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Study Sponsor: Issue Date: Document Reference No.: ELF ATOCHEM 25-Jan-95 53957 AR226-3009 Acute Toxicity to Daphnia Author(s): Coll: H. Thiebaud P. Brochier English Translation of Report Summary for DuPont Chemical Solutions Enterprise 27-Jan-OS Company, Sanitized. Does not contain TSCACM ELF ATOCHEM Levallois Applications Center 1. TECHNICAL SUMMARY Determination of acute toxicity (inhibition of mobility) of Daphnia magna by------------fe over 24 and 48 hours was effected using the operating procedure described in standard ISO 6341 applicable to chemical substances, industrial and urban effluents, to surface and subterranean waters. The method consists in exposing the daphnias to a range of concentrations of the substance being studied. The toxic effect observed is the immobilization at the end of 24 and 48 hours. From the dose/effect relation established with the initial concentrations, a median effective CE(l)so is calculated, expressed as CE(l)so - 24 h and CE(l)5o - 48 h. I^BBiHB Under the study conditions, mg/I and a CEOso - 48 h of 13 mg/l. Presents a CE(l)so - 24 h and CE(I)5o - 48 h above 100 2. SIGNATURE Director of the study: H. THIEBAUD Date Signature 25/1/95 Company Sanitized. Does not contain TSCA feBS ELF ATOCHE8VI D.C.R.D. Centre d'Application de Levallois Service Analyse Environnement Levallois Ie: 25/01/95 Ref. document; 53957 N de Sequentiel: 814020 TITRE : TOXIC ITE AiGUE VIS-A-VIS DES DAPHNiES AUTEURS : H. THfEBAUD coil: P. BROCHIER RESUME DOCUMENTAIRE : Determination de la toxicite aigue (inhibition de la mobilite) de Daphnia magna par leM--------ffsur 24 et 48 heures, en suivant Ie mode operatoire deer-it dans la norme ISO 6341 (seconde edition, 1989). MOTS CLES : Toxicite aigue daphnies, ISO 6341. DESTINATAIRE : M. DEVAUX (DCFS) Copies: Chef de Service, Responsable des Archives, Laboratoire d'ecotoxicologie Secretariat, Fichier TECH Service Ecotoxicite et Surete des Produits (DSE-P) Company Sanitized. Does not contain TSCA CBl Ce ciocumsnt est is DroDri^t^ d'ELF ATOCHE^; !! ne DSiJt ^tre n' csDi^ "i Kimrnur*iau s deE WK pser1?: ?.'.!T's"wir^^-. f'Tmriic. ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois RAPPORT D'ETUDE TOXICITE AIGUE VIS-A-VIS DES DAPHNIES. SOMMAIRE 1. RESUME TECHNIQUE 3 2. SIGNATURE 3 3. IDENTIFICATIONS 4 3.1. Substance d'essai 4 3.2. Laboratoire d'essai 4 3.3. Demandeur de I'etude 4 3.4. Calendrier 4 3.5. Archivage 4 4. OBJECTIF DE L'ETUDE 5 5. METHODE D'ESSAI 5 5.1. Introduction 5 5.1.1. Principe 5 5.1.2. References 6 5.2. Materiel et produits 6 5.2.1. Materiel 6 5.2.2. Produits et reactifs 6 5.3. Mode operatoire 6 5.3.1. Preparation des solutions 6 5:3.2. Essai preliminaire 6 5.3.3. Essai definitif 7 5.3.4. Controle de sensibilite du reactif biologique 7 6. RESULTATS 7 6.1. Essai definitif 7 6.2. Criteres de Validite de I'etude 8 6.2.1. Teneur en oxygene 8 6.2.2. Immobilisation des temoins 8 6.2.3. Sensibiiit" du reactif biologiaue S 7. CONCLUSIONS 8 8.ANNEXES 9 8.1. Annexe 1 Milieu d'essai. 