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Study Sponsor: Issue Date: Document Reference No.: ELFATOCHEM 14-Dec-95 95/S A E K /13 7 2 /A M P AR226-3033 Bacterial Growth Inhibition Author(s): A .M . Petit H. Thiebaud English Translation of Report Sum m ary for DuPont Chemical Solutions Enterprise 27-Jan-03 M p m jf P@s sslata TSGA CBS TECHNICAL SUMMARY Determination of growth inhibition of Pseudomonas putida bacteria by as effected using the operating procedure described in proposed standard ISO/DIS 10712 {C 'doc 118 Afnor T90B). The method consists in exposing the bacteria for 16 hours to a range of concentrations of the substance being studied. The inhibiting effect observed on Pseudomonas putida is determined by comparing the cell growth at various dilutions of the substance with the ceil growth obtained for a culture under the same conditions but which does not contain the test substance. The cell growth is determined by turbidimetry using a spectrophotometer. The percent cell growth inhibition H is given by the relation : H = ((Bk - Bn)/(Bk - B0))x100 where Bk and Bn are the turbidities, respectively, in the control and test flasks (after deduction of non-inoculated whites) and BO is the turbidity at t = 0 in the control flasks. Under the test c o n d i t i o n s | j [ J ^ J J J y resents a : CES0-1 6 h = 140 mg/l, with a confidence interval at 95 % = 130-160 mg/l and a CE10- 16 h = 79 mg/l, with a confidence interval at 95 % = 6 7 - 9 0 mg/l The reference substance, 3,5-diehlorophenol, has a CES0-1 6 h equal to 14 mg/l and a CE10 -1 6 h equal to 6.6 mg/l The validity criteria mentioning that the inoculum used in the control grew by at least a factor of 60X for the duration of the test was respected (growth factor = 216). A. M. PETIT H. THIEBAUD Elf Atochem S.A. DCRD Centre d'Application de Levallois Service Analyse Environnement Levallois, le 14/12/95 Rfrence : 95/SAEk/1372/AMP Squentiel : 814020 RAPPORT D'ETUDE T IT R E : 3 DTERMINATION DE L'INHIBITION DE LA CROISSANCE DES BACTRIES PSEUDOMONAS PUTIDA AUTEUR(S) : H THIBAUD ; Coll. A.M. PETIT RESUME DOCUMENTAIRE : D e te rm jn a tw ^ e rin h ib to de la croissance des bactries Pseudomonas putida suivant le mode opratoire dcrit dans la mthode du prqe td en o m T ^sO /ulS 10712 (cf. doc 118 AfnorT90 B). c: MOTS CLES : ISO/DIS 10712 Inhibition de la croissance des bactries Pseudomonas putida; DESTINATAIRES : M. DEVAUX (DCFS) DOC FICHIER TECH (M. TAISNE) Copies : Chef de Service. Responsable des Archives, Laboratoire d'cotoxicologie (copie c o ll.), Secrtanat, Service cotoxicit et Sret des Produits (DSEPj m m moioonlaln TSCA CBI RESUME TECHNIQUE < e ./o dtermination di l'inhibition de la croissance des bactries Pseudomonas putida par le p t ralise en suivant le mode opratoire dcrit dans le projet de norme ISO/DIS 10712 (cf. doc 118 Afeor T90 B). La mthode consiste exposer pendant 16 heures les bactries une gamme de concentrations de la substance tudie. L'effet inhibiteur sur Pseudomonas putida est dtermin par comparaison de la croissance cellulaire des diverses dilutions de substance avec la croissance cellulaire obtenue pour une culture ralise dans les mmes conditions mais ne contenant pas de substance d'essai. La croissance des bactries est mesure par turbidimtrie avec un spectrophotomtre. Le pourcentage d'inhibition de la multiplication cellulaire, H, est donn par : H = ((Bk - Bn)/(Bk - B0))x 100 avec Bk et Bn. les turbidits respectivement dans les flacons tmoins et dans les flacons d'essai (aprs dduction des blancs non inoculs) et B0, la turbidit t = 0 dans les flacons tmoins. L>Dans les conditions de l'tude irsente une : CE 5,,-16h = 140 mg/1. avec un intervalle de confiance 95 % gal 130 - 160 mg/1. et une CE in-I6h = 79 mg/1. avec un intervalle de confiance 95 % gal 67 - 90 mg/1. La substance de rfrence, le 3.5-dichlorophnol, prsente une CE 5o-!6h gale 14 mg/1 et une CE |(l- 16 h gale 6.6 mg/1. Le critre de validit mentionnant que l'inoculum utilis dans le tmoin s'est multipli par au moins un facteur 60 pendant la dure de l'essai a t respect (facteur de croissance = 216). A. M. PETIT iNnpent Sari d. Do oicon*aPitsca a v T v n c c o ffR fAtnnhnm 3/3 ESSSAI D'INHIBITION DE LA CROISSANCE D E PSEUDQMONASPTE>A (mthode dcrite dans le projet de nonne 1S0T)IS 1C712, ci doc 118 Afnor T90 B} Substance tudie Substance de rference Demandeur de l'lude : Directeur de l'lude Realisation technique Date du debut de l'essai Date de la redaction du rapport d'tude : Nom : 3-5 DICHLOROPHENOL Rfrence lot : ALDRICH M. DEVAUX (DCFS) H. TH3EBAUD A M. PETIT 4/10/95 14/12/95 Preparation de l'chantillon : Le jour de l'essai, une solution mre lg/l dans le milieu d'essai est prpare. Mesures des dH Concentration 0 mg/1 308 mg/l pH en dbut d'essai 6.01 7 pH en fin d'essai 6.43 7.66 Oruamismc test Pseudomonas putida : Institut PASTEUR 103281 Materiel Verrerie strilise (Erlens de 50 ml) Spcctrophotomctrc Perkin -Elmer lambda 5 Agitateur thermostat 21C +/-1C Gamme de concentrations : Solution mre ou solution mre dilue de la substance (facteur de dilution entre parenthses) Eau Milieu d'essai Inoculum 3.08 4.92 1 1 308 Volume (ml) 2.2 147 105 0.75 5.80 6.53 6.95 7.25 1I 11 11 11 Concentration (mg/1) 220 147 105 75 0 8 1 1 0 OoesnoteoMnfo tw ^ ompenfSanfKsad. Bea* noseonfalrs Ce documente st n o te proprit. I ne peut tre n copi, n c o rrm jrx p des hers sans autorisation expresse tfB fA toctm n. <