6.65E+05
1.0E+04 1,0E+04
1.70E+04 8.10E+04 7.55E+05 6.00E+03 6.30E+04 7.10E+05
1,OOE+04 1.40E+04 7.57E+04 7.10E+05
1.0E+04 1.30E+04 7.70E+04 7.15E+05
1.0E+04 1.0E+04
1.1 OE+04 9.90E+04 9.40E+05 6.00E+03 5.40E+04 6.15E+05
1.OOE+04 1,00E+04 7.67E+04 7.57E+05
1,0E+04 1.60E+04 7.50E+04 9.60E+05
1.0E+04 9.00E+03 4.80E+04 4.40E+05
1.0E+04 1.1 OE+04 9,1 OE+04 8.05E+05
1,OOE+04 1.20E+04 7.13E+04 7.35E+05
1 .0E+04 1,0E+04
7.00E+03 4.70E+04 4.70E+05 5.00E+03 8.20E+04 4.60E+05
1,0E+04 9.00E+03 2.80E+04 1.08E+05
1,00E+04 7.00E+03 5.23E+04 3.46E+05
1,0E+04 9.00E+03 5,1 OE+04 3.35E+05
1.0E+04 1 .OE+04 1,OOE+04
1.50E+04 1.00E+O4 1.13E+04
5.50E+04 4.80E+04 5.13E+04
4.90E+05 1.34E+05 3.20E+05
1,0E+04
1.05+04
1,0E-04 1,OOE+04 1.0E+04
8.00E+03 9.00E+03
1.00E-04 9.00E+03 1.70E+04
3.30E+04 4,10E+04 5.50E-04 4.30E+04 3.40E+04
9.30E+04 4.50E+04 5.00E-04 6.60E+04
2,10E+04
1.OE+04 1,0E+04 1,OOE+04 1,0E-rO4
1.OE+04 1.OE+04 1,00E+04
1.20E+04 1,10E+04 1.33E+04 9.00E+03 5.00E^03
7.00E+03
7.00E+03
1.80E+04 3.60E+04 2.93E+04 2,00E+04 2.00E+04 3,1 OE+04 2.37E+04
2.40E+04 3.50E+04 2.67E+04 2.20E+04 2.20=^04 2,70E^04 2.37E+04
#DIV/Ol
#DIV/01
#DIV/0!
#DIV/01
#DIV/0!
#DIV/0!
#DIV/0!
#DIV/0l
A
9.83E+06 1.08E+07 9.58E+06 1.01E+07 1.01E+07 1.33E+07 8.22E+06 1.06E+07 1.31E+07 6.05E+06 1,15E+07 1.02E+07 6.34E+06 7.01E+06 1.58E+6 4.98E+06 4.86E+06 6.96E+06 2.40E+06 4.74E+06 1,50E+06 1 ,14E+06
1.53E-0S
1.44E+0S 8.76E+05
4.08E+05 9.48E+05 7.44E+05 3.60E+05 2.S4E+05 5,3fc-'-Ub 4.20E+05
#N/A #N/A #N/A #DlV/0! #N/A #N/A #N/A #DIV/0!
M
0,0583 0,0601 0,0592 0,0592 0,0593 0,0631 0,0572 0,0601 0,0634 0,0526 0,0609 0,0597 0,0535 0,0532 0,0330 0,0492 0,0488 0,0541 0,0360 0,0481 0,0310 0,0209
0.0249
0,0262 0,0103
0,0122
0,0174 0,0136
0,0110 0.0110 0.0138 0,0120
#N/A #N/A #N/A #DIV/0! #N/A #N/A #N/A #DIV/0!
=oaximerr: es mere nropri. Il re pstf & s rg oe . n canrnfin t e fere sars a le s a t o s - os es cDpcxi tfpv.josnss aisonsss pus s x s m re os iso^irmis.. " tuae r.1 4285/93/A. - P.C34265.DOC pape 2433
i S ADorem.
j.t)oestiotcontain TSCAC
Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois
Essai de toxicit vis--vis des algues
Feuille de calcul des pourcentages d'inhibition et courbes de croissance
Echantillon :
Date :[ 03-nov-98
N d'tude :
P
Initiales Technicien :
CKE
Echantillon Rfrence
T q f e d C b a #N/A #N/A
Concentration algale moyenne (CelUm l)
0 24 48 72
1.00E+04 1.00E+04 1.00E+04 1.00E+04 1 ,0 0 E + 0 4 1 .0 0 E + 0 4 1.OOE+04 1,OOE+04 # D IV /0 ! # D IV /0 !
1.40E+04 1,OOE+04 1.20E+04 7.00E+03 1.13E+04 9.00E+03 1,33Ei-04 7.00E+03 #DIV/0! #DIV/0!
7.57E+04 7.67E+04 7.13E+04 5.23+04 5.13E+04 4.30E+04 2.93E+04 2.37E+04 #DIV/0! #DIV/0!
7.10E+05 7.57E+05 7.35E+05 3,46E+05 3.20E+05 6.60E+04 2.67E+04 2.37E+04 #DIV/0! #DIV/0!
