Document VkRyNdxzqn1EgbOb3EN6MLN4

CCOOMMPPOOSSIITTEE AANNAALLYYTTIICCAALL LLAABBOORRAATTOORRYY RREEPPOORRTT OONN TTHHEE QQuuaantnitittaattiivvee AAnnaallyyssiiss ooff.FFlluuoorroocchheemmiiccaallss iinn EEnnvviirroonnmmeennttaall SSaammpplleess : x RREEPPOORRTTLNNRoO.N. --FFWAA2CC4TT9GG1EE,NN-W-002228114,,5GG,EENWN-3-010292447,,,GGEEE0NN0---001333080,6, .GGEENN--003333 LRN---W2491, W2845, W3197, E00-1386 ANALYTICAL STUDY INITIATION ANALYTICAL STUDY INITIATION GENO21: 08/25/99 GEN021:08/25/99 GGEENN002244:: 1100//1122//9999 GGEENNO3003:0:1122//1133//9999 (GGEENNO0333:3:0033//1144//0000 22881144..00000011 Ex2h8i1b4it W3M_MNMON106186655999977 " : : a Emer attr 3M Environmental Laborator~ Reporte GeGner02c4,Ga2nd1,Ge,n3y Report No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-033 T TABLAEOOFB F CCOONL NTTEENE NTTSS Analytical StudyPersonnel andContributors ws-- wil Analytical Study Personnel and Contributors ................................................................................. 1 ISU sm wml Introduction ................................................................................................................................... 2 Purpose .................................................................................................................................... 2 Tost and Control Alo... e-------------- Test and Control Article ............................................................................................................2 Sample CollaendcAntaliysios..n............ H------------ 1 Sample Collection and Analysis................................................................................................ 3 SAPlE RECIPL ANMBMENENCE rd Sample Receipt and Maintenance ........................................................................................ i ........3 ChemicalCharacterzaton.............. ---- -- Chemical Characterization ............................................................................................................3 Procurement ............................................................................................................................. 3 MOthOd SUIS... sm----_ Method Summaries ..... : ................................................................................................................. 3 Preparatory andAnalyticalMethods. enm--------------r Preparatory and ARalytical Methods ................ ::..................................................................4 AnalyticalEquipment rr------------------------_ Analytical Equipment........................................................................................................... 5 ataSummary,Analyses, and Resuls... A Data Summary, Analyses, and Results .................................................................. : .......................6 Summary of Qual Cont! ATaIYSeSRESUS... Summary of Quality Control Analyses Results ..........................................................................6 SUOMf SAI MPIET REA SUY S... essere ------ Summary of Sample Results ....................................................................................................7 DataQuality ObECHVES....c.cr wmmm-- Data ..Q.uality Objectives ................................................................................................................. 8 SHOfO CONCE HSON ror TR Statement of Conclusion .................... ', .......................................................................................... g References .................................................................................................................................... 9 Atachments ------------------ smn Attachments ................................................................................................................................... 10 REPO SGC... -------- --} Report Signature ........................................................................................................................... 10 L LISTi OOFFTs TAABBLT LEESS T"Taabbllee11.. DDesecrisptiocnoorffSSiaammpplpeletss,,bibyySoSttuunddyy sns----------r .................................................................................... "TTaabbllee 22.. PPrrooccuurreemmeenntt IInnffoorrmmaattiioonn ffoorr RReeffeerreennccee MMaateterriiaallss iinn tthhee AAnnaallyyssiiss ooff EEnnvviirroonnmmeennttaall 2 Samples .......................................................................................................................... 3 "Table3. 1005 Monitored in theAnBlysesofEXraCt of GIOURMEIET.........v.rceccn Table 3. Ions Monitored in the Analyses of Exlracts of Groundwater..............................................6 Tabl4e. RangeOf LOQS 10 SO, BY SY... ren Table 4. Range of LOQs for Sera, by Study...................................................................................8 Table 5. Rangeof LOGS for Liver and OtherTISSU8S, BY SKY... Table 5. Range of LOQs for Liver and Other Tissues, by Study .....................................................8 Prpraary aosCention 22881144..00000022 Paani Page il 33MM_MMNNO011666655999988 Repo teGen21,G3enE2nv4e,anGmeanne0s%t,LGaevro03e3 3M Environmental Laboraton/ Report No, Gen-021, Gen--024, Gen-030, Gen-O33 AANNAALLYYTTIICCAALL SSTTUUDDYY PPEERRSSOONNNNEELL AANNDD CCOONNTTRRIIBBUUTTOORRSS AAnnaalylyttiiccaall CChheemmisisttrryy LLaabboorrsattoorriieess 333MMM EEEnnnvvviiirrrooonnnmmmeeennntttaaalll TLTaeebccohhrnnaootllooorggyyy aanndd SSaaffeettyy SSeerrvviicceess ((EETT&&SSSS)) 2F3FiMl3uuo8oErr0iinnn0veeirAAonnnamalylyettinicctaaalll Chemistry Laboratory Chemistry Team Team ((FFAACCTT)) 929St3-3355EPaBB-0uuul9ss,hhMAANvvee5nn5uu1ee08 St. Paul, MN 55106 HKKiadtrssolHHdaanJnsosehonnn,s,oPPnhh,.D..DA,n.a,lPPyAtAiIlcal Chermist MLHLiaiassrraaokAAldE..fJCCtolflheesnmmosneeo,nnn,A,,nAAaAnlnnayalatylilyytctitaiiccclaaaClllhCCCehhhmeeeimmsmitsiissttt Mark Ellefson, AnalytiGal Chemist - SSppoonnssoorr . 3B3uMMilEEdiTTn&Ag SS2SS-309 SBtu. ildPla~ul~lg, 2M-3NE-5059133 St. Paul, MN 55133 `Daallee BBaaccoonn,, SSppoonnssoorrRReperperesseennttaattiivvee 22881144..00000033 Paetott0 Page 1 of 10 33MM_MMNND011666655999999 Ret cen cz1,sSuenEdstcoonmoabSoorsraroy 3M Environmental Laboratory Report No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-033 IINNTTRROODDUUCCTTIIOONN PPuurrppoossee "TIS3TMhWhheeuSspptiuuuudrreappierososesseeGGte5oeonsfnf-u-thnGh0i2i2sss11acc,mooGGpmmlepeeponsos-a0sic2it,ot4eeli,rroGeGecppioeoeonnrdr-ttD0r3si3so00ot,:,oaafppnanrrnddoo.vvGGiibdedeesenn,-a0a033ss5m3u.ua.mmmAAmmmllalaalrolroyyfstt,oohhffeeattnhsshdeaaemmaaapnpmnlaolaleevylssytitibiinccnaaacunlllsuddd;deaaettdDdaat.ciicnnooJltlthlloeheeenccsstteeeeGddoiffosoyrr OCsofotfunMMddiiuiecccshhtiiagegrdaaennttoiSSsasstatuutepsepsUUoanrnmvievspreulsedmiistietyycsohhdllaaeesssscuitsegpudnppelfpdriloieebmydd 1r. SGaamcpyes to 3. Thess analyses have psen fish, birds, mammals, and amphibians; Dr. John all samples to 3M. These analyses have been Geisy conducted to support studies designed by Dr. Geisy. "T3C3T).hhh,egepp3tteea3arrr5frtgl2uoue5otot.rraao2anno6oaac-clltya1aytn.tneeeesassffnuuoodlrirfoottphnneheyyrelsaausemmofifriooddouueenrres((sPxtPuuaFFdniOOieeSsSssAAuww;lefeCCrorAAeenaSSptpH#eeerr77(ff55luFi44ooH.-rr95Soo11:oo.-cc69ntt),ao,annppCeeeeATnssSuuluuHolfforooraononovaoactaceeitlaa((nnPaPcoFeRaaOOttSesS;;((PCCPFAFAOOSSAAS# 2o2779F95O5-A33R95:- or POAA; CAS# 3825-26-1), and pe~rfluorohexane sulfonate (PFHS; no CAS# available). uvQDeovuusoNaelivnttoinofnggatthhoeeaannnvvaaala(rlydyLitteei0iccttGyaay)lloowmfmfeemmertatheahtortoarcidiuscost,es,ossosoaavmanmnraaeielalyybaazlzennee.addalyyA((iwtwiisccittauhahlmrrddmeeaaasstarppaeeyqcqocututfaatlotilithtbbyyeooOotatbhhbcjjhseseipcpceiteaivvvcceeeiedessss,,LaassOnnuuGdcdchhtt(iiasbassysssuustteehpsesee)),c,iliiamam,nniitddsoodduffuueee ttaoond " Sy number) s presenta in quantitation (LOQ) were quite study number) is presented in Tab2loef hi report variable. A summary Table 2 of this report. The stated data ually is ase of the achieved LOQ (by specie, The stated data quality is based on resus tissue and on results of of 3 " ddaattaa ccoolllleeccttiioonn qquuaalilittyy ccoonntrtroollss,, ssaammppllee pprreepp qquuaalilittyy ccoonnttrroollss,, aanndd rreeccoovveerryy ooff ttaarrggeett aannaallyytteess ffrroomm pSrnetpcaarledsumcailers sapriekeosuatmipnleeds.aMtorioen tsreperceiporctata qualty actives an parameters for nese prepared matrix spike samples. More specific data quality objectives and parameters for these analytical studies are outlined later in this report. Test and Control Article TT"bbaepTeheplhlesoroowtwttpe,e,rassinnittnadtaaTeTr.CtataicboRlolelneastr1b1foo..obrlFFrAooe1er5ararstccaliuhhllclelsscssettthuuwuddeediyyrsess,cc,oocnthnhhssoeeiisssccetteooennddntatroorofofl(lvvhaaaaerrrrtiiciocoeuoluessoccitlioossnnsssasuuiiieesscssttieefefddrrsoooomfbmferrvvcaaaababrbrubiiiosiottueusssspeesrsraappeeeaavccnniiieddeossrraSaaabnnbubbddeiitaarsIlriveveeNrlirie,s,svtaaeeo5sdd acCinpodapincrotatptearaidartvveecr. ryRysallwoboewbwritvleetivepsersllousveioosdffeweedennbrddeyooggcienheonnsoo3euuMnss as the control articles because previous studies have EfnuvairroocnhmeemnitcallsLanboirnaetsoerymaces. Samples of he fluorochemicals in these matrices. Samples of the control articles were provided by the 3M Environmental Laboratory. TTohbhitissairrneeeppdoorfrttrddomooeeDssr.nnooGttetninscc:luldde details details fofor ththe ccaollleecctlioonn of of hethe tst test aces; articles; hese these dota details shad should be be obtained from Dr. Geisy. TTaabbllee11. .DDee=scrciptrionioopffSStaamimppolleen=s,bbyySSttuudyy Carn Som in. CrtSe Gent21 |om|cTtSoomTnmpEmRLiorseP nmSehaHsomtR omrioTreenVaaASsme||||HVn,oeh gtoSeSmrSEooaseEr,A eea rkRa e rGnaeen rTewcneren ||| J( CS e -- RoOo S FrP raUmamlo r aesI FnrS emeeo Gen-033 SCuomrsmaorcanhtSBelonotd, SCuagspliaannSSeelall Blood, Sea Otter Blood Albatmss sera, Albalmss p~,ma, Cormorant plasma, Hen~ng Gull Plasma, Bald Eagle I:lasma, Cormorant bkxxl, Herring Gul blood CHaHalarifYoberonoriraSSeSeaelaa,l, GLGaiooznzz,zi,E,MlMeipninhkka,,nRRtiiSvveeerar l, Otter, Sea Otter, Turtle Loon, Brow~ Pel'~an, Albatross Norl~em Fur Seal blood ~v~e~le, subadult, adult), Polar Bear I~:x~d, Stellar Sea Lion blood Nodhem Fur Seal, Polar Bear, Mink, Map TurUe, Terrapin, Tuna, Green Frog, Chinook Salmon, Lake Whitefish, Brown Trout None Submitted Mink, Baikal Seal, Ganges DdCain, cormorant (adult arm Bot~enose Dolphin, Stripad Dolphin, Weddell Seal, Swordfish, Tuna, Blacktailed Gull `SSeemaOOttt~eerrBBrarianin,,SSeeaaOOtttterrKIi~clnaeyy Carp body, Frog muscle, Frog body, Green Frag aggs, Lake Whitefish egg~, Broom Trout eggs, Carp nlu~, Ch~-~ Salmon muscle, Lake VVh~flsh n~___~t~._, Brown Trout rnu=de None Submitted J Page 2 of 10 a3MW_MMNND011666656000000 22881144..000004 wee omen SpeEtTra 3M Environmental Laborato~/ Report No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-033 Fotowing Following ants, analysis, xtra extracts generated generated omfrom hasthese elo samples avehave bonbeen tain retained in cold saree, storage. Sale Calcton and Anita Sample Collection and Analysis Tosue samples wer submit th Envionmatal Laboratory: Fuge Araya Chemisty Tissue samples were submitte~l to the Environmental Laboratory- Fluorine Analytical Chemistry Team reac aan Kam of Wevgon Sons arty Deo hi amt, Team by Kurunthachalan Kannan of Michigan State University. Details of the sample receipt are oa ne Cen ay or documented on the chain of custody forms located in appendices of this report. `SSAAMMPPLLEE RREECCEEIIPPTT AANNDD MMAAIINNTTEENNAANNCCEE a ------------ Samples were received in the Environmental Lab cold or frozen on the following dates: Gen-021 Ea Coase ED Go a an ces nee (8/24/99), Gen-024 (10/11/99), Gen-030 (12/13/99), and Gen-033 (3/13/00). Sample receipt, mesiceanshaeof soeteo seso a om ny oe err. na iclentification, and chain of custody information are located in the study folder for each report; the . a oe sampa le esta at wil bno mplntrainwodrincpl esotraeg ot he SM Environment Laboratory el folders are located in the 3M archives. The sample extracts will be maintained in cold storage at the 3M Environmental Laboratory until the quality of preparation no longer affords preservation. hF e arg ae es chareacsi SsaempleshcudoPFOSs, PEOsSA PoEORo, adnPHS * CCHHEEMI~IICCAALL CCHHAARRAACCTTEERRIIZZAATTIIOONN The target analytes characterized in the samples include PFOS, PFOSA, PFOA, and PFHS. Procurement details of the reference standards used for analysis are summarized below. Procurement Procurement Tat. Prorat ton Fes tri Anis fEmirSages Table 2. Procurement Information for Reference Materials in the Analysis of Environmental Samples PFOS (potassium salt) PFOSA [PHPFSHS(p(poottaassssiiuummssaatlt))| PFOA (ammonium salt) 171 Gen-021: L-2353; per all others: L-15709 Neiio6%46 NB116638-16 rT Gen-024: 245; 3M ICP/PCP Division 3M Specialty Chemicals (R. Buckanin) WSowcuriac y Buck) | a3MSSpepceiciaalltyyCChehmeimcicaallss.(G.MMoooorree)) | Cat Msp rn Gen-024: 3M Specialty Chemicals; all others: commercial all others: Aldrich Comma a rones Goon cooa Bna ae pa nn St FFuullll cchheemmicicaall cchhaarraacctteerriizaattiioon ssttuuddiieess,, iinncclluuddiinngg ppuurriittyy aanndd ssttaabbililittyy ddeetteerrmmiinnaattiionn,, hhavennoott bbeen completed at this time. Upon completion of these studies, a report will be archived in the 3M Environmental Lab. MMEETTHHOODD SSUUMMMMAARRIIES owingi abit door of th mehads sed dung is apical suc bythe Following is a brief description of the methods used during this analytical study by the 3M Eom Loman Cos ee er Environmental Laboratory. Copies of the actual methods used for these studies are located in fret attachment H. 22881144..000005 pire Page 3 of 10 su unoreesor 3M MN01666001 Rept Genz, MaWsEsmGmonas%0aCons 3M Environmental Laboratory Repor~ No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-033 Pro [:~EPARAanAav TANAoLYRTICYAL TORYAND ANALY'ilC~L METHODS METHODS + AAEEbneTnTalSaSol.wly8-y:8s.si0-i0s0s40uu.4s1s.i,1inn,gg""EEHHxPxPttLrrLCaaCccEt-tlEiioeolnencctootofrfosPPspFprrOaaFSyyoMMorOaraOsOstssthSheSSerppreeFFccultutorroorormomoceechlhteryeym"m"iwwciciaiattlhhl CCssoooommmmpeepoommuuononddiddfsisfiiccffraarottomiiomonnSSss,ee, rrdduueemsmsccfrfrooiibrrbeedd BpbBoeeeslccosaaiwubu.lsseeeoithneeprmmeapatatrrriiecceeessxwwaecertreeedssooSvvaaarnriiaadbballee caaunnrddvesssa.ammAlppllleexsstiizrzeeaceetxxtwtrreeermmoeelelyyvallliimumiaittteeeddd,, tvitewwrasasussnnoott idupuinnenonteseeeexsaaxritctcbmrahhailecncittaittsseoetssdiduuposesenrettassapnanaaddmmreaapprrledldeexcctffrururaorrocvvmemteess.dee.aaWsWccthhhahnesesdnppnaeercsscdiaaieemmcptutpeelrlsvseetteeesssddii.zztAeteoolplpppeeerrrxroomntvvriiiaidtedcteedetsd.ss,owottmwmewreeooe mllmeeavvvataelrtrlliuixxooaffsstepeepdxiixktktervreaaessccrtwwstiieuoeorsnrneeeeppfcfrriiecepeipeaannrrceceyydd dFFaveooartreilssramoobmmilneoeavtssiooaalnmmup.plmleeessw,,aelesssessxttihhraaancnte11dmmaiLc.coooffrsdsaiamnmpgpltleoewtwhaaessmaaevvtaahiiolaadbblwleei..lFFotorhretthehexescseeepsstaaimmopnpltleehssa,, ttthhheee final Volume of extraction solvent was adjusted available volume was extracted according volume of extraction solvent was adjusted 1oto to match the volume of the nial the method with the exception match the volume of the initial sample. that the sample. final TThhiiss mmeetthhoodd wwaass uusseeddffoorrtthhee eexxttrraaccttiioonn ooff ssoarraa,, ppllaassmmaa,, aanndd wwhhoollee bbloooodd ssaammplpeless.. Fl + UEETsTSiS:n-8g8.-H000P05L5..C11,,El""AeAcnntaarllyoysssipissraooyff MPPaFFsOOsSSSooprrocOOittrhhoeemrreFFtllruuyoorrwooiccthhheersmmoiimccaeallmCCoodoimmfpipocoauutnindodnsss,iindSSeseecrrruuimmbeEEdxxtbtreralaoccwtts.s - pUBBoeesscicsnaaiguublssHeeePtttLhhCeepm-rEmaeltpaeratcirdtecrcoeeesssxpwtwreraaerycreetMessdaoosssvvtaaaSrndpidaaeabbrclldteerocaamunnreddvtersssyaa."mmwAplpilltlheeexsssiiiozzrmeeaeceetxxmwttreroeredmmeifeeiclelayyvtailloilimnumiaisttte,eedddd,,evstitecwwrraisabsusesdnnoobttelow. opuoUufnnonfense11xgsx..t2cit2brr5e5alaes1cctso0tttaeoeaarddcydpjssjruwuettsashpatntnaefddfornoeaarrraeddhtnhxecceteuruxarrrrtvceveretmemeasso;cdo;vtveasaaadltssal cnaoaoufdfrsra44evur1se5d5luosl,cotf,ufutaratslvhhllleeeesdssMaM.afmmAToTprlpBBllelEEeeevxaccfftlrrooruoannoamccmtcteisettonhnhwnieterreaareetetxxiototerrnnaavssccatwwtl.ueeTTarrthheeeeedaadfadvajcjeucuirstsosottreuredsdiissbbyy aa ffaaccttoorr unnecessary when an extracted curve is used for evaluation. + HEETPTSSL.-C88.