Document g25kx6RppkY1ZEgyX2LawyRx3

CCHHRROONNIICC TTOOXXIICCIITTYY TTOO FFIISSHH TTEESSTTSSUUBBSSTTAANNCCEE _ IIddeennttiittyy:: 7PP8ee.rr0ff3llu,uooPrrooFooOcctAtaannaoomiicmc oaacnciiidd,u, maammsmamloto,nnAiiumummmossnaaliltt;u; mmmaapyyeraaflllssuooorbboeeocrrteeaffneecrrrareteded,ttooPFaaOss, 7F8C-.0131,6,PFFOC-A12a6m,mFoC-n1iu6m9,soarlt,FCA-m14m3o.ni(uOmctpaencrfilucoarcoiod,ctanoate, PFO, FppeeCnn-t1taa1dd6eec, caFafClfluu-o1or2roo6--,,, FaaCmm-m1mo6o9nn,iiuoumrmFssCaaloltt1,,4CC3.AASS(O##ct33a88n22o55i-c-22a66-c-1i1d)), TRRheeemmatarerskktsss::ampTTlehheeis33FMMC-pp1rr4oo3dd.uucctTtiihooenn tlloeotsttnniuungmmblbeaebrrorwwaaatssor88y33,r.efers to it as 78.03". Its Tipptisuuharreiittytyemwwsiataxssstaunnmrooetptolssefuuf9ifsf6fii.cFc5iiCee-nn-t1t1ll4yy030cc.hh%aaTrtrhaaecescttteteesrrsuiizztbieensddtg,,alnttahchboeoouuragganhhtdoccr0yuurr~rrreee3fnne.ttr6siin%ntfofoCorsirmt,maaaCsttrii,o"o7nna8nii.n0dnd3dCii"c.scaattIete'sss pipteeirsrffllauuoomrroioxtaaunnraeallooogfgu9uee6.5ccoo-mm1pp0oou0un%nddstes..st substance and 0 - 3.5% C~, Ct, and Cg MMEETTHHOODD:: MMeetthhoodd FFoolllloowweedd:: TfTohhleelommweeetdthhtoohddaotollpoorggeyyseffoonrrtetthdheeineeg"gPggraaonnpddosfferrydy eerxxeppcooossmuurmreeenccldlooessdeellyy fbbfoiiisloolhoaa"wss(sseUaad.yySt.hpprarEootPccApee,rddeuus1rer9ee7n2tffe)oo.drr eeingggg"Paarnnoddpoffs~ryedssttaraeggceeossmoomff fferrenesdshehwdwaatteerr TTGeLessPtt:TTyyNppoee:: FFllfoioswwh-t"thh(rUroo.uSugg.hhEPA, 1972). SpYGYeeeLacaPrir:esssttNu:uoddyy ppeerrffoorrmmeedd:: 1F1a59t77h88ead minnow (Pimephales promelas) SSuSppupeplcpiileeiesrr::: UFUE.na.SSvt.hi. erEEoannndvmvieimrrnooitnnnanmmloeewnRnteta(saPlel iamPPrrrecoopthteehcLcatatliiebooosnnrpaAArtgogoemernyncecyilayn''sssD)uluth, Tostfish age: EMEMigninngvnnsireeoswsnoiomttthaaei..nnt4a8l-RhoeusresaracfhterLafebrotriaiztoatriyonin Duluth, Test fish age: Eggs within 48-hours after fertilization AAnnaalylyttiiccaall mmoonintitoorriinngg:: TTpeeHmmpwpeererareattumurorene,i,tddoiirssessdoolldvvaeeiddly.ooxxWyyeggeeeknnlccyoonsncacemenpntlrtraeatstiioownne,,raaenndd t`tpaaHakkmeewmnnoeffnrreriooummmmoeepnaaeicctrohhfrleaaudqqoruudoaaaorriciliuytu.mamnWoffoaoetrreeddkeceltoytenecsrrmemanimitnnrapaatltteiioisoonnwn.ooeffArlel asspoamalmmmyppelotleenhssiyulttmeaankkepeeenbnrofddtlutuulrodeirnsnoggaonctthtdhaeensttoheeaissptttepwweceedorroneencssettMnooatrrreyeaddti3oii1nnn,. 1A6ll78 pttooolttyhheeeth33yMMlenCCeoommbpopatantlneyys.. and shipped on May 31, 1978 * EExxppoossuurree ppeerriioodd:: 3300 ddaayyss ppoosstt--hhaattcchh SdStutapatltiiissctatiitcceaalalqMMueaetrtihhaoodwdses:r: e subjMMeecetaaenndsstoooffammnaeelaaysssuiusrreeoddf vbbaiioorlilooaggniiccceaall(SpptaaerreaalmmaeenttdeerrTssorffrrroioem,m `d11s9u9u6r6p0v0lii,,cvaaccltooeammpnaplqdeluetpateeerlrilayycerrwnaatennarddegooesmmuhiiabzztejeecddchtbbewlldoeocrctokke ddatenersasainilggysnnsf,i,osrPPm=o=0ef0.dv0.0a5tro5)i.)aa.nrccDDeasatit(naaSftsfoeoqerurlappareenerrdccfeeoTnnootttraaroggifeee, Tsppueeersrrvcctieevcnnaottlanaadggnieetdippporrinieoosrrr:ctteoonataannagaleylyshsiasis,tc. h were transformed to arc sin square root of Test conditions: Exhibit 176 11117766..00000011 33MM_MMNNO011665555665500 wDDiaillsuuttaiioeornnawwtaeatdteebrre::foWWreeelllfl lwwoawatiteenrgr pptouummthppeeeeddxttpooosauccrooenncscryreesttteeemrreetssheerrrvovouoigirrhwwahhgeeerrdee PiittVC. wppDiiiappleseu..taieornawteadtebrefcohreemfiloswtrinyg(t0o-3th0edaeyxsp)o:sure system through aged PVC DilutiAolTTnkooatwtlaaaillntehhiartaryrcdd:hnneeemsssiss::try (0-30 d323a1y61s---):333288 mmmooglllLl (((aaasss CCCaaaCCCOOOss3))) ApSppHHlek::cailifniictyc:onductance: 27716.4009----1377724.04mpgm/hLo(saiscCmaCO3) Specific conductance: 149-170 pmhos/cm SS0.tt5oo0cckkdiaalunntddiontteefssattctssooorllwuutatiisoonnuspperrdee.ppaaTrrhaatetiiodoinnl::utAAer mmdoeodlidifivfieieerdde,,d ppfriroovepponororttmiioionnnaaalll ddiilluutteerr'wwiitthh aa 0mccoo.g5nn/0ccLeednanitlnturrdataitotciinooonnnftassrcoooltfofwraaawmmtmaemrsoontunoisiuuedmudmp.lppiTeecrhraffetllueudootirelrousoottoeccarttqaduanaenoroliiaavatet.eererrAdaannf4iggviilenintggenroffgrmrolomaimnsas11lm00a00rtitooot66t..e22 b`mboaotgmtt/tlmLleeoanttnooicxxuliicmccaaopnnnetttrrddfoeelllulwiiovvareeotrreoyyrcssttoyyasnsdtcteuaemtpmeliwwcsaatatossecukutesscseeotddnactteqoonutddaeredlalaitivv.ieeorrAn66o4..f66l2itmm8e.LrL4goomlfafgasa/snnmmooLmmaiirinnnioaadtlitlestiled wawamattmeerronttooiuttmhheepmmeirixxfiliunnoggroccohhcaatmmabnbeoerar tooeffstththoeecddkiillcuuotteenrrc..entration of 29.4 mg/mL in distilled PP1r5reesttrereceaaottnmmdesennttto:: elEEiggmgignssawtweeerpreeosppslilaabccleeeddfuiinnngaau66s00grmmogwg/t/LLh.mmaallaacchhiittee green green solution solution for for oE1En5ggggsoenccceuuoppensnsdd::.saatccorAryynelliliicecmgttiugnubbaceetuesspp((r33ooscccsmkmiebrOOle.a.DDf.um.,n, g77aupccpsmamgrarllootownunsggth,))w.waitsithhde44s00crmmieebsesdhh bNNyiitteMexoxRunsstccrreeeenn o((F11nr99y6o68en8)x)e,,pewwonasaduss.ruueAssneveeddesgttsoogelggcseeu:nnpttlGlryyloaoocssskscceiiltrllleaaasrtttemeattqhahuepeapreeaiggruggamtccumuusepp, assassiiunnrdttiehhnseegcttre3ieb0sset.td5wwXbaa3ytre0M.r.. o5uXnt30.5 FccDimrmlyuwwteieixttrhhp: oaaDse11ul77ir..ve55evrcceemmdss0hhe.iig5lgsh0h: sslGitttaaleanrnssddsoppfiitppeteeesstddtrarwaaqiaiunnta,,edrwwuatamtoteeermravvecooahllsuauumqmruieenagoorffi3u110m66.5ll1ittX9eer5r3ss.t0. i.5meXs 30.5 per ddDFaaeiylyeu,,dtieyyniireeg:l':dDdiifnenrglgyivwaaeer99er00de%%f0e.lt5dee0ssltitlviwwteeaabrtstreeirornferretesepphsllrataicwcmeeapmmteneearnnutttpolttieiimamteechhoorfefaeaaqpptupiparmrroeoiuxsxmiidmmaa1alt9tyee5lloyytnim11w00eeshheoopkuuedrrrass.y. s waaFennerddeedttwiwbniirgccue:esfhddraeyaidilwlyyaeoonrennd fwwseeiedpeehlkkioveeennneddbdssdtntotehhrrrsoeohumurgogimhhvooepuutentxatthcuheeepsleeisixxtfpphoooroessdeuurarteeinmdppeeerfsrieiocoddada.l.ilmyTaTothheneeriwaaaqeqlueuatkawrdriiiacaaeys weTeaaeeccmrehhpewwbrereaueetskkhu..erde and siphoned to remove excess food and control: Waler bath containing circulating fecal material water heated twice by Tiimmemmmeeprrsesiriooanntuccrooelillchhoeenaatttreeorrl:aannWddarrteeeggr uubllaaatttheeddcobbnyytaaainmmineergrcccuuirrrcyyucclaootlluinumgmnnwttahhteeemrrmmhooerraeetggeudullaabttyoorr NNNuuummmbbbeeerrr ooofff rereegppgllsiiccfaaottreessh::atttwcwhooability test: 60 NNNNuuuummmmbbbbeeeerrrrooooffffffecrrogyynfgfcosoerrnfotffrrrryayhteeaixxtocppnhosoas:sbuufriirlveeiteyttpeetlsseuttss::ta:4400b6l0ffarrnokommcoeenaatccrhohleegggg ccuupp Number of concentrations: five plus a blank control WWaatteerr cchheemmisisDttirrsyysddouulrvriienndggottxhhyeegesstntuu:ddyy>::85% saturation pTDpHeHis:m:spoe77rl.0va0e-t-du77ro3.e3x:yg2e5n+: 1>9C5% saturation Temperature: 25 + 1C AAcottnttcheeenttterearrmtmiiionnnaatt(iio1on0n0oofmfgtth/heLe)tteewssett,r, etthhpeerfferrsyyeffrrrovomemdttihhnee1cc0oon%nttrbrooullffaaennrddedtthhfeeorhhmiiagglhhin while the frfcryoyfnfrcroeomnmtrttahhteeiooontthh(1ee0rr0tteemssttgaa/Lqqu)uawarreiiaarewwpeerrreeeseffrrroovzzeeednn..in