9 8.2. Annexe 2 Concentrations utilisees et resultats des calculs a 24 heures 10 8.3. Annexe 3 Concentrations ulilisees et resultats des calculs a 48 heures 11 Company Sanitized. Does not contain TSCA CB '-.e. nn-.i [mis.n: est is DroDri^te d'ES-P ATOCHEh/.. II ne osul fare ni CODIS. ni comrnuniqu0 s dss tiers SSP.S autorisation iormelie ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 1. RESUME TECHNIQUE La determination delatoxicite aigue (inhibition de la mobilite) de Daphnia magna par Ie ----------------^su, r 24 et 48 heures a etc reaiisee en suivant ie mode operatoire decrit dans la norme ISO 6341 applicable aux substances chimiques, aux effluents industriels et urbains, aux eaux de surfaces et souterraines. La methode consiste a exposer les daphnies a une gamme de concentrations de la substance etudiee. L'effet toxique observe est I'immobilisation au bout de 24 heures et 48 heures. A partir de la relation dose/effet etablie avec les concentrations initiales, on deduit une concentration mediane effective CE(l)5o. exprimee en en CE(T)5o - 24 h et en CE-fOso- 48 h. ^HBHB Dans les conditions de {'etude. Ie presente une CEOso - 24 h superieure a 100 mg/1 et une CE(i)5o - 48 h de 13 mg/I. 2. SIGNATURE Le Directeur de I'etude : H. THIEBAUD Date Signature Z^/l/^ Company Sanitized. Does not conta'ir Ce aocumero est te oropriae d'ELP ATOCH2M. li ns peut etre ni copie. ni communique s des tiers sans auiarisation fonneile ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 3. IDENTIFICATIONS 3.1. Substance d'essai Caracteristiques principales: - apparence : liquide ambre - solubilite dans I'eau : soluble a environ 10% en masse 3.2. Laboratoire d'essai ELF ATOCHEM CENTRE D'APPLICATION DE LEVALLOIS SERVICE ANALYSE ENVIRONNEMENT 95 me Danton 92300 LEVALLOiS-PERRET Directeur d'etude M. THIEBAUD Personnel impligue dans I'etude Ingenieur: M. THIEBAUD Technicienne: Mile BROCHIER 3.3. Demandeur de I'etude M. DEVAUX (DCFS) 3.4. Calendlrier Debut de I'etude Fin de i'etude Rapport d'etude 2/11/94 15/12/94 25/01/95 3.5. Archivage Les substances etudiees sont conservees dans Ie Service Analyse Environnement pendant une duree de 5 ans au maximum. L'ensembie des documents d'etudes est conserve au moins 1,0 ans. Company Sanitized. Dees not contain TSCA CM r-.an. =-' is n-.-i-iae -"c: : t.-r\ ^.-i=v, |] ne neuS 6tre n1 CODR. ni communiaue a des tiers sans au-iorisation fonnel's. ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 4. OBJECTIF DE L'ETUDE ^ U | f 1 L'objectif de cette etude est,de determiner la toxicite aigue (inhibition de la mobilite) vis-a-vis des daphnies du en suivant Ie mode operatoire decrit dans la norme ISO 6341 (seconde edition, 1989). Cette norme s'applique aux substances chimiques, aux effluents industriefs et urbains, aux eaux de surfaces et souterraines. 5. METHODE D'ESSAI 5.1. introduction 5.1.1. Principe Les daphnies sont exposees a la substance d'essai ajoutee a I'eau, dans une serie de concentrations donnee, pendant une periode de 24 heures et eventuellement 48 heures, sans renouvellement des concentrations d'essai. Dans des conditions identiques et pour une gamme de concentrations adequate (definie au moyen d'un essai preliminaire), des concentrations differentes en substance d'essai ont des effets differents sur la capacite de nage des daphnies. En consequence, en fin d'essai, a chaque concentration correspond un pourcentage different d'immobilisation des daphnies. Les concentrations hitiales provoquant 0 et 100 % d'immobilisation