-E00l00e66c,t, r"=oAAsnnparalalyyyssiiMssaoosffsPPSFFpOOeSScioorrroOOmteththereryr FFiiltuuhoorrsooocchhmaeemmimicocadalilfCCicooammtpipoonousu,nndddsessiicnnriLLbiivevdeerrbEEexlxtotrrwaa:ccttss uussiinngg HBpBoeePsccsLaaiCuub-lssEeeeleotthchteeprormmesappatarrtarriieycceeeMssxwawaescesrtreeSepdsseooscvvtaraanorrdmiiaaaebrbtldreeyc"aaunwnrddvitehsss.aasmmoApmpllleeeexmsstiizrozaeedciteefisxcxtatwrrteeieormmneeesle,lyyvdalleiilmsmuicitatreeitbddee,, dvtitewbwreasalsuosswnn.oott uidpuinennonl'eseeesxsaxmatictmcbrrhihalaenccstaittttseoeuisddoupenessr.ettasspanaanadmdmreaapprrldeldeexcctffururarrorvvocme.mteess.ede.aasWWccthhhahneessdnppnaeercsscdiaiaeemcmuttpperelsvlesteetsssdeii.zztfAeeoopllpeppeerrrroxoimtvvrtiiaidtdetceeedtsdss,,owowtmwmeoreeoe emmevavaeattlrluoiixafstseeppxdiitkkreveaesscrtwwsiaueorsrneeeppcrrieeoppaanrrceeydd level of extraction efficiency dtFFhoeoertresssermoosmmianeemaptsslioaaenmmsp.,plleheses,, laleevssassitathhbaalnne m11ag9ssooffossfaasmsmpupleo((waaassccaaellxlleterddaffcootreidinntatchhceeormmdeietnthhgootddo))wtwhaeassmeaatvvhaaoiidlaa.bbllee. FFoorr `Samples of Kidney, these samples, the Samples of kidney, brain, 9, and available mass brain, egg, and muscle wero of tissue was muscle were exacted extracted extracted by this method according to the by this method. method. + AAEEbneTnTalSaSol-wly-y2,8ss.i-i00ss00uu77ss,,iin"n"EgEgxxHHttrrPPaaLcLctCtCiioE-olnEneloeocfctf trPProoFFssOOpprSSraoayyorrMOMOtaathsshesserrSSpFFpeuleucocotrtrrrooooccmmheheetemtrmriyyc"i"cawawlilittCChhoossmmoopmpmooeeuunmmndddosisdcffifarrioctomaimtoioLLninisvvs,ee,rrddffeeoossrrcciriibbeedd below. pBBoeesccsaaiubulsseeeotthheeprmmeapatatrrriiecceeessxtwwreearcreotessdoosvtvaaarndidaaabbrlldeecaaunnrddvesss.aammAplpllleeexsstizrzaoecteesxxtwtrreeermmoeelelyyvallilimumiaittteeeddd,, tvitewwrasasussnnoott U0upuonn1onfen1se1xe.sx.t2c2itbrr5e5alaescc1tso0tttaeoeaarddpyduSsrjuswettashaptntnaedfdfrnooeaarrrradedttnhxhcceteeruuaxrrrrtcevvetreemmesasodo:c;vveasaaadltssal cnaooufdfrrfa44evor7/sedu55ulilcoot,,fufuraattvslhlhlleeeedsssMa.MaommATTrplBpBllelEEeeevcxafcofltrrronuoaoacnmmctecitnseotttnhhnwer.etareateerteixxiototerrnnaavssccaw.wtl.ueeTTarstheehedaafdfdavajjeuccutrstsosotteruredsdiissbbyy aa ffaaccttoorr FoduFenorvnreeGGlcoeeonnsp0-sm0a3e3rn0y0twaaannhldldensGGaeaemnnnp--le00ex33st33radoocentneltlyyde::rcDDmuuuirevenetetotoidostthhuceeosnelltadaaccifkkonroogferfeveeaaxxtlccueeerassttsisothtneea.ssntt mm0a.at01et5erdigaa/llgffooorrfmmPeeFttOhhooSddwere WSdsiuuelbbvhjjeeerlccoettps1tpmo0eecaatnnnt1,a0aaddtlddlhiiesttiaoo4mnn8aa9pllle>PPsFF8dOO9eSStUevavrmeenrrsiiniffiieicocdaantttiiooaonnncdoppnrtroothacecieens4ss9gs.9r.eEEaaatcec8hhr0thssraaaanmmnspp0ill.iee0o1nww5saa.sspgTaaihngneaaollqyyfzuzPeaeFddnOissSoiepapwaiarereaartetreeellyysus with respect to the 499 --> 99 transition and the 499 -) 80 transitions. The quantitative results Prgnastto Page 4 of 10 33MM_MMNNO011668656000022 22881144..00000066 W Emm `RReeppoorrttNNoo.. GGeenn--00221,1, 3GGMeenn-E-00n22v44i,r,onGGemenen-n-00t3a30l0C,L, aGbn eonra-0to3r3y oo33dbb00et%t%aan,ii,nnittehehddeeofffidrdProeeomFmnnOteietySyaaccocohhffotPrPruaFFanOOnisSStiotiowwbnnaaessaacnnccoaaoonllnnyfysffsiiiriimsmsmewweededderaroe((rseeccaeeoocmmtRRpepeaedfarfeeeriendrred.etn.nhccWWeeehch11eae)).nn.tTThtthhheaoeobssssie.eee srreeassmuupllttlsseasaggwrreheeeeddrtfoionwwoiitthh samples where the identity of PFOS could not be confirmed are noted in the data table. In Genv021, 10 PEHS standard was avalabe. In these samples. quaatve determination of In Gen-021, no PFHS standard was available. In these samples, qualitative determination of PSeHmS.was conducted based on feasanadi retention ime anda Known PH transion (100 PFH~ was conducted based on reasonable retention time and a known PFHS transition (399 --) 99). SESpnpeveciicrfifioiccnmiinnessntttrru!ummLeeannbttaaallrppcaahriraavmmeesetteerrss arare aavvaaiilaabbllee iin aappppeennddiixx HLI-L ooff tithis repo, report, ssttoorreedd iinn tthhee 33MM Environmental Lab archives. Aime Ecvemenr LFFioourriHHdPPGLLhCCro-EmElaleetcoctotrrrooasspphpr:raayyHeTTwaainnaddtePemamcMkMaaarssdssSSSppeerecictetrsroo1mm1e0et0trryyL:i:quid Chromatograph system Liquid Chromatograph: Ftewlett-Packarde Series 1100-Liquid Chromatograph system AGAnonalalyulytmtiinccaa1Itll2xeccm33oop00leluurmmmmammntnu::r1Ce1:883B0BeedteatgsiralTesMes C CCyoclulemTnitmeem:p1e0ramtuirne:e3s0 degrees C Cycle Time: 10 minutes :. Mobile Mobile ~ 'pCpCChhoooaammmssppeepoooccnnnooeemmennpnpttotonAA8ne:::enn2M2ttmses:m:Mthaammimcmooonnnaiiluumm saccettaattee Flow rateC: o0m0popnLemntinB: Methyl alcohol '. Flow rate: 300 pl_/min ISInnofjleevccettiniotonnGvvrooallcuuimmene::: 1100 pL Solvent Gradient: TTiimmeeo((mmiinn)) %%180B s011s o111s000 5.5 7s7.5 088 o0095 95 10 10 10 " For Detection: MFMaoasrsssDSeSptpeeeccctttirrooonmm:eetteerr::. MMiiccrroommaasssse AAPPlI//MMaassss SSppeectcrtroommeteetrer QQuuaatittrroo UUllttiimmaa TTrdippllee QQuuaaddrraappoollee systemo Micromass" APiMass Specirometer Guat | Tre Quadraple system system or Micromass API/Mass Spectrometer Quattro II Tdple Quadrapole system Aoauistion Mods: MRM (ofe 1 Table 3) Acquisition Mode: MRM (refer to Table 3) Software: Mass Lynx: 33 Software: Mass Lynx" 3.3 Node: Eleciospray Negative blode: Electrospray Negative Source lock Temperature: 125-150C Source Block Temperature: 125-150oc Source: Z.spray Source: Z-spray 22881144..00000077 Frnsorto Page 5 of 10 33M UMNNOO1166665600D033 no con -- SE-- ES 3M Environmental Laboratory Report No. Gen-021, Gen-O24, Gen-030, Gen-033 ----_----_-- Table 3. Ions Monitored in the Analyses of Extracts of Groundwater CSPFO$ PFOSA i---- 499,0 498 80, 99* 78 PFOA 413 169 Cre| = = PFHS 399 99 SE * Indicates the ion used for quantitation TE Eg i RATT Refer to the analytical methods and equipment logs found in the raw data for details on the Et ie actual analytical equipment settings used in the present study. These settings may have vaded sclasp esep su,hse igs may a etd, somewhat during actual data collection. However, slight variations in the instrument settings will mt godsowe Sa vers nn nt not adversely affect the quality of the data. Exact settings dudng all phases of data collection am Tool ee ly eeSet recorded and presented in the appendix of this report. * DDAATTAA SSUUMMMMAARRYY,, AANNAALLYYSSEESS,, AANNDD RREESSUULLTTSS SP -- Standard Summary of Standard Curves: Quality Curves: The coeffofidetcerimienatniotn Control Analyses Results The coefficient of determination ((r~)) ffoorr aallll 11/XXwweiegighhtteedd curves curves Ce pt bracketing useable data was > 0.982. High or low curve points may have been excluded to rcleingotees di e0s562gHs sopoorespousnHyohriiencocaers provide a better fit over the linear range appropriate to the data. High or low curve points were deactivated if the calculated concentration vaded from the theoretical concentration by oe 5 sap rivarearnknsvorss oOrarace cn ra an ls more than 30%. Acceptable data was evaluated versus a standard curve containing at least 5 points. All actions are acceptable and are documented in specific data sets. All standard Spon cr or oom curves used to evaluate quantitative data were acceptable. + coma catenionnvese ow alckan Continuing Calibration Verifications: On average, one calibration check is analyzed for Comtmvenctoars:nvge,Cofabrtnahectk aoens every five samples. Acceptable data is bracketed by calibration checks quantitated to be ms ames Mapai cal cons ner Sco uted within 30% of the theoretical value, evaluated at least every ten samples. All quantitative RE data is bracketed by acceptable calibration checks, as required, eta rans Blanks: Extraction blanks were compliant if no target analyte was detected above the limit BofEan (00) ct daeJn n,sdy violvar sstn of quantitation (LOQ) for a specific analyte. In this study, extraction blanks were often higher than low curve points. Because analyte levels in the blank are used to determine the LOQ, on SpotsSecs raves hia vl ome by default, all blanks were determined to be below the limit of quantitation for the ge ss compounds of interest. . eA TT Internal Standards: Internal standard response was monitored in Gen-030 and Gen-033 A ER a only. Internal standard response was required to be within 50% of the theoretical value. If impes ove to nr pr al dreevoConr STe a, mes samples showed an internal standard response that deviated more than +50%, the samples were reanalyzed. If the deviant IS response was confirmed, the analyte data was reported, but noted in the data table. 22881144..00000088 te Page 6 of 10 worsens 3M MN01666004 SM Encrmnt Lapa 3M Environmental Laborato~/ Resor a Gen21, Ge02,Gen03.Gen633 Report No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-033 `SSuummmmaarryyooff SSaammppllee RReessulutltss. + GGEENNO-0z211 : + PLPiFFoOOn SSivwweraa,ssHddaeerttbeeoccrttSeeeddaiilnn alaittvellere,aassG!toooznnzeie CLoiornmolirvaenr,tHbalroboo,r SOtetaelrlibvoero,,Goaznzdi lssiaavemmrp,pllMeeinffrkroomlmivttehrh,ee Cliavsepr,iaMninSkealilvebri,o RRffoioivvllleolerowrwOOiintntgtgteemmrraitalivrvtreieicrcre,,essTT::uurCCrttallaeleliifilfoivvoreernrrii,,aa od. SSeeaa Cormorant blood, Otter blood, and Caspian Seal blood. CbPCPlaFFaoloilOOidff.oSSorrAAnniiwwaaaaSSsseettaaeennLLttiiaaootntniivvileeivvlleyeyrr,,iiddRReeinnitvvtieeiffririeeOOddtttiitnneerraatitlivlvleeeeraar,s,sttSSoeoennaaeeOOsstttaateemmrrppvlillveeerffr,r,rooSSmmeeaatthheOOettffttooeellrrlolbbowrwraiainininngg,,mmaaanntarddtiricOOcetesttse:e:rr = PFCbPalFolOiOofdAAo.rnwwiaaassStteeeannttLaatitioivvneelilyyveiidrdeeannnttidiffiieCedadsiipnniaaattnlleSeaaessattloobnnoeedss.aammppllee ffrroomm tthhee ffoollloowwiinngg mmaatrtriicceess:: CCPPaFFalHilHiffSSoorrnwwniiaaaassSStteeeeaannttaaLLtiitoiiovvnneelllvyiyveeriidd,reeannGtntioidffizieCezddasiiinnvpeiaaartt,nllMeeSiaaesnsatktloolbnnilveeoesros,adam.RmpivlpeelerfOfrrtoolmmrtthihveeerff,oollSlloeowwaiinnOggtemmartarvtrieiccrees,s::Turlle fiver, Comorant blood, Caspian Seal California Sea Lipn liver, Gozzi liver, liver, Cormorant blood, Caspian Seal blood, and Mink liver, blood, and ROOtitvtteeerrr blood. Otter liver, blood. Sea Otter liver, Tudle GENO: GEN-O24: ": = APAPllFFbbOOaattSSrroowwssassassppldldaaeessltmmeeacca,tt,eeAAddllbbiidadaeettnrrntootisisffsisieesdsdeeriirnnaa,,aatCtColloemeraanmssottorooraannnneett ssppaallammaspspmlmleeaa,,ffrCCroooomrmrmmttohhoreeraaffnnoottlllolbbowllwooiioonnddgg,,mmHHaeaterrtrrririiiccnneeggss::GGuulll plasma, Herring Gul blood, Bald Eagle plasma, Loon iver, Albatross iver, Brown, . PpPeleallsiicmcaaann, lliHivveeerr,r,inAAgllbbGaatturrololssbsslokkoiidddnn, eeByya,,ldCCooErrammgoolreraapnntlat syyomollkak.,, and Gull yo. Loon liver, Albatross and Gull yolk. liver, Brown + P`PCFFoOOrmSSoAArawwntaassblttoeeonndtt,aattBiivvaeellldyy iver, Cormorant blood, Bald Eiidadegenlntetiiffpiieledadsiimnna,aatt Eagle plasma, Llleeoaaossntt Loon oloinnveeer,ssBaarmmoppwllene liver, Brown ffPrreoolmimcttahhneefffiovoelllrol,owawiinnndgg Pelican liver, and AAmmllabbataartlrtiirrccooeessssss:: + liver. `PPCFFoOOrmAAorwwaaansts ttbeelnnototaadt,tiivvAeelllbyyatiidrdeoensntstiifffiiieevdedr,iinnCaaottrftmoeoaarsstatnootnnyeeolsskaa,mmapnpldlee Gffrurolomlmytthohkee.ffoolllolowwiinngg mmaartiricceess:: PCPHeFForHrHrmiSSnogwwraaGanusstllttbeelpnnotlotaaadtts,iivmvAeealllbyyaaniitddrdoeenBsntsatiiffdliiievededEraii,ngnClaaeot rpllmeleaaaosssrtmtaaoon,nnt eeyLoosslokaan,mmpavplneleedr,fGfrroAuomllmlbyatthothreleko.fsfooslllloliowvweiirn,nggBmrmaoatwrtrniiccPeeessl::ican Hlliiveveerrrr,,inAAgllbbGaatutrrlolospssslaKksiimddnnaeeyay,n, dCCooBrrammlodorrEaanantgtleyyoopklkl,a, saamnndda,GGLuulollol nyyoolkilvk.e. r, Albatross liver, Brown Pelican - GENO: + PFOS GEN-030: was detected bPlFooOd,SPwolaasrdBeeteacrtefdiv eiinrn, aaMttielneakasstlti vooennr,ee NssoaarmmtpphlleeerffrFrouomrm Stthheeeaffooillvloleorww,iinMnggampmaatTrutrriitccleeess::ivPPeoorl,laarTr uBBneeaaarriver, GCGbarlroreeopeed,nn, FPFFrrrooooglaggrmlluiBivsveeecrarl,,reCC,lihvhLieiannr,kooeooMkkWinhSSkiaatllleimvmfeioorsnn,hNlleiivogveegrrtrs,h,,eLLrBaanrkkoeeFwuWWnrhhSiTtireteoeafufliitsslihevhgeligrivv,see,Mrr,,CaaBBprrrTopouwwmrnnutlseTTcrrllooiveuue,ttrC,llihivTvieeunrrno,,oaWWkh.lihvooellree, C`SSaaalrlmpm,ooFnnrommguussmcclulees,,cLlLeaa,kkLeeaWVkheiVthWeitfehifiitssehhfismmhuusesccgllgee,s,,aaBnnrddoBwBrnrooTwwnrnouTTrtrooeuugttgsmm,uusCcsalcerlep.. muscle, Chinook + PMPiFFnOOkSSliAAverww.aass tteennttaattiivveellyy Iiddeennttiiffiieedd iinn aatt lleeaasstt oonnee ssaammppllee ffrroomm tthhee ffoolllolowwiinngg mmaattiricceess:: Mink liver. + PPFFOOAA wwaass nnoott tteennttaattiivveellyy iiddeennttiiffiieedd inn aannyyssaammpplleeaananlaylyzzeedd.. + PPFFHHSS wwaass nnoott tteennttaattiivveellyy iiddeennttiiffiieedd iinn aannyy ssaammppllee aannaallyyzzeedd.. + GGEENN-0O3:3: + SDSPPoeeFFlaaOOpllhSSlliiivnvwweeraair,,vsseCCrddo,eoertrtSmmeewoccoorttrereaadddnfntiiitnnsialhivavteteLlrirle,e,vaaBeBsso,otttattTotlnlueneeneNNassooaafssimmeevpeddprl,lDeeDaoofnflrlpdpoohhmmiBinnlttahhilcieevvkeeffrTro,oa,llilGGoolawewadnininnggGggeuelssmmlaDaDtiortvorlieilccprp.eehhsisi:nn: MvMliiveinenrkrk,,llSSiivivteerdrirp,,peeBBddaaiikkaall + MPDPiFFonlOOpkShSiiAAnvewrwli,avaesCsro,ttreeSnmntwotaartoitarivdvnefeltiyslyhiviiedLdreeiv,nnetatirinff,iiedTedduBnoiintantalaltietvlelNeeroaa,sssatetndoodnnDeeBollssapaachmmkipnTpllaveeielefrfr.rdoomGm utthlhleelivffooellrlol.owwiinngg mmaatrtriicceess:: Mink liver, Cormorant liver, and Bottle Nosed Dolphin liver. 22881144..00000099 PPaaggee77aotf 1100 I3MM_MMNND011666686000055 rn amo sBiEreEnSs 3M Environmental Laboratory Repeal No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-033 PFOA was tentatively identified in at least one sample from the following matrices: Cormorant liver. on PFHS was tentatively identified in at least one sample from the following matrices: Mink liver, Striped Dolphin liver, and ,Swordfish Liver. Appendices contain data summa~ tables. DDAATTAA QQUUAALLIITTYY OOBBJJEECCTTIIVVEESS nT.etA ng pt sy st tasactuty No circumstances existed during the present study that would have affected the quality or integrity of the data. The data quality objectives (DQOs) followed dudng the present are indicated below. T + LLiinneeaaririttyy:: TThhee ccooeffeiciefntfoofifddeceteterirmmieninanattiiotonn ((r2)) ooff tthhee ssttaannddardd ccurvveewwaasseeqquuaall ttoooorrggrreeaatteerr o it Stn Sart cevs en re than 0.985 with at least 5 active points using a linear regression curve with 1Ix weighting. + eama es Cartan Li a V2 eget Beton pet Instrument Quantitation Limit (IQL): The IQL is equal to the lowest acceptable standard in A A the calibration curve (acceptable standard is defined as a standard within 30% of the ,: L tnt Oe or theoretical value). As this value is not useful in consideration of the sample data, the IQL R was not specifically determined or stated for every study. Lin~its of Quantitation (LOQ): The LOQ is equal to the lowest acceptable standard in the o ae cate ntti te calibration curve (defined as a standard within 30% of the theoretical value), and is at least n rn as 3Sati nf po Soar) eSwi two times the analyte peak area detected in the extraction blanks. The LOQ may vary due to See ate peaks da etna,To L05 may oya the amount of sample available for analysis (particularly for samples extracted according to EToEutof spe li als Goto ees xc sera ETS-8-006) or to day-to-day variations in the analytical system. The ranges of LOQs for Eos diol ins oemale hes Ger vadous tissues are listed in Table 4 (sera, plasma, and blood) and Table 5 (liver, kidney, p muscle, egg, and brain). -------- Table 4, Range of LOQs for Sera, by Study [pros |oonesmmi.|otrsiom.|omaoosmipm| a| PFOS 0.0116 pg/mL 0.00116 IJg/mL 0.0029-0.0579 pg/mL NA [pros |comamom | ocomiom | ooomsmne|| PFOSA 0.00625pg/mL 0.00626 IJg/mL 0.000625 IJg/mL NA [ms| wn |osonsiom | sooneom | | PFHS NA 0.00114 pg/mL 0.00114 IJg/mL NA [rror |ome | on mmmios m | somone |] PFOA 0.00599 pg/mL 0.0299 gg/mL 0.00240-0.00958 pg/mL NA J Table 5. Range of LOQs for Liver and Other Tissues, by Study [pros | oisiaion|ooueson |omomomieys|y oesoomamo PFOS [eros |oosmion |omrows | oven | ome| PFOSA Pi | wn |ooomon| aommomsimn PFHS ronPFOA 0.0348 pg/g 0.0375 pg/g NA 0.0359 pg/g ea NA = not applicable 0.0348 pg/g 0.00750 pg/g 0.00683 pg/g 0.180 IJg/g O.O06g6-o.o696 pg/g 0.0188 IJg/g 0.00683-0.0342 pg/g 0.0180-0.0719 pg/g 0.00696- 0.0694pg/g 0.0376 pg/g 0.00683 pg/g 0.00719-0.0718 pg/g rsa Page 8 of 10 22881144..000010 3M MN01666006 Reporte Gen21, GIerE34m,Grane230L.Goarrrdy 3M Environmental Laboratory Report No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-O33 + tDDiuuspspluileiccsaawtteeer//aeaccrcceeeppprttoaadbbulcleeibpplerreetccoiiswsiiiotohnnin((ee1xx5ttrr%aaccttiioonn)):: SSppiikkeess ccoonndduucctteedd oonn ssamapmlesopofflccoonetnrtsrooll tissues were reproducible to within 15% QuQ5a-lu1ia0ltitsyyamCCpoolnentstr.rooAllcRRceeepsstppaoobnnlsesee:C:CAAVccoronentstiipnnouuniinsnegg wccaaallsibbwaraitthiioionnn 4vvre3ir0iff%iiccaoaftiiotonhne((tCChCCeoVVr)')etwwiacaassl aavnnaalaulleyy.zzeeNddoeevmvoeerrreyy. tt5hh-aa1nn0 11s00amssaapmmleppsll.eeAsscwwceeerrpeetaaabnnlaeallyyCzzCeedVd bbreeesttwpwoeeneesnneaawccccaeesppwttaaitbbhlliene CVs. +30% of CCVs. the theoretical value. No more `SSgprpieiakkteelv/aaarcciccaeebppittlaaybblilneesrrpeeicckooevvreeerrciioeevsse::riDDesuu.ee Ft(oo0rttahheneynnguuimmvbbeeenrromofafddrifixfffee(rreennstt mmpaatatrenriicdcecetssislaasnnuaeea)ll,yyzzseepdid,k,e.tthheerree wwaass g2Freer3ecc0ooa%vvt)eev;rraiiserepissaibkwweiilitittrhhyeiincnino77vs00epr--i1ik1e3e3s00rb%e%ectooowfvfeethehreineese5e.xx0Fpp-eoe1crc5ttae0endd%ycicgnooidnvnicecceneantntmetrrasaatettiirmooix-nnq(uiisnnapddneiictccaiaieatteetaiqqnvuudeaatnndistatsiattuatafeitio)vv,eetshdpdaaiakttteaam((gaGoorooxdd ttoo (+(ugg3sooe0ood%ddf)t;tooorsqp+2u5i5ka00el%%t)ra.e)i.ciSSovpevpieikpkreueiersrrpeeobccseooetvvsweereorinieelenyss.5oouD0ut-utss1eii5dd0oee%oosffainthmhdpsiislcearrataiennmggiseteeamtiininidod-qniicscua,aattenemtttaihtharaattxtivssesaapdmmiapkptlealeesftddouaardtttiaaheasssthhwomoeuuralledtdrinbbxaeet `cuscposoiennkdddeuufscoctttreueqdddiueffaosolrristaaanltlollivummeladatptrbruciecrepescos.os.neFsFsioodrorenPPrlyeFF.dOODfSSoureaaqnntuaoalalyysissaaeetmssi,p,vlesseaaplmmiumprpliplteeaotsdidoeaansttsaao,ltthmhyaa.atttSriisiisxnnncsooepttinksseouuppsepptnouotrdrtitieeetddsy bwbyyermmeaantorxitx svaVepleririkaiffeniicacsalatttyuiiosdoenniesesetxxhsppaheteorrauiimrlmdeeennbntoettsscswwoueenprrspeeiodrppeteereerrdfdfoobrfrmoymreemqddauffraoolxrritaPPstFpFiviOOekAAep,,SutPPrupFFdoHHiseSSes,s,saaohnnonddulylP.PdFSFbOiOenScScAeAo,n,nsoffooirdirtdetehhrneeedtssiteetyoaanpnaralolyvytiteedsse,, auunlnlccaoonnnaffliiyrrmsmeeesddthqquauatalailittraaettiinvvoeet ddsaauttpaapooonnrltlyey.d. by matrix spike studies should be considered to provide " + UUtssoeetohofefeiInxnttterearmncatalsl SSptotaastnn-ddeaxarirdrdassc::tiTToeenltrraaanhhdyyddurrsooe--dppeearrsfflluauonorronootocectmiaaannleessstuuallnffodoannraadttfeeo((rTTsHHaPPmFFpOOlSeSs)) iwwnaaGssesnspp-ii0kk3ee0dd :. iaaannnntaoddlytGGtheieencna-el-00x3st33ro3a.u.cntFFsdoonrpreoasalsslllt-sosefaaxmmttrphapelcleetdissaotnaiIn.nattnhThdeeHssPueesFessOtdtuuSddaiisleeessav,,nelTTisnHHtthPPearFFntOOawlSSesrltleeaovnvdeedellasstwredweremfrorieernsemmadmootnopnitbloeeirsedtidnetvotGoiarevanneter-rt0fidf3yyo0mtthhee aeceoxxnnppafeeliyccrtttimceeeadddvl,vasaolalunuuaneeldssybntbeeyyslsmmevoooerflreetshewtthheadarnnaeta+r5.5e0p0To%%HrwtPweeFderbOreueStrrleeaeaarvnneeaallnslyyoztztheeedadd.t.wIIInfefttrhhheeeedrddeeeetsveuvirlimaatnsnitnttaeTTbdlHHe.tPPoFFbOOeSSdleelevvvieaelnlsstwwfereorrmeo confirmed, analyte levels were reported but are noted in the results table. U'sUEseSeMooSffMccSoo)nnfafinirrdmmlaaattcookrryyofmmaeetvtihhaoobddlses::alGGtieivvmeeanntittvhheeeossreelleaecnctaitlivvyisittiyys,ooffnttohheceoaannnfaaillmyyaitictcaoalrl yttoomooell tuuhssoeeddds((HwHePPrLLeCC-u-sed. ESMSM$) and lack of a viable alternative for analysis, no confirmatory methods were used. = tDDieemmmeoon(smnatstrtrcaahtteiidoonntooofsftssappnedecacirfifdiicsciitttoyy::wiSStphpeiecnicf3iifi%cci)ittyyawwnadassthddeeemrmoeonsnspsiotrnrasateteeoddf bbayy lccehharrsootmmoaantteooggcrhraaaprphahicicclerrreeittseeinncttiioonn tppimrrooedduu(ccmttaiiotocnnhaeardriisstiionnggstffarronomdmarccdoolslllitisosiiowonnissthooinff aa3nn%aa)nnaaanlldyyette-hs-espperceeicsfipfiioccnppsaaerreeonnfttaiitoonlne..ast one characteristic `AmAasstssruuimmxiisnnpggiksseppiiskkteeudrrleeeccsoohvveaervryyessbtteuueddinieesussffeoodrrmmasaa sasunuiititaandbbillceeatiinonrddoiiccfaattdiioaotnnaooqffueeannlddyoogg(eesnneoeouuassboaavnnea)al.lyyttTeehrreeeccvooalvvieedrriyyt.y, of ttmhhiiasstdaaxsssssuupmmikppettiisootnnudhhiaeasss nhnooattvebbeebeeennenvveerudisffeiiededdabbsyyaoontthhineedrritcteeaccthhonnriioqqufueedssa..ta quality (see above). The validity of `SSTTAATTEEMMEENNTT OOFF CCOONNCCLLUUSSIIOONN `UUqnundadneetrirtttahhteeivcceooannnddailittyiiosoninsss ooofff atthhseeelpperrceetssieeonnnttossfutueddniiveeissr,,ottnhmeeenpptrraeelsseemnnatccreeiocofefsff.lluuoorroocchheemmiiccaallss wwaass oobbsseerrvveedd iinn tthhee quantitative analysis of a selection of environmental matrices. RREEFFEERREENNCCEESS Q11)u)a""lAAictcaccteeippvtteaannDcceeeCCtrditeteerrriiaamffoooirrfUUnlSlttuarrlaaftttroranaicyceleouHHrPenPaLLCCH-e-TrTbaainncddiedeemms MMinaaSssossiSS;ppeLeci,cttrLroo.mYme.;tertCyray.m: pQQbueualanlin,ttiat.atAtii.vv;ee Baannoddnet, PAK:HeniJ.oAnna,l. Chem6.8 (19), 3397-3404, 1996. Qualitative Determination of Sulfonylurea Herbicides in Soil"; P.K.; Henion, J.; Anal Chem., 65 (19), 3397-3404, 1996 U, L.Y.; Campbell, D.A.; Bennet, 22881144..00001111 PPaaggee99cotf 10 10 I3MM_MMNND011666686000077 