TT1ee0nn%ffoobrrummfafaellriinen-d-ppfrroeerssmeerarvvlieenddwffrhryyile((55the 11117766..00000022 33M_MNMoN10e1s65s5e6s5!1 fhfhririossom ttmooppeeaaaattcchhhhoollroroeeggpipilccliiaacclalatteeeexx))aaffmmrrioonimnmaattttihihooeennccoooofnfntaatrroottlrlraaaannnnssddvveetthrrhsseeeehhssiigeegchchttiiccoooonnnnccooefefnnttthrhtreaeattnniioaaonrnreeuussnnaaddnneeddrrwweenntt fcfcrreeyyppahahannalddliiccffrroeeoxzxzteteeennnnfsfsrriiyyoownnweeoorfrfeetthhaaeennaallaallyttyeezzrreeaalddl llaaiinttneeaa((llSaSaeetteeeerrTTddaaaabtbtelelee((b22b)y)y..33TTMMhheeCCoorrmemempmpaaaaininnnyiyi)nn)ggffoopprrrreesseerrvveedd `aammmmoonniiuumm ppeerrfflluuoorrooooccttaannocaattee ccoonncceenntrtraattiioonnss.. NRRoEEmSSiUUnLLaTTlSSconcentrations: Nominal concentrations: BBKk ccoonnttoroll,, 66..22,, 1122..55,, 2255,, 5500,, 110000 mmgL/L EI-l'leemmeenntt vvaalluuee:: NNoott ssttaatteedd 11117766..00000033 33MM_MMNND011665555665522 TTAABBLLEE 11 WATCH, PPEERRCCEENNTTAAGGEE HHAATTCCHH OOFF EEGGGGSS,, PPEERRCCEENNTTAAGGEE SSUURRVVIIVVAALL,, MMEEAANN AANNDD SSTTAANNDDAARRDD DDEEVVIIAATTIIOONN TTOOTTAALLLLEENNGGTTHH,, AANNDD MMEEAANN WWEETT W WEEIIGGHHTT OOFF FFAATTHHEEAADD MMIINNNNOOWW ((PPiimmeepphhaalleess prroommeellaass)) FFRRYY EEXXPPOOSSEEDD TTOO AAMMMMOONNIIUUMM PPEERRFFLLUUOORROOOOCCTTAANNOOAATTEE FOR 3300 DDAYSS PPOOSSTT-- HATCH. noanmin|-- Fe wan i Nominal vom concentration (mg/I) ws ww ew Cont~ui " |:[E A sme: 6.2 [8 Ta -- s[ee: 12.5 [I = I NEE i 25 [se Te Teeea en 5O [oo 5 Tg[& eee 100 Replicate A B A B A B A B A B A B Hatch % 98 95 95 94 93 88 98 100 gO 95 95 97 30 Days Post-hatch Survival % Mean Mean length in weight in mm mg (+SD) 92 20(2) 62 95 21(3) 75 98 20(2) 59 88 22(2) 79 21(3) 70 IO0 21(2) 72 90 21(2) 74 95 21(2) 7O 90 20(2) 60 98 20(3) 65 88 19(2) 59 82 20(2) 6o 11117766..00000044 au nesses 3M MN01655653 TTAABBLLEE 22 RREEPSSRUUOLLMTTESSLOOAFFSHHFIISRSTYTOOEPPXAAPTTOHHSOOELLDOOG3GI0ICCDAAALLYEESXXTAAOMMII1NN0AA0TTmIIgOO/lNNOOOFFFAPPMIIMMMOEEPNPHIHAAULLMEESS PROMELAS FRY EXPPPEEORRSFFELLUDUOO3RR0OODOOACCYTTSAATNNOOOA1AT0TE0Em" g/I OF AMMONIUM TE]c | n in| Test Matedal 1 or ObOsNbeusremvravb0taeitriooonnfss FTO NHoirstmoFaFpilinanddthiinonglgossgical Control 10 36@3//t/11110000LNLGiiiovvleremrHryaFFpalaettrttypylCCahshiaaannggee Amorim ] 35(EE1/p11pi00itthhGNeeolilliilmuuHmma)yr)p|Ierplasia Ammonium 10 5110 Normal Perfluorooctanoate 252(E10/pth1el1i1um)000GGUivillleHHryFyp|paeetrtrpypllCaashsiiaaange 5 WWorok rk ppeerrffoorrmmeedd uUnnddeerr GcoonntraTcatTtaooEEGG & & G Blooms (Epithelium) I G Bionomics Laboratory Laboratory dNNeOOmTToEnE:s:tr""OaObnnlllyey ttchhhooassneegtteiissassruueeeslsiswwthehidi.cchhTwwheeerroeenmmliyisstssiiisnnsggueoorcrhccaoonnntgtaaeiisnneedd doocbbehssmaeenorrgvnveesedtodrfawwtbeehlreereeclihhhveyayrp.pneegrrTepphllaaaerssseiieaaliscoothffeadggnii.llgl Tellasahmmeweeleollrlnaaelrryjeetupipsdiistgthuheeeedlliucituhommabnaaegnnmeddisnffaaittmttyayl aca`Ahnnuaddtnocclgoopeninsssoiiofssftttheegeninlttliwwiviseittsrhh.ueccThhwhaaeannssggeeeosscbhsssaeeenreegvnneedsrrooiwuuntteiisnrneeeevlljeyyurdaiinnglehhfediesaahlt.oltthhTbyyheffiiimssshhcin..himanagl e Awwfoauarstsmoalppliprriooinsbbtaaoobbfltlgyhyiellddptuuioseesstotueoertithwohereadsppooooroosbrarslppeeerpnvoneerettdtriraoaintntiiosoofnenvtooehfferatthglhieleflisbbshuup.ffaffceTeerrhe.ei"dsd change formalin to the posterior dorsal portion of the gill space." CCOONNCCLLUUSSIIOONNSS BoBifioo1lloo0gg0iiccmaagll/ddLaathtaaedggeennnoeeraraadttveeeddrsiinne ttehhfiifssecsstttuuuddpyyoniinndtdhiicceaahtteaetttchhhaaattbttihhleetynnooormmeiginngaalsl ccooofnncucepenontntrraattthiioeonn sosuufrr1vvi0ivv0aalml aagnn/Ldd hggraroodwwnttl~ohoaofdf ffvaaettrhsheeeaadedffmmeicinntnnuoopwwonffrrtyyhttehhrhrooauutgcghhha33b00iliddtyaayyossr eppgoogsstst-hhoaarttcuchhp.o. n the SSPauuubblm,mitMittitenernr:e:sot33aMM, CC5o5om1mp3pa3annyy,, EEnnvviirroonnmmeennttaall LLaabboorraattoorryy,, PP..OO.. BBooxx 3333333311,, SStt.. Paul, Minnesota, 55133 DDAATTAA QQUUAALLIITTYY tRReeelsiltiaiabnbiglilaiitttyyt::heKKtiliimmmieissccithhwarraasnnkckioinnnggdu==ct22.e.d,TThhbiiusstsshttuaudsdyysmmeveeeeertatssl aadlelllftithcheieeccnrrciiitteeesrii.aa fIfootrrlaqqcuukaaslilittyy tfiinenrfsfootomirrnmmwgaahtatiiitocohntnhteoohnnteimpptueuersritiitttysywaooamffsptthlhceeeonttweedassutstcsstteuuabdbks,estntbaa.unnTtcchehee,a,rsaaennsiddesvttnehhoreeailppnrdrfooeoddrfuiumccacitettiiinooocnnnielalsoovt.tainnIlutualmmbablcbeekersorn ffttrhrhoeoemzaaennwnaahlflryiycysshisissathmoopeffltttehehsese.ttteseassttmsspoollleuuttwiiooanns cctoaonkncecenen.nttrTraahtteiioroennssisoonrrooonninfttohhreempparrteeiossneerravveveaddilffarrybylaaennoddn frozen fry samples. RREEFFEERREENNCCEESS TT1hh9ii7ss8ssottunuddtyyhewwaarsesqccuooensndtduuoccftt3eeddMbbCyyomEEpaGGn&&y.GG,, BBii0onnoommiiccss,, WWaarreehhaamm,, MMaassssaacchuhsuestetttss,, 1978 on the request of 3M Company. 11117766..00000055 33MM_MMNNo0t1e6s5s566s544 REReXessPeeOaarSrccUhhRRREeepTpooOrrtt7""8TT.HH0E3E (EEAFFMFFMEEOCCNTTISSUOOMFFPCCEOORNNFTTLIIUNNOUUROOOUUOSSCAATQQAUUNEOEAOOTUUESS) ON FFHHEAAAXATTTPTCHHCOHEEHSAAAAUBDDBRIILEMMLIIIITTTNNOYYNNOOO7O8FFWW.0EE(3(GPGP(iiGGAmmSSMeeppMAAhhNONaalDDNleeIssUGGppMRRrroOoOPmmWWeEelTTRalaHHsFs)L).AA."U"NNODDRRReepSSOpoUUorORrRttCVV##TIIAVBVBWNAAW-LLO7-78AOO8-TFF-66E--FF)11RR7O75YY5N,,OOEEFFGG && GMG,a,sBBsiaioocnnhooummsieicctsst,,s,AAqqJuuuanatetiicc1TT8o7ox8xi.iccoollooggyy LLaabboorraattoorryy,, 779900 MMaaiinn SSttrreeeett,, WWaarreehhaamm,, Massachusetts, June 1978. `ORROeFeFsseFFeaAaArrTTccHhHhEERRAAeepDDpoorMMrttIIN""NSNSNUUOOMMWWMM(A(APPRRiimYYmeeOOppFhFhaalHHleeIIssSSTppTrrOOooPmmPeAAelTTlaaHHss)OO) LEELOOXXGPGPIOOICCSSAAEELLDDEETTXXOOAAMM77I88IN.N.00AA33TT' IIOONN 77((A88A-M-M99M--M33OO001N1N,,IIUEEUMMGGPP&&EEGGRR,,FFBBLLiUiUooOnOnooRRmmOOiicOcOssC,C,TTAAAqAquNuNaOatOtAiiAccTTTTEEoo)x)xiiFFccOooOllRRoogg33yy00LLDDaabAbAoYoYrSraSa.tt."oo"rryyRR,,ee77ppo99or00rttMM##aaiBBinnWW-SSttrreeeett,, WWaarreehhaamm,, MMaassssaacchhusuestelttss,, SSeepptteemmbbeerr 11997788.. orOOTTeHHeEERRR OO LLaasstt cchhaannggeedd:: 55//2255//0000 11117766..00000066 33MM_MMNNo01166s5s566S555 | TETHHXEEPOSEEUFFRFFEEECCTT7SS0 OO7FF8.0CC3OO~NTTOIINNNUUHOOAUUTSSCHAAAQQBUUIEELOOIUUTSSY OF } EEOEGXFGGPGSOSFSAUATARNHNEDDEADGTGRORMOOIWW7NTTSHN.H0O3AWANNDDO(NPSSiHUUnARReTVVpCIIhHVVaAAAlLBLeIsLOOIFFpTrYoFFmRReYYOlFas). OF FATHEAD MINNOW (Pimephales promelas). i Fe-143 RREESSEEAARRCCHH RREEPPOORRTT i sSuUBBNMIITTTTEEDD TTOO y 331M cCoOmMpPaAnNYy : SSTT.. PPAAUULL,, MMIINNNNEESSOOTTAA I RREEPPOORRTT #BB1~--7788--66--117755 AquatiEEcGGT&o&GxiG,,colBBoiigooynnoonmLiiaccbssoratory AquaWtaircch77a99Tn00o,xMHiaacMiioannlsosgaSSyctthrrueeLeseattebtortastosy WarehamJJ,uunneeM,,ass11a99c77l88]usetts 1117766..00000077 W3M_MNMON1061S6555665566 : -AABBSSTTRRAACCTT FFaatthheeaadd mmiinnnnooww ((PPiimmeepphhaalleess pprroommeellaass)) eeggggss aanndd ffrryy wweerree ccoonnt%iinnuu-- oouussllyy eexxppoosseedd ttoo nnoommiinnaall 7788..0033 ccoonncceennttrraattiioonnss rraannggiinngg ffrroomm i10000 ttoo 66..22 mmgg//1 tthhrroouugghh 3300 ddaayyss