sont determinees directement par ['observation. La concentration initiale efficace inhibitrice immobilisant en 24 heures 50 % des daphnies mises en experimentation, designee CE(l)5o - 24 h, est determinee par calcul. La CE(I)5o - 48 h est eventuellement determinee par la meme methode. L'etude est conduite en deux etapes : - un essai preliminaire qui sert a determiner ia gamme des concentrations pour I'essai definitif. - un essai definitif dont seui ie resultat est retenu : CE(I)5o - 24 h et eventuellement CE(l)so-48h. Si I'essai preliminaire montre une absence de toxicite sur ia gamme de concentration testee, un essai limite a 100 mg/l, ou a ia iimite de solubilite de la substance si celleci est inferieure a 100 mg/!, est realise. Le ^fBH----R etant un melange de plusieurs substances pouvant evoluer differemment, ies resultats sont exprimes par rapport aux concentrations nominales (mg/1) de la preparation, considerees equivalentes aux concentrations initiales. Les pourcentages d'immobiiisation en fonction des concentrations initiaies, a 24 et eventuellement 48 heures, sont utilises pour calculer, a 1'aide d'un programme informatique approprie, ia CE(l)5o (a 24 heures et eventuellement 48 heures). Les intervalles de confiance a 95 % sont, si possible, determines par le calcul. Company Sanitized. .Does not contain TSCA CBj ^-, .men' c,e' b nrn-TioW "=! ? s TOC t-W. I' ne seu; are ni coDi. n' communiaue 8 des iisrs sans autor'sation forrnelle ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levaliois 5.1.2. References - Norme Internationale ISO 6341, Qualite des eaux - Determination de I'inhibition de la mobilite de Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea), seconde edition du 01/10/89. 5.2. Materiel et produits 5.2.1. Materiel L'etude a ete realisee dans une sal Ie thermostatee a une temperature comprise entre 20 et 21 C. Les parametres physico-chimiques ont ete mesures au moyen d'un combine multifonctions JENWAY 3410 (oxymetre, conductimetre, pHmetre). Les daphnies {Daphnia magna Straus) utilisees proviennent d'un elevage realise dans Ie laboratoire. La selection d'organismes ages de moins de 24 heures s'effectue par tamisage (toile a biuter a mailies de 0,56 mm). La composition du milieu d'essai est detaillee en annexe 1. Les recipients pour essai sont des flacons type penicilline de capacite nominate 120 ml bouches par des septa en Teflon sertis par des capsules en aluminium. 5.2.2. Produits et reactifs - Eau : pour la preparation des solutions meres du milieu d'essai, it est fait usage d'eau ultrapure (ultrafiltration, charbon actif, echange d'ions, filtre 0,22 um) ; de meme, pour la realisation du milieu d'essai (eau de dilution) les solutions meres sont dilutes dans de !'esu uitrapure. - Les reactifs utilises pour la preparation de I'eau de dilution (voir annexe 1) sont de qualite "pour analyse". 5.3. Mode operatoire 5.3.1. Preparation des solutions Une solution de^ll----HBBHF03''^ ie milieu d'essai a 0,1 g/l est preparee Ie jour de I'essai. 5.3.2. Essai preliminaire CHHIHMH^ Des volumes adequats de la solution mere de 0,1 g/l sont verses- dans des fioles jaugees de 250 ml et completes par de t'eau de dilution pour obtenir la Qamme de concentrations atlant de : 0.1 s 100 ma/1 company San'rtizecL Does not cantalu TSCA CBt iso >-"=' r ;--~i''i-i=t>/, i! nc nei!