Rosato. Gand, EGerntrsoGrene.aCteasnedy 3M Environmental Laboratory Repod No. Gen-021, Gen-024, Gen-030, Gen-033 ArAaTTcAwCHwMeEnNtTSs + AAttttaacchhmmeenntt AA": GGeenn--002211 SSeerraa//PPllaassmmaal/BBiloooodd RReessuullttss + AAtttaacchhmmeenntt 8: B: GGeenn--002211 LLiivveerr/MMiissccaellllaanneeoouuss RReessuullttss + AAttttaacchhmmeenntt CC:: GGeenn--002244 SSeerraa/~PPllaassmmaa//BBlloooodd RReessuullttss + AAttttaacchhmmeenntt DD:: GGeenn--002244 LLiivveedrMMiisscceellllaanneeoouuss RReessulsts AtAtttaacchhmmeennt Et:: GGeenn--003300 SSeerraa/PPllaassmmaaB/Blloooodd RReessutltss + AAtttaacchhmmeenntt F: F: GGeenn--0g33o0 LLiivveerr/MMiisscceellllaanneeoouuss RReessuulltss AtAttatacchhmmeenntt GG:: GGeenn--003333 LLiivveerr RReessuullttss + AAltttaacchhmmeenntt HH:: AAnnaalylyttiiccaall MMeetthhooddss t AtAatrtcathacicvhhesmm)e:ennAttInIa-lyLtLi(c(aaalcdddDtietiitooanniaallsl bfboooruuGnneddndd-oo02cc1uu,mmeGenentnt-aa0vv2aa4ii,laabbGlleeen-iin0n3tthh0ee, S3aMnMdEEGnnevvinirr-oo0nn3mm3eennttaall LLaabb . archives): Analytical Details for Gen-021, Gen-024. Gen-030. and Gen-033 RREEPPOORRTT SSIIGGNNAATTUURREE bho le RKerisittenonJJ.. HHaannsseenn,, PPhh..DD.,, PPrriinn~ci,ippaall AAnnaailyyiticcaall iInnvveessttiiggaattoorr / Date L B~ Bdbon, Spo hnsorrRReperperesesnetnatattiivvee 5/10/00 Dete 5 feo [aoe 22881144..00001122 Pagetoctio Page 10 of 10 33MM_MMNNO011666656000088 |4 [RY soci ut vsne 22881144..00001133 9 wn Cov r~ 1991 Wdson Jones Company aw uotess00s 3M MN01666009 FACT-GEN-021 FACT-GEN-021 fess r=-- erseshe ffrPE ey n: fa Saontei n e = frprieyt r h pr= emy forma ci aa om rsvoz Sample 0 of PI~S uWmL Ei* & 7 SppjooVTTevVTaoonooaiaaraetroioiumrmeatrioioaensnsennsnd 2 PS<owSWWRoe XraaiRdeSeteiasieeiaanatimim mnnegsiiintnaeanoae = Method Rosas va H20 H20 Bn,-2 ~ H20 Bn~-3 8D..5~99 H20 Bu~-.4 ~ w24~1-4oJ 53 W2491-41,J I! W~4~t-4.qJ 8 W2491.,47J 9 w2,m l-4~j 14 W2491-49,718 W2~l-~OJ ~2 W2~t-52J !o aoaisng <L~ ( O.OI <L~ ( O.Ot ~ ( 0.0~ 0.01~ ~ ( O.Ot 0.0131 ~ ( o.o~ ~ ~ o.o ~(o.ot~ ~ ( o.o ,L NDm D oePFsSiy su al evesnfeosSi tnEapRrem oede.tdeeoomtsA epiG . AG 1`NS0aebaaeAkpet dor 0"2,/22100 M~ f"Raeoqem(aammann| ao SRlBooieetemmnnay R pWrie te]r aiR prisee tmaed Re NA Tr i RoRA e em--is ET5-8-5. I Evil Ymion ~ 22881144..00001144 33MM_MMNNO011668686001100 FACTGEa N FACT-GEN-021 EF== S oie E SEEaEeS Sample Data BLOOD Group GEN021 Variou~ Mt~i~* ~ MSU No~e Blood Bur ~.l SEn Mml~ ~3 F i E=Ern ae. ~ M~~ Conceat~flon Meth~ BIt. EZEZRaotE EZ=onEn 3i TEE] Eis lee]2 ~J3~- 10ut~l NA | ND ND 3ND Lol) NNAA D D 5, :Eaa bo EEE22ziE waa= iae=m EE a =:gEgg: . ero i amped estei. HA . NA NA " fraiimtiy NA - Net Applicable 0APearce PFO~ - ~ ' PFO~A- P " Tim wma 22881144..00001155 oy p-- 3M MN01666011 EFooe TSo EER, soonTo Qc rE M~tod Bat EEm atm s eam FACT-GEN-021 EEE EEeleyovmeen rr EEE NA NA NA NA I~. NA NA NA N^ 101% 1991% 116% ira,y, go~ 4"/% T=E. EE 17% 10~ 12% !o% L~ 6.1% 3?% OEN-O21,mn.-I- 22881144..00001166 3M MN01666012 ramen FACT-GEN-021 EEE [mEEig I ESoEEciore Pind Sample Data BLOOD Qc BaB rmesmgenain 2 fBErYe NA NA NA Bo ID'~ I~4 E Er e Et E, 111% 111% 91% 14% BE=m Rms 22881144..00001177 swmoressors 3M MN01666013 v L n WilsonJones te 22881144..00001188 cen S_MNotessots 3M MN01666014 ~ N~ba(Tm Su~mcz): M~bod~.m~lm: EE FACT-GEN-021 ECEERS it/S m" % R~ LOQ ( o.037~ HENNE (MAE 1A NA = hE NA Creer mem |i= |ow [2]BElal]N~ Em pm e-- RES. | ETS4-7,0 22881144..00001199 3M MN01666015 FACT*GEN-021 eee TeR,gD $~. D~. NA ND NA lid n D NA D D NA NA D ND D HI) D NA NA [== | ooomenos [sas [oa [0| = |ow N[OAW mE Era 22881144..00002200 3M MN01666016 E Eam r Ma~ri~: EaD~ of D~a Sample Data rELIVER~VHOLE BLOOD FACTGENAI FACT.GEN-4)21 E=fren ERE --_-- PF(~A NA NA NA NA' I " NA ~% 3~% 4~ 16% 26% om | ses[2Tala] 2[l=] leeremir |2 ola] 814% ~% 1.T= ] EarmER mene Be Ea ---- Dule ~Aml~e o~/1~ ~17~0 LAC 22881144..00002211 swnoteea0r7 3M MN01666017 FACT-G EN-021 T ri e. LIVEIU~VHOLE BLOOD Callfo~it Sa8 Lira IJver ArT 8O% 31% 91% 21% 47% 64% 47% ZZ~ 44% Turlle Liver ee ems e 42% rrTs ere ene [BE W"/491-S$.Cmm,m~l~ ~~ ~ Sup.MS 172~ 123% Tel fF 1s] EAoSEEsTTEATBmIooIeeE r ErRe T ee, m ETS-1-7~O ~IO~O 6:07 aw noteesors 3M MN01666018 22881144..00002222 Cc ~ WilsonJones Ou~~ Reference/n~x S/~e,~ 22881144..00002233 33MM_MMNN10'6166656001~99 FACT-GEN-024 SE 1 fo | B= le 15 l |g] TT Fee 8 aria 5 0.449 0.0147 0.122. 0.0~5 257 2.35 0.0)24 Er ET 0~49 FREE 3)O.335 EE ii BE = 22881144..00002244 swnoressozo 3M MN01666020 FACT-GEN-024 SAE. To one anaa RSD B[E EEE=E = T = E == r =e e aa ] a EE Es = =D ; pres mss mE 1 a a neem= 5 BLiehma B NA IEE on bas En SE =n fois gRdEE Ea-- SEm ZEm Bm ILSD * II~l~Ve Slmdmd Devbtiee os == = 22881144..00002255 awnoteesoz1 3M MN01666021 D J vt. astro 22881144..00002266 enews ,~ 1gill Wilson Jones Company aw unotsssoz2 3M MN01666022 ESnaares m=n = m Breee Hiren... onvai nwoi.ens CETT ET =E LIVER, KIDNEY, YOLK S~. D~. MS~4SD Rlq) =aesTxToTw om TelwmNA ] [m om [ a ow | wm e | [e a] | Wem s = F=a HA ` EEE] TT Y~ == a= EEE Ta EE] ER T---- Fe A sass 22881144..00002277 mz 3M MN01666023 FACT-GEN-OU FACT-GEIN-024 i EoEm tians LIVER., KIDNEY, YOLK ee mFmltroim estsr. <~x~ NA FE e Ee en ee ] 104% -. p,% =n = 15% TeEET ) r i CE EE o=on Ea EEE) 1. NA tT.~ eofn H - N Foon EE E BE ES armen oe 0.~0104 mEE--e -- 22881144..00002288 6:07 AM sw moressozs 3M MN01666024 22881144..00002299 33MM_MMNNO011668656002255 FACT-GEN-030 FACT-GEN-030 Ea = Ser Efren == ns Ho *fPFOS Mm ~1.~. r SebEi <LOQ (o.~ =o.~ Emm NA NA Tr HaEeEs| O.O0O790 . MN 21~ 5 [esmamet |0m [oe-6~ | ow [2 Taw| 71"/. I'PA ==z=z <m= amTL~ee(maomm.~s~) ~% psma Hi eeainnn =#52= bhma oeeamey E m fnoo E ni ae g2 ia mame pa r 2E | po] T Hase i Z n = 2] -- rE I lw 'HA m a a mem m eee T H pEtno nes TEpm= E ome=m] p = E Ey i E IH TmrEae B= g p 2 EE 5 i +n fr === mSm meeemmmm NA m E aegin n man TE EE Z= 3l L.LL H= E J le i CEmtERenesian RS, trerm mir m RR usg e Ta T OA o el Rt BTS4=5,I ~ Vmio~ :$/95 22881144..00003300 S_MNotessozs 3M MN01666026 ACTONAN FACT-GEN-030 = --- SEE Fo Es E Loi ; re Ee T r NA <Lo~(e.~ ~L) ei o =e 0.00190 BEE EEm 0.00225 Ee [EER I I ESS (En 1 CE] I - LLL I NA ., e & TT T aT+IIl Tu N od] meme | om Te[0 II [Tw| gz2 i EEtEe]E 1 1 I I Bi 2 E En m on I i I I I 2zz E a Em e s I ! l I I = os I I I I SE ieE IN LL. " = EpZoen] !!:;I ! I 1 I I ! 1 EE |1 [ EE ;! 1 I I ee [ ! I I afz==i >fEoiiiesss] I I I I ! . I PRAT aneom r prcirecrf I E ae Ta!1 ma m~-I- i GEI~-~3~dl 22881144..00003311 aw norassoz? 3M MN01666027 ---- FACT-GEN-030 ons FACT-GENo030 Ease E SEnE i ER ~mmpll ii Sgrinemsdes SEE omEn=y EES ee E i wE e mm TR pSiEa=E FBr=EyE eminm BTmESEehiEevEaemTeEEmsn ||| ESnIanmEEk || mnems | p Ea ERsE sDn &2=g wi==s "=| B T 3I&|x|||| E S EmSI mhmE smam 8RBmEsR Bo smee| TEERhEi. NV - 1~oI Ve~,ed S T armee mi] m aiih Ei S mE E pm SRaameemn h i]nis EStm] Sh D Eem Krs-i..$. I ~:)7 PM su unoreesozs 3M MN01666028 22881144..00003322 ACTA FACT-GEN-030 En ridaessym er i;E Shuer EER S=oim A BEE=EmE. ms itSD MS~MSD RPD N^ EESiarEntrE || bmSermeee mEiEsEe |mEeEmE EnE:eR :| " I% TE hE ||r Bae me a E =| SE EE EER pEilEe | EEEETn eeommm |2sS 00mE00eRwa)l) o nBBEEilpineNai zsea:Nnsm |||w mB| A Eho eaE e au mn SoSBRooeEyEr..||SP(phERa] EnnRe p E ergSs bE e n . EE Hoan 3~ a ad r a = b=y = i a pr] | m=e=m <10Q000065apm) |e | 1FD0 oir HEE u ET PSOA r Rett 22881144..00003333 $:37 PM aw otsssozs 3M MN01666029 22881144..00003344 33MM_MMNNO011666656003300 [2 FACT-GaPe-030 gMe SU Emnommeta Saie MSU Environmental Samples Mmly'~x 33 jo MUSCLE t, roup [== ] ] RSD VeHfled of PFOS m~l ~" % Ree. PFOS Std. MS/~ISD RPD of P~J~5 u$/g or % Ree. PFRS St4. Dev. NA 0.0163 NA <LOq ( NA <UOQ (0.0342) N& NA <LOQ (0,0342) NA NA <L~ (0.0~2) Tamms[80m[1 or[ml To| NA 37.2 ~ (0.0~2) NA <L~ (0.0~2) NA eenTETRTTae NA 45% ~ NA TETm mn Te Too 21% 4 i 1~% 5 <L~ { 0,0~2) <L~ (0.m~2) ~ (0.~2) ~ (0,0~2) ~ (0.0~42) X 0.05~ ~ (0.0~2) ~ (0.0~2) SE ~ (0.0~42) TELE NA 0. I~ 0.~93 ~ (0.0~2) <L~ (o.~) <L~ (o.~) <~ (0.~) ~ (o.o~) dl Lake Whitef~h O. <L~ (0,0~:) NA ~ (o.o~z) X 0.130 X 0.~ NHIEENE N X X 0.1~ x <L~ (0.~) 0.132 0.0~48 <L~ (0.0342) <L~ (0.~2) <L~ (0,0~2) <~ (0.03~=) <L~ (0.0~2) <~ (0.0~2) ~ (0.0~4~) i= E <L~ [ 0.0~2) <L~ (0.0~) auis aans <L~ (0.0~2) a, NA ~(o.~ el. ER mn <~ (0~0~:) <~ (o.o~4:) ~ (o,o3~=) Si ~ (o.o~:) NA ~ (o.o~2) NA a Ifs 1~- Nm Bxlrac~d ET3-8-7.0 22881144..00003355 4:46 PM au noressost 3M MN01666031 FAC~-GEN-03 0 MSU Environmental Samples SEHmEmE BfY i 5 * MUSCLE EELEees R[RELSH|. MSUI2149-H~C~mfil 5-1" MSU 12149-H2Omsfil $1,1 Dev. NA NA NA NA ug/I or % I~. <L(~ ( <L~ ( o.ol ~) <L~ ( 0.0] ~) <L~ ( o.ot ~) Mm HA NA C?M-BZH6-MS ~ I-Z 23% 148% 12"A 19'~ [Ese ETT [on] om] 15~A I1% Eee Bin- tram ~1-2 125% 33% 76% 68% 22~ . [REmsilTSTa] [= ofa = aBINI Soaomm 3~ (am ~ (o.ot~) AE i: 5 BeBtNI0 B~ Sms) | ow [mem E~nI0 prtterd aia Seemm <L~ ( 0.0~ <L~ (O.Ol~) 3 ESpaom|| ev ai T=b=aifT Lake Whitefish L999029-I I" 1999029-12+ 1999029-14 I~)9029-16 <~ ( o.01~ NA <L~ ( 0.0~ ~ ( o.o~ <L~ ( o.0~ <L~ ( 0.01~ <L~ (0.0~) Brown Trout Bese ipeEi 1999O40O6 1999040-~ me im 1999040-~ 1999O40-09 NY ek satis HEE | ce Fiemme Doinia n| on NOT e~r*lb'm~l; lk~ t~amdt~m vtr~ >. ~ SE mares ue ee oe ; D~e F.nte~l/A~l~t: 01/24/00, 0 ir2~x), Ol/2Woo LAC HA NA - ~ .~li~e L0~ = ~imit of Q~o~ x - Ve~Eed PFOS <L~ (0.01~) <~ ( 0.0~ ~ ~ ( 0.0~ EEE430-1iv=.xb 22881144..00003366 4:46 PM aw3MnoMtNe0e16s6o60s3z2 MSUEanimensSuapis FACT-(;EN-030 MSU Environmental Samples HEE. Simple [}11~1 en MUSCLE BT~4-6.0 & ETS-I-7.0 ma ] 5 PFOS : Mesa pitHS 8SD Ski. D~. |= [18[Es].[a[sm] NA X X x X X X X X <t~ La~A] I1% D% des EX X X ELLIE] X nin tlllh (>so~.) ~.,,~.~ ~..~ X X 0OO =I ES X 0.263 X X X 22881144..00003377 : 6:46 a unoressoza 3M MN01666033 FAC~T-(~EN-030 MSU Environmental Samples Sample Data ~USCLg and EGGS erE e E LE Man'ixDtk [EE atl 5 Talw[=[| E E E e E EE T E E i Ll EEE sal EE : [or= |Gi8 | &lem] | 2| 22881144..00003388 3M MN01666034 S~udy Sample Data Miscellaneous Liver UrouF Melhod BIk Unfiltered water MSU Eoirnmen Semple FACT-GEN-030 MSU Environmental Samples ETS-8-6.0 & ET5-8-7 0 So~p 020199. Amelia 062498 Massly~x 3 J SEE E EERs IE msbn wgmi EH HN Ame |ommdmn Tel mm| | | En IR ms Tn| CmeEsR Te m = ye smTeay CEESeT (e Feri T s e er e &rs= CE sT sEr E e T s & Ee== =RE TED posed oaiaenn a = =ITEENA rr uip E& o ! am fin pre hed 2 team NA Gl~-O30-live~.xls 22881144..00003399 ~9/00 4:46 PM sw. unoroonss 3M MN01666035 MSU Ea aviconmentysSyupls FACT-GEN-030 MSU Environmental Samples BEE. EEE mam,.. Miscellaneous Liver M~o4 Btk ~U 12129-~OBIk-~ ~ 2 of POAA NA POAA $ld. Dev, of PFOSA NA NA <LO~ (0.0188) <LO0 (O.OISB) PFOSA Std. Dev. HS/MSD RPD Method BIk <LO~ ( o.m es) NA <L~ (O.OlOe) ~A <L~ ~ O.O~SS) NA NA Fihc~td vratcr SSEEEmEERC| EmiEm ~u12~z~mon~-~] I[4 M,~'ix Blk . hbbit Liv~..~. ~A B ~ (O.OtSS) wh <~ (0.0188) ~ ( O, Otas) mam| NA ~ (o.o~ss) NA NA ~ (0.m~) NA <L~ (0.018s) NA NA <L~ (o.o~as) NA ~ ( o.ol as) ~ (oo~as) ~A <L~ ( o.ot ss) NA <L~ (o.otss) NA 250 C| ommasToTTTo T T T2e T Tol] a] ~~I-2 CCGa r eaamemmseaT TL B F 8TTTaooTo lT= T E aa a 2ta TTa oo] To]] G~-~M-DI-~t-2 " 3% 81% 62% I~ 52% 6% ~% 93% 3% 71% NA ~% 71% 1~% 71% 74% 74% TE Eei |, T fooeise I..~keWhitefish ~ ( o.m as) ~ ( o.0~ as) =Trout LL -- pi TEos] = Eo Ssemios e S TIA RE HE High D~ 12J~'99, 12/2~99, 12/29/99, 12/3(Y9~, Hare ETa-g-7 0 E~el Vmi~ ~95 = IR NO - No~ ~ fmm NA - Not Al~icab~ ne. L0Q = Limit of Ouantltafio~ X - Vcrifi~ PFOS m~ ~trado~ . comes GEq-030-1iv~r.xll EEE ' a2 IN NA NA . y awoteesoss 3M MN01666036 22881144..00004400 aan et as a TE rETar E ee e HI FR. 22881144..00004411 W_MNO1685057 3M MN01666037 etEvraSemea _-- ]; _i = ! EC Eemmn | 2 lel a oe m o 4- yo [m EERSTa E oTT EToT s ores rs ere a re rors 22881144..00004422 W3M_MNMONT06186656003388 Mlscellan~o=s Liver Gm~p wmre----r FACT-GE N-030 MSU Environmental Samples Ivlatrix Blk Liver F [a aE TETe RESET RT RE Te LL rEEEsRETE TE Ta ;CA ---- me Eee 22881144..00004433 4:44 PM swnoressoss 3M MN01666039 MSUEoiramari sane FACT-GEN-030 MSU Environmental Samples Miscellaneous Liver Group D~e NA Pi]~:~d w~z NA NA E Te ae ta ee . E y e eere a r e 1r ] erer ------y a EE TER TTT e Ee TT Tu = ELF ITNA -- Tre BEE PFOSA" Pe~ smd~msam~z | Ei a = awoteesoko 3M MNO166604D 22881144..00004444 G 22881144..00004455 33MM_MMNNO011668656004411 FACTGENOY) FACT-CEN*033 22 2 32 i llSD Sld. I)~. M~rMSD P.~D aE Em 103 NA 1.?.3 1.2.7 NA Y= Es E fei] 0.0123 O.0O41~ N~ i |- or 22881144..00004466 i a aw noteesosz 3M MN01666042 FACT-GEN-033 ==. ~ample Data Eien 5. = Sim c2~ (,4) =use 32. ~ (~ 28~ (~ |<Ee lneenve Eo) Asma "En p- s~ ~ ~ sis (40 sls(~ SI~ (~ COB8 | afge]e ~m) ~) B= ~(~ 2 Ee ~ (~) iBJtO~ Senn ~ ~) RSD S~L D~. MS,'~SD B.PD EEE pi mt HERE EE p= je oo] =a fr Em mmm t14 ~ ~) ~(~ 2~(~ | EEE m(~ ~ ~t) meene------ =z al 22881144..00004477 awoteesoss 3M MN01666043 =[1---- ==1 2 [TeeT[[o.[aEE1T].] [== 1 2 T= Tels || EET o,o'xn <L,CI} Io.o~tll,/) 22881144..00004488 3M MN01666044 = & [1 ==.1251]. COTE EET Hos ELLIE 22881144..00004499 3M MN01666045 ?. 2. dE CT o TT ETa ] e ara 22881144..00005500 aw otess04s 3M MN01666046 Smmpkt Data Vm4em Li've~ % mg eer T=Teala1 2 lel=| * 4,CammyTwTmTmTo 61% Tal mn eee 2 wm [a| m Twlal Eero ome Tm om em a Ton om | ees 8Tm mmTal w| mes 2 wnTo Tm a) t45% TE Emer 8|e|aTETel 22881144..00005511 nme 3M MN01666047 ~d WilsonJones. 22881144..00005522 33MM_MMNNO011668656004488 33MM EENNVVIIRROONNMMEENNTTAALL LLAABBOORRAATTOORRYY MeTHOD METHOD EXTRACTION OF POTASSIUM PERFLUOROOCTANESULFONATE OR OTHER EXTRACTION OF POTASSIUM PERFLUOROOCTANESULFONATE OR OTHER ELECTROSPRAY/MASS SPECTROMETRY 'FLFULUOORROOCCHHEEMMIICCAALL CCOOM MPPOOUUNNDDSS FFRROOMM SSEERRUUMM FFOORR AANNAALLYYSSIISS UUSSIINNGG HHPPLLCC-ELECTROSPRAY/MASS SPECTROMETRY M Meetthhoodd NNuummbbeerr:: EETTSS--88--44..11 AAddooppttiioonn DDaattee:: 0033//0011//9999 " AAuutthhoor:r: LLiissaa CClleemmeenn,, GGlleennnn LLaannggeennbbuurrgg RReevviissiioonn DDaattee:: `AApppprroovveedd BByy:: LLaabboorraattoorryy MMaannaaggeerr DDaattee GGrroouupp LLeeaaddeerr Teme Technical RRevieewerviewer DDaattee "DaD te m LO SCOPE AND APPLICATION 1.0 SCOPE AND APPLICATION 11.11 SSccooppee:: TThhiiss mmeetthhoodd iissffoorrtthheeeexxttrraaccttiioonnooffppoottaassssiiuumm ppeerrfflluuoorrooooccttaanneessuullffoonnaattee ((PPFFOOSS)) oorr ootthheerr fflluuoorroocchheemmiiccaall ccoommppoouunnddss ffrroomm sseerruumm.. 11.22 AApppplliiccaabbllee ccoommppoouunnddss:: FFlluuoorroocchheemmiiccaall ssuurrffaaccttaannttss oorr ootthheerr fflluuoorriinnaatteedd ccoommppoouunndds.s. 11.33 MMatartriicceess:: RRaabbbbitit,, rraatt,, bboovviinnee,, mmoonnkkeeyy,, aanndd hhuummaann sseerruumm oorr ootthheerr fflluuiiddssaassddeessiiggnnaatteedd iinn the validation report the validation report. W Waorrdd 669/955 E--xracEEotfTTiSPS-Fo8sO-n-4S4l.1fom Seam Extraction of PFOS from Serum 22881144..00005533 Page1of14 Page 1 of 14 W3M_MNMONT06186656004499 22.00 SUMMARY oF METHOD 22.11 SUMT(T(pPahPhMiiFFirssAOOinRmmSSgeY))erttooeOhhrarooFgddooeMttnddhhtEeeeesTrsraccHnfrfrldiOliubbuoDmeeoerssrototthcchhyhheelee-mmppeirrricocotaacc-lleebddusstuuuuryrrrf|efeaafcefcootttarahrnneeetrtxxss(ttffrrMraaroBccomttEmiin)nssg.geerprpuuooImmtnt,aa,tsshososiirrsiuuoommtmtehhtppeeheerrrorfffdfllll,uuuuiioosddrrseso,o,vooeuuccnssttiiaafnnnnuggcoeasasrnuunolilcffiohoooennnnmsaittceeals wpwstaeeairrrneeidnageerxxdtrterr(aaacscgteteeeednd:3t:.a0PPnFFDdeOOfmSiS,ne,itPPhtiyFFolOOn-tsSSe)Ar.At,-,bAPPunFFtyOOilSoSenAAthpAAea,rr, i(EEMnFtgFtOBOrSeESaE)Eg..e-nOOItnHHi,ts,haiPPsFFmdOOeSSdtEEhtoAoeAd,h,,dMMes5es5v5a5e6m6n,p,lfaaleunnaoddnrossduucrhrtrrehoomeggaiacttaeels naffasinitnialtatartnlrloeyydorgtgteaeeeedrnndtiiohoee(nnrsvveoaappeupapagoioi3rrhrr.a0aiiatsstDoo3pprraaecruurfctitnninitpttiiiiltiolaionosddntrenreyiydd.sc.)iis.nnEEyttraAoaoiccnnMMhhgBieoeetEBxxnat.ttEprraaaaccicTThrtihehniisdseegrrtMMereoeccIatooBBgnn0seEEs.tnt2iietettxxuuiusttttmrereaaddadcncdtiiynneliisdso11nrr.t0e0oeimmmmttoohe.Lvvereeoonsddfaftmaamomnnepegddtltlehhappaasauunsnnttooduoollt,ntnohttttvheoohieeaaannls. 22 2.2 fTmTihelhteteeshsreeeoddssatahmmrpopllueegeehxxtatrra3acctctscsaaprrleeasaatinncaallsyyyzzreeinddgffeooallltlotoawwciihnneggdmmteoettahhoo0dd.2EEpTTaSSn--8n8-y-55l.o.11n or other sppropriste filter into glass autovials. or other appropriate method. s30 3o..01peDEeF0 PwIFNOmIST:oIOsp0 NesSrfluor0 ooctane0 sulfona0 te (anio0 nofpot0 assium0 salt Ca0 FyrSOy000 ." 323.1 3.2 PFOSA:perluorooctane sulfonylamide PFOS: perfluorooctanesulfonate (anion PFOSA: perfluorooctane sulfonylamide CiFnSOsNH; of potassium salt) C~F~vSO2NH2 C~F~TSOs" : 33 3.3 PFOSAA: P~.OSAA: perfluorooctane perfluorooctane sulfonylamido sulfonylamido ((eetthhyyla)acceettaattee CC~FF:~TSSOON2(NC(CHH;2CCHH:3))CCHH2iCCOO2;" "343.4 EE(ICtFFiOOFSS:EsE.S-OOOHNH:(:C22H((,NNC--eHettyhh)yylClppHee,rrCffliHuv,ooOrrboHooccitaannee ssuulffoonnaammididoo)-)-cetthhyyll aallccoohhooll 33.55 PCRgOFSIvESAO:2Np(eCrfHlzuCorHo3o)cCiHan2eCsHul2fOoHnyl PFOSEA: perfluorooctane sulfonyl eetthhyyllaammiiddee CCsFFxSvOSNO(2NC(ICLt/C2CHH:3))HH 33.66 MMS5S566:: CCu~FF~sTSSOON2(NH(H)()(CCHH:2CCOOOOHH)) 33.77 SSuumrrooggaattee ssttaannddaarrdd:: 11HH1-IHH.-22HH--22HH ppeerrfflluuoorrooooccttaannee ssuullffoonniicc aacciidd 4440.10 WWAARHRNeNIaIlNNtGGhSSaAAnNdNDDsCaCAfAevtUyTTIwIOaOrNNnSSinC gs 0000 0 4.1 44..H11..e11althUUhassaneendluduinninsivgavaefernersstiayamllawpplrareetrcicnsaasiuunuttegii,oosnnwssh,,iceeshsppemeccaiiyaallcllyyonlltaaabbioonrraapttaootrrhyyogcceoonaastt.ss,, ggoogggglleess,, aanndd gglloovveess wwhheenn handling animal tissue, which may contain pathogens. So0 55.1v0 eINmTTheEesRr0 eFeEaeRreEvnNeoCrE0 inSsterferenc0 es known0 at this tim0 e, 0000 5.1 There are no interferences known at this time. 60 66.0.10.BuTeh0 ewfeolslo0 rwing eq0 uipment0 is used0 whilep0 erformi0 ngthis0 method.0 Equiv0 alent e0 quipmen0 t i 6.1 Taacchcceeeppftotaablblloleew..ing equipment is used while performing this method. Equivalent equipment is 6.1.1 6.1.1 VVoorrtteexx mmiixxeerr,, VVWWRR,, VVoorrtteexx GGeenniiee 22 6.12 6.1.2 CCeennttrriiffuuggee,, MMisisttrraall 11000000 oorr I[EECC 613 6.1.3 SShhaakkeerr,, EEbbeerrbbaacchh oorr VVWWRR. 6.4 6.1.4 NNixitoroggeenneevvaappoorarattoorr,, OOrrggaannoommaattiioonn Ex-racionEoEfTTSPS-F8eG-a4S.l1from Serum Extraction of PFOS from Serum Page20f1e Page 2 of 14 3WM_MNMON106168656005500 22881144..00005544 66..11..55 BBaalalnacen((c+e0.10.01000 gg)) 1S 770.10 Su UPGPlLovIp EeSs ANp D MAu TERIAe LS saoMaTERIGS 77.21 EGplopveens dororf disposable pipettes 77..23 ENaplpgeenndeobroftotlreds,iscpaopsaabblleeopfipheotltdeisng 250mLand 1 L. 77.43 NVoallgumeenterbiocttflleass,ksc,agplaabslse, otyfpheoAlding 250 mL and 1 L 77.54 VLoClHumEeMtrivciafllsa,skglsa,sgs,la4ss0, mtyLpeglAass 77..56 I-CH:EM vials, glass, 40 mL glass Cenrifuge tubes, polypropylene, 15 mL 77.76 CLaebnetlrisfuge tubes, polypropylene, 15 mL 7.7 Labels 77..88 OOxxffoorrdd DDiissppeennsseerr ~-33..00tto0 1100.00 mmLL 77..99 SSyyrriinnggeess,, ccaappaabbllee ooffmmeeaassuurrinign5g5 y~tLLttoo 5500 BuLL 77..1100 GGrraadduuaatteedd ppiippeetttteess " 77..1111 SSyyrriinnggeess,, ddiissppoossaabbllee ppllaassttiicc,, 33 ecec . 