ppoosstt--hhaattcchh.. OObbsseerrvvaattiioonnss wweerree mmaaddee | oonn ppeerrcceennttaaggee hhaattcchh ooff eeggggss aanndd oonn ssuurrvviivvaall,, mmeeaann ttoottaall lleennggtthh ] aanndd mmeeaann wveett wweeiigghhtt ooff ffrryy.. RReessuullttss iinnddiiccaatteedd tthhaatt nnoonnee ooff tthhee aabboovvee ppaarraammeetteerrss wweerree aaffffeecctteedd bbyy ccoonnttiinnuuoouuss eexxppoossuurree ttoo | aannyy ooff tthhee 7788..0033 ccoonncceennttrraattiioonnss tteesstteedd.. y ] ] iiii 11117766..00000088 33MM_MMNNO011665555665577 \ TTAABBLLEE OOFF CCOONNTTEENNTTSS sSeEcCtTiIoONn PPAAGGEE I x IINTN RODT UCTRIONO....D +.v.v.Un.e.v.Cs.e.v.T.n.s.I s.n.nO .n.s.nN .n.s.i. .n.n.e.a.n.n.n.n.n.n.a.e.s. 11 1II MMAATTEERRIIAALLSS AANNDDMMEETTHHOODDSS........e.v.o.r.v.n.e..r.n.a.e.n.n.n.a.i.n.n.n.n.a.n.., 33 AA.. EEXxppoossuurree SSYysStteemM............e.e.s.e.r.i.s.e.i.i.e.i.e.s.i.i.i.i.e.s.i.e.e..s.s 33 BB.. EEgggg aanndd FFrryy EEXxPpOosSuUrZeE........e.s.e.v.u.e.r.n.n.e.r.n.n.e.r.n.n.a..e.n.s 44 CC.. TTeesstt WWaatteerr AANnBallyySsiiSs................s.e.s.i.i.e.i.i.e.i.i.i.e.e.i.i.e... 66 DDi. SSEtAaLtEiSstEiIcCsS......s.e.e.r.s.s..s.s.ei~n.e.r.r.n.e.r~n.n.e.a.i.e.n.a.n.n.e.a.n.a.s. 77 1I1I1I BREEBSUULLITSS s..e.e.s.n..r.o.r.i.s.s.n.r.s.r.n.s.v.r.r.i.n.s.s.r.r.s.r.s.s.t.s.i.r.e.s.n.i.e.e. 8 wIV RREEFFEERREENNCCEESS..+....+.v.v.n.a.v.n.n.r.n.n.n.s.n.n.e.n.n.c.i.n.n.n.n.n.n.e.n.n.n.n.a.n.e.s. 99 3 vV T TABLE ES .B v..s.sI .s.e.r.E v.r.t.S e.r.s..e:.s.s.e.i.v.r.t.s.s.s.t.o.n.t.r.s.s.s.s.r.s.s.s.n.c.n..n I4i1 AAPPPPEENNDDIIXX TI o.v.n.v..n.n.r.n.n.e.n.n.i.e.n.n.r.n.n.n..m.n.e.n.e.i.n.a.e.n.e.n.e.n.e.,. 1122 J 4iisi 11117766..00000099 I3MM_MMNND011665555665588 secrion 1 SECTION I fr-- INTRODUCTION J eciatcn. mhe oftects on esa bavchebiticy and on survives | TThhee oobbjjeeccttiivvee ooff tthhiiss ssttuuddyy wwaass ttoo ddeetteerrmniinnee tthhee eeffffeeccttss ooff 70.00 on Gothen mise (CETUS CLATRIAR vive i Fay Suing 78.03 on fathead minnow (Pimephales promelas) eggs and fry during | ccoonnttiinnuuoouuss aaqquueeoouuss eexxppoossuurree.. EExxppoossuurreess wveerree iinniittiiaatteedd wwiitthhiinn t6-hours after ogg fertilization and continued through 30 days 48-hours after egg fertilization and continued through 30 days post-hatch. The effects on egg hatchability and on survival cstimte of the NIC minimsm threshold concentration). he NEC 1 aanndd ggrroowwtthh ooff ffrryy wweerree mmeeaassuurreedd aanndd wwoouulldd bbee uusseedd ttoo mmaakkee aann estimate of the MTC (minimum threshold concentration). The MTC | iiss vviirrttuuaallllyy ssyynnoonnoommoouuss wwiitthh tthhee tteerrmm MMAATTCC '((mmaaxxiimmuumm aacccceeppttaabbllee tsooxnitcoarnntt ccotnncmeennttraabtiioonn)) GdAevveellnogpeedd bbyy MNoiunnet asnndd Shug Stephen ((1990677)).. Mount and Stephan's term, however, was estimated after the ) pveerrffoorrmnaannccee ooff aa ffuullll,, lliiffee--ccyyccllee,, cchhrroomniicc-tteesstt wwhheerree eeffffeeccttss oonn ! rreepprroodduuccttiioonn aanndd sseeccoonndd ggeenneerraattiioonn ffrryy wweerree aallssoo mmeeaassuurreedd.. | Vacek and Sleight (1977) and Nekim (1977) described egg and Macek and Sleight (1977) and McKim (1977) described egg and fry investigations as being reasonably accurate short-term | chronic tontoity studies. in the mesorisy of the studies ard as being sinilar to those estinations derived fron definitive ] eessttiimmaattiioonnss ooff ppootteennttiiaall lloonngg--tteerrmm cchheemmiiccaall hhaazzaarrddss to fish, and as being similar to those estimations derived from definitive reported by the authors and of those performed at this labor chronic toxicity studies. In the majority of the studies reported by the authors and of those performed at this labor- ! were sencrally the most sensitive aattoorryy,, tthhee eemmbbrryyooss-aanndd ffrryy dduurriinngg eseaatrrallgyyes ssttaogecsheomficadleveelxopposmuernet. wRearreelygenvaesralrleyprothdeucmtoisont osrenssiutrivvievalstaangedsgrtoowtchheomficaslaceexnptosure. gRearneelryatiwaosn rferyprordeudcutcieodnaotrexspuorsvuirveal leavndelsgrolwotvehrofthasnecotnhdose generation fry reduced at exposure levels lo~er than those ' tthhaatt rreedduucceedd ssuurrvviivvaall oor growth of the first generation fry. i | 2 swmoresseso 3M MN01655659 11117766..00001100 TThhee aauutthhoorrss ddeemmoonnssttrraatteedd tthhaatt ffoorr tthhee ggrreeaatt mmaajjoorriittyy ooff ttooxxii-ccaannttss,, tthhee qquuiicckkeerr aanndd mmoorree eeccoonnoommiiccaall eegggg aanndd ffrryy tteessttss yyiieellddeedd eessttiimmaatteess ooff ssaaffee ccoonncceennttrraattiioonnss vveerryy ssiimmiillaarr ttoo tthhoossee ddeerriivveedd ffrroomm cchhrroonniicc ttooxxiicciittyy ssttuuddiieess.. ) 2 11117766..00001111 33MM_MMNNO011665555665600 y SECTION TI SECTION II M~ATTEERRIIAALLSS AANNDD MMEETTIHIOODDSS TThhee eegggg aanndd ffrryy ssttuuddyy wvaass ppeerrffoorrmmeedd aaccccoorrddiinngg ttoo mmeetthhooddss ddeevveellooppeedd aatt EE GG && GG,, BBiioonnoommiiccss ((AAppppeennddiixx II)),, wwhhiicchh cclloosseellyy ffoollllooww tthhoossee pprreesseenntteedd iinn ""PPrrooppoosseedd rreeccoommmmeennddeedd bbiiooaassssaayy pprroo-cceedduurreess ffoorr eegggg aanndd ffrryy ssttaaggeess ooff ffrreesshhwwaatteerr ffiisshh"" ((UU..SS.. EEPPAA,, 11997722)).. TThhee tteesstt mmaatteerriiaa!l,, llaabbeelllleedd 7788..0033,, aa ffiinnee wwhhiittee ppoowwddeerr,, wwaass oobbttaaiinneedd ffrroomm tthhee 33uM CCoommppaannyy,, SStt.. PPaauull,, MMiinnnneessoottaa iinn 22 sshhiippmmeennttss oonn MMaarrcchh 1177 aanndd AApprriill i1i1,, 11997788.. )) AA. EExxppoossuurree sSyysstteenm AA mmooddiiffiieedd,, pprrooppoorrttiioonnaall ddiilluutteerr ssiimmiillaarr ttoo tthhaatt ddeessccrriibbeedd bbyy MMoouunntt aanndd BBrruunnggss ((11996677)) wwiitthh aa 00..5500 ddiilluuttiioonn ffaaccttoorr wwaass uusseedd iinn this study. The diluent water was well water which was pumped ! ttoo aa ccoonnccrreettee rreesseerrvvooiirr wwhheerree iitt wwaass aaeerraatteedd bbeeffoorree fflloowwiinngg ttoo tthhee eexxppoossuurree ssyysstteemm tthhrroouugghh PPVVCC ppiippee.. TThhiiss wvaatteerr wwaass i cchhaarraacctteerriizzeedd aass hhaavviinngg aa ttoottaall hhaarrddnneessss aanndd aallkkaalliinniittyy aass ccaallcciiuumm ccaarxbboonnaattee ((CCaaCcOO3;)) ooff 3311--3388 mmgg//%Z aanndd 2266--3322 mmgg//%,, rreessppeecc- ttiivveellyy ((AAPPHHAA,, eett aall..,, 11997755)),, a2 ppHH Ooff 77..00--77..44 aanndd aa ssppeecciiffiicc 1 ccoonndduuccttaannccee ooff 114499--117700 mmiiccrroommhhooss ppeerr cceennttiimmeetteerr ((~ymmhhooss//ccmm)).. TThhee ddiilluutteerr ddeelliivveerreedd ffiivvee nnoommiinnaall ccoonncceennttrraattiioonnss ooff 77H6I..0033 rraannggiinngg frroomm i10000 ttoo 66..22 mmgg//4 aanndd ccoonnttrrooll wwaatteerr ((vweellll wwaatteerr)) ttoo dduupplliiccaattee 2 ctoesstt aagquuaarriiaa.. EFaacchh tteesstt aaqquuaarriiuumm mmeeaassuurreedd 3300..55 xx 3300..55 xx 3300..55 3 I3MM_MMNNO011665555665611 11117766..00001122 cceennttiimmeetteerrss ((ccnm)) aanndd hhaadd aa ssttaannddppiippee ddrraaiinn 1177..55 ccmm iinn hheeiigghhtt ttoo mmaaiinnttaaiinn aa ccoonnssttaanntt