* ptrp ni wic " co""nuniou sss tiers sans auiorissiion tonnells ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levailois 5 daphnies agees de moins de 24 heures sont ajoutees dans chaque recipient d'essai puis ceux-ci sont places a I'obscurite dans ia salle thermostatee. Au bout de 24 heures, les daphnies encore mobiles sont denombrees, les flacons sont replaces a I'obscurite puis un deuxieme denombrement est realise 48 heures apres Ie debut de I'essai. Les resultats obtenus servent a definir la gamme de concentration de i'essai definitif. 5,3.3. Essai definitif On precede a des dilutions de la solution mere dans de I'eau de dilution pour realiser la gamme de concentrations necessaire a la realisation de I'essai definitif. Les differentes concentrations de cette gamme sont donnees dans les annexes 2 et 3. 4 flacons de 5 daphnies agees de moins de 24 heures sont prepares pour chaque concentration et pour Ie temoin. Au bout de 24 heures, ies daphnies encore mobiles sont denombrees, les recipients sont replaces a I'obscurite puis un deuxieme denombrement est realise 48 heures apres ie debut de i'essai. 5.3.4. Controle de sensibilite du reactif biologioue Periodiquement, et selon Ie meme mode operatoire, la CE(l)5o - 24h du dichromate de potassium est determinee afin de controler la sensibilite des organismes. 6.RESULTATS 6.1. Essai definitif Les resultats obtenus dans I'esssi sont rassembies dans les tableaux en annexe 2 (resultats a 24 heures) et en annexe 3 (resultats a 48 heures). La par-tie superieure montre les donnees brutes obtenues-; ies concentrations utilisees pour les calculs sont indiquees en dessous. Apres linearisation au moyen de ia methode des Logits, on obtient les resuitats suivants : CE 5o-24h superieure a 100 mg/8, CE5o-48h=13mg/I, avec un intervalle de confiance a 95 % egal a : 7,3 - 25 mg/1 (r2 =0,964) . Les resultats obtenus sont rassembies dans les tableaux en annexe 2 (resultats a 24 heures) et en annexe 3 (resuitats a 48 heures). C.B documsni est ia proprisfe d'ELF A.TOCHEM. II ns psu? 6tre ni copie. ni communiqu0 E des tisrs sans autonsaiion formelle ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois Le pH initial a la concentration la plus elevee etait de 7,91. Le tableau ci-dessous donne les resultats des mesures d'C^ et de pH realisees aux differentes concentrations: Concentration nominale (mg/l) 0 0,1 1 5 10 50 100 02 a 48h (mg/l) 7,8 8,0 7,6 7,4 7,6 7,6 7,9 pH a 48 h 8,00 7,99 8,02 8,00 8,01 8,00 7,88 6.2. Criteres de Vaiidite de I'etude 6.2.1. Teneur en oxygene A chaque concentration, la teneur en oxygene dissous, mesuree en fin d'essai, est superieure ou egale a 2 mg/l. 6.2.2. Immobilisation des temoins L'immobilisation au bout de 48 heures dans la serie temoin est de 5 %. La clause requerant une mortalite inferieure ou egale a 10 % en fin d'essai a done ete respectee. 6.2.3. Sensibilite du reactif biologigue Le dernier controle de la sensibiiite des daphnies au dichromate de potassium a ete realise !e 8/11/94. La CE(l)5o -24 h de cette substance de reference, evaluee a 1,1 mg/l, etait comprise entre 0,9 mg/l et 2,4 mg/! qui est la gamme acceptable ( 9.2 de lanorme iS06341). 