77.122 SSi~r.innggee ffiillteerrss,, nnyylloonn,, 00..22 ylamm,, 2255 mnumn 77.1133 TTiimmeerr 77..1144 CCrriimmpp ccaapp aauuttoovviiaallss aanndd ccaappss 77..1155 CCrriimmppeerrss NNoottee:: MPPririiloorrl-ttooQuuTMssiiwnnaggteggrllaa.ssssRwwianarsreee aasnnyrddibbngooettsttlleaes,m, iriirnnsiseemu33mttoiimfmeess twwiiimttehhsmmweiettthhhaanmneootllhaaannnddol33, tt3iimrmieenssswwesiitfthhrom 3 Msseeippllaai-rrQaatTteeMvviiwaallass_ter. Rinse syringes a minimum of 9 times with methanol, 3 rinses from 3 80 REAGENTS AND STANDARDS 88..01 REATGypEeNT[rSeAagNeDntSTgAraNdDeAwRatDeSr, Mill-QTTMM or equivalent; ll water usd i this method should 8.1 bTbeeyMpMielillIli--rQQeTMaTgMenwwtaatgterearrdaaenndwdmamtaearyy,bMbeeilpplirr-oQovvidieoddrbebyedyquaaivMMaiilllellni--tQ;QaTTllOOwCCatPPellruussuTMTsMedssiyynsstttehemims method should 88.22 SSooddiiuumm hhyyddrrooxxiiddee ((NNaaOOHH)),, J1..TT BBaakkeerr oorr eeqquuiivvaalleenntt 88.33 TTeettrraabbuuttyylalmammmoonniiuumm hhyyddrrooggeenn ssuullffaattee(T(TBBAA)),, KKooddaakk oorr eeqquuiivvaalleenntt 88.44 SSooddiiuumm ccaarrbboonnaattee ((NNaa2;CCOO3)),, JJ.TT.. BBaakkeerr oorr eeqquuiivvaalleenntt 88.55 SSooddiiuumm bbiiccaarrbboonnaattee ((NNaaHHCCOO;3)),, JJ..TT.. BBaakkeerr oorr eeqquuiivvaalleenntt 88.66 MMeetthhyyll--TT--BBuuttyyll EEtthheerr,, OOmrnninsisoollyv,, ggllaassss ddiissttiilllleedd oorr HHPPLLCC ggrraaddee 88.77 MMeetthhaannooll,, OOrmninsisoollyv,, ggllaassss ddiissttiilllleedd oorr HHPPLLCC ggrraaddee 88.88 SSeerruummoorr bblloooodd,, ffrroozzeenn ffrroomm ssuupppplliieerr 88.99 FlFuiuoorroocchheemmicicaallssttaannddaarrddss 88..99..11 PPFFOOSS ((33MM SSppeceicaiallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 553388 88..99..22 PPFFOOSSAA ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),,. mmoolleeccuullaarr wweeigihtg==4h499t99 88..99..33 PPFFOOSSAAAA ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmicicaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 558855 Ex.tractionaEEfTrPSsF-s8O.Sa4.ntfrom Serum Extraction of PFOS from Serum PPaaggee 3 o01f 1144 22881144..00005555 33MM_MMNNO011668666005511 88..99..44 EEtFFOOSSEE--OOHH ((33MM SSppeecciiaalltyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 5S7700 889.9..55 PBFFOOSSEEAA ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmicicaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 552277 88..99..66 MM55566 ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 555577 88.99..77 `SSCuaurFrr1rooSggOaastteeH)ssttaamnnoddlaaerrdcd:u:l4a4r--HHw,,eippgeerhrftfllu=uoo4rro2ooo8ccttaannee ssuullffoonniicc aacciidd ((I1--HH,,1l--HH,, 22--HH,, 22--HH Cff~3SO3H) molecular weight = 428 885.9..88 OOtthheerr fflluoorroocchheemmicicaallss,, aass aapppprroopprriiaattee 810 8.10 RReeaaggeenntt pprreeppaarraattiioonn NNOOTTEE:: WWphrheeepnnerpparrteeippoanar,riinandggjullasartrggaeecrrcvvoorodlluiumnmgeelssytthhaann ilitsteedd iinn rreeaaggeenntt,, ssttaannddaarrdd,, oorr ssuurrrrooggaattee preparation, adjust accordingly. 881.100..11 1110000NN0mssoioddbiiueumamkhheyyrddrcroooxnxitidadieen((iNnNgaaOO5H0H)0:):mWWLeeiMiigglhhi-aaQppTMp~rgoxxwiiammtaeatrtee,llymyi22x0000ungglNNaaallOOsHoHl.i.dPPsoaoururer :ninttooaa dd1ii0ss0sso0ollvmveedLd..beSSattkooerrreeicinnonata1|inLLinNNgaal5lgg0ee0nnmee LbbootMtttlleiel.l.i-Q'~' water, mix until all solids are 88..1100..22 N11 NNNsAsooOddiHiuumsmohlhyuydtdiroronoxxiiinddteeo (a(NN1aa0OO0HHm)):L: vDDioillluuutmteeet11r00icNNfNlNaaakOOaHHnd11d::1i10l0.u.teMMteoeaasvsuourlruee1m1e00ummsLiLnogofMfi11l00i- . NQTMNawOatHers.oSluttoiorneiinnto2 a12150m0LmNLalvgoelunmebeottritclef.lask and dilute to volume using Milli- . 1+.0" 3oQ00.f5.r5~TlMMBwtAeatettnetrrrtaa.bobuuaStttyyo1larLaemmvmimonolnaounim1ieu2utm5mrimhhcLyycdodNrnrotoaagglgieenenninnsseuuglblff5oaa0ttttee0le((m.TTLBBMAA)i):l: lW W-eQiegiTMrhw,aaatppepprrroo.xxAiidmmjaauttseetllyyto1166p99H gg10 NuoussafiiTOnnggBH,Aaappappindrrtdoooxxsiialmmoa1awttlLeeyllvyyboe44lcu44amu~fseooter55it44chemmcopLLnHtooafcfinh11ian0ng0NNge5sNN00aaabOmOruHHLptl(M (yWW)hi.lhiliill-DeeQiaal'~ddudtdweiinnatggotettvrhh.oeeAllluadamssjteut smmvtiLLttohoopfMfHel1l0 NQQa'TMrO~ Hwwa,atteaerdr.d. sSSltotoowrrleeyi~bnneaaca11uLLseNNtahalelggpeennHeecbbhootattntllege.e.s abruptly). Dilute to volume with Milli- 88..1100..33..11 TTnBeBeAAdrerdeeququsiirunegsia1arcNchheeNeccsakkOpprHiroisorortltuootieeoaancchhuusseettoo eennssuurree ppHH== 1100.. AAddjjuusstt aass 88..1100..44 00a.p.22p55roMMximssaoontddeeiieluudymme2dcc6a.ua5rrsbbignooognnafa1ttseeNo//sdsoNioddauiiOumumHmcabbrsiiobccolaaunrrtabibotooennn.aa(ttNee&bb:uuCffOffsee)rr ((aNNndaa2:2CC1OO.0Y3N/gNaoaHfHCsCOoyOd)3i:)u:mWWeeiigghh babipiccpaarrrobbxooinnmaaatteteel((yNNa2_a6rH-.I5CCOOg3)o) fiinnsttooodiaum11 LLc-avvroobllouunmmaeettetrrii(cNc affll2aaCsskOk 3aa)nnddanbbdrrii2nn1gg.0ttoogvvooollfuusmomdeeiuwwimitthh MMiilllli- QQrTM~ wwaateter.r. SSttoorreeiinnaa 11 LL NNaallggeennee bboottttllee.. 88.1111 SSttaannddaarrddss pprreeppaarraattiioonn 88..1111..11 PPrreeppaarree PPFFOOSS ssttaannddaarrddss ffoorr tthhee ssttaannddaarrdd ccuurrvvee.. 88..1111..22 PfPrureeoppraoarcreeheoomttihhceearrlffllsuutooarrnoodccahhreedmmsiiaccraaell asscttacaennpddtaaarrbddlsse,, aa(fssoaarppeppxrroaopmprpirlaieat,tee.o.nMMeuwulolirtickcioonmmgpposontneaennndttard sfs1loo.ull1ouu0rttoiipocopnnhmeccmooEnniFtctaaaOiilSnnsiEitnna-ggnOd11Ha..0)r0d00)sppapprmemaPPcFFcOOeSpSt,a, b11l..e002(2fopprppmemxaPPmFFOOplSSeA,A,o,n00e..99w88o77rkppippnmmg PPstFFaOOndSSaAArAdA,, aanndd 8.11.3 W1.eli0gphpamppErotFxOimSaEte-lOyH1.0)0 mgof PFOS into a 100 mL volumetric flsk and record 8.11.3 Wtthheeeiaagcchttuuaaapllpwwreoeixiggimhhtta.tely 100 mg of PFOS into a 100 mL volumetric flask and record 88..1111..44 BBrriinngg ttoo vvoolluummee wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aa ssttoocckk ssttaannddaarrddooff aapppprrooxxiimmaatteellyy 11000000 ppppmm (pg/ml). 88..1111..55 DaDipilpluurttoeexitthmhaeetssettlooycckk50ssoopllpuuttmiioonn wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aa wwoorrkkiinngg ssttaannddaarrdd 11 ssoolluuttiioonn ooff 8.116 aDpilpurtoexwimorakteilnyg5s0tapnpdmard 1 with methanolfor a working standard 2 solution of 8.11.6 Daappipplrurotoxex.w. 55o..r00kippnppgmm.s.tandard 1 with methanol for a working standard 2 solution of Ex-tractionoEEfTTSFS-Oe8S-a4.n1fiom Serum Extraction of PFOS from Serum Page dorle Page 4 of 14 33MM_MMNNo01166B6s6005522 22881144..00005566 88..1111..77 DaDipilplurutoteex.wwo0or.rk5k0iinnpggpmss.ttaannddaarrdd |1 wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aa wwoorrkkiinngg ssttaannddaarrdd 33 ssoolluuttiioonn ooff 812 Surrogaatpeprsotxo.ck0.s5t0apnpdmar.d preparation 8.12 S8.u1r2r.o1gaWteeisgthocakppsrtoaxnidmaartedlypr5e0p-a6r0amtigonofsurrogate standard 1-H, 1-H, 2-H, 2-H, 8.12.1 CF sSO;H into a 50 Weigh approximately CsF13SO3H into a 50 mm5iL0-6vvo0olluummmgeetotrrfiiccsuffrllraaossgkkaaatnneddstrraeenccdooarrdrddtthhl-eeHaa,cctlt-uuHaall, ww2e-eiHigg,hht2t..-H, 88..1122..22 BpBprrmiin.ngg ttoo vvoolluummee wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aa ssuurrrrooggaattee ssttoocckkooff aapppprrooxxiimmaatteellyy 11000000--11220000 8.12.3 Pprpemp.are a surrogate working standard. Transfer approximately 1 miofsurrogate 8.12.3 wPsstotroeorccpkkkairntteoogaaasts11au00nrdrmmoagrLLdaotvvefoolwluu1omm0er0ekttriprnipigccm.ffslltaaaRssnkekdcaaaornndrdd.dbbTtrrihirnenaggnatstcofoteuvvralooallpvuupommrloeeuxmwwiemiitttahhrtaemmnlesyetfteh1hraarmnendoLo.lloffoforrsuaa,rrogate working standard of 100 ppm. Kecord the actual volume transferred. 9.0 SAMPLE HANDLING. 9.19.0 9.1 SAMAAllPllLssEaammHppAllNeessDaaLrr1eeFIrrGeeccedivveedd ~frroozzeenn aanndd mmuusstt bbee kkeepptt ffrroozzeenn uunnttiill tthhee eexxttrraaccttiioonn iiss ppeerrffoorrmmeedd. 92 Allow samples to thaw to room temperature prior to extraction. 9.2 Allow samples to thaw to room temperature prior to extraction. 1 1100..00 QQUUAALLIITTYY CCOONNTTRROOLL . 1100.11 SSoollvveenntt BBllaannkkss,, M Meetthhoodd bbllaannkkss aanndd matrix matrix blanks blanks 1100..11..11 AAnn aalliiqquuoott ooff11..00mmLL mmeetthhaannoolliius usseedadass aa ssoollvveenntt bbllaannkk.. 1100..11..22 EEaxsxtmtrreaactctht ottwdwoobl11an..0k0s.mmLL aalliiqquuoottssooffMMiillli-lQ-TQMTM wwaatteerr ffoolllloowwiinngg tthhiiss procedure procedure and and use use 10.1.3 aEsxtmraectthotdwobla1n.0ksm. L aliquots ofthe serum following this procedure and use as 10.1.3 Emmaxatttrrriaixxctbbltlwaannokkss.1..0SSmeeeeL11a11l.i.11q..u44,o.ts of the serum following this procedure and use as 1100.22 M Maattrriixx ssppiikkeess 1100..22..11 PPthrreeeppaaacrrceeuaranancddyoaafnnaatllhyyezzeeexmmtaratatrcritixxiosnsp.piikkee aanndd mmaattrriixx ssppiikkee dduupplliiccaattee ssaammpplleess ttoo ddeetteerrmmiinnee. 10.2.2 tPPhrreeeppaaacrrceeureeaaacccyhhossfppitikhkeee uuessxiitnnraggcaatiosSnaam.mppllee cchhoosseenn bbyy tthhee aannaallyysstt,, uussuuaallllyy tthhee ccoonnttrrooll mmaattrriixx 10.2.2 rreecceeiivveedd wwiitthh eeaacchh ssaammppllee sseett. 1100..22..33 AEEdxxdpipetecictotneeaddlccsoopninkcceeensntmrtaartyiaobtniesvowiinlnisllcllffuaadlllelidinnatnthhdeemmmaiyidd-f-rrlaalnnggneeotohffetthlhoeewii-nnriiattinaalgl eccoaalfliitbbhrraaettiiooinntaccluurrvvee.. cAcaadlliidbbirrtiaaottiniooannl cscupurirvkveee.s. may be included and may fall in the low-range ofthe initial 1100..22..44 P`Prmreeippnaairrmeeuomonnoeemf2matamrtaritixrxsispxpisikkpeiekaaennsddpemmraatbtraritixcxh.ssppiikkee dduupplliiccaattee ppeerr4400 ssaammpplleess,, wwiitthhaa minimum of 2 matrix spikes per batch. 10.3 10.3 CCoonnttiinnuuiinnggccaalliibbrraattiioonn cchheecckkss 1100.33..11 PPcarrleeippbaarrareeticcoononncttuiirnnvuueii.nngg ccaalliibbrraattiioonn cchheecckk ssaammpplleess ttoo ensure the accuracyofth initial ensure the accuracy of the initial 10.3.2 calibration curve. PPrreeppaarree,, aattaa mmiinniimmuumm,, oonnee ccoonnttiinnuuiinngg cchehck ppeeerr cggrrookuupp ooff 1100 ssaammppleless.. FFoorr 10.3.2 eexxaammppllee,,iifraa ssaammppllee sseett == 3344,, ffoouurr cchheecckkss aarree pprreeppaarreedd aanndd eexxttrraacctteedd.. 1100..33..33 PtPhrreeeppiaanriretealeeaacccuhhrvecc,oonnttiinnuuiinngg ccaalliibbrraattiioonn cchheecckk ffrroomm tthhee ssaammee mmaattrriixx used used to to prepare prepare the initial curve. Es. iracoEEftTTPiSSF-os8O-San4.lfIrom Serum Extraction of PFOS from Serum PPaaggee 5Sooff 1144 22881144..00005577 33MM_MMNNO011668686005533 1100..33..44 TTcuhhreeveee.xxppAeedccdttieetddioccnooannlccesenpntitrkraaetstiiomonnassywwibilellliffnaalclllluwwdiiettdhhiitnnhatththeefammlliidid-n-rrtaahnneggleeooowft-frthhaeengiiennoiittfiiaaltlhcceaalliiinbbirrtaaiattliioonn ccclauaollrwiivbbeerr.naattdiAiooofndndtccihuutirerovvence.aa.lliTsTbphrhaiiiktssieoisissnmnnceeauccyreevsbsesseaa(rifrnyoyicrilfufetxdthhaeeemdpaatlnnheaaa,lltyy5sfsattpllmmpiunus--bsttthqeq1uu0la0aonnwtptipi-ttbraaa,ttneergauuetsshoiiennfrggtthoohennallniynyittthihaeel 5 ppb low end 5 ppb - 1000 ppb). of the calibration 1000 ppb). curve (for example, 5 ppb - 100 ppb, rather than 011.0 CALIBRATIONAND STANDARDIZATION LLL CAPLreIBpRarAeTImOaNtrAiNxDcaSlTiAbrNaDtiAoRnDsItZaAnTdIaOrNds 11.1 PTrLepLareTrmanastfreirx c1 amliLboraftsioenrusmtatnod2ar1d5smi. centrifuge tube. 11.1.1 Transfer 1 mL of serum to a 15 mL centrifuge tube. 1111..11..22 IvIfFommlouosmstetsssaaemqmuppalllee tvvoootlluhumemesessamaaprrleeelleevssosslutthmheaasnn.11..0D0 ommLLn,o,teexxetxtrrtaarccatcttsstteaasnnsddaatrrhddassn ww0i.itt5hh0 mmmaaLttrroiifxxmatrix. vRRoeeclcuoomrrddeseeeaaqcchuhasslaatmmopptllheeevvsooallmuumpmleee oovnnolttuhhmeeeeesxx.ttrrDaaccottiinooonntssehhexeetetr.ta.ct less than 0.50 mL of matrix. 1111..11..33 WWbhehitilwleeeeppnrreeapplai.aqr~uioinntggs.aattootalotoffttawweenlnttyy aalliiqquuoottss iinn 1155 mmLL. cceennttrriiffuuggee ttuubbeess,, mmiixx oorr sshhaakkee 11.1.4 bTewtwoe|enmLaliaqluioqtuso.ts, orotherappropriate volume, sears mvatreix blanks. Typically o 11.1.4 uTutshswieestothshee1ectmssittoLaannn,addltaiaoqrruddsopccitsoko,enn,occeriennontdtrtuhapretliaroitcanapisatpoeanr,nnodsdtpswrspiopaiitkskeitinnvaggnoadlauammmroduoecnu,utnsrtesvsrevslliei,sstatfeesoddirmainnaTttTraoiatbxablllobeeflae11n,,ikagasttth. tthhTeeeeynpeeinncddaloolyff : 4 tsshttaiasnnddsaearcrddtisso,,ntt,wwtooo smmpaaitktrreii,xxibbnlladannukkpssl,i,caaanntedd,tttwwwooo mmseteattnhhdooaddrdbbllcaaunnrkkvsse.s, for a total or" eighteen 1111..11..55 RRraeenffgeeerrsttooanvvdaalltiihddeaattLiioionnnerraeerppCooarrtlt.iEEbrTTaStS-i-8o8-n-44R..a00n&&geEE(TTLSCS-R-88)--55f.o.00r--cVVa-l-1i1,b,rwwahthiioiccnhhcullirissvttesss.tthhee wwoorrkkiinngg ranges and the Linear Calibration Range (LCR) for calibration curves. 1111..11..66 UUstssaeendAAarutdtasac.chhmmSeeenenttSDDeictaaissoaannn1aa3ii.dd0iitnnoccacalalclcucululalatatitinenggatcthhtueealccoocnnoccneecnentntrrtaarttaiitooinnossnosofotffthhPeeFwwOoSorrkkiiinnngg scctaaallniibbdrraaarttdiioson.n ssStteaaennddSaarerddcsts.i.on 13.0 to calculate actual concentrations of PFOS in 1111.22 TTwoooreekaaiccnhhg ssstttaaannndddaaarrrddd,,fbbollaanntkkh,,e oocrroncccooennntttiirnnauutiiinnoggnccthhoeeccfkakl,, waaiddtddhiaanpppptrhrooeppcrraiilaaittbeeraaatmmiooonuuncnuttorovfefssruuarrnrrgooeggaa5tteeppb - w1100o00rk00inppppgbb.s.tandard for the concentration to fall within the calibration curve range 5 ppb - 1111.33 EE10xxtterrsaatccatbtlssippsiihkkeeeaddcmmhaatintriritiixxalssttcaaunnrddvaaerrddossnfftoohllellomowwaiisnnsggs11p22e.c.66t--r1o1m22e..1t1e66r.oofftthhiiss mmeetthhoodd.. UUssee tthheessee ssttaannddaarrddss to establish each initial ciarve on the mass spectrometer. ErLacteiosnoEfTsPSF-a8O-4S.1from Serum Extraction of PFOS from Serum 22881144..00005588 PPaaggee 6Gooff 1144 33MM_MMNNo01166B6s6005544 Tabie 1 Table 1 AApppprrooxxiimmaattee ssppiikkiinngg aammoouunnttss ffoorr ssttaannddaarrddss aanndd ssppiikkeess UUssiinngg 11..00 mmLL ooff mmaattrriixx approx. conc -- Working standard Approx. final conc. of analyte inmatrix (approx. conc.) analyte in matrix [1 BBalankk | [O_ . 500 ppo m s | c 1lO0 o |p 000.0op 0s5ppppmmm| |0_ .500 ppo m s | 0 2200 0|"p 000.0lp 100ppppmmm| [5.s 00 ppm o | 0 55 1 pp 000.202S5ppppm mm | [_S005p.00pppmm [10lO | 000.50500ppppmm | 5.00 ppm 20 0.100 ppm 50.0 ppm 5 0.250 ppm [00p 5500..00 m ppppmm [151105 0.500 ppm | 070.57500ppppmm | . 5500..00 ppppmm [ 20 2 TT "io1o.0p0 0 pppmm IZ.0 PROCZD~rRE 1122..11 OObbttaaiinn ffrroozzeenn ssaammpplleess aanndd aallllooww ttoo tthhaaww aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree oorr iinn aa lluukkeewwaarrmm 122 wwVaaottreetrrebbxaattmhh.i.x or 15 seconds, then transfer 1.0 mL o other appropriate volume to. 15 mL Vppoooll~yyepprrxoopmpyyilxleenfnoeercce1en5nttrsriieffcuuoggneedstt,uubbtee.h.en transfe~ 1,0 mL or other appropriate volume to a 15 mL 123 Return unused samples to freezer afer extraction amounts havebeen removed. 12.3 Return unused samples to freezer after extraction amounts have been removed. 1122..44 RReeccoorrdd tthhee iinniittiiaall vvoolluummee oonn tthhee eexxttrraaccttiioonn wwoorrkksshheeeett 1122..55 LLaabbeell tthhee ttuubbee wwiitthh tthhee ssttuuddyy nnuummbbeerr,, ssaammppllee IIDD,, ddaattee aanndd aannaallyysstt iinniittiiaallss.. SSeeee aattttaacchheedd `wwoorrkksshheeeett ffoorr ddooccuummeennttiinngg tthhee rreemmaaiinniinngg sstteeppss.. 1122..66 SSppiikkee aallll ssaammpplleess,, iinncclluuddiinnggbbllaannkkssaanndd ssttaannddaarrddss,, rreeaaddyy ffoorr eexxttrraaccttiioonn wwiitthh ssuurrrrooggaattee `sstatnanddaarrdd aass ddeessccrriibbeedd iinn 1111..22.. 1122..77 SSppiikkee eeaacchh mmaattrriixx wwiitthh tthhee aapppprroopprriiaattee aammoouunnttooffssttaannddaarrdd aass ddeessccrriibbeedd iinn 1111..11,, oorr TTaabbllee 11iinntthhaatt sseeccttiioonn,,ffoorrtthhee ccalaibrlatiionbccururrvvaeesttsataninddaoardrndss.. AAllssoopprreeppaarreemmatartriixxspspiikkeessaanndd c`coonnttiinnuuiinngg ccaalliibbrraattiioonn ssttaannddaarrddss.. samples for 15 seconds 1122..88 VVoorrtteexx mmiixx tthhee ssttaannddaarrdd ccuurrvvee ssaammpplleess,, mmaattrriixx ssppiikkee ssaammpplleess,, aanndd ccoonnttiinnuuiinngg ccaalliibbrraattiioonn samples for 15 seconds. 11:22..99 CChheecckk ttoo eennssuurree tthhee 00..55 MM TTBBAA rreeaaggeenntt iiss aatt ppHH 1100.. IIff nnoott,, aaddjjuusstt aaccccoorrddiinnggllyy.. 1122..1100 TTooeeaacchh ssaammppllee,, aadddd 11mmLL00..55 MMTTBBAAaanndd 22mmLL ooff'0.20.52M5M ssooddiiuumm ccaarrbboonnaattee//ssooddiiuumm `bbiiccaarrbboonnaattee bbuuffffeerr.. 12.13 Centrifugefor 20 to 25 minutesata setingof 3500 pm,or until layaerewrelsl separated. 1122..1111 UUssiinngg aann OOxxffoorrdd DDiissppeennsseerr,, aadddd 55 mmLL mmeetthhyyl-l-fteerrrt--bbuuttyyll eetthheerr.. 112:2..1122 CCaapp eeaacchh ssaammppllee aannddppuuttoonntthhee sshhaakkereaartt aa ssetetingtooftf33i0000nrrppgmm,, ffoorr 2200 mmiinnuutteess.. 12.13 Centrifuge for 20 to 25 minutes at a setting of 3500 rpm, or until layers are well separated. . Essa ETS-g-4.1 Exsction of FOS from Serum Extraction of PFOS from Sentm Page rats Page 7of14 a3MW_MMNND011666656005555 22881144..00005599 1122..1144. LLaabbeell aaffrreesshh 1155 mmLL cceennttrriiffuuggee ttuubbee wwiitthh tthhee same Same information information as as in in 12.5. 12.5. 12.15 Remove 4.0 mLofthe organic layer to this clean 15 mL centrifuge tube. 1122..1165. 12.16 RPhPuouetutmreesoaavccehh 4s.a0mmplLe sample on the analytical nitrogen evaporator until ry, approximately of the organic layer to this clean 15 mL centrifuge tube. on the analytical nitrogen evaporator until dry, approximately 1 1 to2 to 2 12.17 hAodudrs.1.0 mL ofmethanol to each centrifuge tube using a graduated pipette 1122.1178 AVodrdte1x.0mmixLfoorf m30etsheacnoondlst.o each centrifuge tube using a graduated pipette. 1249. 12.18 12.19 VFAAiottltraettrceahxicn2amoh0ix.a202f1o~u.rmm5 3m0nnLyyslleolocnnaosnmmsdeessas.uhhtffoivlitietlr ttooo alo33wcc-cvosslyyurriimnneggeeauaatnnoddvittarrlaanwnsshffeeernrtthnheeescseaasmmspaplrleye to to this this syringe. syringe. 12.20 12.20 FLLmaaialtbbtreeeirllxi,ttnhhtfeeoinaaaauultt1soo.ov5vliivamaellnLwtw,igittelhhaxstttshrhaeaecutsstittououvnddiyyadalnntouuerm,mblaboenewrdr,-,vaaanonnaliliumymmsaailel(snna)uuupmmtoebbvreeifrarolraawmnniddhnegggneetnnnhddeeeecrere,x,stsssraaaarcmmytp.iplolnee.ttiimmeeppooiinntt,, 1221 mCaaptriaxn,dfisntaolrseoelvxetnrat,cetxattrarcotioomn tdeamtep,eraantduraenaolrysatt(sa)ppperrofxoirmmatineglyth4eeCxturnatcitlioanna.lysis. 12.22 12.21 12.22 CCnCooaotmpmepabplnoeledottkeestottohrhreeeieenexxcxtlttrruraadacdectttiiisononnasttwwurooodryorkkmsbshihnetedeeeemtrt,,,paaeattr5tataatacupchprheereoddoprtrtoioaatttthheaii.pss pddroooccxuuimmmeaentntet,l,yaa4nnddCttaapupneeitiiln atthnheaeslyststuuisdd.yy notebook or include in study binder, as appropriate. " 1133..00 DDAATTAA AANNAALLYYSSIISS AANNDD CALCULATIONS CALCULATIONS : 1133.11 CCaallccuullaattiioonnss 1133..11..11 cCCaaallliccbuurlalaatttieeonaaccstttuuaaanlldaccroodnnscceeunnsttirJna'agttiitoohnnessfoooflflPPoFFwOOinSSg,,eooqrruaootttihhoeenrr: aapppplliiccaabbllee fflluuoorroocchheemmiiccaall,, iinn AcLammlloibLforaofstfitosstantaannsndtddaaaanrrr+ddddaxxrmdccLsooounnsfcciesnenungtrtrtrrahaotetgiioafoontnoleloofsfwsastnitnaadgnnaddreaadqrrudd+a((tii~unottgngi:a//mlmLmL))at volume (mL) - = mL of standard + mL of surrogate standard + initial matrix volume (mL) Final Concentration (g/mL)of PFOS in matrix Final Concentration (~g/mL) of PFOS in matrix 140 METHOD PERFORMANCE. 