tteesstt' wwaatteerr vvoolluummee ooff 1166 1 iinn eeaacchh aaqquuaarriiuumm.. TThhee ddiilluutteerr ddeelliivveerreedd 00..5500 & ooff tteesstt wwaatteerr ttoo eeaacchh aaqquuaarriiuumm 119955 ttiimmeess ppeerr ddaayy yyiieellddiinngg aa 9900%% tteesstt wwaatteerr rreeppllaacceemmeenntt ttiimmee ooff 1i00 hhoouurrss ((SSpprraagguuee,, 11996699)).. TToo mmiinniimmiizzee tthhee aaddssoorrppttiioonn ooff 778S..0033 i oonn ssuurrffaacceess,, aallll eexxppoossuurree ssyysstteemm ccoommppoonneennttss hhaavviinngg ccoonnttaacctt wwiitthh ; 7788..0033 wveerree ccoonnssttrruucctteedd ooff aaccrryylliicc mmaatteerriiaall rraatthheerr tthhaann ggllaassss.. EEtthhyylleennee ddiicchhlloorriiddee wwaass uusseedd ttoo cceemmeenntt aaccrryylliicc ccoommppoonneennttss | ttooggeetthheerr.. i TThhee aaqquuaarriiaa rreesstteedd iinn aa wwaatteerr bbaatthh ccoonnttaaiinniinn'gg cciirrccuullaattiinngg wwaatteerr : hheeaatteedd bbyy iimmmmeerrssiioonn ccooiill hheeaatteerrss aanndd rreegguullaatteedd bbyy aa mmeerrccuurryy ccoolluummnn tthheerrrmoorreegguullaattoorr ddeessiiggnneedd ttoo mmaaiinnttaaiinn tthhee tteesstt wwaatteerr ) tteemmppeerraattuurree aatt 2255 ++ l1%C..~ | AA 44 % ggllaassss MMaarriioottttee bboottttllee ttooxxiiccaanntt ddeelliivveerryy ssyysstteemm wvaass uusseedd | t0o ddeelliivveerr 66..66 mmi ooff aa nnoommiinnaall 7788..0033 ssttoocckk ccoonncceennttrraattiioonn ooff 2299..44 mmgg//mmt iinn ddiissttiilllleedd vwaatteerr ttoo tthhee mmiixxiinngg cchhaammbbeerr ooff tthhee 1 ddiilluutteerr.. I 5 B. ees Egg an and Freryy eExxppoossuurree } OOnn MMaarrcchh 3311,, 11997788,, tthhee eexxppoossuurree ooff ffaatthheeaadd mmiinnnnooww eeggggss ttoo i 7788..0033 wwaass iinniittiiaatteedd wwiitthh eeggggss oobbttaaiinneedd wwiitthhiinn 4488--hhoouurrss aafftteerr ffeerrttiilliizzaattiioonn ffrroomm tthhee UU..SS.. EEnnvviirroonnmmeennttaall RReesseeaarrcchh LLaabboorraattoorryy,, DDuulluutthh,, MMiinnnneessoottaa.. UUppoonn aarrrriivvaall aatt EE GG && GG,, BBiioonnoommiiccss,, tthhee eeggggss vweerree aalllloowweedd ttoo aacccclliimmaattee ffrroomm 1177..55CC ttoo tthhee tteesstt tteemmppeerraattuurree 4 I3MM_MMNNO011665555665622 11117766..00001133 I teat waters. peas cops were comes ns semves dutty wucss ooff 2255C oovveerr aa ttuwoo hhoouurr ppeerriioodd.. SSiixxttyy eeggggss wweerree tthheenn rraannddoommllyy Gdiissttrriibbuutteedd ttoo eeaacchh ooff 1122 oegggg ccuuppss wwhhiicchh wweerree tthheenn ppllaacceedd iinn aa 6600 mmgg//L mmaallaacchhiittee ggrreeeenn ssoolluuttiioonn ffoorr 1155 sseeccoonnddss ttoo eelliimmiinnaattee ppoossssiibbllee ffuunngguuss ggrroowwtthh.. OOnnee eegggg ccuupp wwaass tthheenn ssuussppeennddeedd iinn eeaacchh Ooff tthhee 1122 tteesstt aaqquuaarriiaa.. EEgggg iinnccuubbaattiioonn ccuuppss wweerree aaccrryylliicc ttuubbeess ! ((77 ecmm lloonngg,, 33 ocmm 0O..DD..)) ccoovveerreedd aatt oonnee eenndd wwiitthh 4400 mmeesshh NNiitteexxR | ssocrreeeenn.. AAnn eegggg ccuupp rroocckkeerr aarrmm aappppaarraattuuss,, aass ddeessccrriibbeedd bbyy MMoouunntt ((11996688)) wwaass uusseedd ttoo ggeennttllyy oosscciillllaattee tthhee eegggg ccuuppss iinn tthhee test waters. Dead eggs were counted and removed daily until hhaattcchhiinngg wwaass ccoommpplleettee.. PPeerrcceennttaaggee hhaattcchh ccaallccuullaattiioonnss wweerree bbaasseedd oonn tthhee nnuummbbeerr ooff lliivvee ffrryy ppeerr aaqquuaarriiuumm aafftteerr hhaattcchhiinngg wvaass | ccoommpplleetteedd ccoommppaarreedd ttoo tthhee nnuummbbeerr ooff eeggggss ((6600)) ppeerr aaqquuaarriiuumm J aat tthhee iinniittiiaattiioonn ooff tthhee eexxppoossuurree.. 7T0o iinniittiiaattee tthhee 3300 ddaayy ffrryy eexxppoossuurree,, 4400 ffrryy wweerree rraannddoommllyy : sseelleecctteedd ffrroomm eeaacchh eegggg ccuupp aanndd ttrraannssffeerrrreedd ttoo tthhee rreessppeeccttiivvee | aaqquuaarriiaa.. UUppoonn ccoommpplleettiioonn ooff hhaattcchh,, ffrryy wveerree ffeedd lliivvee bbrriinnee sshhrriimnpp nnaauupplliiii tthhrreeee ttiimmeess ddaaiillyy oonn wweeeekkddaayyss aanndd ttwwiiccee ddaaiillyy on weekends. Aquaria were 5rushed and siphoned twice each I | wweeeekk ttoo rreemmoovvee eexxcceessss ffoooodd aanndd ffeeccaall mmaatttteerr.. OObbsseerrvvaattiioonnss oonn bbeehhaavviioorr aanndd aappppeeaarraannccee ooff ffrryy wweerree mmaaddee ddaaiillyy aanndd ffrryy ccoouunnttss wweerree mmaaddee wweeeekkllyy.. AAtt 3300 ddaayyss ppoosstt--hhaattcchh tthhee ffrryy ffrroomm eeaacchh aaqquuaarriiuumm wweerree aanneesstthheettiizzeedd wwiitthh 1MSS--222222 ((ttrriiccaaiinnee mmeetthhaannee-- : ssuullffoonnaattee)) aanndd ppeerrcceennttaaggee ssuurrvviivvaall,, mmeeaann ttoottaall lleennggtthh,, aanndd mmeeaann wveett wweeiigghhtt vweerree ddeetteerrmmiinneedd.. TThhee ffrryy wweerree mmeeaassuurreedd iinnddiivviidduuaallllyy t0o ccaallccuullaattee mmeeaann aanndd ssttaannddaarrdd ddeevviiaattiioonn ttoottaall lleennggtthh wwhhiillee ceaacchh ffrryy ggrroouupp ((ffrryy ffrroomm oonnee aaqquuaarriiuumm) wwaass wweett wweeiigghheedd ttoo ccaall-- 5 W3M_MNMoNT0e1S65S5665633 1117766..00001144 ccuullaattee mmeeaann vweett wweeiigghhtt.. AAtt tthhee tteerrmmiinnaattiioonn ooff tthhee tteesstt,, tthhee ffrryy ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll aanndd tthhee hhiigghh ccoonncceennttrraattiioonn ((1i0000 mmgg//4)) aaqquuaarriiaa wweerree pprreesseerrvveedd iinn 1100%8 bbuuffffeerreedd, ffoorrmmaalliinn wwhhiillee tthhee ffrryy ffrroomm tthhee ootthheerr tteesstt aagquuaarriiaa wweerree ffrroozzeenn.. TTeenn pprreesseerrvveedd ffrryy ((55 ffrroomm eeaacchh rreepplliiccaattee)) ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll aanndd tthhee hhiigghh ccoonncceennttrraattiioonn wweerree sseenntt ttoo tthhee EEnnvviirroonnmmeennttaall PPaatthhoollooggyy LLaabboorraattoorriieess,, IInncc..,, CCaarroolliinnaa,, RRhhooddee IIssllaanndd.ffoorr ccoommpplleettee hhiissttooppaatthhoollooggiiccaall eexxaammiinnaattiioonn wwiitthh aa ttrraamnss-vveerrssee sseeccttiioonn ooff tthhee nnaarreess aanndd cceepphhaalliicc eexxtteennssiioonn ooff tthhee llaatteerraall lliinnee.. TThhee rreemmaaiinniinngg pprreesseerrvveedd ffrryy aanndd ffrroozzeenn ffrryy wweerree sseenntt ttoo tthhee 33MM CCoommppaannyy,, SStt.. PPaauull,, MMiinnnneessoottaa,, MMaayy 3311,, 11997786.. Dc. C. mest Test mWaatteerr Amnaatlyyssiiss DDiissssoollvveedd ooxxyyggeenn ccoonncceennttrraattiioonnss wweerree mmeeaassuurreedd iinn tteesstt aaqquuaarriiaa uussiinngg aa YSSII MMooddeell ##5544 ddiissssoollvveedd ooxxyyggeenn mmeetteerr wwiitthh aa ccoommbbiinnaattiioonn eelleeccttrrooddee ppoollaarrooggrraapphhiicc pprroobbee wwhhiillee ppiH wwaass mmeeaassuurreedd wWiitthh aann IInnssttrruummeennttaattiioonn LLaabboorraattoorryy MMooddeell #$117755 ppHH mmeetteerr.. TTeemmppeerraattuurree wwaass mmeeaassuurreedd wwiit~hh aa llaabboorraattoorryy tthheerrmmoommeetteerr.. MMeeaassuurreemmeennttss wweerree rmaaddee ddaaiilly: aanndd aalltteerrnnaatteedd bbeettwweeeenn aaqquuaarriiaa ssuucchh tthhaatt eeaacchh aaqquuaarriiuumm wwaass mmeeaassuurreedd oonnccee eeaacchh wweeeekk.. oOnnee--hhuunnddrreedd mme wwaatteerr ssaammpplleess wweerree ttaakkeenn wweeeekkllyy ffrroomm eeaacchh tteesstt aaqquuaarriiuumm aanndd ssttoorreedd iinn ppoollyyeetthhyylleennee bboottttlleess.. SSaammpplleess wweerree ) sshhiippppeedd MMaayy 3311,, 11997786 ttoo tthhee 33M CCoommppaannyy,, SStt.. PPaauull,, MMiinnnneessoottaa ffoorr ddeetteerrmmiinnaattiioonn ooff 7788..0033 ccoonncceennttrraattiioonn.. 