Rapport (R) densits
71 76 74 35 32 7 3 2 #DIV/0! #DIV/0!
Facteur k (J-1)
1,421 1,442 1,432 1,181 1,155 0,629 0,327 0,287 # D IV /0 ! # D IV /0 !
Pourcentages m oyens d'inhibition
Echantillon Rfrence
B io m as se intgrale
Taux de croissance
IAl (%)
Ipi (%)
T
0,00
0,00
g f e d C b a #N/A # N /A
-4,85
-1,47 50,60 52,94 85,70 92,61 95,83 # D !V /0 ! # D IV /0 !
-1,49 -0,81 16,86 18,72 55,73 76,99 79,79 #D!V/0! 2DIV/0!
Validit de l'essai (onauon : n temcm io ;
OUI
Courbes de croissance des algues
j
I
i
X - 3 .....+
-X -- C
A.. a
- #N/A
-#N/A I
53SS OST5STS SUOI
f r f "`itrmg.Tr-
2reoro3LC33ri oe ce rapxr d'su oe nes: aire que s e ts tarme ae fec-snrtueprxxcrmcxjs
: 425/3S/r - RC34255.DOC oage 2o/25
rrscACB'
/O s
Elf Atocnem s. a . Centre ('Application de Levallois
9.3. Annexe 3 : Concentrations inhibitrices calcules par la mthode des Probi.ts
TOXICIT CHRONIQUE VIS--VIS DES ALGUES Feuille de calcul des concentrations inhibitrices par la mthode des Probits
Substance tudie :
Date :|
06/11/98
Numro d'tude :
Initiales Technicien :|
CKE
Mthode par mesure de la biomasse intgrale
Donnes utilises pour le calcul
Concentration nominale
inhibition (lAi) (%) corrige
_____________________ Conc. Inh ibitrices (CE*b)
PROBIT log conc.
X
CExb
CE,,
y X (%) inf.
mg/l (%)
100 45 5 20 7 94 43 19
95,8
96
6,750
2,000
5
92,6
93
6,480
1,658
10
85,7
86
6,080
1,316
15
52,9
53
5.080
0,973
20
50,6
51
5,030
0,633
25
-1.5
1
2,670
0,279
30
#N/A
#N/A
//NOMBRE!
35
#N/A
#N/A
//NOMBRE!
40
#N/A
m/A
//NOMBRE!
45
nb valeurs 6
Somme Moyenne
32.090 5,348
6.859 1,143
50 55
r2= 0,855
60
65
70
0,077 0,18 0,32 0,5 0,74
1 1,4 1.8 2,3 3 3.8 4,6
5,8 7,1
1.6 2,4 3,1 3,9 4.7 5,5 6,3 7.3 8,3 9,6 11
i3 15 17
75 8.7 20 80 11 24
85 14 29
90 17 38
95 24, 56
mg/l
CExb sup.
4.5 6 7.4 8,8 10 12 14 16 18 22 26 31 38 47 62 86 130 220 490
Probit de la proportion inhibe en fonction du logarithme dcimal de la concentration Mthode par mesure de ia biomasse intgrale -
0,000
0,200
0,400
0,600 0,800 ' 1.000 1,200 1,400 Logarithme dcimal de la concentration
1,600
1.800
2,000
L2
reorirttri
oe
s ra x o rttf x fe ce r
n'est
auoses
sue
s
a
s
rame
de
tacana
w
cc^ o a n E te n
g
ga
Etuae n` 42S5/95/A RC342S5.DOC page 25/29
Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois
t o x ic it c h r o n iq u e v is - -v is d e s a l g u e s Feuille de calcul des concentrations inhibitrices par la mthode des Probits
J
Substance tudie :
Date :I 06/11/98
Numro d'tude :
Initiales Technicien :l
CKE
Mthode par mesure du taux de croissance
Donnes utilises pour le calcul
Concentration nominale mg/l 100 45 5 ?n 7
94 43 19
Inhibition (l,,i)
(%) corrige (%)
79,8 80 77,0 77 55,7 56 18,7 19 16,9 17 -0.8 1
#N/A
#N/A
#N/A
nb valeurs 6
Somme Moyenne
______________
- Conc. Inh bitrices (CEr)
PROBIT log conc.
X
CEx,
CExr
y X (%) inf.
5,840 5740
2,000 1.65B
5,150
1,316
4,120 4,050 2,670
0,973 0,633 0,279
#N/A #N/A
#NOMBRE! #NOMBRE!
#N/A
#NOMBRE!
27,570 4,595
6,859 1,143
r2= 0,933
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
65 70 75 80 85 90 95
2.9
1.9 4,6 2,9 6.2 4.1 8 5,4 10
6,8 12 8.3 14 10 17 12 20 14 23 16 27
19 32
22 38 26 45 30 54 36 67 44 86 56 120 80 180
mg/l
CExr sup.