14.114.0 14.1 MTTEfohThreeHsOmmpeeDectithhPfiooEcddRMFddODeettRLeeM cctatAiinooNdnnCllliiEimmmiiittto((fMVqDDuLaLn))tiiitssaaatnniaoalnlyy(tteeLOaannQdd)mmvaaatltruriiexxs ss(ppseeecceiifAfiitcc..taRRceehffmeeerrntttoosMMBDDaLLndrreeCpp)oo.rrtt 142 14.2 fTTtohhhreeesqfpfuooaelllclilioftowiywcoiinMfnggtDhqqueLuaalealixintttydyralcccioomtnnitiottrrnooolalfnqssdaaummaapnnplatlieeltssyastaaisorreenee(xxLttOrraaQcctt)eevddawwluiietthsh (ecsaaeccehhAbbaattttaccchhohomffsesaanmmtpsplBleessatntoodeeCvvaa)l.luuaattee t1h4e.2q.u1alMiteytohfotdhebleaxntkrsacatinodnmaantdriaxnballyasiks. 14:22 14.2.1 14.2.2 MMMpareaetcttrhriiiosxxidossnbppilioakkfnteekhaasennaddenxmmdtaratmatecratiiixtxroinssx.ppibikklaeenddkuuspp.lliiccaattee samples samples to to determine determine accuracy accuracy and and 14:23 pCorenctiisniouninogfctahleiberxattriaocnticohne.ck samples to determine the continued accuracyofthe 14.2.3 initial calibration curv. Continuing calibration check initial calibration curve. samples to determine the continued accuracy of the 143 Refer to section 14 ofETS-8-5.1 for method performance criteria 14.3 Refer to section 14 of ETS-8-5.1 for method performance criteria. 15.0 POLLUTION PREVENTION AND WASTE MANAGEMENT 15.115.0 15.1 POSHSLiaagLmmhUpplBTleeITOwwUNaascsPtotRenetEsiaV sindEdeiiNrssspTp,ooIOssaeeNndddAiiunNnsDbbeiidW oohhgAlaaazzSsaaTsrrEddpiMccpooeAntntNttaeaAiiwnnGeaeErrsssM,,tEffilNlasamTdmimmsaapbbolsleeedssooillnvvbeenrntot kwweaansstgteelaiissssddciiossnpptooassieendderiisnn hllooigcchaatteBeddTiiUnn the laboratory. containers, and the laboratory. used glass pipette wasteis disposed in broken glass containers Ex-tractionEEofTmPSs-F8eO-a4S.l1fom Seam Extraction of PFOS from Serum Page Bol 14 Page 8 of 14 W3M_MNMON106186656005566 22881144..00006600 1166.00 RREeCcOomRpDsS 1166..11 CnCoootmmepbploleeottkee otthrheeineecxxltturraadcceittiinootnnhwweoor3r-kkrssihhnegeeestttaauttdttyaacbchihneedddertto,o atth5hiiasspmmpreeottphhrooidad,t,e.aanndd ttaappee iinnththeestsutuddyy notebook or include in the 3-ring study binder, as appropriate. 1720 ATTACHMENTS 1177..01 ATATtAtaCcHhMmeEnNtTAS, Extraction worksheet 1177..12 AAttttaacchhmmeenntt AB,, MExDtLraIcLtioOnQwvoalrkuessheaentd summary 1177.32 AAttttaacchhmmeenntt BC,, MCalDiLbr/aLtOioQn svtaalnudeasradncdonscuemntmraartyion worksheet 17.3 Attachment C, Calibration standard concentration worksheet Bo18R.0eRmEmFEeRsEeNCeEsS 18.1 The validation report associste with this method is ETS-8-4.0 & 50-V-1 18.1 The validation report associated w~th this method is ETS-8-4.0 & 5.0-V-1. 1188..72- FFAACCTT--MM-3-.31.1,, ""AAnnaallyyssiissooff SSeerruumm oorr OOtthheerr FFlluuiidd EExxttrraaccttss ffoorr FFlluuoorroocchheemmiiccaallss uussiinngg 'I-HIPPLLCC-E-Eleleccttrroosspprraayy MMaassss SSppeeccttrroommeettrryy"" 1 1199..00 AAFFFFEE(C:TTEEDD DDOO(C:UUlMVEIENrOT'SS 19.191.1 EETTS'-S8-8-5-5..11,, ""AAnnaallyyssiiss ooff SSeerruumm oorr OOtthheerr FFlluuiidd EExxttrraaccttss ffoorr FFlluuoorroocchheemmiiccaallss uussiinngg HHPPLLCC-- Electrospray Mass Spectrometry" Elcctrospray Mass Spectrometry" 200 Revisions 20.0 REVISION8 Number ReRveivsisiioonn 1 Number 1 ReasonForRevision Section 12.21 Changed to Rinecalsuodne FsaomrpRleesvtiosiroangeat room temperature. Section 12.21 Changed to include sample storage at room temperature SSeeccttiioonn 1122..1133 AAddddeedd tthhee sshhaakkeerr ssppeeeedd.. SSeeccttiioonn 1122..1177 FFiinnaall vvoolluummee iiss 11..00 mmLL;; nnoott aaddjjuusstteedd ffoorr iinniittiiaall vvoolluummeess lleessss tthhaann 11..00 mmLL.. Dae RReevviissiioonn 0044D//00a22/t/e9999. . Emssa ETS-8-4.1 Extraction of FOS fom Serum Extraction of PFOS from Serum 22881144..00006611 Page9atis Page 9 of 14 33M UMNNO01166656005577 44..11..22 WWanhhdeecnnlohhtaahnniddnllgiinngg ssaammpplleess oorr ssoollvveennttss wweeaarr aapppprroopprriiaattee pprrootteeccttiivvee gglloovveess,, eeyyeewweeaarr,, and clothing. 42 4.2 CCaauuttiioonnss:: 442.2..11 OOprppeeesrrsaauttreeettehhxeecessooeldlvvsee4nnt0t 0ppuubmmarpp,tsshbbeelHeoPw1la1abo0ba0acwckwkilpplrreeinssisstuuirarteeeoofafu4t4o00m00batbaiarcr ((s5h58u8t00d00owppsnsii.)).. IIfftthhee bbaacckk pressure exceeds 400 bar, the I-IP 1100 will initiate automatic shutdown. 442.2..22 DDoo nnoott rruunn ssoollvveenntt ppuummppss ttoo ddrryynneessss.. 55..00 INTERFERENCES INTERFERENCES 55..11 TTstooormmaiginneiimmoirizzaeeniyinntpteaerrrftfeoerrfeenincncesesstrwwuhmheeennntaaantnaialolyynzztiinhnaggtsscaaommmpplelesess,i,nTTceeoffnlltooannctsshhwaaillltlhnnoottthebbeesauumsspeelddeffooorrr essxaatmmrappcltlee. storage or any part of instrumentation that comes in contact with the sample or extract. S6O.0EEoQuUeIPwMeEeNrT 1 66..11 EEmqoqduuiiifppimmceaetnnittonllisissttieenddtbbheedlorowawwmmadaaytyabbaeesmmmoeodtdihiffoiieeddddiiennviooarrtddieeornrstt.oo ooptpimtizietthhmeesisyyszstteeemm.. DDooccuummeenntt aannyy modifications in the raw data as method deviations. . 66~114"~1i MMciiiecccrrtoormmosaapssrssayQQuiuaoantitttzrraootiTIolInttrsiioppullreeceqq.uuaaddrruuppolleeMMaassss SSppeeccttrroommeetteerr eeqquuiippppeedd wwiitthh aann 6.12 eHlPe1ct1r0os0prlaoywipounliszeatsioolnvesnot6rpcuem. ping system, solvent degasser, column compartment, 6.1.2 Iaa-nnIPdd1aa1uu0tt0oosslaoamwmpplpleeurrlse solvent pumping system, solvent degasser, column compartment, 77..00 SUPPLIES SUPPLIES AND AND MATERIALS ~IATERIALS 77..11 SSuupppplliieess 77..11.11 HHiigghh ppuurriittyy ggrraaddee aaiirr rreegguullaatteedd ttoo aapppprrooxxiimmaatteellyy 110000 ppssii ((hhoouusseeaiarirssyysstteemm)) 77..11.22 HHinPPtLLheCCraaannwaallydytatiticcaaall ccoolluummnn,, ssppeecciiffiiccss t~oobbee ddeetteerrmmiinneedd bbyy tthhee aannaallyysstt aanndd ddooccuummeenntteedd 7.13 Cinatphpeerdawautdoawtiaals or capped 15 mi centrifuge tubes 7.1.3 Capped autovials or capped 15 ml centrifuge tubes 88..00 REAGENTS AND REAGENTS AND STANDARDS STANDARDS 88.11 RReeaaggeennttss 88..11.11 MMeetthhaannooll,, IH-[PPLLCC ggrraaddee oorr eeqquuiivvaalleenntt 88..11..22 MM1,iiolllrli-ieQq-TuQMiTMvawwlaeatntete,rr (a(AnAdSSTTbMMetpytrypopeveiIdI))e,,daalblllywwaaatMteeirrluulss-eeQddTiinOntCthhiiPsslmmuestethshyoosddtessmhhoooruluodtlbhbdeeerAAvTTenSSdMMorttyyppee I, or equivalent, and be provided by a Milli-Q TOC Plus system or other vendor 88..11..33 AAmmmmoonniiuumm aacceettaattee,, rreeaaggeenntt ggrraaddee oorr eeqquuiivvaalleenntt 88..11.33..11 WWhheenn pprreeppaarriinngg ddiiffffeerreenntt aammoouunnttss tthhaann tthhoossee lliisstteedd,, aaddjjuusstt aaccccoorrddiinnggllyy.. 88..11.33.22 22`..a00mmmmo_MnMiaaummmmmacooentnaiituuem.m Paacoceuettraattieentssooolaluut2tii0oon0n:0: WWmeLeiiggvhholaauppmppertroorxixciimmcaaotnteetllayyin00e..r3300c00onggtaining 2ta2em00m00mp00eormmantiLLuurmMMei.aillclliei-t-QaQtT"eMTM. wPwaoatuteerrr,,inmmtoiixxauu2nnt0ti0ill0aallmll ssLoovlliioddlssumaarreeetrddiiicsssscooollvnveetadd.i.neSSrttcooorreentaaattinrrioonoogmm temperature. Ana. lofyLsivEEeeTrmSsE-x8et-rn7a.co0t Using ESMS Analysis of Liver Extract Using ES/MS PPaaggee330o1f1100 33MM_MMNNO011668686005588 22881144..00006622 88.22 SSttaannddaarredss 882.2..11 TTpyrypepipicacaralellldyy dttwuwrooinmmgeettthhheooeddxtbbrllaaacnntkkisso,,nttwpwrooocmmeadatutrrrieixx. bbllRaaennfkkessr,, taaonnddETeeSii-gg8hh-tt6ee.ee0nn,mmaattrriixx ssttaannddaarrddss aarree prepared during the extraction procedure. Refer to ETS-8-6.0. 99..00 SAMPLE BANDLING SAMPLE HANDLING 99..11 aFFrrreeessshhtommraeatdtrriiixxn csstatapnapdneaddrdaasurtradoresveiapplrrseeppoaarrrceeaddpwwpieittdhh 1ee5aaccmhhlaacnneaalnlytysrsiisifs.u. geEExxttutrrbaaeccstteeuddnisslttaaannnaddlaayrrsdidsss.aanndd ssaammpplleess 92 aIFraenasltoyrseids iwnilclabpepeddelaauyetod,vieaxlstroarctceadppsteadnd1a5rdmslacnedntsriafmupgleestumbaesyubnetisltaonraeldysaits.room 9.2 temperature, or refigerated at approximately 4 C, until analysis can be performed. If analysis will be delayed, extracted standards and samples may be stored at room ' temperature, or refrigerated at approximately 4 C, until analysis can be performed. 00 QuALITY CovTROL 1100..01 QMUetAhLoITdYBClaOnNkTsRaOnLdMatrix Blanks 10.1 M10.e1t.h1oSdoBlvlaenntksblaanndks-M,maettrhixodBbllaannkkss, andmatrixblaarenprekparsed and analyzed with 10.1.1 eSaoclvhebnattbclhantoksd,emteertmhiondebcloanntkasm,iannadtimonatorirxcbalrarnyokvsearr.e prepared and analyzed with " 10.12 eAacnh baatlcahmyteotzhdoeetderbmliannekacnodntaammaitnraitixobnloanrkcparriryorotveore.achcalibrationcurve. 10.1.2 Analyze a method blank and a matrix blank prior to each calibration curve. . 1100..22 MMat~rriixx SSppiikkeess 1100..22..11 MrMeacatotrrviiexxrssyppeiikfkieecssiaaenrrecypp.rr.eeppaarreeddaanndd aannaallyyzzeedd ttoo ddeetteerrmmiinnee tthhee mmaattrriixx eeffffeeccttoonn tthhee 10.2.2 Mreactoivxersypeifkfeicdiuepnlciyc.a.tes are prepared and analyzed to measure the precision and the 10.2.2 recovery for Matrix spike recovery for each analyte duplicates are each analyte. prepared and analyzed to measure the precision and the 10.23 10.2.3 AmAninanalilyymzzueemaa ommfaat2trrsiixpxsispkpeiiskkpeeeaarnnbddatmmcahattrriixx spike spike duplicate per forty duplicate per forty samples. samples. Witha With a 10.2.4 mMaintiimxumspiokfe2nsdpikmaetsrpiexrsbpaitkceh.duplicate concentrations will all in the mid-range of 10.2.4 Mttrhhaeeantgiirneniioxittiifasatlplcihcakalelinibabirnraaadttliimoocnnaactlucriiruxbvrrveasetp..iikonAAedcddduduirfipvtieliioo.cnnaaatlel spike concentrations may concentrations will fall in spike concentrations may fllthe fall nthe low- mid-range in the low- of range of the initial calibration curve. 1100.33 CCoonnttiinnuuiinngg CCaalliibbrraattiioonn CChheecekkss 10.3.1 10.3.1 CtChooenntctiainnliuubiirnnaggticcoaanlliicbburrraavtteii.oonn verifications verifications are analyzed to veriy the continued accuracy of are analyzed to verify the continued accuracy of 10.32 tAhnealcyazliebraatmiiodn-cruarnvgee. calibration standard every tenth sample, with a minimumofone 10.3.2 per batch Analyze a per batch. mid-range calibration standard every tenth sample, with a minimum of one 1.0 CALIBRATION AND STANDARDIZATION. 1111|.0 11.1 C"AATAnnhaLaellIayyBvzzReeeArttaThhgIeeeOeeoNxxfttArrtaNawccDotteeSsddTtmamAnaNadttDarrriiAxdxsRctsDutaarInZnvddAeaasTrrIwddOisspNlprribioeorrplttoooatatnendddbffyoollllloionwewaiinrnggreeegaarccehhssssietotnoof(fyssa=ammmppxllee+eebxx)tt,rraaccttss.. Twehiegahvteerdag1ex,ofnotwt ofosrtcaenddtahrdrocuugrhvtehs woirlilgbien,pulsoittnegdMbayslsiLneyanrxreogrroetshseiornsu(iyta=blmexso+ftbw)a,re. 1111..22 wItsftehatihngeedhatccreuuddrrvcvluee/rxddv,ooenee(ossitfnnfnoooettrccemmesedeseeatttrhyrrr)eoeqquauugniihdrreetrmhmeeeaennnaottlrssyigzppeieen.rr,ffuoosrrminmgrrooMuuttaiisnnseeLmmyanaixinntoteernnoaatnnhcceeeroosrurirrteaeebexlxetrrasacoctitlt,trhhaeere. standard curve (if necessary) and reanalyze. AnalyofsLiiv2EseTSE-)8v-r7.c0 Using ESMS Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00006633 Page ot10 Page 4 of I0 W3M_MNMON106186656005599 11.3 11.3 uFFsooerr tpphuuerrpplooossweesseonofdfoaafcccctuuhrreaacccayyliwwbhrhaeetnnioqqnuuacanuntrtivitteaattriianntgghellroowtwhalleenvvteelhlsseooffufalannaralalynytgteee,o, fiitttmmhaeayystbbaeennndeaecrcedesscssuaarrrvyye.ttoo uEcEaxsxleaaimmbtphrlpaeetle:ilo:onwwwcheuhnreedvnneoaacfttotttenhemsemippsctttaiiinlnniggbgrtotaofottioqhqunueaancnstuttiriatvtnaaedtteaerraaadtpphspperfrroortxxohimiammnaSatttpheeplelybyfut11lo00l r1ppa0ppn0bbgepoopffobaafnnrtahaallteyyhtteseert,,atngghdeeananneredrtrahactetueefruvaalel. crrraaeanglnirggbeeersoasotfiifoottnnhheweceucciruuvgrrhevvteecion((n5g5soppifshpptbibinggttohoo1c1fo00tnh00c00eenpsppttpabrb)na.)dt.iaorTTdnhhsisisstfrawwonimidlllalr5rrdeespddpuubcceetoiinn1aa0cc0ccuuprrpaabccyyraaattthttreriirbbutuhtteaednd tttohoelliifnuneellaarr regression weighting of high concentration standards. 1122..00 PROCEDURES ]~ROCEDURES mmrer------ 12.1 Acquisition Set up 12.1 Acquisition Set up 1122..11..11 SSeett uupp tthhee ssaammppllee lliisstt.. 1122..11..11..11 lAAestsstsieirggonnfaathssaeammapplllpeehallibssetttflisletenanraatmmineeg uuwssiiitnnhggaMMOO--DDAAY-Yl-aIasstt digitof year-increasing digit of year-increasing 111222,.111..111.232 lAeststeirgnofatmheetahlpohda(bMetSstfailreti)nfgorwaicthquairing AAsssignsaanimHegPthLnoCdp(rMogSrfailme) (fIonretaciqluei)ring 111222...111...111...344 TATyyspspieegniinnassnaaHmmpPpllLeeCddeepssrccorrgiipprattiimoonn(ssInaalnneddt vfiilael) vial position poskion numbers numbers vo: 1122..112.22 TTspooeccctrerraotmeeeataemamrehtetethhaoeoddidnccgllsiiccakkndoonnsemmleeecttthhooSddIRiinn(StthihenegAAlcecqqluouinsisiiRtteiiocononcrocdonitnnrtgro)olloprpaanMneeRll Mtthhee(nnMummlatasisspsle . . sRoRpteehaeaecccrtttriiaooopmnnpreMMotoeponrrinihtiateotoarerdiimninnaggsg))ss.easSS.needttAsIIeoolfnneuiilczzltaastStciiIoaoRnnn (iMMSsoiuondsdgueelaelaalIssyoaancppopRplrlreoeocpcportrireidadatitnaeelgaao)nnnoddgrmwmMaiast1shsLstMtthooe(M44S99Iu9R9lst.ooiprrleSave aoafccrtqhqaueguirmisseiaintpttiipoaorntnoimmpoenretiatihhtnoeofdod.mr.tIanIsaFfsteMMisoSn.S"//AmMMafSySulbiilnensssccttarorunlulmmeisceetnunetstdssu. aaalrrRleeyeefecmemorplplltelooocyytMeeeiddd,c,araalooddmdndiagitstiiwsoonniMtaahallstpphsrreLoodydSunuIcRcxtts.iioonSn ave fGrUagImDeEntTatOioDn AinTfoArfiAaaCtQioUnImSaIyTbIeOcNolfloerctaeddd.itRioenfaelritnofoMrmicartoimonaassndMMaRssML.ynx 1122..11..33 TGyUpiTcDalElyTtOheDaAnaTlyAticAaCl QbaUtcIhSIrTuInOsNeqfuoerncaeddbietigoinnaslainndfoermndastiwointhanadsMetoRfMex.tracted. T`myaptricixalslytatnhdearadsn,alytical batch run sequence begins and ends with a set of extracted 1122..11..44 matrix standards. aSSfaatmmeprpleleevsseraayrreeteaannntaahllyyszzaemedpdlwew.iitthhSoaalccvooennntttiinnbuuliiannnggksccaasllhiiobburraalttdiiobonne vvaeenrraiilffyiiczcaaettdiioopnneriiinnojjdeeicccttaeelddlysstttaaonnddmaaorrndditor papsoufotcssehssr.iibbellveeeraaynnaatlelyynttteehccsaaarjm-rryypoolevv.eerrSaaonnlddveaanrrteebnnlooatnt kccsoonnsshsiioddueelrrdeeddbessaaammnpaplllyeezssebbduutptemmraiaoyydibbceealiilnyncctllouuddmeeddonaaisstor such. 12.2 12.2 Using Using tthhee AAuuttoossaammpplleerr 1122..22..11 SSeett uupp ssaammppllee ttrraayy aaccccoorrddiinngg to to the the sample sample lst list prepared prepared in in Section Section 12.1.1. 12.1.1. 1122..22..22 aSSneeattl--yuuspptttchhoeensHHiPdP1e11r10s00a0/p/apaurutotoporssiaaammtpepllfeeorrraaottpttthhieemaffloollrlleooswwpoiinnnsggec.coonRndedicittoiioornndssaoocrrtuaaatlcccooonnndddiiitttiiiooonnnsssttihhneethe instrument logbook analyst considers appropriate instrument logbook: for optimal response. Record actual conditions in the 1122..22..22..11 SSaammppllee ssiizzee == 1100u~Lininjjeeccttiioonn 1122..22.22.22 ITnnjjeecctt/ssaammppllee == 11 1122.222.2..33 CCyyccllee ttiimmee ==99 mmiinnuutteess Anal.so isEofmLivsEesTsSE-rxga-7oc.0tUsing ESMS Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00006644 PPaaggee s5ooff 1100 33MM_MMNNO011666656005600 1122..22.2..44 SSoollvveenntt rraammpp ccoonnddiittiioonnss TTiimmee MeOH 20mM Ammo2n.i0ummMacetate [o0o.0o0mmiinn. | a4o0%% TT co% Ammonium 60% | acetate [L1o.0mriainn, [aSmin |" | a4o0%% oso [ |" 5 e600%%%|| 4.5 rain. 95% 5% [o6.s5 mminn. | o595%% | 5% | [r7o.0mrniinn. T4a 0% |0 6600%/% 'o | C9o.0 mrni. TT a4o0%% | 6600%% | 1122..22.22.55 PPresrstthheee""SsStatarstrt"" bbuuttttoonn.. 1122..33 IInnssttrruummeenntt SSeett--uupp 1122.33..11 RRTreeiffpeelrrettQoouEEaTdTSrS-u-9p9-o-2l24e4..M00,a,s""sOOppSeeprreaactttiioroonnmaaentndedrMMFaiaitintntetdeennwaainntccheeaoonftfAththemeoMMsipichcreroormmiacassPssreQQsusuauatrttetrroo IITI . TIToornnipiizzleaattQiioounnadSSorouuurprcocele,e,""MffooarrssmmoSorpreeecddteretotaaimillses..ter Fitted with an Atmospheric Pressure : 1t22..33..22 CChheecckk tthhee ssoollvveenntt lleevveell iinn rreesseerrvvooiirrss aanndd rreeffiilllliiffnneecceessssaarryy.. * 1122..33..33 tCChhheeetccipkk. tthhTeehssettaatiinpnlleessshssousstlteedeelbl eccaalppaiitllllawrriyythaattnttohhjeeaeegnngddeodoffetdthgheees.pprrooIbbfeet..heUUstisepeaiasnnfoeeuyyenepdpiieteocceebtetoo cchheeeckk utuhnnsesaattitipiss.ffaaTccthtooerryyt,i,pddsiihssaoassussledemmbbbelleeflttahhteewppirrthoobbneeoaajnangddgrreeedpplleaadccegeettshh.ee Issfttaathiinnelleetsispss ssisttefeloluccnaadppiiltllolaarrbyye.. 1122..33..44 TTuurmn oonn tthhee nniittrrooggeenn. 1122..33..55 hOOeppaeetnenrtsthhee ttuunnee ppaaggee.. CClliicckkss oonn ooppeerraattee ttoo iinniittiiaattee ssoouurrccee bblloocckkaanndddedseosolvlvaattiioonn heaters. 1122..33..660OppeenntthheeIINnl~etEEddkitoorr. 1122:.33..66..11 SSeett HHPPLL.CC ppuummpp ttoo ""OOnn"" 1122:.33..66..22 SSeett tthhee ffllooww ttoo 1100 -- 550000 uuLL//mmiinn oorr aass aapppprroopprriiaattee 1122..33..66:.33 eOOxbbpsseeelrrlvveeed dwdrirootphpllneetotssncciootmmroiignneggnooluuetatokoiffngtthhaeerttoiipuponodffttthhheeetppprrooofbbete..heAApfrfiionnbeee.mmiisRstteassdhhjoouuuslltdd tbbheee titeixpppooeflfltethhdeewppirrtoohbbneeoiiffnnnitoorommgieissntt liiessaookbbisnseegrrvavereoddund the tip of the probe. Readjust the 1122..33..66..44 AAllllooww ttoo eeqquuiilliibbrraattee ffoorr aapppprrooxxiimmaatteellyy 1100 mmiinnuutteess.. 1122..33..77 TTchhhaeengiinenssittnrruoumrmdeeenntrt uutssoeeosspttthhieemssieezepptaahrraeammreeettseeprrossnaastte:tthhee ffoolllloowwiinngg sseettttiinnggss.. TThheesseesestetttiinnggss mmaayy change in order to optimize the response: 1122..33..77..11 DDrryyiinngg ggaass 225500--440000 llitteerrss/hhoouurr 1122..33.77.22 EESSII nneebbuulliizziinngg ggaass 1100--1155 lliitteersr/sh/oouurr 1122..33..77..33 HHPPLLCC ccoonnssttaannttfflloowwmmooddee ffllooww rraattee 1100 -- 550000 BWLL//mmiinn 1122:.33..77..44 PHPrrPeeLssssCuurriees <<op44e00r00atbbiaanrrg((cTTohrhriiessctpplaya.rr)aammeetteerr iiss nnoott sseet,, iitt iiss aa gguuiiddee ttoo eennssuurree tthhee HPLC is operating correctly.) 1122..33..77..55 SSoouurrccee bblloocckk tteemmppeerraattuurree 115500 1122..33..77..66 DDeessoollvvaattiioonn tteemmppeerraattuurree 225500 Ana.loyfsLiivEEesTrsSEax-8ttr-a7oc0t Using ESMS Analysis of Liver Extract Using E$/MS PPaaggee G6ooff 1100 33MM_MMNNO011666666005611 22881144..00006655 t 0 1122..33..88 taped into the PPrriinntt tthhee ttuunnee taped into the instrument ppaaggee,, wwiitthh instrument logiittss ppaarraammeetteerrss,, log. aanndd ssttoorree iitt iinn tthhee ssttuuddyy bbiinnddeerr wwiithh a ccooppy end sample number includes al samples to be analyzed 1122..33..99 CClliicckk oonn ssttaarrtt bbuuttttoonn iinn tthhee AAccqquuisisiittiioonn CCoonnttrrooll PPaanneell ((tthhiiss mmaayy vvaarryy aammoonngg M MaassssLLyynnxx vveerrssiioonnss,, rreeffeerr ttoo aapppprroopprriiaattee MMaassssLLyynnxx UUsseerr''ss GGuuididee).). EEnnssuurree ssttaarrtt aanndd end sample number includes all samples to be analyzed. 