5 1117766..00001155 33M UMNONT0616S555665644 ! DDb.. sSttaattiissttiiecss MMeeaannss ooff mmeeaassuurreedd bbiioollooggiiccaall ppaarraammeetteerrss ffrroomm dduupplliiccaattee aaqquuaarriiaa wweerree ssuubbjjeecctteedd ttoo aannaallyyssiiss ooff vvaarriiaannccee ((SStteeeell aanndd TToorrrriiee,, 11996600,, ccoommpplleetteellyy rraannddoommiizzeedd bblloocckk ddeessiiggnn,, PP==00..0055)).. DDaattaa ffoorr ppeerr-cceennttaaggee hhaattcchh aanndd ppeerrcceennttaaggee ssuurrvviivvaall wweerree ttrraannssffoorrmmeedd ttoo aarrcc ssiinn ~/ppeerrcceennttaaggee pprriioorr ttoo aannaallyyssiiss.. IIff ttrreeaattmmeenntt eeffffeeccttss wweerree iinnddiiccaatteedd,, tthhee mmeeaannss ooff tthheessee ppaarraammeetteerrss wweerree ccoommppaarreedd ttoo tthhoossee ffrroomm tthhee ccoonnttrroollss uussiinngg DDuunnnneetttt''ss pprroocceedduurree ((SStteeeell aanndd TToorrrriiee,, 11996600)).. WWhheenn aa ttrreeaattmmeenntt mmeeaann wwaass ssiiggnniiffiiccaannttllyy ddiiffffeerreenntt ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll mmeeaann ((PP==00..0055)),, tthhaatt ttrreeaattmmeenntt wwaass ccoonnssiiddeerreedd ttoo bbee aann eeffffeecctt lleevveell.. J) 77 11117766..00001166 I3MM_MMNNO011665555665655 resus SECTION III RESULTS The daily measurements of water quality parameters demonstrated tthhaatt tthhee tteemmppeerraattuurree rreemmaaiinneedd aatt 2255 ++ 1lCC aanndd tthheeddiissssoollvveedd oxygen concentrations above 95% of saturation throughout the entire exposure period. The pH normally ranged from 7.0-7.3 and did not differ significantly between exposure aquaria. The biological data generated in this study indicate that nominal 78.03 concentrations as high as 100'mg/ had no adverse effects upon the hatchability of eggs or upon the survival and growth of fathead minnow fry (Table i) through 30 days post- ) hhaattcchh eexxppoossuurree.. _~ . 11117766..00001177 3M MN01655666 sSeEcCtTiIOoNn I1Vv ) RREEFFEERREENNCCEESS AAPPEHAA,, NAiWWWAA,, WWPPCCFF.. 11997755.. SSttaannddaarrdd MMeetthhooddss ffoorr tthhee EExxaammiinnaattiioonn ; ooff Wlqaatteerr aanndd WWaasstteevwaatteerr.. 1144tthh EEddiittiioonn,, NNeeww YYoorrkk,, HHaerrddnneessss | oEDmTaA TTiittrriimmeettrriicc MMeetthhoodd.. 330099B8,, pppp.. 220033--220066.. 1 ] MMaacceekk,, KK..JJ.. aanndd BB..HH.. SSlleeiigghhtt,, IIIIII.. 11997777.. UUttiilliittyy ooff ttooxxiicciittyy ] tteessttss wwiitthh eemmbbrryyoo aanndd ffrryy ooff ffiisshh iinn eevvaalluuaattiinngg hhaazzaarrddss | aassssoocciiaatteedd wwiitthh cchhrroonniicc ttooxxiicciittyy ooff cchheemmiiccaallss ttoo ffiisshheess.. I | SSyymmppoossiiuunm PPrroocceeeeddiinnggss,, AASSTTMM,, MMeemmpphhiiss,, TTeennnneesssseeee,, OOccttoobbeerr,, 11907766:: 113377--114466.. | eMciKinm, SJ.uM. 11957777.. EBvvaalluuaattiioonn ooff tteessttss wviitthh eeaarrllyy lliiffee ssttaaggeess . ooffffiisshh ffoorr pprreeddiiccttiinngg lloonngg--tteerrmm ttooxxiicciittyy.. JJ.. FFiisshh.. | RReess.. BBdd.. CCaann.. 3344:: 11114438--11115544.. i ] MMoouunntt,, DD..II.. 11996688.. CChhrroonniicc ttooxxiicciittyy ooff ccooppppeerr ttoo ffaatthheeaadd 1 mmiinnnnooww ((PPiinmeepphhaalleess pprroommeellaass,, RRaaffiinneessqquuee)).. WWaatteerr RReess.. 22:: 1 215-223. 215-223. Vane ot. anton anes, 1567, sistas costes ] Mount, D.I. and W.A. Brungs. 1967. A simplified dosing : aappppaarraattuuss ffoorr ffiisshh ttooxxiiccoollooggyy ssttuuddiieess.. WWaatteerr RReess.. i1:: 2200--2299.. Houat, D.I. and C.F. Stephen. 1967. A method for establishing Mount, D.I. and C.E. Stephen. 1967. A method for establishing . acceptable acceptable ttooxxiiccaanntt lliimmiittss ffoorr ffiisshh,, mmaallaatthhiioonn aanndd tthhee | bbuuttooxxyyeetthhaannooll eesstteerr ooff 22,,44--DD.. TTrraannss.. A~mmeerr.. FFiisshh.. SSoocc.. 96: 185-103. 96: 185-193. | 5 9 a3MW_MMNND01166555566677 1117766..00001188 sSpprraagguuee,, JJ..BB.. 11996699.. MMeeaassuurreemmeennttss ooff ppoolllluuttaanntt ttooxxiicciittyy ttoo ffiisshh.. II.. BBiiooaassssaayy mmeetthhooddss ffoorr aaccuuttee ttooxxiicciittyy.. W~laatteerr RReess.. 33:: 779933--883311.. | SStteeeell,, RR..GG..DD.. aanndd JJ..EH.. TToorrrriiee.. 11996600.. PPrriinncciipplleess aanndd pprroocceedduurreess ooff ssttaattiissttiiccss.. MMccGGrraaww--HHiillll,, NNeeww YYoorrkk:: 448811 pppp.. | ass ana fry stages of freshwater fish: pp. 7. UU..SS.. EEPPAAI. 11997722.. PPrrooppoosseedd rreeccoommmmeennddeedd bbiiooaassssaayy pprroocceedduurree ffoorr eggand fry stages of freshwater fish: pp. 7. i ) 1i00 11117766..00001199 3IMM_MMNND011665555665688 ZTaabbllee 1 1 ---- PP"eeorrrccaeennttlaaeggneegthhhaattcachnhdoofmfeaeenggggssw,,etppeewrreccieegnnhtttaaggoeef ssfuuarrtvvhiievvsaadll,,minnmeneaoanwn aofnnrdyd ss(ttPaainnpddeaaprrhdadieddseevvpiiraaottsiieoolnnss5()S..5D..)) ctoonttalinuloeunsgtlhy, sxapnodsemdeantowe1t8.0w3e.ight of fathead minnow fry (Pimephales promelas) continuously exposed to 78.03. ccoonncNsewoeonomnmgritiinranaattltiioonn (mg/) 10 100 5 =5O 2 25 1s12.5 06.2 caneror control septicate Replicate A a5 A B : AaB Aa5B A B a: aB 5A B eunsHatch (%) =955 5o990s7O 10599S05 i00 5593 at89558 a94 598 95 30 gave post-haten 30 days post-hatch R em ee Survival T~tal length TM a (%) (~) and (S.D.) Weight (mg) " na 5 ss 19 (2.) 59 2 na . 82 20(2] 60 50 20m o uf 9O 20 (2.) 6O 0m eo Bf 98 20 (3) 65 0 ne : 90 21 (2) 74 a nw TM 95 21(2) 70 5 am 95 21 (3) 70 100 na i00 21(2) 72 = we 5 98 20(2) 59 w ne 88 22 (2) 79 = na @ 92 20(2) 62 ss nm 7 95 21(3) 75 amworessen 3M_MN01655669 11117766..00002200 APPENDIX I EE y-------- PROCEDURES FOR CRITICAL LIFE STAGE Roxcerry TEsns wen eRasmSR Fish TOXICITY TESTS ~ITH FRES~qATER FISHES EE tese TThhiiss ddeessccrriibbeess ssttaannddaarrdd ttooxxiicciittyy tteessting procedures for egg and r or chemo Tiines eioeed SEonarenells SE, fry stages of freshwater fishes followed at the Aquatic Toxicology Laboratory of E G & G, Bionomics, Wareham, Massachusetts. This rosea cSostry Manin Laine Thora Teernnies Blinn | PpPrrroooccceeeddduuurrreee closely ffoorr EEgggg adheres aanndd FFrryy to the SSttaaggeess Proposed Recommended Bioassay ooff FFreshwater Fish (EPA, 1972). 