7. CONCLUSIONS L'etude de la toxicite aigue du ^UBiHHB^is-a-vis de la daphnie montre que cette substance presente uns CE(l}5o - 24 h superieure a 100 mg/l et une CE(I)5o 48 h eaaie a 14 ma/i. Sanfeea. Does not contain TSCA Cft f-s "ssumsn' est 12 oroorite d'EL? ATOCHEM 11ne Deut 6tre ni CODIS. ni communiaue a dss tiers sans auiorisaiion ronnelis. ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 8.ANNEXES 8.1. Annexe 1 : Milieu d'essai. L'eau de dilution (ou milieu d'essai) est preparee de la facon decrite dans la norme ISO 6341: - les solutions meres suivantes sont preparees : 11,76 g de CaCl2, 2HzO par litre d'eau ultrapure, 4793-g-de~RlgS04,-7(-^20-parlttTe-d'e'auult^apu^e, 2,59 g de NaHCOs par litre d'eau ultrapure, 0,23 g de KCI par litre d'eau ultrapure. - I'eau de dilution est obtenue a partir de 25 ml de chacune de ces solutions par litre d'eau, puis aeration jusqu'a saturation en oxygene. ;e docurnsni es? Is oroDriete d'ELP ATOCHEIV.. li ne psut strs ni coDi. ni commLiniau0 s des aers sans autorisgaon fonnslte ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 8.2. Annexe 2 : Concentrations utiiisees et resultats des calculs a 24 heures TOXICiTE AIGUE VIS-A-VIS DES DAPHNIES Substance d'essai :. Numero d'etude : Essai definitif, 24 heures Nombre de daphnies par concentration : 20 mg/1 subst. 100 50 10 5 1 0,1 0 (temoin) 0 (solvant) % IMMO 40 30 10 15 5 0 100 100 100 100 100 5 100 Recipient 1 3 4 4 4 5 5 Nombre de daphnies mobiles Recipient 2 Recipient 3 Recipient 4 3 2 4 3 3 4 4 5 5 3 5 5. 5 5 4 5 5 5 5 5 4 5 total 12 14 18 17 19 20 0 0 0 0 0 19 0 'Sanitized. Does fiot contain TCA. c B^ Cs document est la oropriete d'SLF ATOCHSh/.. li ne Deut etre ro coDie. nl communiaue s des tiers sans autorisation foi-me!is. ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 8.3. Annexe 3 : Concentrations utilisees et resultats des calcuis a 48 heures TOXICITE AIGUE VIS-A-VIS DES DAPHNES Substance d'essai : Numero d'etude : Essai definitif, 48 heures Nombre de daphnies par concentration : 20 mg/1 subst. 100 50 10 5 1 0,1 0 (temoin) 0 (solvant) % IMMO 90 65 45 30 10 0 100 100 100 100 100 5 100 Recipient 1 2 2 2 2 4 5 Nombre de daphnies mobiles Recipient 2 Recipient 3 Recipient 4 0 0 0 1 2 2 3 4 2 3 4 5 5 5 4 5 5 5 5 5 5 4 Donnees ut'lisees pour Ie calcul concentration 100 50 10 5 1 0,1 % IMMO 90 65 45 30 10 0 nb valeurs 6 CE50 = CE50> CE50< r2= 13 7,3 25 0,972 #N/A : valeur non disponible. #NOIV!BRE!: vaieur indeterminee. Proportion immobiiisee 0.90 0,55 0,45 0,30 0,10 0,03 #N/A #N/A #N/A #N/A Somme Movenne LOGIT y 2,197 0,619 -0,201 -0,847 -2,187 -3,664 #N/A #N/A #N/A #N/A -4.092 -0.682 log cone. x 2.000 1,699 1,000 0,698 0,000 -1,000 #NOMBRE! #NOMBRE! ^NOMBRE! #NOMBRE! 4.398 0.733 mg/1 mg/1 mg/1 total 2 7 11 14 18 20 0 0 0 0 0 19 0 , Does not sontain TSCA CB Ce document est is Dropriete d'SLF ATOCHEM. II ne osut etre ni cooie, ni cornmuniaue a dss tiers ssns aLltorisation formslle. ID :3. (0 "I iff 0 3 u itT 0= (11 r- 'TI ,]> 0 0 x [Tl s 3 (t) n g. is' f3 3 ro^ 2, 0 1 0 1 m' Gi ro a U) w :3 V] 01 nSf. l i". ' 3' ^ 00 -r "\, 0 6 'w - 0 ^^ ''. 5- IQ Q. 8 ' 8 - B) 0 0ID. tnwi o 8 S- 3 8 3 1 - ' - S3 0 3 (0 "" A W 0 0 M "0 0 0 ^ ^ "0 0 0 0 ^^ a." ". (B n) o 33 . e 3 SB. d) o 3. E. { 8 \ Loyit de la proportion "immobilis6e Sanitized. Does not contain TSCA CB8