13.0 DATAANALYASNDIS CALCULATIONS 13.113.0 13.1 Calculations: DATA ANALYSIS Calculations: AND CALCULATIONS 1133..11..44 CCaallccuullaattee mmaattrriixx ssppiikkee ppeerrcceenntt rreeccoovveerriieess uussiinngg tthhee ffoolllloowwiinngg eeqquuaattiioonn:: %% RReeccoovveerryy == OB Obsbesa errvveec ddRResk eusultlg t-- Bracko grou undRn Resesud ulltt xx 110000 `EExxppeecctteedd RReessuulltt 1133..11..55 CCaallccuullaattee ppeerrcceenntt ddiiffffeerreennccee uussiinngg tthhee ffoolllloowwiinngg eeqquuaattiioonn:: %Differenc=e Expected Cone = Calculated Conc. x 100 % Difference = Expected Conc. - Calculated Cone. x 100 Expected Cone. Expected Cone. 13.16 Calculateactual concentrations inmatrix (ug/g): 13.1.6 Calculate actual concentrations in matrix (it#g): co (n(nggooffPPFFOOSScaclael ,.ffrroommssttdd.. CCuurrvveexxDiDliuluttiioonnFFaaccttoorr)) (_I(inniittiiaallW WeeiigghhttooffLLiivveerr(g) FFiinnaall VVoolluummee ((mmLL)) 140 METHOD PERFORMANCE 14.0 METHOD PERFORMANCE xx 1Lu~gg 11000000 nngg. 142 Solvent Blanks, Method Blanks and Matrix Blanks 1144..11 M Meetthhoodd DDeetteeccttiioonn LLiimmiitt ((MMDDLL)) aanndd LLiimmiittooffQQuaunatnittitaattiioonn ((LLOOQQ)) aarree mmeetthhoodd,, aannaallyyttee,, aanndd m`maattrriixx ssppeeccififiicc.. RReeffeerr ttoo EETTSS--88--66..00,, AAttttaacchhmmeennttBB ffoorr aa lliissttiinnggooffccuurrrreenntt vvaalliiddaatteedd M MDDLL aanndd LLOOQQ vvaalluueess.. 14.2 Solvent Blanks, Method Blanks and M~trix Blanks 1144..22..11 SSoollvveenntt bbllaannkkss,, mmeetthhoodd bbllaannkkss,, aanndd mmaattrriixx bbllaannkkss mmuusstt bbee bbeellooww tthhee lloowweesstt ssttaannddaarrdd in the calibration curve. in the calibration curve. 143 Calibration Curves 14.3 Calibration Curves 14.4 Matrix Spikes 1144.33..11 TThhee r2 vvaalluuee ffoorr tthhee ccaalliibbrraattiioonn mmuusstt bbee 00..998800 oorr bbeetttteerr.. 14.4 Matrix Spikes 1144..44..11 MMatatrriixx ssppiikkee ppeerrcceennttrreeccoovveerriieessmmuusstt bbee wwiitthhini_n+ 3300%%ooff tthhee ssppiikkeedd ccoonncceenntrtraattiioonn.. 14.5.1 Continuing calibration verification percent recoveries must be within + 30% ofthe 1144..55 CCoonnttiinnuuiinngg CCaalliibbrraattiioonn VVeerriiffiiccaattiioonn 14.5.1 Continuing calibration verification percent recoveries must be within :!: 30% of the ssppiikkeedd ccoonncceennttrraattiioonn.. 1144..66 IIffccrriitteerriiaa lliisstteedd iinn tthhee mmeetthhoodd ppeerrffoorrmmaannccee sseeccttiioonnaarreennoott mmeett,, mmaaiinntteennaanncceemmaayybbee ppeerrffoorrmmeedd oonn tthhee ssyysstteemm aanndd ssaammpplleess rreeaannaallyyzzeedd oorr ootthheerraaccttiioonnssaass ddeetteerrmmiinneeddbbyyththee aannaallyysstt. DDooccuummeenntt aallll aaccttiioonnss iinn tthhee aapppprroopprriiaattee llooggbbooookk.. Avaly.sof LiveEErTmSEs-x8at-rr7a,co0t UsingESM Analysis of Liver Extract Using ES/MS Page 0110 Page 7 of I0 33M UMNNO0T166656005622 22881144..00006666 1144..77 I1ffdoodatatntaaotaaerrdee ot1on0 bbtaeeblrreeesppooarrnttdeedddiwwshcheuesnnseppdeeirrnffootrrhmmeaatnneccxeetoccfrriittteehrreiiaarehhpaaovvrtee.nnoott bbeeeenn mmeett,, tthhee ddaattaa mmuusstt bbee: footnoted on tables and discussed in the text of the report. 15.0 POLLUTION PREVENTION AND WASTE MANAGEMENT 1155..01 PSOaLmpLlUeTIeOxtNraPctREwVasEtNeTaInOdNfAlNamDmW abAleSTsEolM veAntNiAs GdiEsMpoEsNeTd in high BTU containers, and glass 15.1 ppSiiappmeettpttleeewweaxaststrtaeeciitsswddiaisssppteoossaeendddiinfnlabbmrroomkkaeebnnleggllsaaosslssvcceoonntnttiaasiidnneiesrrpssollsooeccdaattieneddhiiingnhtthBheTllaaUbboocrroaatntootraryiy.n.ers, and glass 1166..00 RECORDS RECORDS 1166..11 EhEeaaaccdhherppaaoggfeehggaeennndeerwraartiteetddteffnooorrnaathsstteuupddayygemm:uussttsthhuaadvvyeeortthheeprffooojllellocotwwniinnuggmbiiennrffo,orrmamcaaqttuiiioosnnitiiinnoccnllumuddeeetddhoeedii,tthheerr iinn tthhee iahinnneattaleedyggserrtraa.ttoiioronnhammneedtthhwoodrdi,,ttessanammoppnlleethnneaammpeaeg,,eee:xxttsrrtaauccdttyiiooonnrddpaatrtoee,j,eddciitlluunttuiiomonnbffeaarc,cttaoocrrq((uiiifsaaiptpippollniiccmaabbellteeh))o,, daa,nndd analyst. 1166:.22 PParpripinnrttoptthrhieeatttuuennseetppuaadgygeef,,olssdaaemrm.ppllCeeollispstty,, taahnneddseaaccpqqauuigisesiisttiiaoonnndmmteaetpthheooiddntfforrotomhmeMMinaassstssrLuLymyennnxtttroouniilnnoccgll.uuddee iinn tthhee appropriate study folder. Copy these pages and tape into the instrument rurdog " 1166..33 PPsltloootrtetthihneetcchaaelliisbbtrruaatdtiiyoonfnolccduerruv.ebrbyylvilinneeeaarr rreeggrreessssiioonn,, wweeiigghhtteedd 1l//xx,, tthheenn pprriinntt tthheessee ggrraapphhss aanndd store in the study folder. * 1166..44 PaPrnriidnnttstddoaartteaaiiinnnttteheggerrasatttiiuoodnny ssfuoulmmdmemra.arryy,, iinntteeggrraattiioonn mmeetthhoodd,, aanndd cchhrroommaattooggrraammss ffrroomm MMaassssLLyynnxx and store in the study folder. 16.5 16.5 ASSutumtmmamacrahirmizzeeentddaaAttaafuuosrsiiannngg essxuuieittmaapbbllleee ssooofffattwwsaaurremem((aEErxxcyceelslp55r.e.0a0+d+s))heaaenntdd. store store in in the the study study folder, folder, refer refer to to Attachment A for an example of a summary spreadsheet. 16.6 16.6 BaBnaadcckklouucppateeilloeencocttfrrobonnaiiccckdduaatptaaettlooecaatpprpoprnrioocpprdriiaaatttaee mmeeddiiuumm.. RReeccoorrdd iinn ssttuuddyy nnootteebbooookk tthhee ffiillee nnaammee. and location of backup electronic data. 121.70.0 TTAABBLLEESS~.DDIIAAGGRRAAMMSS,~FFLLOOWWCCHHAARRTTSS,~ A~ NDVVAALLIIDDAATTIIOONNDDAATTAA 1177..11 AAttttaacchhmmeenntt AA:: EETTS-S8--87-.70.0 DDaattaa ssuummmmaarryy sspprreeaaddsshheeeett 18.0 REFERENCES 1188..01 RFEAFCET-RME-N2C.E1S, "Extractionof Potassium Perfluorooctanesulfonate or Other Fluorochemical 18.1 F`CCAoomCmTppoo-Muunn-dd2ss.1ff,rro"o'mEmxLLtirivavecertrioffonorroAAfnnPaalolytyassisisssiUuUsmsiinnPggerHHfPl:uPLoCLr-CoEo-lEcetlcaetncrterososusplpfrroaanyya//tMMeaaossrssOSSptpheeeccrttrrFoolmmueoetrtorryyc"h"emical 1188..22 EETToTSnSi-z9-9a-t-22i4o4.n.00/,,Ma""sOOsppeSerpraeatctiitoornnomaaenntdderMMaQaiuinnattteetnnraaonnIcceeotorfifptlthheeequMMaidiccrrruoopmmoalasesssSAyAstttmmeoomssspp"hheerriicc PPrreessssuurree Ionization/Mass Spectrometer Quattro II triple quadrupole Systems" 18.3 18.3 TThhee vvaalliiddaattiioonn rreeppoorrtt aassssoocciiaatteedd wwiitthhtthhiissmmeetthhoodd iiss EETTSS--88--66..00 && 77..00--VV--11 1199..00 AAFFFFEECCTTEEDD DDOOCCUUMMEENNTTSS 1199..11 EE`TTCSSo-m-88p--6o6.u.0n0,d, s""EEfxxrttorrmaaccLttiiivooennroofofrPPFoolttuaaissdssifiuoumrmAPPneearrlffyllsuuioosrrooUoosccittnaagnneeHssPuuLllCff-ooEnnlaateteectoorrroOOstpthhreearry/FFMhluauoosrsroocchheemmiiccaall CSSppoeemcctptrroooummneedttsrryyf""rom Liver or Fluid for Analysis Using HPLC-Electrospray/Mass AnalyofsLiivEresrTESxl-t8r-a)7c.0t Using ESMS Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00006677 PPaaggee B8ootf 1100 33MM_MMNNO011666656005633 100 Revions 20.0 REVISIONS Roviion Revision `NNuummbbeerr - RReaeassoonnFFoorr RReevviissiioonn Rovion Revision DDaattee y. AmEimBrancUsingiESAS . ETS-8-7.0 Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00006688 rasan Page 9 of 10 ou. nssoes 3M MN01666064 LLaabboorraattoorryy SSttuuddyy ## sTSteuuaddyyM: aterial M MTMaeeasstttrihiMocx/dFaFRtiieennrvaiaaliSl:sSooollnevenntt: MAAIlnneyatnhliyoectdiraclRal:leEEvSqiqosuuifioipbpnmmr:erenentVt eySrysssitoeenmm Nusber Number: Instrument FR.eSqmuraed Filename: Software/Version: Value R-Squared Value: SYiipnei.rept Slope: DDuDYaaetItneetooeoffrfcEEAepnxxtstr:rlacycitsiooinnAm/mAlanylasylttys.t: ~ Date of Analysis/Analyst: Group| Sumpiel| Concentration Group Sample/# Concentration Dose Dion Dilution Fa~or Final Cone. SSGllroooppueepr:/DTToaaskkeee:nnfTfrraookmmenHlfiinooeeamar rrteehgegrrseesssyiioonnfeSolqqduueaarti.ioo~n GSSCoaarnmomcupepplnle/tD#er:oaTstTeaia:kokenTe(naakfregroon)mm:frothhTmeeasktshteueyndfsytouffdoomlyltddfheeorrel.dMear.s yox negation sanmay. TCIDonioilitnuictaleilonWWntreFta.atc((igot9)on::r(:TTngaTk/ageak)n:enfrTfrokoaommkmehtenheefsiresontmuydtydhyeffoofMlloddelaerdsr:.seLrynx integration sun,unsay. DFiinlualtioCnonFea.c(tour:g:TakCeanlfroolmttehbeydstdudiy vfolidtedhr.iintigvane ror the concetation Final Cone. (ug/g): Calculated by dividing the initial volume from the concentration AAttacthmsentAAc::SSuhummmmamraryySeSpprreenaaddshtseheAteseat.y of LivEEeTTrESSx8-t8.r-a77c.00tUsingESMS Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00006699 Page 00110 Page 10 of 10 W_MNOT685065 3M MN01666065 33MM EENNVVIIRROONNMMEENNTTAALL LLAABBOORRAATTOORRYY PB " M MEETTHHOODD EXTRACTION OF POTASSIUM PERFLUOROOCTANESULFONATE OR OTHER FFLLEUUXOOTRRROOACCCHHTEIEOMMNIICCOAAFLLPOCCOTOAMMSPPSOOIUUUNMNDDPSSEFFRRRFOLOUMMOLLRIIOVVOEECRRTFFAOONRREAASNUNALALFLYOYSNSIAISSTUUESSOIINNRGGOHHTPHPL'ELRCC-- EELLEECCTTRROOSSPPRRAAYY//MMAASSSS SSPPEECCTTRROOMMEETTRRYY Method Number: ETS-8-60 Method Number: ETS-8-6.0 AAuutthhoor:r: LLiissaa CClleemmeenn,, RRoobbeerrtt WWyynrmnee , AApppprroovveedd BByy;: AAddooppttiioonn DDaattee:: RReevviissiioonn DDaattee:: LLaabboorrataotryoMrMaynaanaggeerr Ba Due Date GGrroouupp LLeeaaddeerr DDaattee `TTeecchhnniiccaall RReevviieewweerr DDaattee 0 Scope AND APPLICATION 1.0 SCOPE AND APPLICATION 11..11 SSccooppee:: TThhiiss mmeetthhooddisisffoorrtthhee eexxttrraaccttiioonnooffppoottaassssiiuumm ppeerrfflluuoorrooooccttaanneessuullffoonnaattee ((PPFFOOSS)) oorr `ootthheerr fflluuoorroocchheemmiiccaall ccoommppoouunnddss ffrroomm lliivveerr.. 11..22 AApppplliiccaabbllee CCoommppoouunnddss:: FFiluuoorroocchheemmiiccaall ssuurrffaaccttaannttss oorr ootthheerr fflluuoorriinnaatteedd ccoommppoouunndds.s. alidation report. 11..33 M Matartriicceess:: RRaabbbbiitt,, rraatt,, bboovviinnee,, aanndd mmoonnkkeeyy lliivveerrss oorr ootthheerr ttiissssuueess aass ddeessiiggnnaatteedd iinn tthhee validation report. WWoorrdd 66.00/9955 E.xtracionEEoTTfSSP-E8aO-s6S.f00rom Liver Extraction of PFOS from Liver Page lor14 Page 1 of 14 W3M_MNMON106186656006656 22881144..00007700 22..00 SUMMARY oF METHOD SUMMARY OF METHOD 22..11 TT(hPhiFissOmmSe)ettohhrooddotddheeesrsccrfrilibbueeossrottchhheeemppirrcooaccleeddsuuurrrfeeafcfootrarneetxxsttfrraarccottmiinnlggivpperoo,ttaaosrsssioiutumhmerppeetrirfsflsluuueoosrr,oouoosccittananngeeassnuulliffooonnnaapttaeeiring (rerPexetaaFrggOaeecnSnttet)daa:onnrddPoFmmtheOeteSthr,hyfyllP-lu-tFoteeOrrroSttc--Ahbb,ueutmtPyylilFceOeattlShhsAeeurrAf((f,MaMcEBttXBaEnF)EtO.s).SfEIIrnon-mOtthhHiil,ssivmmePerFe,ttOhohoSrodEdo,,Ath,sseeervMveet5inn5ss6fful,uueoosar,rnooudccshhisneeugmmriraicocngaaaliltsosen.ccaapnnaibbrieeng sespttaxaartnnrtdadiactaritrdeod.dn.e:dAAPninFnOotioonSnM,ppBPaaEFiirrO.iinnSggATrrh,eeaeaPggFMeeOnnItStBAiiEssAaaedd,xddtEreetaddFctOttooiSsttEhth-reeOassnHasamfm,epPprlrlFeeeaOdanSntdoEdtAathh,ceeeMnaatnn5raa5ill6fyyu,ttgeeaeniitodounnbsppeuaarariirnodgiissaptuet onto a pnntihaittrrrtrooiotugiggoeehnnneaeedvv3aaincppctooorrpaaMltatoosttrBriEcuunn.sttiyillrTidhdnrregyy.e.MaEEttBataaEccchhheeeexdxxttrttraroaacccattt0isii.sst2rrraeeunccmsoofnnesnsrtytriliettoduunttteefoddilatiinencre11nn..t00troimmfguLLlgaesmmseteutathbuhateaonnvaooinlladltth.hpeeunnt iered onto a filtered through a 3 ce plastic syringe attached to a 0.2 Ixm nylon filter into glass autovials. 22.22 TT`mhheeetssheeodsssaammppllee extracts extracts are are analyzed analyzed following following method method ETS-8-7.0 ETS-8-7.0 or or other other appropriate: appropriate methods. 3.0 DeemTIoNs 3.13.0 3.1 DPEFFOINS:ITIpOeNrfSluorooctanesulfonate PFOS: perfluorooctanesulfonate ((aanriioonn ooffppoottaassssiiuumm ssaalltt)) CCu~Fz17:SSO033 H 33.22 PPFFOOSSAA:: ppeerrfflluuoorrooooccttaannee ssuullffoonnyyllaammiiddee CC~iFF~iTSSOO:2NNIH-I;2 333.3 PPFFOOSSAAAA:: ppeerrfflluuoorrooooccttaannee ssuullffoonnyyllaammiiddoo ((eetthhyyll)aacceettaatteeCCasFF~inTSSOON2(NC(CHI;-IC2CHHs)3)CCHHo2CCOO,~ 33..44 CEEatFFFOO1SySESE-O-OO;HNH:(:C22H0(;NNC--eHettyhh)yylClppHee:rrCffllHuu:ooOrrooH0occitaannee ssuullffoonnaarmniiddoo))--eetthhyyll aallccoohhooll CsF~TSO2N(CH2CH3)CH2CH2OH 33..55 PPFFOOSSEEAA:: ppeerrffluuoorrooooccttaannee ssuullffoonnyyll eetthhyyllaammiiddee CFsSO;N(CHCHy)H C~F17SO2N(CH2CH3)H 33..66 MMS5S566:: CCsFFtTSSOON2(NH(I)-I()(CCHH:2CCOOO0HI-)I) 33..77 SSuurrrrooggaattee ssttaannddaarrdd:: 11HH--11HH--22HH--22HH ppeerrfflluuoorrooooccttaannee ssuullffoonniicc aacciidd 44..00 W WAR~ NIG NGsS AANrD~ CCAAUtTrrIioOrN~Ss 44.11 HHeeaalltthh aanndd SSaaffeettyy W Waarrnniinnggss:: 44..11.11 UhUassneedluuinnniigvveearrnssiaamllapplrreetcicsaasuuutteii,oonwnshs,,iceeshsppemeccaiiyaallllcyyonllatabbioonrraapttaootrrhyyogcceoonaastt.ss,, ggoogggglleess,, aanndd gglloovveess wwhheenn handling animal tissue, which may contain pathogens. 55..00 IItNWTrEERRFFE~RREENNCCE~SS 55..11 TThheerree aarree nnoo iinntteerrffeerreenncceess kknnoowwnn aatt tthhiiss ttiimmee.. 66..09 EEQquUiIPpMmeEn~tO." 66..11 TTachhceeepfftooallbllloeow.wiinngg eeqquuiippmmeenntt iiss uusseedd wwhhiillee ppeerrffoorrmmiinngg tthhiiss mmeetthhoodd.. EEqquuiivvaalleenntt eeqquuiippmmeenntt iiss acceptable. 66..11..11 UUllttrraa--TTuurrrraaxx TT2255 GGrriinnddeerr ffoorr ggrriinnddiinngg lliivveerr ssaammpplleess : 66..11..22 VVoorrtteexx mmiixxeerr,, VVWWRR,, VVoorrtteexx GGeenniiee 22 66..11.33 CCeennttiriffuuggee,, MMisisttrraall 11000000oofr I[EECC 66..11..44 SShhaakkeerr,, EEbbeerrbbaacchh oorr VWWRR E.xtracEEotTfmsPSis-O8os-Son6.0from Liver Extraction of PFOS from Liver Page2of14 Page 2 of 14 22881144..00007711 33MM_MMNNo011666B6800677 66..11.55 NNitirtrooggenenEEvavpaoproartatoorr,, OOrrggaannoommaattiioonn 66..11..66 BBaallaannccee ((sseennssiittiivviittyy t1o0 00..110000 gg)) 7.0 SUPPLIES AND MATERIALS 717.0 SUGlPoPvLeIEsS AND MATERIALS 77.21 GDilsosveecsting scalpels 77..23 DEpispseecntidnogorsrfcadlpieslpsosable pipettes 77..34 ENaplpgeenndeobroftotrledsi,spcaopsaabblleeopfipheotltdeisng 250 mL and 11 77.54 NVoallguemneetibcotftlleassk,sc,agplaabssle, toyfpheoAlding 250 mL and 1 L 77..56 VCoHluEmMevtriicalflsa,s4k0s,mgLlasgs,latsyspe A 77..67 IP-lCasHtiEcMsamvpiaulsl,e4v0iamls,LWghleaasston, 6 mL (or appropriate size) 77..78 7.8 PCelansttriicfsuagme ptuubleesv,iaplosl,yWprhopeyaltoenne,,6 Centrifuge tubes, polypropylene, 1mSLmL(.or 15 mL appropriate -- size) 77.99 LLaabbeellss 77..1100 OOxxffoorrdd DDiissppeennssoorr -~33..00ttoo 1100..00 mmll " 77..1111 SSyyrriinnggeess,, ccapaablepooffammeeabassuulrriinnegg 55 iL ~tL to to 50 50 uL. ~tL : 77..1122 Graduated pipettes "7.17.133 GSSyyrr~riidnn.ggueeasst,e,dddipissipppooessttaaebbsllee ppllaassttiicc,, 33 cccc. 77..1144 SSyyrriinnggee ffiilteerrss,, nnyylloonn,, 00.2.2 im, tam, 25 25 mm mm 77..1155 7.16 TTiimmeerr Crimp cap autovials and : caps 77..1167 CCrriimmppercasp autovials and caps 7No.1t7e: Note: CPPQrrriiim%oorrpwtetaoortsuuessriinnggRggillaaesssswswyaarrrieengaaennsddabbmootitttllneess,i, rrmiinnousseefm33 ttiiimnmeeesss wwwiiittthhh mmmeeetththaahnnoool,l aa3nnrddi n33stetiismmfeerssowwmiitt3hhsMMeipillallrii.a--te viQa'~ water. vials. Rinse syringes a minimum of 9 times with methanol, 3 rinses from 3 separate 88..00 81 REAGENTSAND STANDARDS REATGypEeNTLrSeAagNeDntSgTrAaNdDeAwRatDeSr, Mill-QPorequivalental wer usedinthis methodshould 8.1 bTbeeyMpMielillIl-ir-eQQaTMIgMe.wnwat tagterearrdaaenndwdbabteeeprpr, roMovviilidldie-eQddbTbMyyoaarMMeiqiluliliiv--QaQleTTnOOt;CCaPlPllwulusaTMs.~..r. ssuyysssettdeemimn this method should 88.22 SSooddiiuumm hhyyddrrooxxiiddee ((NNaaOOHH)),, LT J.T Baker Baker or or equivalent equivalent 88.33 TTeettrraabbuutytylalmammmoonniiuumm hhyyddrrooggeenn ssuullffattee((TTBBAA)),, Kodak Kodak or or equivalent equivalent 88.44 SSooddiiuumm ccaarrbboonnaattee ((NNea2xCCOOy3)),, IJ.TT.. BBaakkeerr or or equivalent equivalent 88.55 SSooddiiuumm bbiiccaarrbboonnaattee ((NNaaHHCCOO)3,), J.T. J.T. Baker Baker or or equivalent equivalent 88..66 MMeeththyly-l-tteerrrt--bbuuttyyll eetthheerr,, OOmmninsisoollyv,, ggllaassss ddiissttiilllleedd or or HPLC I-IPLC grade grade 88.77 MMeetthhaannooll,, OOmmainsisoollvv,, ggllaassss ddiissttiilllleedd or or HPLC I-IPLC grade grade 88 8.8 LLiivveerr,, ffrroozzeenn ffrroomm ssuupppplliieerr 88.99 DDrryyiiccee ffrroomm ssuupppplliieerr 88.1100 FFlluuoorroocchheemmiiccaali ssttaannddaarrddss 88..1100..11 PPFFOOSS ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr weight weight = = 538 538 E.xtractionEEoTfTSFs-O8a-Ss6.o0from Liver Extraction of PFOS from Liver PPaaggee 3daofr1e4 22881144..00007722 33MM_MMNNo01166666800688 88..1100.,22 PPFFOOSSAA ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 449999 88..1100.,33 PPFFOOSSAAAA ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 558855 88..1100..44 EEXtFFOOSSEE--OOHH ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 557700 88..1100..55 PPFFOOSSEEAA ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmicicaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 552277 88..1100..66 MMS5S566 ((33MM SSppeecciiaallttyy CChheemmiiccaall DDiivviissiioonn)),, mmoolleeccuullaarr wweeiigghhtt == 555577 88..1100..77 SCSuuFrrr1roo3ggSaaOttseeHss)ttaamnnoddlaaerrcdd:u:la44r--HHw,,eippgeehrrftfllu=uor4roo2oo8ccttaannee ssuullffoonniiccaacciidd ((l1--HH,,1l--HH,, 22--HH,, 22--HH 88..1100..88 OCOtsthFheie~rrSffOluu3ooHrroo)ccmhheeommlieciccaualllsas,r, waseiagphprto=pr4ia2t8e: as appropriate 88.1111 RReeaaggeenntt pprreeppaarraattiioonn NNprOOepTTaErEa::tioW Wnh,heeandnjuppsrrteeppaaacrrciionnrggdillnaagrrlggyee.rr vvoolluummeess tthhaann lliisstteedd iinn rreeaaggeenntt,, ssttaannddaarrdd,, oorr ssuurrrrooggaattee pBrIeLpaLrat1io0nN, asdojduistuma.chcyodrrdoinxgidlye. (NaOR): Weigh approximately 20 Na0OH. Pour into a 8.11.1 1d11i000s00sN00olmsmvoeLLddb.iubemeaSatkkoheeryrredccrioonoxnitdan1ienL(itnNNgaa5aOl50g0Hi0e0)nm:menWLLboiMetMiltgnlilhleliiag--QpQ,~TMxwwiamtaetaertre,,lmymii2xx0uun0tngitillNaalalllOssHooll.iiddPssoaaurrreeinto a : 8.11.2 d1 iNssoslvoeddi.umShtoydreroixniade1 L Nalgene bottle. (NaOF): Dilute 10 N NaOH 1:10, Measure 10mLof . . M1110iN0lNNlso-NNdQaaiTMuOOmHwHahtsseyoordl.luurottiixSooitnndoeriinet(tNooian2a2O11H1002)005:mmmDLLLilNvuvaootellluug1mme0enetNetrriiNbccotafftlOllaaesHs.kk aa1n"n1dd0d.diillMuutteeeattsoourvveooll1uu0mmmeeLuussoiinfngg 8.113 MiIli-QTM water. Store in a 125 mL Nalgene bottle. 00..55 M M tteettrarbaubtuytlyalmammmoonniiuumm hhyyddrrooggeenn ssuullffattee ((TTBBAA):): WWeeiiga~h aapppprrooxxiimmaatteellyy 116699 gg 8.11.3 oPoffHTT1BB0AAusiiinnnttogo a2ap11prLLo~xvoiomlluaumtmeeelttyrrii4cc4cctooonnt5taa4iimnniiLnnggo55f000010mmNLLNMMiaillOlli-H-QQ'(Whiwwalateeterar.d.dAAidndjgjuutsshttettoloast mL. oMpoifHflNNl1iAa-0~OQOuTM}s,~inwaagaddtaddeprss.pllrooowwSxltliyyomrbbaeeeteiccnlaayuus4se1e4LttthhoNeea5ppl4HHgmeccnLhheaaobnnofggtet1els0se.aNabbrrNuuppatlOtlyy)H).. (WDDiihlliuulteteeat(do0dvvinooglluutmhmeee lwwaisittthhmL Milli-Q 8.11.3.1 water. Store in a 1 L TBA requaicrheecsk Nalgene bottle. prior to each usteo ensure pH = 10. Adjust as 8.11.3.1 TnneeBeeAddeerddequususiiinrneggs11aNNchNNecaakOOpHHriossoorlltuuottiioeonan.c. h use to ensure pH = 10. Adjust as 88..1111..44 0a0.p.22p55roMMximssaootddeiiluuymm2cc6aa.rr5bbgoonnoaafttees//ossdooidduiiumummcabbriibccoaanrrabbtooennaa(tteeNbbauuff:ffeeCrra((ONnNd5aa2:)CCOO23Y1.0/NNgaoaHfI-CsIOCoydO)i3:u):mWWeeiigghh bbQaipicMcpaarrrowbbxaootinnmeaarat.tteeel((SyNtNa2oaH6rH.eC5CiOnOg3a)o)1fiinsnLtotoodNiaaaulm11geLLcnavevroobblloouutnmmtaeletteetrrii(ccNffall2aaCsskOk a3an)nddanbbdrrii2nn1gg.t0toogvvooolfluusmomdeeiwuwimitthh MMiilllil- Q~ water. Store in a 1 L Nalgene bottle. su 8.12 SSttaannddaarrddss pprreeppaarraattiioonn 88..1122.,11 PPrreeppaarree PPFFOOSS ssttaannddaarrddss ffoorr tthhee ssttaannddaarrdd ccuurrvvee. 