5. PhvsiBcaol esysten ] 3. Diluter: A proportional diluter (Hount and Brungs, A. Physical System Diluter: A proportional diluter (Mount and Brungs, a aT Ee aE SE OR 1967) with a dilution factor of 0.5 is employed for | cog ant 2 eons "5 Check $4 made GF oleees egg and fry exposures. A check is made of diluter Rte rire Redd function by daily observations. Five toxicant con- centrations, a control, and if necessary, a solvent control, are utilized in each test. | 2. Toueant sixing: container to promote mixing of Toxicant mixing: A container to promote mixing of toxicant be&ring solution and diluent water is used . SERMC arhLet ara pater: for ooh comerciales between diluter and aquaria for each concentration. Separate delivery tubes are run from this container fPorotinoneotn LorfomtA seta ion nd SSe SI ECs E to each duplicate tank. Calibrations are performed before every test to insure that the correct proportion of toxichnt solution and diluent ~ater is delivered to each duplicate tank. Toxicant concen- trations are monitored in each duplicate aquarium. i 3. o TTaannkk:: EEaacchh dduupplliiccaattee aagquuaarriiuumm iiss ccoonnssttrruucctteedd oof SE anal ne of glass and silicone adhesive and measures 39 x 20 x Tn Te hy SR 25 cm.. Water depth is maintained by a constant ray ep Lo level glass drain tube 19.5 cm from the bottom of | SSeonIRSAI, J0R2ELfrIo the beeenof each test aquarium. The total test solution volume in each aquarium is thus maintained at 15 i. ] G0 SPloEw rEate: rivechundreacnt of test solution ase Flow rate: Five-hundred-ml of test solution are PERheS In Soe | d66-e-11l00ivettraaenndkk vvtooolluuemmaeecssh pdpeeurrpli224c4athheoouurrassq..uarTiThhuiimss atiiss a ssruuafftffeiiccoiiefenntt A CH to maintain a dissolved oxygen concentration >60% of saturation. 5. Cleaning: 13 aquaria exe brushed and siphoned at Cleaning: All aquaria are brushed and siphoned at least t~qice weekly. 6. Bag cup: rag sncubasion cups are mds feom 3 on Egg Cup: Egg incubation cups are made from 5 c~ O?'_'_~. round glass jars with the bottoms cut off 38 ST Ee: aanndd rreeppllaacceedd ~with stainless sstteeeell oorr NNiitteexxRR ssccrroeeenn Them ate he semi hetasTn 5 (40 mesh per inch). Cups are oscillated in the test water by means of a roc]{er arm apparatus Sent RTL RET driven by a 2 RPM electric motor (~ount, ]96S) . Ie 12 sores 3M MN01655670 11117766..00002211 7. Bighe: men necosaary for egg and fry survivel Light: I';hen necessary for egg and fry survival ~.g., salmonids),, the aquaria are shielded from Sul al! sources of light. The ent ameCollet,oo, o Temperature: Temperatures are controlled so as not to deviate from the specified test temoerature by | mmoorree tthhaan l1oC throughout the entire te~st pericod.. Construction materials: Construction materials which contact the test water are chosen which do ] EE aires Jaa of sorb sSeE rSheen which4 not either leach of sorb significant amounts of substances from the water. Glass, silicone ] uuaannddphpheellssaaiissvvtteeii,,cciizNzNieeittddeexxppRRoo,,llyyeeTtytghhoyynllRee,nneesaiarrleeicottnhheee cscotononspsptterrruusccttiiaaoonndndn nar materials used. | i100.. WWaatteerr:: AA 125 meter deep bedrock wweellll iiss tthhee ssoouurrccee of the diluent water. This water is pumped to a concrete holding tank where it receives extensive SoTaion ana tai, reegives exons aeration and is delivered through aged PVC pipe to the exposure system. a pisesen seve B. Biological System i 1. BBeeggiinnnniinngg ttest: The exposures are initiateedd aass ssoooonn aass . alia S ) opoffosseeimmbbblrreyyoo addfeetvvereellootpphemmeennetgtgsiiss arrreeeccoofrreddreetddi..lizeDDdee,ppeennaddniidnnggtheuuppoosnntage EER 37 fopsied bebending wen availability of eggs, 35 to 50 eggs are randomly distri- rP35aBoirianiieyperSnanrcgnoan0 og orePlaced1 | Zor a'ninimun of 1/2 the expected eos facvhatioy boston. buted to each of two egg cups or 60 eggs are placed in one egg cup per duplicate aquarium. Eggs are exposed for a minimum of 1/2 the expected egg incubation period. fet A A ng nected, 233 Incubation per Egg mortality in each egg cup is recorded daily. If I AE ibis aCL deemed necessary, eggs will be treated with an appro- SETI RTI asia be ree priate fungicide during incubation. !! 2. PSounvbeoyxpoOsFurLo:is I handing of ages permits, daily ] FrFreycEoreCxdp1OoisssrurkdeKee:pptt wwIhhfeennhahhnaadttlccihhniginnggofccoeogmmgmmseennccpeeessrmiootfs,Lthheea daily ER havnesering, cueences of Li"e number of eggs hatched, the number of dead fry, | ARS sReEE SiGe,Shemaser of dese fry. and the number of deformed fry in each egg cup. BT TRrIE of deformedey ineen eg0cw After complete hatch, 40 fry are randomly selected Io 40 EY frerendendy elect from the egg cup or cups.and transferred to each aquarium. The fry are exposed to the test solution EBAeTeT EeSE1E0fhe font elution for a minimum of 30 days post-hatch. This period may The Tamer ofTesotnraeiavitl Some nteny Ths period my be extended if the data ~arrants a longer investigation. ATOR ng Bee otoagaiet versigend The number of surviving fry is recorded twice weekly. Berit sOF BETES ie recorted ticeveo At the end of the fry exposure period, percentage h Ser Pesare PRriot; pescenteg survival, individual mean total lencth, mean wet weight and deformities are recorded~for each fry group. 3. Necessary data: Data that ~qill be reported for 13 Swworesor 3M MN01655671 11117766..00002222 3 eeh2a))aaaccthhpcpeherdidrcunucepgpenlnlttiiiaaccsggaaeettceeomhhpaaiilttnnaccth~ttehhee/((nnnueeuusggmmggbbbeeerrraannddooofff ffrerffyygrrgyyseexxssppuuioorrnssvvcuuiiurrvvbeieianntggaaerrdeeaa),::fftteerr hbb)))atcppgheerirrocncwegetnhnttiasa(ggmeeceoamnffprrlyyteottsseauul/rrnvvuiilmvvebaanlelgrthaattofan33d00eggddwsaaeyyissgihntppcoousbsatatt-t-he3had0at)t,cdchah,y,s-), aca)nnad'gadr))owddteehffoo(rrmmmeiiattniieetsso..tal length and weight at 30 days), 4. FFoFooFooddl::iveUUnnlbleerssissneoottshhheerrri%wm~ipisseenadudepeleeimmieeddtwnnieeccceeesssspaaerrryy,,dayffiiasshhd aarree t1flhieiedbbiitlftiiuuvsnmehssbhuurappvippenlleeemmreesennhattcreehiddemdpwwiinattahhuspudldfri~fiyyicippteeewnilltclleeettseeipdzdeer.ffdooaooydd wwhheenn the fish have reached a sufficient size. 5. EDtDoiihsseeeaaissee::: naDDtiiussreeeaa.ssee Woouhuttebbnrreetaarkkessatmaaerreenthhaainnsddldleeeddemeaadccccnooerrcddeiisnnsggary, taaollllthaaeqq~uu'aarrriniaaatuwwriiell.ll rr%ee~ccheeeiinvveetrettahhetemessnaatmmeeisttrrdeeeaattemmmeeenndtt..necessary, 6. S5pSSpp5eer5cciieaaallrseeeexxaammriinnvaatteiioodnnss::for pIIoffssrrieebqqluuieirreefdda,,tureeexxttrrpaahysffiiiosslhhogaainncddal, mbebagiiygooscchhieeanmmrdiieicccaapallrt,,eeseacarnnevddretdhahiiisnsfttorootllooopxggoiiiscccasaanilltbleriiennlfvvaueettsseuttrdiieggeaaftptfihieoyocnsntsisso.lwwohhgiiiccchhal, may indicate certain toxicant related effects. cC.. cChheemmiiccaall SSyysstteemn 1. r PPrreeppae arriingnb Eg yaada issttsoosct co]k[lvsse ioonlluugttd iihooenn:: toxSStitoocccakkntssooilnluuwttiaioconnessr oaafrree in ) paiannrmeoopuornargtrgaeandnoiifccbyssosdoloilvlsevvnseetnontltv(iiirnffegaiigtnnehssneootll-uugtbbrollaxeediecaiinnnotrwwaabiltteleetrrt?..;eart)eTTrhhieeosr keinpt aaacttmoonautanrotmmliinnoiifimmsuusmmao..ilsvoenIItffestss(aoorbllelvvaieegsnnehttnetd-ii.ssgrauudssTeeehdde,,orcoaabnecssteootnlletvvreer)nnatttiisonkept hoocfiofgnshtsoreoloslvltveennsittsolvaiiennlnstotthheoceostnSsacoobelllvnvieetsnnrhttaetdicc.ooonnnttrTrfohoolelundciissonineceqqeuunaaantllyratettiooxopntothhseeure haaiqquguaahrreisfutumn..solvent concentration found in any exposure : 