5,4 8 10 13 17 20 24 30 37 45 56
89 110 150 200 300 480 960
Probit de la proportion inhibe en fonction du logarithme dcimal de la concentration Mthode par mesure du taux de croissance -
~J
Valeurs exprimentales j Droite calcule_______I
-r 2,000
0,000
0,200 0,400 .
0,600 0,800 1,000 1,200 1.400 Logsrithme dcimai de la concentration
1,600 -
1,800 .
1,000 2,000
i'Jde n' 4235/9S/A - RC34255.DOC page
v g a h ltlZ d . UOB
tir Mtocnem a. . Centre d'Application de Levallois
9.4. Annexe 4 : Bulletin d'analvse de la substance Cette annexe est constitue d'un feuillet non pagin la suite de la prsente page.
Ce document es: rare praorit. Il re bsj; se ni cod, reccmmcnnus a assises sers euresdon expr^s= Le reorccucir, de ce rznrt d'tos nes autorisecos sais terme ce fac-sirsi ghoogaannus ig = -a -n - r~j' T^nnU tO t C u n ia ' Etude r," 42S5/95/A - RC342S5.DOC cage 2&2S t S a i H a n ? # 0 ,
CB
eif atochem
%
Etablissement Villere si Paul
ILABORATOIRE CONTROLE QUALIT
LCU PO601 - ENR 130 REV : 2 O5-dc-07
Demande d'analyses n '420 Destinataires : M. delaunaV
M. DELLECASE M. GRUPPO
Conforme
Bulletin d'analyses produit fini
N LU 1 Caractristiques
Units
Extrait seo
%
PH MoBreddladansit Ethanol
Ij Foisonnement0.5%dseaude Drainage2i a0.3%dseaude Tensioneuperfielello
%
mn mN/m
Spcifications
27-29 8-9
1.06-1.09 c< 2.5 >=6 3 <" 16.5
.
pouvoir Fllrrogne SurHepuno3% ^ udo
Seconde
<- 40
Date : Rsultats
29-m ai-98
Mthode de contrle
28.5.
.J
B.5 1.081
1.7 7.5 7mn 25s is.y
16
U c;
1m 1v9 V'. ''NJ
\ CL) 004
n OV/".%) 1r.i i RTO (../ LCU7 C.
LCU GC3
v ...
.C 1w tpfift
c
t.
Observations :
Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois
9.5. Annexe 5 : Bulletins d'analvses statistiques Cette annexe est constitue de 2 feuillets non pagins la suite de la prsente page.
Ce decunst s : rare oraris. I! rte osx re ni caps, rscamnLrcts e des Serea n s sE s ra c n expresse d 3 f cchsn.
U tenrtaudnn dece raoaortc` oe n'es auonase que sole fermeoe res-ssnae jxu^i'eanq'js t ia=?=~
n n e S T \0'
rttnn r.'2S5/3SM - RC34265.DOC cape 2S/29
. _____C a n tttZ e u -u u
Summary Statistics and ANOVA
Transformation =
None
Cone.
------ -- = control
09 2 3
U,J 4 3,4 5 Z4> 6 * us;r 7 *
JX> 8 *
n
3
3 3 3
3
3 3
3
Mean
. 0592 .0599
.0 5 9 0 .0 4 6 6 .0 4 6 3 .0 2 5 6
.0133
.0119
s.d.
.0009 .0030 .0057 .0118 .0093 .0051 .0037 .0016
cv%
1.5 5.0 9.6 25.2 20.1 19.9 27.6 13.5
)
the mean for this cone, is significantly less than the control mean at alpha = 0 . 0 5 (l-sided) by Dunnett
s
test
:inimum detectable difference for Dunnett's test his difference corresponds to -21.92 percent of control
i tween concentrations
of squares
=
.008740 with 7 degrees of freedom,
rror mean square =
.000039 with 16 degrees of freedom.
artlett's test p-value for equality of variances = .072
. .. . Y;..ssftotco?am
I Biomasse integrale, definitif.
Summary Statistics and ANOVA
Transformation =
None
Cone } 1 = control o,3 2 >,3 3
4*
3,U 5* Ze,3 6* ur,r 7* _^oo 8*
n
3 3 3 3 3 3 3 3
Mean
10070.0000 10540.0000 10216.6667
4976.6667 4740.0000 1440.0000
744.0000 420.0000
S.d.
644.4377 2568.4236 3696.0565 2960.6137 2282.3672
274.9545 293.2030 193.1217
cv%
6.4 24.4 36.2 59.5 48.2 19.1 39.4 46.0
*) the mean for this cone, is significantly less than the control mean at alpha = 0.05 (1-sided) by Dunnett's test
Minimum detectable difference for Dunnett's test = -4362.417691 This difference corresponds to -43.32 percent of control
i^tween concentrations J m of squares = 402610734.500000 with 7 degrees of freedom.
Error mean square = 4355778.833333 with 16 degrees of freedom. Bartlett's test p-value for equality of variances = ,003
************************************************
* Warning - the test for equality of variances *
* is significant (p less than 0.01). The
*
* results of this analysis should be inter-
*
* preted with caution. *
* *
************************************************