88..1122..22 PPfrureeoppraoarcreeheoomttihhceearrlffllsuutooarrnoodccahhreedmmsiiaccraaellasscttcaaennpddtaaarrbddsls,e,a(assfaoapppeprxorapomrppirlaieat,ete.o. nMMeuwulolttriickcoiomnmgppoosntneaennndttard fss1loo.ull1ouu0rttoiipocopnhnmeccmooEnniWtctaFaaiilOnnSsiitnEnagg-nOd11Ha..0r.0d00)sppapprmemaPPcFFcOOeSpSt,a, b11l..e002(2fopprppmemxPaPmFFOOplSSeAA, ,o,n00e..99w88o77rkppippnmmg PsPtFFaOnOdSSaAArAdA,, aanndd 88..1122..33 W1.e1i0gphpamppErotFxOimSaEte-lOyH1.0) 0 Weigh approximately 100 mmggooff PPFFOOSS iinnttoo a a 110000mmiLvvoolluummetertriicc ffllaaskk aanndd rreeccoorrdd tthhee aaccttuuaall wweeiigghht.t. 88..1122..44 BBrriinngg ttoo vvoolluummee wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aa ssttoocckk ssttaannddaarrddooffapappprrooxxiimmaatteellyy 11000000 ppppmm (ng/mL). 88..1122..55 DDaipilpluurttoeexitthmheaetssettlooycckk50ssoopllpuutmtii.oonn wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aa wwoorrkkiinngg ssttaannddaarrdd 11 ssoolluuttiioonn ooff approximately 50 ppm. .ExtractionEEoTrfsSFs-8Os-oS6.0from Liver Extraction of PFOS from Liver Page dof 14 Page 4 of 14 33MM_MMNNO011666656005699 22881144..00007733 88..1122..66 DaDpiipllruuottxee.tthh5ee.0ssttopopccmkk,ssoolluuttiioonn wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aa wwoorrkkiinngg ssttaannddaradr2d2 ssoolluuttiioonn ooff 8.12.7 aDiplpurtoex.th5e.0stpopcmk .solution Dilute the stock solution wwiitthh mmeetthhaannooll ffoorr aawwororkkiinngg ssttaannddaarrdd 3 3 ssoolluuttiioonn ooff 8.12.7 aapppprrooxx.. 00..5500 ppppmm.. 88..1133 SSuurrrrooggaattee ssttoocckk ssttaannddaarrdd pprreeppaarraattiioonn 88..1133..11 WWeCeiaiggFhh1SaapOpppsrrHooxxiiimmntaaotteeallyy505500m--i66v00ommluggmoeotffrsisuucrrrfroloaggsaakttaeenssdttaarnneddcaaorrrddd 1tI-h-HeH,,a1cl--tHHua,,l22w--eHHi,g,h22t-.-HH,, 88..1133..22 BBrrCiinnsFgg~tt3ooSOvvoo3llHuummineetowwiaitthh50mmemettlhhvaanonoloullfmfooertrariacssfuularrrrsokoggaaanttdee record the actual weight. ssttoocckk ooffapapprporoxxiimmaatteellyy 11000000--11220000 ppppmm.. 88..1133..33 PPrrseetppoaacrrkeeataoassuurr1rr0ooggmaaltteevowwlouormrkekitinrngigcssfttalaannsddkaararddn..d TTbrrraiannnsgsff(eeorrvaaopplppurrmooxexiiwmmiaatttheellmyyet11h..00anmmolllooffsforusruarrrooggaattee wwstooorcrkkkiinntogg asstta1an0nddmaarrlddvooolffum1100e--t22r00icppfpplamms.k. aRRneedccoobrrriddngtthhteoaavccottuuluaalml vveoowlluuimtmheemttrreaatnnhssaffneerorrrleedfdo..r a 99..00 SSAAMMPPLLEE HHAANNDDLLLINNGG 99..11 AAllll ssaammpplleess aarree rreecceeiivveedd ffrroozzeenn aanndd mmuusstt bbee kkeepptt ffrroozzeenn uunnttiill tthhee eexxttrraaccttiioonniis ppeerrffoorrmmeedd.. | 10.0 QuaLITY CoxTRo) 1100..01 QMaI~tLr1iTxYblCaOnkNsTaRnOdLmethod blanks 10.1 Matrix blanks and method blanks 1100..11..11 AAnnaalliqiuqoutooofft11..00mmLL.mmetehthaannoolliissuusseeddaass 2asosollvveennttbbllaannkk.. 1100..11..22 EEaxsxtmtrreaactctht ottwdwoobl11a.n.00ksmm.LL aalliiqquuoottss ooffMMiillli-lQ-TQMTM wwaatteerr ffoolllloowwiinngg tthhiiss pprroocceedduurree aanndd uussee 1100..11..33 as method blanks. EExxttrraacctt ttwwoo 11..00 mmLL aalliiqquuoottssooff lliivveerr hhoommooggeennaattee ffoolllloowwiinngg tthhiiss pprroocceedduurree aanndd uussee aass mmaattrriixx bbllaannkkss..ReRfeeferr ttoo 1111..116.6.. 1100..22 M Maattrriixx ssppiikkeess 1100..22..11 PPthrreeeppaaacrrceeuraaanncddyoaannfaatllhyyezzeeexmmtaratatrcriitxxiossnpp.iikkee aanndd mmaattrriixx ssppiikkee dduupplliiccaattee ssaammpplleess ttoo ddeetteerrmmiinnee the accuracy of the extraction. 1100..22..22 PrPerrceeeppiaavrreeedcevaaiccthhhsseppaiickkhee suuassiimnnpggleaa ssstaa.mmppllee cchhoosseenn bbyy tthhee aannaallyysstt,, uussuuaallllyy aa ccoonnttrrooll lliivveerr 1100..22.33 rEE`eAxxcdppdeeieicvtcitetoeednddawlccioosthnpnciceekeanenctstrhrmaastataiiyomobnnpessliewwnisilclelllt.ufaaldllel diinnattnhhdeemmmaiiyddf--arrlaalnniggneeotofhfetthhleeowii-nnirittaiinaallgeccoaalfliibbtrrhaaettiioionnnitccauulrrvvee.. Accaadlliidbbirrtiaaottiniooannl sccupurirvkveee.s. may be included and may fall in the low-range of the initial 1100..22..44 PP`rmreeippnaairrmeeumoonnoeef2mmaamttarrtiixrxissxppsiikpkieekaeensnddpemmraatbtrariitxxchssppiikkee dduupplliiccaattee ppeerr 4400 ssaammpplleess,, wwiitthh aa minimum of 2 matrix spikes per batch 1100.33 CCoonnttiinnuuiinngg ccaalliibbrraattiioonn vveerriiffiiccaattiioonnss 1100..33..11 PPinrrieetippaaalrrceealccioobnnrtatiitnniuuoniinncggurccvaaell.iibbrraattiioonn vveerriiffiiccaattiioonn ssaammpplleess ttoo eennssuurree tthhee aaccccuurraaccyyoofftthhee 1100.,33..22 iPP1nrr0ieetippsaaaalrmrcepel,a,elaisabt.traaatFmmiooiinrnniiecmmxuuaurvmmmep,,.leoo,nnceiccfaoosnnattiminnpuuliiennsggecctaall=iibb3rr4aa,ttiiofononuvvreervrieiffriiiccfaaittciiaootnniossnaasmmaprpleleeprppeeerpraggrrreooduuappnoodff ee1xx0ttrrsaaaccmttepeddle. s. For example, ira sample set = 34, four verifications are prepared and E.xtractionEEofTTSPS-F88O-66S.00from Liver Extraction of PFOS from Liver PPaaggee S5 ooff 16 14 22881144..00007744 33MM_MMNNO011666656007700 1100.33.33 PPprrreeepppaaarrreee teehaaecchhinicctooinanlttiicnnuuuriivnnegg ccaalliibbrraattiioonn vveerriiffiiccaattiioonn ffrroomm tthhee ssaammee mmaattcriixx uusseedd ttoo 103.4 pTrheepaerxepethcteeidnictioanlcceuntrvrea.tions will ll within the mid-range ofthe nial calibration 10.3.4 Tcccuauhrlrevivebee.r.xatpAAiedocdndtdiectidutiiroovcneno.aanllcTsseppnhiitkikreaeisstsiommnnaeascyyewsbbiseellaiirfnnyacclilflltuwudhdieetedhdiatntnhhaaatlhttyesffatamlllmiidiunn-srtttahhneeqgulleaoonwoiwi-f-trrtaahatneneggiueenosioitfinfagltthhcoeeanlliiinynbiirtttaihaatelilon clT1oao0wlw0ib0eernnapdtdpiobo)ofn.ftcthhueervcceaa.lliiTbbrrhaaittsiioiosnnncceuucrrevvseesa((frfoyorrifeextxhaaemmpaplnleea,,ly55stppmppbbus~-t q1100u00anpptppibtba,,terraauttshhieenrrgtthohananlny55thppeppbb - 1000 ppb). 0_ CALIBRATION AND STANDARDIZATION 1111.10 CPAreLpIBarReATmaIOtrNiAxNcDalSiTbrAaNtiDoAnRsDtaIZnAdaTrIOdNs 11.1 Prepare matrix calibration standards 1111..11..11 Weigh approximately WmseigMhialplp-rQ~TMmwaatteerly. 44G00riggndooffltiolivv&eerhr oiinmnttooogaaen22e55o00ummsLLsolNNuataliloggnee.nnee bottle bottle containing containing 200. 200 mLs Milli-QIM water. Grind to a homogeneous solution. 1111..11..22 1rIaft46i0o4ggi0iss nnoott Aavvaaiillaabbllee,, uusseeaappprporoppririaatteeaammoouunnttssooff liivveerr aanndd wwaatteerr ttooeennssuurree aa 11::55 ratio. " 1111.11.33 RRcoeenffceeerrntttoora11t33i..o00nttooofsccoaallliccduullalaittveeertthhteeisaasccutteuuadalilsddpeeennrsssiiettdyy ioonfif1lv.ive0ermr Lhhooommfooghgeoenmnaoatgteeenaaanntddetthshoeelution concentration of solid liver tissue dispersed in 1.0 mL of homogenate solution. - 111i..11:55 AAshddaddki11ngmmbLLeotofwfehheoonmmaoolgigeqenunaoatttseewtthooila2e11p55rmempLLarcicenengntrtariioffutugagleeottufubbeeei..ghRRteee--essnuussIppeemnin.ddsasololiluqututioiootsnnbobyfy. hhshooammkoiognggeennbeeeootwuusseessnoollauulttiiiqoounnoiitnsn w1155himmleLLpccreeepnntatrrriiifnfuugggeea tttuoubbteaesls..of eighteen 1 mL aliquots of 11.1.6 TTwwoo 11 mmLL aalliiqquuoottss~, oorr ootthheerr aapppprroopprriiaattee vvoolluummee,, sseerrvvee aass mmaattrriixx bbllaannkkss.. 11.1.7 TtThyyeppieiccnaadlllolyyfuutssheeistthhseeecsstttiaaonnn,ddaatrrodd sccpooinknecc,eenintntrrdaauttpiilooinncssataaenn,ddtsswppoiikksiitnnaggnadaammrooduurcnuttrssvellisiss,tteefddoirinnaTTtaoabtblallee o11f,, at at teehiigeghhettneedeennossfaatmmhpipslleesses,,ctttiwownoo, mmtoaattsrrpiixixkbbell,aainnnkksds,,upaanlniddcatttwew,ootwmmeoettshhtooaddndbballraadnnkkscs.u.rves, for a total of 1111..11.88 RRwehefifeecrrhttlooisvtvsaalltiihddeaattwiiooornnkrrieenppgoorrrttassnEEgeTTsSS-a-8n8-d-66t..h00e aaLnninddeaEErTTSCS-a-8l8i--b77r.a.00t--iVoVn--11RaoonrrgAAett(ttaLacCchRhmm)eefnontrt BB,, wccaahlliiicbbhrraalttiiisootnsn curves, the working curves.. ranges and the Linear Calibration Range (LCR) for 1111..11.99 UUstssaeendAAarttdttsaa.cchRhmemfeeennrtt1CC0aa1ss3a.a0nntsaoiiddciainlnccucalalaltcceuulaalctatinutagitltnhchgeoenccceoonnnctcerenantttriraoatntiisooonnfssoPofFfOhthSee iwwnoocrrakkliiinnbggration ssstttaaannndddaaarrrdddsss... Refer to 13.0 to calculate actual concentrations of PFOS in calibration 1111.22 TTsuoomeeoaagccahhtewwowororkkrikinniggngssttsaatnnaddnaadrraddr,,dbbflloaarnnkkt,,heoorrcoccnoocnnettniitnnruuaiitnniggovvneetrrioifffiiccaaalttiwiooinnt,,hiaandddtdhaaeppcpparrlooipbprrriaiaattiteoenaacmmuooruvunenttraoonffge ppb 1000ppb. surrogate working ppb - 1000ppb. standard for the concentration to fall within the calibration curve range 5 E.xtracEEotTfsSiFs-F8oe-O6nS.0from Liver: Extraction of PFOS from Liver 22881144..00007755 PPaaggee b6oorf11s4 33M_MNMON106186666007711 amdarde 6 esablsh ec tn Cure on 1h as SpeSOELr 1111..33 EExxttrraacctt ssppiikkeedd lliivveerr hhoommooggeennaatteess ffoolllloowwiinngg 1122..1144--1122..2255ooffththiiss mmeetthhoodd.. UUssee tthheessee standards to establish each initial curve on the mass spectrometer. Approximate Spiking AmoTTuaanbmtlees11for Calibration Standards Approximate Spiking Amounts for Calibration Standards Working Sundard oT Aro Tat eore of Working Standard T oe T a | (A(Apppprrooxx.. CCoonnc.c.) Approx. final cone. of PPFFOOSS iinn lliivveerr Blank 0.50 ppm 2 0.005 ppm [00..o 5500 ppppmm so 11400 pop o00..a0012s50pppeppm mmm | 0.50 ppm 20 0.050 ppm 0.50 ppm 40 0.100 ppm 5.0 ppm 10 0.250 ppm . Sop3m 0 | 5.0 ppm 20 5.0 ppm 30 orsopm 0.500 ppm 0.750 ppm 50 ppm 4 l.O0 ppm n1e2.e0 oI~cROoI2wEDRUReE 0000000 12.1 Obtain frozen ver samples. 12.1 Obtain frozen liver samples. 1122.22 CCu`utpteaarppfpporrroomexxdiimmqauatitecelklylyy,11 nggoootffallliivvleoerwriuunssgiinntggheaalddiivissesrseetccottiitnnhggawss.ccaallppeel.l. TThhiiss ppaarrttoofftthhee procedure procedure is is best best performed quickly, not allowing the liver to thaw. 125 Weighthe sample dirt inattaroed plasticsumpuevil, 12.3 Weigh the sample directly' imo a tared plastic sampule vial. 1122..44 RReeccoorrdd tthhee lliivveerr wweeiigghhtt iinn tthhee ssttuuddyy nnootteebbooookk.. 1122..55 RReettuurrnn uunnuusseedd lliivveerrppoortrtiioonnssttoo ffrreeeezzeerr.. 12.6 Ad42.5 mLsofwater to sampule vial. 12.6 Add 2.5 mLs ofwater to sarnpule vial. 1122..77 GGrriinndd tthhee ssaammpplele..PPuutttthheeg~ririnnddeerr pprroobbeeiinntthheessamapmleaanpnddglgrriienndd for for about about 2 2 minutes, minutes, or or rl sample is homogrous until the sample is homogeneous. 1122.,88 RRiinnssee tthhee pprroobbee iinnttoo tthhee ssaammppllee wwiitthh 22..55 mmLLss wwaatteerr uussiinngg aa ppiippeettttee.. 1122..99 TTaakkee tthhee ggrriinnddeerr aappaarrtt aanndd cclleeaann iitt wwiitthh mmeetthhaannooll aaf_t~eerr eeaacchh ssaammpplele.. RReeffeerr ttoo AAMMDDTT--EEPP-222. es Toe, daeand anys is 1122..1100 CCaapp tthhee ssaammpplleeaannddvvorotrteexx ffoorr 1155 sseeccoonnddss.. LLaabbeell tthheessaammpupluelevviiaallwwitithhtthhee ssttuuddyy nnuummbbeerr,, weight, liver ID, date and analyst initials. ErncionEafsFsOSarm Liver ETS-8-6.0 t~xtraction of PFOS from Liver 22881144..00007766 fm Page 7 of 14 a3Mw oMtNs01s6s6o60r7z2 1122..1111 cPPeiinppteertitttfeeug11e..00tummbeLL.,, Looarrboeotlthhteehrreaacppeppnrrtoorppirfriuiaagtteeetvvuooblleuumwmeie,h,ootffhhheooimmdeoongtgeiecnnaalattieenfiinnottroomaaati11o55nmmasLLtpphoeollsyyappmrropopupylyleleevnnieeal RcReeenffeterrrif1tuo0geaatttttuaabccheh.eeddLawwbooerrlkkstshhheeeecetetnfftoorrrifdduoogcceuutmmuebenenttwiinnigtghtththheeerrieedmmeanaiitnniciiannlggisnsttfeeopprssm.. ation as the sampule vial. 1122..1122 `PPmiieppteehttottdee tbtwlwaoonks1|.mmLL aalliiqquuoottssooffMMiillli-lQ-TQMTM wwaatteerr ttoo cceennttrriiffuuggee ttuubbeess.. TThheessee wwiillll sseerrvvee aass method blanks. 1122.,1133stSSappniidkkaeeraadllall sssaadmmeppsllceerssi,,biienndcclilunuddsiienncggtbiblolanann1kk1s.s2a.anndd ssttaannddaarrddss rreeaaddyy ffoorr eexxttrraaccttiioonn wwiitthh ssuurrrrooggaattee standard as described in section 11.2. 1122..11o44 fSSptpihikkaeet eesaaecccthhiommna,attfiironxr wtwhiietthhcatthlhieebraaapptppiroroonppcrruiiraavtteee aasmmtaoonudunanrttdoso.ffsstAtaalnnsddoaaprrrddeapasasrddeeesmsccrriiibbxeeddsiipnnik11e11s..11a,,noodrr TTaabbllee 11 cocoofnntthtiianntuusiinengcgticcoaanllii,bbfrroaarttiitoohnnesscttaaalnniddbaarrarddtsis.o.n curve standards. Also prepare matrix spikes and 1122..1155 sVVaomorprttleeexxs mmfioirxx 1tth5heesesscttaoannndddsaa.rrdd ccuurrvvee ssaammpplleess,, mmaattrriixx ssppiikkee ssaammpplleess,, aanndd ccoonnttiinnuuiinngg ccaalliibbrraattiioonn samples for 15 seconds. 1122..1166 CChheecckk ttoo eennssuurere0.50.5 MMTTBBAA rreeaaggeenntt iiss aatt ppHH 1100.. IIffnnoott,, aaddjjuusstt aaccccoorrddiinngglyly.. . 1122..1177 bTTicooaerebaaoccnhhasstaaemmbppulflefe,e,raa.dddd |1mmLL 00..55 MM TTBBAA aanndd 22 mmLLooff tthhee0.20.525 MM ssooddiiuumm ccaarrbboonnaattee/lssooddiiuumm bicarbonate buffer. : 1122..1188 UUssiinngg aann OOxxffoorrdd DDiissppeennsseerr,, aadddd 55 mmLL mmeetthhyyl-l-fteerrtt--bbuuttyy]l eetthheerr.. * 1122..1199 CCaalp~ eeaacchhssaammpplleeaanndd ppuutt .oonn tthhee sshhaakkeerr aatata sseettttiinngg ooff 330000 rrppmm,, ffoorr 2200 mmiinnuutteess. 12.20 12.20 CCeennttrriiffuuggee ffoorr 2200 ttoo 2255 mmiinnuutteess aatt a a sseetttiinnggooff33550000 rrppmm,, oorr uunnttiill llaayyeerrss aarree wweellll sseeppaarraatteedd.. 12.21 12.21 LLaabbeell aa ffrreesshh 1155 mmLL cceennttrriiffuuggee ttuubbee wwiitthh tthhee ssaammee iinnffoorrmmaattiioonn aass iinn 1122..1100.. 12.22 12.22 RReemmoovvee 44..00 mmLLooftf thhee oorrggaanniicc llaayyeerr ttoo tthhee ffrreesshh 1155 mmLL cceennttrriiffuuggee ttuubbee.. 12.23 12.23 PPuutt eeaacchh ssaammpplleeoonnththee aannaallyyttiiccaall nniittrrooggeenn eevvaappoorraattoorr uunnttiill ddrryy,, aapppprrooxxiimmaatteellyy 11 ttoo 2 2 hhoouurrss.. 12.24 12.24 AAdddd 11.0 .0 mmLL ttoo ceaacchh cceennttrriiffuuggee ttuubbee uusinsgaagigrraadnduuaatgteedd ppiippeettttee.. 1122:.2255 VVoorrtteexx mmiixx ffoorr 3300 sseeccoonnddss.. 1122..2266 FAAitltttteaarcchihnta2o0a.20.12 .up5amnmnnLyyllgoolnnasmmseeassuhhtoffviiillattelerr ot1ro0.la8o33w-ccvccosslyyurrmiinenggaeeutaaonnvddiattlrrwaannhsseffeenrrnetthcheeessssaaammrpypl.lee tothissyringe. to this syringe. Filter into a 1.5 mL glass autovial or low-volume autovial when necessary. 1122..2277 mLLaaatbrbeielxl,tthfhieenaaaulutstooovlviviaealnltww,iitetxhhttrthhaecestsittouunddydyantnueu,mmbabenerdr,,aanananliiymmsata(llsnn)uupmmebrbeferorraamnniddngggeetnhndedeeerrx,,trssaaacmmtippolnlee. ttiimmeeppooiinntt,, matrix, final solvent, extraction date, and analyst(s) performing the extraction. 1122..2288 CCaapp aanndd ssttoorree eexxttrraaccttss aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree oorr aatt aapppprrooxxiimmaatteellyy 44 CC uunnitiill aannaallyysissis.. 1122..2299 oCCrooimmnpclpleluetdteee itthnheesteeuxxdttyrraabccittniidooennr,wwoaorsrkkaspshphereeoetpt,r,iaaatttteta.acchheedd ttoo tthhiiss ddooccuummeenntt,, aanndd ttaappee iinn ssttuuddyy nnootteebbooookk or include in study binder, as appropriate. E.xtractionEToTfsSP-Fa8O-6So.0from Liver Extraction of PFOS from Liver 22881144..00007777 PPaaggee 88ooff1144 33MM_MMNNO011666656007733 13.0 DATA ANALYSIS AND CALCULATIONS 1133..01 DCaAlTcAulAatNiAonLsY:SIS AND CALCULATIONS 13.1 Calculations: 1133..11..11 CsCaealplcacurulalatatetee1tt.hh0eemaaLvveearrlaaiggqeeuoddteesnnossfiittyyhooofmfottghheenllaiivtveeerr hhoommooggeennaattee bbyy rreeccoorrddiinngg eeaacchh mmaassssoofftteenn separate 1.0 mL aliquots of homogenate. AAvveerraaggee ddeennssiittyy ((mmgg//mmLL)) == AAvveerraaggeemmaassss((mragg))oofftthheeaalliiqquuoottss 11.00 mmLL aalliiqquuoott 1133..11..22 CCdaialslcpcueulrlasateteed ttshoheleiaadmmtoiosuusnuntetopofefrilivmveeLrro((frmahgg)o)mppoeegrre11n..a00tmmeLLsuhhsoopmmenoosggieoennna)attuees((ioonrrg cctoohnenccfeeonnlttrorawattiiinoognn ooff deeqqisuuapatetirioosnen:d: solid tissue per mL of homogenate suspension) using the following `ggooffLLiivveerrxx.AAv(evgreoarfaggLeeidvdeeenrnssi+ittyyg**oofofWfhhaootmmeoro)ggeennaattee((mmgg/mmLL)) (g of Liver + g of Water) ** rreeffeerr ttoo 1133..11..11 ffoorr ddeettaaiillss. 13.1.3 CCsatalalcncudulalaratdtees aauccsttiuunaaglltcchooenncfceoenlntltrorawatitiinoognnsesoqoufaftPPiFFoOnOSS aanndd ootthheerr fflulouroochremoiccahlsieinnmcacilailcibbraraatltiioosnn standards using the following equation: 4CpL.LoooffSSnt`atmangncdLdaiarevrddexrxn/C1tomnLcrenhtaormaotitgoen(ni(autttggoe//mmnLL)) ==oFFifinnaaPll CCoFonncicenOenLntirtravSatetiiroonn ((rutgg//gg oorr mmgg//kkgg)) mg Liver / 1 mL homogenate* of PFOS in Liver "*rreeffeerr ttoo 1133..11..22 ffoorr ddeettaaiillss. 14.0 14.0 METHOD M~ETHOD PPEERRFFOORRMMAANNCCEE 14.1 14.1 TTsphheeecimmfieecttMhhooDddLddeeattneecdcttilioiomnnitlloiimfmiiqttu((aMDntLDitL)a)tiiisosnaann(aaLllOyyttQee)aanvnaddlmmuaetasrtr(iirxxesfpseperceticofifiiAcc.t.taRRecefhfeemrrenttootsMMBDDLLanrrdeeppCoo)rrtt ffoorr specific MDL and limit of.quantitation (LOQ) values (refer to Attachments B and C). 142 14.2 TTthhheeeqffuooallllilotowywiionnftgghqqeuuaalelixitttyyracccootnnittorrnoolal nssdaammapnpallleeysssiaas.ree eexxttrraacctteedd wwiitthh eeaacchh bbaattcchhooffssaammpplleess ttoo eevvaalluuaattee th1e4.q2u.a1litMyeotfhtohde belxatrnakcstiaonndamnadtrainxalbylsainsk.s. 1144..22..12 MMaettrhioxdsbpilaknekasnadnmdatmraitxrisxpibklaendkusp.licate sampletso determine accuracy and 14.2.2 Mpprreeacctriiissxiioosnnpiookftfethhaeendeexxmttrraaatccrtitixioonsn.p.ike duplicate samples to determine accuracy and 1144..22..33 CCthooenntitiniinntuuiaiilnnggcacclaialbliirbbarrtaaittoiinooncnuvvrevereri.iffiiccaattiioonn ssaammpplleess ttoo ddeetteerrmmiinnee tthhee ccoonnttiinnuueedd aaccccuurraaccyy ooff the initial calibration curve. 1144.33 RReeffeerr ttoo sseeccttiioonn 1144ooffEETTSS--88--77..00 ffoorr mmeetthhoodd ppeerrffoorrmmaannccee ccrriitteerriiaa. 15.0 POLLUTION PREVENTION ANDWASTE MANAGEMENT 1155..01 PSOaLmpLlUeTwIOaNstPeRsEVdiEsNpoTsIeOdNinAbNiDohWazAaSrTdEcoMntAaNinAeGrsE,MflEaNmTmable solvent waste is disposed in 15.1 hlHSoiiagcgmhahtpBBeledTTwiUUnatccshootenentltiaasaiibndnoereirsarspts,o,orsaayenn.ddd iuunssbeeiddohgglalaazssassrdppiicppoeetntttteeaiwwnaeasrsstt,eefiilssamddiimssppaoobssleeeddsoiinlnvbberrnootkkweenansggtellaaisssssdccioosnpntotaasiienndeerrissn located in the laboratory. E. xracEEoTmftSsPo-Ea8On-sS6o0from Liver Extraction of PFOS from Liver Page ois Page 9 of 14 22881144..00007788 33MM_MMNNo011666B6007744 l1e6.o0 RReECcOoRwDSs 0000000 1166..11 CCoroomimpnlpcleleuttdeeettihhneeteehxextt3rr-aarccittiniogonnstwwuoodrrykksbshihenedeeettr,aaatttstaaacpchpheerddopttrooiattthheiiss. mmeetthhoodd,, aanndd ttaappee iinn tthhee ssttuuddyy nnootteebbooookk or include in the 3-ring study binder, as appropriate. 1177..00 TABLES, DIAGRAMS, TABLES~ DIAGRAMS~ FLOWCHARTS, AND VALIDATION DATA FLOWCHARTS~ AND VALIDATION DATA 1177..11 AAttttaacchhmmeenntt AA,, EExxttrraaccttiioonn wwoorrkksshheeeett 1177..22 AAttttaacchhmmeenntt BB,, MMDDLL//LLOOQQvvaalluueessaanndd ssuummmmaarryy 1177..33 AAttttaacchhmmeenntt CC,, CCaalliibbrraattiioonn ssttaannddaarrdd ccaallccuullaattiioonn aanndd ccoonncceennttrraattiioonn wwoorrkksshheeeett 18.0 REFERENCES 1188..01 TRhEeFvEaRlEidNaCtEioSnreportassociated with this method is ETS-8-6.0 & 7.0-V-1. 