2. MMreeaaatssiuuorrneemmeeonnfttToooffxicttaoonxxtiiccaa1nnsttfeccaoosnnuccreeenndttrraattiniiooenancssh:: duTThpheelicccaootnnecceenn-- pataerqqrauutaawirreoiienuukmm.oafattWtaeeotaaxeccirhhcantsttoaoxrxipiilcsceaasnnmtteaarscceuoornnectcdeaenkntetirnrnaattaeitiaoocnnha dpaatuotpinllltieecaaassatttpeprooonncxceei- pmsmeaiardtteeesllwyeyeokmfm.iidcdvwaaa~cyayhtebbareegttuvawsereaieemunnpml.ettshheeWavawrataeteteertrrakseassnmuuprrlffaaeatccseea,,arpeboboiotenttitttoohnmaeprpaarnndodxi- peesrxxietdtesrrseaarccvttoeeefdddeuaiincm~thmmieelddaiiqaauetatxreetillruyyamc.taaiffottnee~~srratosserarammppasllnaiiamnnlpgglyesseoosrrarcaaeappnpprreoboieptprhrieibaraettreellyy pffroorermmseeeddr..ved until extractions or analyses can be per- 3. MMeeaasSsSIvuuedrreemm6eennyttgenooffrooetthhHeer~eAvvaaSrrUiiTaabbeilldneess::aquTaTeremmippaeedrraaaittluuyrreeonaannddanddiiss-- o~aanollcltteveeerrdncnaaatctoihixnnygwggeeenbbkaa.ssaiirsse,,tmheessauusccpuihhl~-itteshhdaattmine"acesaaauccqrhhueadraaiqqwauueaaedrrkaiiliuuylmmy iiissnon taahnnaenaallyyzzeedd ohahniilgcgtheherneaaanantdcdihnllgwooewwebkett.taevssetteTnhcceoonnrcpceHeepnnltiticrrsaaatttmeiieooannstuarnaaeknndsdd %cef.aar.c~coehhmeklvccyoeoncnittknrroottlloh,,eweek. 5 TTcaooelttntaatellrrantahhitaaoirrnnddgnneeassnbssdetwciiessoenntmmereaoarslseuup~rwl-eeiedecdkaltiiyenn. tttahhneeI]f~shhiiaggmfhhyrooaamfnndd\.t~ehJ]e.}eoo[~su,,etcocobonanwr--eeak-. mrceeettneet~rr-sastiaaorrnee aaafnffdfeecccttoeenddtrobby!y wttehheee~[]tt.ooy.rxiiccaeInnftt,,anyaadddodfiittiitoohnneaaslle para- 114 33MM_MMNNo011665555667722 11117766..00002233 , aPaannraaallmyyessteoessr:aarree pertorned performed to to more more closely closely monitor monitor that that 4. o pDRaeerssEaiiRmddEeuuteeeraa.ennaalllyyossniiss!:: iWWmhhaeetnnv'ededdeeeemmfeeoddr nrneeoccreeissossuaanrrtyy,,Fesieedxxuppeoonss.eedd 5. JMMfeeiottsShhhooosdda%ssn:::d eogfHMgees`ttWhhaooatddresser ABnaalycsihsaorf Wamkoerrs adaSdanneen1gadsstlcciyhrrWoaziiaisebbsotdeterededess.fomiiernn((tBEhHbtoPo[anAode,stxsthi.hoc11oda99cdas7n7sn11t.))ffProorerraasorriCvCeedhihuedeyuemmeessiiee.ccddwaaollre aue anclcetusrosatteothsinenfrfoommrFaomoarcrteiieooaenncf..hficainRheaeentfftveoirriemmnneogctesehodssssaaemcrpchilaseen:sspraavoreve.idaaennaamlloyyrszeeedd b. statpiesrtiiocdsically for each analytical method. D. S1.tatiD DDoSsfuuetppcilltticihicsceoe aanttsteeossBx::iecctaaemTnTcrtrnuuee`bbeSeudidipununTpgpgillciittecceeraassett.tteeeesdsswaaa{(srr1iFeei.eei..uua,,ssl-eeddnnooffwwoorraatteeeerraacchhccoonlln-eevveell 2. 2. nections between duplicate aquaria). pisteibution of test concentrations: he toxicant Distribution of test concentrations: The toxicant Ca notn Retigmment, te SI i concentratlons are asslgned to aquagia by stratified 3. Arnaanldyosmisassoifgnvmaernita.nce/Dumott's . m3.isceAlnlaalnyesoiussof variance/Dunnett's E. Miscellaneous ) 1. AAtB Fdhdrdriioattuiiigoohnnnaamlleatnahiia onndfcsoohrrer~mnaaiotttciiaoolcnno::dveeerrteAAeedLldrLlmii1nxnrraootututhitthioiiisnnsn.see,pPrrbbohoiicacooeeanadtsdsusolsraraieyyyngff(tolleefoo.rwwge.--s, pMEfEaheimEsytehsh}er)ioicdcasScalhlnoofossaoerneePddluyytebhclhehifTecoomElrrilxHiacoeoamawnamileelinddtnahdatettttAhihLoeeooosrssnnemeo.icooniGdffaaoettssFWieiecatoorrtenniiess,sbr",eedda1ahnn9addii7nnn5de~)labSSisttsntaaegennwwddaaaeorrtfredderr 2. R(eAfmeerreinccaens:PublFiocr aHedadlitthionAaslsociinaftoiromna,tio1n975c)o.ncerning omiouing retererces are Aisveds fRflelofoewwr--ettnhhcrreoosuu:gghh Fbboiirooaassassdaadyyitittoeenssattlss wwiiinttfhhormffaiitssihhoneeggggcssoncaanneddrniffrnryyg,, mAAtTehmmEeteehRrroiifSdccosaalnnloMfwPoPariuubnbsllgtiiihccereewfHCHeeeerxraaaaoelblmrntitinchnhn:eaastAtAisisososanonorcceiiooaafflttiiiwsvootaonnett..dee:rr o11o9977d55..vastSSottraamnntddoaarrr,da and wastewater. EEC1e4nnhvveeiEmidxir}.oconanlmmeeAcnrPnAoHttnneAaata,lillaiysYsNPPierr.swooSttaoeYeobotcfcerttrkiiaw~-qotoaanonrtneeyshAr,sgeeaonnnnGccddiyyn..ocWairsnitn11eea99nsc77..i11,.. A;oH~~ns.eiai[ctley)hytehotiodidascsnaslffoorr 5Qth~eueKkariilmnmiE,,teaayxm3Jppo..oCn4Msoe..unrtEserEaasonnlddattboDLD.h..aAhbSco.ooorpTpapBBreteeeorornunrtooyiioo,ttnn(..SSChsYiiuvenr11evcv99Li7ii7i11tvnn..ahngllas,,t.iEB,SrfFfeefooppenOcccrthtietoiotnd.nouooiscffittoililyoooonnnn,:gg-- and growth of brook trout (Salvelinus fontinalis) ((MMiittcchheellll)).. JJ.. FFiisshh.. RReess.. BBdd.. CCaannaaddaa,, 2288:: 665555--666622.. 115 11117766..00002244 sw_moresss?s 3M MN01655673 1 U5. Environmental protection Agency. 1972. pro- hl Vater Research, 2; FiBciyyics BEomeles MMoouunntt,, DDoonnaalldd II.. 1199668S.. CChhronic ttooxxiicciittyy ooff ccooppppeerr to fathead minnows (Pimepphhaalleess prproommeellaass~, RRaaffiinneessqquuee)).. . MMWsSsooeaiiuuitnmnnbppettillr,,eiisefR.iiDDeeeoosddnne"aaawrllddacddoovhsse,iirII~.nnHgg2:aaeannaspddpcpp2n~aaW1qrri5riaa-leltt2lnl2uuii:3ssaa..mmfSfBoon5rrrrouunnTfFggiaasss"h..h to119x966i77e..olonaAy toxicology ] lStSsao0oatuguuttidhheecieerraeaa,,slvv.yyRSSmmecceeosWottteataatattllresscerehttooRnneSaallse..erbsiaeeerll1scee19,hcc97,7tt66eeE..ddPiA: Lff6eErrGfea2f0fss0e/-ehhc32cwito9taar.sstteeenrroo1ff0ffseiei.sxxnhpp..oossuurrEeeecoon- ] logical Research Series, EPA-660/3-76-105. SaSSanttnoededkee:llPP,,rrooccRaRoe..dGGddiIuuDDrrp..eoe:ssaanoondffd J3S..tH4a..tisTTtooirrcrrsii.ee.. Statistics. MMc11eG99Gr66r00aa..wv--HHiPpLlIrrlLii,,nncciNiNppoellwweess York: 481 pp. | pCPU.EooSss.eFidreEsRRnheevwcciaoortmmoemmnreemnneddnFeetiddanl,PPrrPoorccoeetddeuucrrteeionffoorrAgeEEnggcgey.nandd19FP7re2yp. SSttaaPcgreeoss- of Freshwater Fish. ) = i 1 16 a3wM oMtNe0s16s5e56r7s4 11117766..00002255 prepress 5: SUBMITTED BY: | mn i PREPARED BY: | ssa SobapSa eTa--b atory E G & G, Bionomics Aquatic Toxicology Laboratory Te 790 Main Street Wareham, Massachusetts June, 1978 arena T. wilson Brenda F. Wilson Bnd Fs rie piolopise (%. Aquatic Biologist graph 3. Fils Stephen J. Ells i APPROVED BY: J George A. Cary bDiirreeccttoorr,, AAqquuaattiicc BBiioollooggyy 1~17766..00002266 [-- 3M MN0'1655675 a 5 SUMMARY OF HISTOPATHOLOGICL SEUR~MLTMAIRAYTIOOFNSHIoSTFOPPaATTRHEORLODGMICEALOH E(XpAiMnIsNpAhTaItOesNSpOroFmeF1AaTsH)EAmDxMrIoNsNsOpW70 7(0P.i0m0ephraolmes20prooemse.las) F113 EXPOSED TO : ] resumen mavens RESEARCH REPORT [Ep -- J SSUUBBMMI~TTTTEEDDTTOO 33MM CCOOMMPPAANNYY ST. PAUL, MINNESOTA Rarore fo-78-5-301 REPORT #BW-78-9-30~ athr EeGSTSeeU&xBTtGM,ItIToBoTnRiEsnoDaonynoB2mYTilaccbsseratory , AquaVWatarireecSnh77aaTp59nmo00,,ixMihnacMHoioaanenlssossgahSayct5echrm3mueLee8seassetbttottrssatory September, 1978 11117766..00002277 unsere 3M MN01655676 D nIwNrTeRoOpDvUeCrTzIoOnN AAnn ""eegggg aanndd ffrryy tteesstt"" wwaass ccoonndduucctteedd bbeettwweeeenn MMaarrcchh 3311 aanndd MMaayy 44,, 11997788 ((BBiioonnoommiiccss RReeppoorrtt ##BBWW--7788--66--117755,, JJuunnee,, 11997788)) ttoo aasssseessss tthhee ssuubb--lleetthhaall eeffffeeccttss ooff 7788..0033 oonn ffaatthheeaadd mmiinnnnoowwss ((pPiinmeepphhaalleess pprroommeellaass)).. EEffffeeccttss oonn eegggg hhaattcchhaabbiilliittyy aanndd .oonn ssuurrvviivvaall aanndd ggrroowwtthh ooff ffrryy wweerree mmeeaassuurreedd.. TToo ffuurrtthheerr iinnvveessttii-ggaattee ppoossssiibbllee eeffffeeccttss dduuee ttoo eexxppoossuurree ttoo 7788..0033,, hhiissttooppaat~hhoo-llooggiiccaall eexxaammiinnaattiioonnss ooff eexxppoosseedd ffiisshh wweerree aallssoo ppeerrffoorrmmeedd.. TThhee rreessuullttss ooff tthheessee eexxaammiinnaattiioonnss aarree rreeppoorrtteedd hheerree.. MMAATTEERRIIAALLSS A~NNDD MMEETTHHOODDSS J UUppoonn tteerrmmiinnaattiioonn ooff tthhee eegggg aanndd ffrryy ssttuuddyy,, ffiivvee ffiisshh ffrroomm eeaacchh rreepplliiccaattee ooff tthhee hhiigghh 7788..0033 ccoonncceennttrraattiioonn ((1i0000 mmgg//2,, nnoommiinnaall)) aanndd ccoonnttrrooll wweerree pprreesseerrvveedd iinn 1100%% bbuuffffeerreedd ffoorrmmaalliinn a.anndd sseenntt ttoo tthhee EBnavviirroonnmmeennttaall PPaatthhoollooggyy.. LLaabboorraattoorriieess,, IInncc.: Ccaarroolliinnaa,, RRhhooddee IIssllaanndd.. TThhee ffiisshh wweerree eexxaammiinneedd ffoorr ggrroossss lleessiioonnss,, aanndd.ssaaggiittaall sseeccttiioonnss vweerree pprreeppaarreedd bbyy aa ppaatthhoollooggiisstt.. FFiisshh wweerree ppllaacceedd wwiitthh iinnddeennttii-ffyyiinngg nnuummbbeerrss iinnttoo pprroocceessssiinngg ccaasssseetttteess,, ddeehhyyddrraatteedd,, cclleeaarreedd aanndd iinnffiillttrraatteedd oonn aann AAuut~oo--tteecchhnniiccoonn ttiissssuuee pprroocceessssoorr uussiinngg tthhee mmeetthhoodd ooff tthhee AArrmmeedd FFoorrcceess IInnssttiittuuttee ooff PPaatthhoollooggyy.. TThhee _) ffiisshh vweerree tthheenn ppllaacceedd iinn aa vvaaccuuuumm oovveenn aanndd ssuubbsseeqquueennttllyy eemmbbeeddddeedd iinn ppaarraaffffiinn.. AAllll bblloocckkss wweerree sseeccttiioonneedd aatt 66 mmiiccrroonnss:: oonnee 11117766..00002288 33MM_MMNNO011665555667777 5 2 sslliiddee wwaass pprreeppaarreedd ffrroomm eeaacchh bblloocckk aanndd ssttaaiinneedd wwiitthh hheemmaattooxxyylliinn aanndd eeoossiinn.. SSppeecciiaall ssttaaiinniinngg pprroocceedduurreess ssuucchh aass PPAASS,, TTrriicchhrroommee aanndd AAcciidd FPaasstt wweerree uusseedd ooccccaassiioonnaallllyy wwhheenn rreeqquueesstteedd bbyy tthhee ppaatthhoollooggiisstt.. AAllll bblloocckkss wweerree sseeaalleedd wwiitthh ppaarraaffffiinn aanndd ssttoorreedd.. SSlliiddeess wweerree llaabbeelleedd,, bbooxxeedd aanndd ddeelliivveerreedd.wwiitthh aallll wwoorrkk sshheeeettss ttoo tthhee pPaatthhoOllooggiisstt ffoorr eexxaammiinnaattiioonn.. TTvwoo sslliiddeess wweerree pprreeppaarreedd ffrroomm eeaacchh ffiisshh.. TTiissssuueess pprroocceesssseedd aanndd eexxaammiinneedd iinncclluuddeedd bbuutt wweerree nnoott lliimmiitteedd ttoo;; ggiillll,, tthhyymmuuss,, lliivveerr,, sspplleeeenn,, hheeaarrtt,, ggoonnaadd,, kkiiddnneeyy,, ffoorreegguutt,, hhiinnddgguutt,, oollffaaccttoorryy mmuuccoossaa ((nnaarreess)),, bbrraaiinn,, eeaarr,, sskkiinn,, mmuussccllee.,, ppaannccrreeaass aanndd pphhaarryynnggeeaall mmuuccoossaa.. J) smsuns - RESULTS AA ssuummmmaarryy ooff tthhee oexxaammiinnaattiioonn ooff eeaacchh ffiisshh iiss rreeppoorrtteedd iinn TTeabbllee 1i.. OOnnllyy tthhoossee ttiissssuueess wwhhiicchh wveerree mmiissssiinngg oorr ccoonnttaaiinneedd ddeemmoonnssttrraabbilee cchhaannggee aarree lliisstteedd.. TThhee oonnllyy ttiissssuueecchhaannggeess oobbsseerrvveedd wweerree hhyyppeerrppllaassiiaa ooff ggiillll llaammeellllaarr eeppiitthhiilliiuumn aanndd ffaattttyy cchhaannggee ooff tthhee lliivveerr.. TThheessee cchhaannggeess wweerree jjuuddggeedd ttoo bbee mmiinniimmaall aanndd ccoonnssiisstteenntt wwiitthh cchhaannggeess sseeeenn rroouuttiinneellyy iinn hheeaalltthhyy ffiisshh.. AAuuttoolliippiiss ooff ggiillll ttiissssuuee wwaass oobbsseerrvveedd iinn sseevveerraall ffiisshh.. TThhiiss cchhaannggee wwaass pprroobbaabbllyy dduuee ttoo tthhee ppoooorr ppeenneettrraattiioonn ooff tthhee bbuuffffeerreedd ffoorrmmaalliinn ttoo tthhee ppooss-tteerriioorr ddoorrssaall ppoorrttiioonn ooff tthhee ggiillll ssppaaccee.. 1117766..00002299 33MM_MMNNO011665555667788 3 y BBaasseedd oonn tthheesseeddaattaa,, iitt iiss ccoonncclluuddeedd, tthhaatt 3300 ddaayyss eexxppoossuurree ttoo aa nnoommiinnaall 7788..0011ccoonncceennttrraattiioonn ooff 2200 uugg//t ddiidd nnoott ccaauussee aannyy ssiiggnniiffiiccaanntt,, ddeemmoonnssttrraabbllee,, ttiissssuuee cchhaannggeess iinn 3300 ddaayy oolldd ffaatthheeaaddmmiinnnnooww ffrryy.. i J 11117766..00003300 33MM_MMNND011665555667799 ) TTaabbllee 11 ---- mHiissttooppaatthhoollooggiiccaall eexxaammiinnaattiioonn ooff ffaatthheeaadd mmiinnnnooww ((RPiimmeepphhaalleess pprroommeellaass)) eexxppoosseedd 330 days to I100 mg/s nnoommiinnaall 77688..0033 aanndd ccoonnttrrooll wwaatteerr. r~10000e mn@g//t 7788..0033 --------mmeeereetal FFiisshh # sSeexx cOCoOornrngdgdaiiatntniioonn MMTTiiiissssssssiiuunneegg e eee e rie 1i 2 2 ). 33 4 55s 5 6 " !7 7 8 8 9 5 i100 kUknn?a Ukkan Ukknn " UUkknn F kn Ukn F NNoorrmal NNoorrmmaall NNoorrmmaall NNoorrmmaalI NNoorrmmaall LiLcvihveaenrrg--eFFaa1ttcttyy change IC GGiillll-Hyperplasia (epithelium) I LLiivveerr--pFaattetyy GGcic(ihhlealaplnlnig-gtBeeHhyyeppIIleeirruppmllaass1iiaa (epithelium) LLciihvvaeenrrg--ePFaa1ttttyy change I LcLiihvvaeenrrg--epFaa1ttttyy change I LiLcvihveaenrrg--ePFaa1ttttyy change I nnSaaprrleeesse,,n, eegaaorrnad, SStpphllyeemeeunns,, ggoonnaadd,, thymus HnHeeaaarrretts,, ggoonnaadd,, nares SSttpphhllyyeemmeeuennss,, ggoonnaadd,, SSpplleeeenn,, nnaarreess NNaarr~ess,, tthhyymmuuss Nares, Nares, eeaarr SSpplleeeenn,, eeaarr SSnpaplrleeesee,nn,, egagoornnaadd,, nares, ear SSpplleeeenn,, nnaarreess 11117766..00003311 33M UMNNO0T166S555665800 TTaabbllee i1 ((ccoonntt..)) ) FFiisshh 1# cCoonnttrrooll 1 1 !1 . 22 3 44 J 5 5 6 7 7 | .88 9 9 sSeexx Ukkan ka rF F ud - F r kn Ukn kn .rF i100 kn. Ukn 2aFemale. bbFUenmkanloew.n. ccU"lneksnioownns. are minimal. adMLaelsieons are minimal. Male coOonrrdggiaatnnion Condition MMTiiissssssuiienn.gg Tissue. LLciihvvaeenrrg--erFaa1ttttyy ! GGtoohnnyaamdds,, nnaarreess,, . GcG(ihielalpnllig--tehhheyylppIieeurrmpp)ilaassTiiaa , thymus (epithelium) I LLciihvvaeenrrg-e-rFaaTttttyy change I SnSppallreeeeesnn,, ggoonnaadd,, nares GG(iiellplli'lthhhyyelppieeurrmpp)llaassIiiaa , TThhyymmuuss (epithelium) I NNoorrmmaall SSpplleeeenn,, nnaarreess NNoorrmmaall ShSpepllaeereetnn,, tthhyymmuuss,, heart LLciihvvaeenrrg-e-FFaaIttttyy change I SSpplleeeenn,, hheeaarrtt LLciihvvaeenrrg--eFFaaTttttyy . change I SSgoppnllaeedee,nn",, thhheeyaamrrstt,,, nngaaorrneaedss, thymus, LLicihvvaeenrrg--eFFaaTttttyy change I LLciihvvaeenrrg--eFFaaIttttyy .GGc(iihellapllnigthehhyeylppIieeurrmpp)llaassIiiaa {epithelium) I nSSapprlleeesee,nn,, tgghooynnmaaudds,, nares, thymus SSpplleeeenn,, nnaarreess NNoorrmmaall GGoonnaaad,, tthhyymmuuss 1117766..00003322 33MM_MMNNo0t1e65s5S668s11 ) SsUoBmMuIrTeTrEeDn sBrYs: AquatEiEcGGT&o&GxiG,,colBBoiigooynnoomnLiiaccbssoratory AquWaatriech77aT95m0o0,xMiMacMaioainlsnosgaSSyctthrrLueeaesetbteotrtastory WareSSheeappmtt,eemmbbMeearrs,,sac11h99u778s8etts PPRREEPPAARREEDD BBYY:: SStteepphheenn J3.. EEllllss F< Lnscorossar AAPPPPRROOVVEEDD BBYY:: : GGeeoorrggee AA.. cCaarryy Director, gr J 11117766..00003333 33MM_MMNNo0t1e6s5s5e6s822