18.1 The validation report.associated with this method is ETS-8-6.0 & 7.0-V-1. 1188..22 AAMMDDT-TE-PE-P2-222,, ""RRoouuttiinnee MMaaiinntteennaanncceeooffUUltltrraa--TTuurrrraaxx TT--2255"" . 1188..33 FFLiAAvCCeTrT-f-MoM-r1-A.1n.1a1,l,y""sEEisxxttUrrsaaiccnttiigooHnnoPoLffCPP-EFFlOOeSSctoorrroOsOtpthrheaeryr/AAMrnaiisoosnniiSccpeFFclluturooorromocechthreeymm"iiccaall SSuurrffaaccttaannttss ffrroomm Liver for Analysis Using HPLC-Electrospray/Mass Spectrometry" + 19.0 AfrecTe Documents 1199..01 AETFSI-~8C-T7.E0D,D"OACnaUlMysEiNsTofS Potassium Perfluorooctanesulfonate or other Fluorochemicailsn 19.1 ELLiTivvSeer-r8EE-x7xt.tr0raa,cctt"ssAuunssaiilnnyggsiHHsPPoLLfCPC-Eo-lEtaelscesctiutrromossppPrreaaryyfluMMoaarsosssocSStpapenecectstrruoolmfmoeenttarrytye""or other Fluorochemicals in wo20R.0evREiVsISoIOnNsS NReuRvmeivbsiesiiroon.n Number. RReeaassoonnFFoorrRRevevisisiioonn RReeDvviaistsiieoonn Date E.xtractionEEofTTSPs-F8sO-s6S.o0from Liver Extraction of PFOS from Liver 22881144..00007799 PPaaggee 10 ooff 1144 33MM_MMNNo011668686007755 MSSttuuddayy #7 trix| SaSpuuprrrroooxgg.aattee SSptdpdm|| apFpFrCCoMxMxi0xS.5WStp@dpm|| apFFpCrCoMxM.iixx5 SSpt@pdm|| apFpFrCCoxMM. 5ixx0SSpWtdpm| Comments Commellt$ BMBwooaexxtrpi#x a( aacpcttpuuraaollx, pppe pppmmm| aaapcctptuuraaow llx. 0.5 ppppppmmm||eaaacpctptuuraaollx. 5 ppppppmmmf|eaaapcctptuuraaollx. 50 ppppppmmm WDka/DteaySpiked/Anal # # ws -- Date Spikeed/CAoCnValyst rr --r ------ wMMSSpD |r -- r r 1 r rr T r rr rr r 1 r rr rr r T rrr "== r rr r r w rr r r1 rr r rrr rr 1 r rr r rr r r r -- r r T r r r r r r E-- E -- ---- -------- -- r ---- r pr 71rr1 ET Mbo ----iedTr-- -- TTCR Liver amount = SE g --pan| Date & Initials TE -- Std, # Std. # TNoAo F [t Rem ma a t looeolo Ce pe------------------|| Evn~3r~tor Tern_ner~ture os T~-A- Cont CalVeniicaons sedthesamematrix3s fortheSandardcurve AtattacchhmmeenntAtA': EExxutrraacctiioonn WWoorrkkshseheteet.ExtracEoEtTfTSiSP-F$8oO-4n6S.00from Liver I~xtraction of PFOS from Liver 22881144..00008800 Page L1of14 Page 11 of 14 33MM_MMNNO011666656007766 MDL/LOQ values for rabbit iver MCCooDmmLpp/oLouOunnQdd|valuM M(epsDDpfbLoL)r |r|ab(LLbpOOiptbQQl)i|v|erLLAipinnpeeraaorrxiCCamalaliitbberraacttoiinoocnnenRRtaarnantggieeon((LsLCCtoRR)b)e used for preparing the (ppb) (ppb) AStpapnrdoaxridmCaatelicbornatcieonntrCautirovnes to be used for preparing the [1 PPEFOOSS 84 8.45 |5 2266.59 [3S300tappnppdbbar-d112C200a00libppprpbabtion Curve PPFFOOSSAA |33.505 |I0 1L1.I1 1[212pppbpb--11220000ppppbb PPEF{FOFOOSSSAAEAA-OH|124.60 |38 7485.3 3[36000 pp ppbp--p ---1912b0b 200000pppppbpbb* EtFOSE-OH 108 MMS55566 82.3 23642_5| 262 666000 ppppppbbb---- 91102200000ppppbppb*b. PPFFOOSSEEAA 33.9 110088 3300 ppppbb-- 11220000 ppppbb. MiMnDDcLL//aLLoOOfcQtQhevvhsaaleluueemsastiirnnirrcaaetts,, wbbeoovrvieinneee,x,taarnnaddctmmeodonnaknkedeayynalliilvvyeezrrewwdeewrrieetnnhoottthssettaarttaiisbsttbiiicctaallllliyyveddreectteuerrrmmvieinsneedtd.o.deTTtwweoromiccunurervveess ienqueiavcahleoncfet.hesReesmpaotnrsiceess iwnetrheeeraxtt,rabcotveidnea,ndanadnamloynzkedeywvitherthceurravbebsitwelirveerecquuirvvaelsetnot dtoettehrme rinabebit erqesupiovnasleens,cet.heRreefsoproe,nstehesiirnMthDeLraat,nbdoLviOnQe, wainldl bmeoanskseuymleivdetrocuberveeqsuwivearleenetqtuoivtahloesnet tvoaltuhees asrabbit . rddeeesteperormmnisinensee,ddthffooerrrettfhhoeererra,abbthbbieittirlliiMvveerDr..L and LOQ will be assumed to be equivalent to those values as ; "+ReRfeE eferr ttooALLOQQQFeSSsuutmmiO mmmaaartreyyS saoannnddlME yMfDDoLrL- sMstDtuuLddO yyaininndEELH TTOSS-Q-8.8.-6D6..i00d&&no17t..m00e--VeVt--11crofiotrerfrufiuratrfthhoerervrianilnfifodorarmtmaitaoitnioonn C*CooEmmtFppOoouSunEnd-dO::PHrPPeepFFsatOOriemSSda|tes only for MDL and LOQ. Did not meet criteria for validation. Rangeof |LCRNOR| Rangeol |LCRGoa| Rangeol| LOREM Liver sPrnuaronengpdgaaeerroeodfdfs|| amcveuerrnavgege | aeane | laomwsed alvwsea || hagnheed ~i iili~ i i i i:i:~i~i~iiii~i~ !~i~i~:ii~i~~i~ii ! hagmhesa | ::::::::::::::::::::::::::::::: matrix standards (ppb) (ng/mL) ~,b) (ng/mL) :::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: Rabbit 6.19 - 1237 12- 1200 6-300 60- 1200 i:::::::ii~iii~:i~iiiiiill CCoommppoouunndd::PrPPepFFaOrOeSSd AA| Liver | Prraegpaeroefd| Rmanegnegof | DmCeRafmoem|| RTlaaomnwggeeeodoff | LOloRwGeodm|| Rhainggehosf | LgORhEwda| mix | Liver matrix sandards range of standards | a"vceurargee are low std ame | ane ame (~pb) (t~#mL) Rabbit 6.19 - 1237 12- 1200 12 - 300 Compound: PFOSAA Compound: PFOSAA Liver | Pcraegpaeroefd|| Raawnmggeoef | LmCeRcEuoem|| Rlaonwgsedl | LOlRwfsaom|| Rhaingghesodf | LOhRigEhGsaH Prepared Range of i ~:~:~i:~ : ::: ::: ::::::::::::::::::::::::::::::: :::: matrix | sandords | curve ane ame | ame ame matrix standards curve Range of ::::::::::::::::::::::::::::::: ::::::::::::::::::::::: curve :. :. :. :. :. : i i :'at~e:!:::,i~:.::::~i :?: curve (ppb) (ng/mL) (ppb) (ng/mL) ::::::::::::::::::::::: (ppb) (ng/mL) ::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: ~:~ ~:~ ~ ~:~:;~:~:~ i:;~:~:~;~ Rabbit 6.16 - 1232 12 - 1200 ::!i::::::30:~::12001::!::::::. 30 - 900 AuachmenBt:MDULOQ Valves Attachment B: MDL/LOQ Values E+xtracEEotfTTSiSF-8o8O-6Sn600fom Liver Extraction of PFOS from Liver 22881144..00008811 Page 120114 Page 12 of 14 33MM_MMNNo011668686007777 `Compound: EtFOSE-OH [omaE|[ l2| e E ESe Eo r R aTTREEES TEVTE CCoommppoouunndd:: PPFFOOSSEEAA | TE er Te Ty a Prepared PEE EE Liver range of matrix standards (m~b) (n~rnL) Rabbit 6.17 - 1235 o1 CE `CCoommppoouunndd:: MM555566 Liver |"PPrrrenepgpaaerroeefdd.| mmLaativrriexxr . |, sraanndgaeroifs | standards .," (l~b) (ng/mL) Rabbit 6.17 - 1235 Raavnegmegoef ~ LCmReferuovme|| Rlaonwgseodf ~LClRfwrosm|d| Rhainggheaodf -- LChRifgrhsodm uve ERE curve curve E ane ce 31 - 1200 ::::::::::::::::::::::::::::::::::: :::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: N/A N/A msn.-- es Attachment B: MDL/LOQ Values ETS-8-6.0 Extraction of PFOS from Liver 22881144..00008822 I Page 13 of 14 3M MN01666078 IToonn PPaaiirr SSttaannddaarrdd CCuurrvveess --- TTiissssuuee Prep date(s): PAASnarnaemalpplyyltdteeea(ltmsesa)(:t:sr):ix: Sample matrix: MMTeaterhtghoeodtidra/renevavliiysstiieoosnn)::: TFFFCaCCrgmmmeiiitxxxasssnttdaddlyaaatpppeppp(rrsroo)ox:xx... 00$..05500000ppppppmmm::: FSFFCCCummmriiixxxrssstttddosd taaagdpppapppaprrrpoootzrxx.o.. ex5550...000.001ppp00pppmmmp:p:: m: Surrogate std approx. 100 ppm: SSEtqtaaunniddpaamrreddntnnuunmmubmbeberer:r: : EFFBiliqnnauaanlilpkssmlooillevvvnreetinnitntdueaanmnntddibfeTTireNN:r::: Blank liver/identifier: bg - . Actual conceonfsttairdaradstintiheoFCnmsix Actual concentrations of stahdards in the FC mix PFOS FSutdncolnc|ESidoone|ESucgone| Sidcr oone| Sidcne one g aScomnl e|Antespiked Std cone PFOSA Std cone PFOSAA Std cone EtFOSE Std cone PFOSEA Std cone M556 Std cone Std cone Am't spiked All Density nL 5 [Tou0g.s5m0o0L|0u0$s./5m000L|0u0s~.5/0m000L ug/mL |o0s.5o00 |ou0sg.5/mo00L [ou0s#.5rn0o0L | u~/m~t. Too00m.0L0a2 |ol0.1eg677 | [[CToo0s.s5o0w0 T['oos0s.5o000 | |oo0ss.5w0wo0 ||0o05s.5000 [|T0o500s..55000e000 [|o0s00..s55e00000 | | | oo0.0o0s4 Tool |o|0io.1I66r77 | 0.010 0.167 [To00s..55000000[0300..05500000 |0005..55000000|o00s..5500000 |o0s.50o0 o0s.50o0 [| o0o.020 |oi0.61677 | [C505.05.00000 [s05.5.o0000 [s0o5.5.00o00 [so0"5.5.0o000| s050.5.00000[s005.5.00000 | [so5.0o0 [so5.0o0 |s5o .00 | s5e.0o0 |s5o.0o0 | s5e.0o0 [| [so5.0o0 [so5.0o0 | s5o.00o [| s5o.0o0 | s5e.0o0 | s5e.00o[| [50500.0 1 5500.00 | 5500.00 | s5o0,o0 | s5o0.o0 | s5o0.0o | 1 000..000141000 0.167 0.167 o0o.020 [oI0s.1677 | o0o.03o0 [oe0.16r"7 | o0o.00o4 |oi0.61677 | Calculated concentrationsofstandards in the sample matrix Calculated concentrations of standards in the sample matrix FOS| PFOSA| PFOSAA| ECFOSE| PROSEA| MSS6 Sorrogae| Al PFOS PFOSA PFOSAA EtFOSE PFOSEA M556 Surrogate All Fil | Fil |Fissloooc| Final | Final | Fal | Sdoone | Scone | Amt Final Final Final cone Final Final Final onc | om | wp |e | om | omc | agg | one | kd COI1C conc conc Gong conc ng/g ng/g [ss5.9o9 | s5o.9o9 | 359.999 |s5o.9o9 |s5o.9o9 [so5.9o9 Std cone Std cone Am't ng/g ng/mL spikod mL [1 tw |o0w.00s5 } i mn [2921929..09 [2921925..09 | 09 12.0 29.9 | 221092..009 [2021929..90 [2021929..90 [1 ogs Surrogate [on59s.9 [w5s9.9 Tw59o.9 To59o.9 s5e9.y9 [Clo[10 |10 | 20| 120 | so59s.9 | JFFainael cowne | [ioT7777] ngml [Ta2192o09 | 221092909 | 221092900 | 202192009 | oo 120 299 | 229192090 | ["o0s.50w0 | [To599 [so59o9 | s5o99o |s5o99 | s5o9o9 | s5o99 | | [o8s98 [wo8s98 | s89s8 |s8m98 |s8m98 | 88B98 | | [Co119e8 u1s19s8 [vo11s98 |wo119s8 |w1o19s8 | w1e19s8 || Erfees Validated Validated r[anPge-sr- aaopppprrsooxxiim|maattee ccpoonrnccoeensnttsrraa|ttiioonnFss FOSAA |BWOSEOR| [RabbLivier StPoFmOSp [PSFiOmSoAes|S1P0F00O5SpA5A | sEitFoOoS0~p-gOhH| PPoOORmAAKg ||Sr0PoF0Os0SeEaA|| Rabbit Bovine ag 5-1000 ppb 5-1000 ppb Estimates only, use rabbit values. 5-1000 ppb Loe 5-1000 ppb Laue LS 5-1000 lrpb [Flour Rat Monkey Etats Estimates Estimates ony.only, only, weuse use bsoes rabbit values. rabbit values. Aachen: Attachment C Sandard C: Standard CCaallceulwaatitonisons.E_xt ra ctio noEEfTTSSP-F8$O-66S.00 f r om Liver Extraction of PFOS from Liver Page 14of 14 Page 14 of 14 33MM_MMNNO011666656007799 22881144..00008833 3E 33MMM EEN NNVVIIRV ROONNMMI EENNTTR AALL LLAAO BBOOORRRN AAATTTOOORRM RYYY E~ N~T ~AL M MEETTHHOODD AANNAALLYYSSIISS FOOLFFUPPOOORTTOAACSSHSSEIIUMUMIMCPPAEELRRSFFLILNUUOSOREROROUOOMCCTTEAAXNNTEERSSAUUCLLTFFSOONNUSAAITTNEEGOORR OOTTHHEERR F'IL-HIUPPOLLRCCO--ECELHLEEECMCTTIRCROAOSSLPSPRRIANAYYS//EMMRAAUSSMSSESSXPPTEERCCATTRCROTOSMMUEETTSRIRNYYG M Meetthhoodd NNuummbbeerr:: EETTSS--88.-55..11 : AAuutthhoor:r: ,L.Liissaa CClleemmeenn,, RRoobbeerrtt W Wyynnnnee ~ . AApppprroovveedd BByy: . AAddooppttiioonn DDaattee:: 0033//0011//9999 RReevviissiioonn DDaattee:: LLaabboorraattoorryy MMaannaaggeerr GrowpLeader Group Leader TTeecchhnniiccaall RReevviieewweerr -- -- DDaatete. DDaamtee Due Date 1.00 SSCCOOPPEEAANNDD AAPPPPLLIICCAATTIIOONN I1..I1 SSccooppee:: TThhiiss mmeetthhoodd ddeessccrriibbeess tthhee aannaallyyssiissooffsseear-tumma eexxttrraaccttss ffoorr ffluuoorroocchheemmiiceaall ssuurrffaaecttaannttss uussiinngg HHPPLLC-Ce-leeleccttrroosspprraayy//mmaassss ssppeeccttrroommeertryy.. 11..22 other ionizable compounds. AApppplliiccaabbllee CCoommppoouunnddss:: FFlluuoorroocchheermniiccaall other ionizable compounds. ssuurrff'aaccttanntts or other fflluuooriinnaatteedd commppoouunnddss,, or 11..33 vMMaaltairtdriaictceieossn:: reRRpaaobbrbtbiitt,, rraatt,, bboovviinnee,, mmoonnkkeeyy,, aanndd hhuummaann sseerruumm,, oorr ootthheerr fflluuiiddssaassddeessigingatnedaiitnntethhdee validation report. Word 695 Word 6/95 Analys-isof SerEEuTtmSEsx-e8t-rs5a.tc1t Using ES/MS Analysis of Serum Extract Using ES/MS Page 109 Page I of 9 W3M_MNMON1O61866560088D0 22881144..00008844 22..00 SUMMARY OF METHOD SUMMARY OF METHOD 21 2.1 TTohthihiessrmmfeletutihhdoos,dduddseeissnccgrrHiibbPeeLss ttChheeelaaenncaaltlyyrsosiisssprooaffyfl/lumuoaorsrosoccshhpeeemmciticcraaollmsseuurrryff,aaccottraannsttissmieelxxattrrraasccyttseetddemffrroaosmmaspseperrruoupmmriooarrte o"TfTlthhhueeeorraaonnfcalahulleyiydmsssiii,sscauiilsss,ippnseegurrfcfHohorPrmaLmseeCdtd-heebblyyepcemmtrorfoonlnsiupitotroorarroyiion/ncmggtaaaansessssiinsunpggllefleecontiiraoootnnmecce(hhtPararyFraa,OcctSote)errrisiasisnmttiiiociclnaoo,rffmasayiszppta=aerrmt4tii9ccau9usllaaarrppropriate. fAtAldhuddeodiirtiodtiiecoonnhntaeialmtllylyyoi,c,fassla,aammscpupolclmeehspsaommsuaatnhyydebbbpeeyeaardnnfelaautlloeyycrzzoteeioddncguutassdniianneuggsguhaaltftteoaarnnnadodteneemsm(oPmmfFaaOstshssSe)sspppaaeenrccieottnrrntoo,mmireonentltzee=rr tt4oo99ffuu. rrtthheerr vveerriiffyy the identity of a compound by detecting daughter ions of the parent ion. 30 DEFINITIONS 3.13.0 3.1 sDyEAAstFtteImmNmosoIsTspaIplhOhleIoe~rwrSiifccorPPrvreaesrsissouuurrsee mIIeootnnhiizozaadttsoiioofnnio((AnAiPPzIIa))t::ioTTnhhebeyMMiuitccirrlooizmmianagssssvaQQruiuaoatuttstrrsooouIIIlrctterrsiip,plleeprqqouubaaeddsr,ruuappnoodllee isiPnnyrttseeetsrresffmaauccrseeessa.c.llhoeTTwmhhieefcsosaeerlviilnnaiccrzliluouadudteesibbomuunettt(haaArorPeedCsnn)ooo,ttflTiiiohmmnieitritzeemaddottsitoopo:nr: abEEylyl,eeuceettttircrlo.iozssippnTrrghaaeyyvaiIIroooinnnoiiiuzzzsaaatttsiiioooounnnrpc((r'eEEoSsSc,IeI)p)s,,rsoAAbittnemmsto,ohsesapspnhehdeerriicc Ptteerccehhsnnsuiiqqrueueecsshooecmccciuucrrassl Iaaottnaaittzmmaotoissoppnhhe(erAriiPcccppIrr)e,essTsshuuerrerem((ioi.es..p,rnnaoyot,t ueutnncdd.eerrTaahevvaaioccnuuiuuzmma)t).i.on process in these . 33.22 presEEslulreeecc,ttrrwoohssepprrreaabyyyIIiooonnniiszzaianttiisooonnlu((tEEiSoSn,,aEErSeStIIr))a::naasfmmeeretrthheoodddtoooffthiioeonngiiazzsaattpiiohonansppeeervrfifoaorrtmimneeyddcaahttaarattgmmeodossdpprhoheperlrieitccs. : TpThrheeesssseeurccehh,aawrrggheeeddreddbrryooppiloleenttsss iaanrreesopplrurootiddouuncceaerddebbtyryattnhhseefeaarpprpepldliicctaoattiitohonne ogfasa of a pshtarsoengveialetcitnryiccalhafrigeledd strong electrical field. droplets. * 33 3.3 Mass Spectrometry, Mass (MSM/MaSs)s:SpTehcetrAoPmIetQruya,tMtraosIs SStprpieepclcettrrqooumamdeerttueeprrol((MeMSsS)y),s,tTTeamasnnddareeemmeqMMuaiaspsspseSSdppweeiccttthrrooqmumaeedttreeurrpole mass. (SssM eeullbeeSscce/ttMqiivuveeeSn)ddt:eelttyeTeccdhtetoeotrersAcs.t.PeIdIl.oQonsusAaaattrsrreeionssgIeelIlleeetMccrittpSiivvleeemllqyayuyddaiidbsscreucreiprmmoipilmneliaonstyyeaedstbdteebymdfyosmrmaaiasrosesns edttoqeotucceihphcatapirregogdneeworrraaittthiaioosq((eumra2i/dez)sr)u(aapMnnoSddle/MmSa)ss sfuorbsmeoqrueenstpleycidfeitcefcrteadg.meAntastinigolneiMnfSormmaatyiobne employed for ion detection or a series (MS/MS) 3.4 3.4 for more specific fragmentation triplCCeooqnnuvavedenrntutipiooonnlaeallsvvysss..teZZm--ssspp(rrpaoasyyt information. probe interface: The latest modelsofMicromassQuattro p1r9o9b8e) iuntitleirzfeacae":Z-Tsphrealya"tecsotnmfoordmeatlsioonf.MTichreosmparsasyQeumaittttreod II II tffdrirriroopelmmcetaalqyuppaarrtdoorbbtuheepeioisscloooenrrsettyhhasooptggeeoormnntsaaullr(eptt,ooosatttfhhte1eer9cc9poo8ann)seesuiaatnpiplegeirrtzttehuurrraeeo.".uZg-hIIsnnapttrthhaoeeyr"cctooucnnoovvuneesfnnopttraiimotoannhtaawillaonycc.ooinnnffTtoohhrreemmaacsttpoiiruooannynteeiirttmiiisststaeiidmmeedd deemillareeieccncttttrrloeoydndeeaa..tnctTTehhheaoorcueuoggnthhehettahhspeeaemrccetoo.unnrffei,Higgoauuwfrrteaaevttriiepoornan,siisZsi-ddnsiigpffffrteeahrryreecnnottou,,gmtthphhoaeenmtmeeoentrttthhusoooaddunsssodpofafctooohnppvweeerranaaytttiiiiooonnnnt,,ahlelclecceaooanmunipninntoggen,,renaanntdds are mnncoaoottmipnccatootemminppbaaalntteciiebbwlliaeetrhewwiitstthoehhmsooeannomeeteha.aennrooHttZohh-ewesrrep,,vrebbauruytt,sooyZnns-lltsyyepmrwwsaii,ytthhectsoscii.mm)mpiiollaanrrenssytysssttaeenmmsds (coin.veZn-tsiponraaly (i.e., Z-spray ccoommppoonneennttss components aarree are compatible with some other Z-spray systems, etc.) 33.55 QuatMMtarasosssILlLytyrninpxxleSSqoouffattdwwraaurrpeeo::leSSsyyysssttteeemmms.ssooffCttuwwraarrreeentddleeyssiiMggannseeddsfLfooryrtnthhheeasssppWeeicciniffdiiccooowppseer9raa5ttiiaoonnndooWftfihthneedssoeewsNT 4Q4in.00usvatvetrrteursrmosieionoInItnsts.(r.iMpAiAllcellrlqvovumeaeardssrirsuopnQsosualaareirteesrsoyisosmitmniIelImialstarsrr..i.plCFFeouoqrrrurmaemodnortrluryeepdoMdeletaeatsaiMsillLassssysesneeLxetyhtnhhaxeesmWmoaraniMnnuuadaaosllwsspsLspeyce9nic5xfifiaiNccnTdt0oWtUthshieenerd'oswsNT iGGnuusitdirdeue)m.).ent (Micromass Quattro II triple quadrupole MassLynx or MassLynx NT User' s 4.0 WARNINGS AND CAUTIONS 44.10 WHAeRaNltINhGaSndANSDafCetAyUWTaIOrnNiSngs: 4.1 Health and Safety Warnings: 4.1.1 Use caution with the voltage cables for the probe. When engaged, the probe 4.1.1 Uemspelcoayustiaonvowltiathgetohfe avpoplrtaogxeimcaatbelelsy f5o0r0t0heVoplrtosb.e. When engaged, the probe employs a voltage of approximately 5000 Volts. Analy.sisEofTSeSrEuT$mSE-s8xt-5r)a.1ct Using ESMS Analysis of Serum Extract Using ES/MS 22881144..00008855 PPaaggee 220o1f99 33MM_MMNNO011668666008811 44..11..22 WWanhhdeecnnlohhtaahninnddgll,iinngg ssaammpplleess oorr ssoollvveennttss wweeaarr aapppprroopprriiaattee pprrootteeccttiivvee gglloovveess,, eeyyeewweeaarr,, and clothing. 42 Cautions: 4.2 Cautions: 442.2..11 DDIfoothnneoobttaoocppkeerpraartteeessssuoorllevveeennxttcppeeuudmmspp4ss0aa0bboboavvree, cctaahppeaaHcciPitt1yyo1of0f04400wi00lblbaiarnrit((i55a88te0000aupptssoi)m)abbtaaiccckkspphrrueetssdssouuwrrnee,. If the back pressure exceeds 400 bar, the HP1100 will initiate automatic shutdown. 44.22.22 DDoo nnoott urunn ssoollvveenntt ppuummppss ttoo ddrryynneessss.. 50 INTERFERENCES 55..01 INTToERmiFnEiRmEiNzeCEinSterferences whenanalyzing samples, teflon should not be used for sample 5.1 Tssttooorrmaaggineeimoorrizaaennyyinppteaarrrftteorofefinincnseststrrwuummheeennnttaaatntiiaoolynnzttihnhaagtt sccaoommmpeelsessii,nnteccofolnnottnaaccstthowwuiitltdhh ntthhoeet sbsaaemmuppslleeedoofrroreexxsttarramacctp,tl.e 660.0BoEQuUe-~wPMe~srCrr " 66..11 EE`qmquoudiiippfmimceaentntitollniisssitteeddbtbheeellrooawwwmmadaaytybabeaesmmmodeoitdfhiifoieedddidiennviooarrtddieoernrts.toooopptitimmiizzee tthheessyysstteemm.. DDooccuummeennttaannyy modifications in the raw data as method deviations. 66..11.-.11 MMelieicccrrtoormmosaapssrssayQQuiuoaantitttzrraootiIIolInttrrsiioppullreeceqq.uuaaddrmuppoolleeMMaassss SSppeeccttrroommeetteerr eeqquuiippppeedd wwiitthh aann electrospray ionization source - 66..11..22 IHa-InP:Pd111a10u0t00oslloaowmwplppeuurllssee ssoollvveenntt, ppuummppiinngg ssyysstteemm,, ssoollvveenntt ddeeggaasssseerr,, ccoolluummnn ccoommppaarrttmmeenntt,, and autosampler 77..00SUPPLIESAND MATERIALS 7.0 Supplies SUPPLIES AND ]3t&TERIALS 7.1 7S.u0p1plieHsigh purity grade nitrogen gas regulated to approximately 100psi(House air 7.1.1 Hssyyissgttheempm)u) rity grade nitrogen gas regulated to approximately 100 psi (House air 77..11.22 HHin:PPtLLheCCraaannwaalldyyatttiiacc.aall ccoolluummnn,, ssppeecciiffiiccss ttoo bbee ddeetteerrmmiinneedd bbyy tthhee aannaallyysstt aanndd ddooccuummeenntteedd 7.13 Cinatphpeerdawautdoavtiaa.ls or capped 15 mL centrifuge tubes 7.1.3 Capped autovials or capped 15 mL centrifuge tubes 8.0 REAGENTS AND STANDARDS 818.0 RERAeaGgEeNnTtsS AND STANDARDS 8.1 Reagents 88..11..11 MMeetthhaannooll,, HHPPLLCC ggrraaddeeoorreeqquuivivaalleenmt 88..11..22 MMeqiiullilliv-iQal-TeQMnTMt,wwaaatntederr,,maaallyllwwbaetateperrruouvssieedddeidinnbttyhhiiassMmmieletlthh-ooQddTssOhhooCuullPddlubbseesMMyiislltllie-iQm-ToQMrTMowwtahateteerrrvooerrndor equivalent, and may be provided by a Milli-Q TOC Plus system or other vendor 88..11..33 AAmmmmoonniiuumm aacceettaattee,, rreeaaggeenntt ggrraaddee oorr eeqquuiivvaalleenntt 88.22 SSttaannddaarrddss 88..22..11 TTpyrypepipicacaralellldyy dttwuwrooimnmgeettthhheooeddxbtblralaancnktksi,so,nttwpwrooomcmeadtaurtrrieixx.bbllSaaennekkssE,,TaaSnn-dd8-ee4iig.gh1htteeeenn mmaattrriixx ssttaannddaarrddss aarree prepared during the extraction procedure. See ETS-8-4.1. sosoeeReeNe 9.0 SAMPLE HANDLING Analysisof SerEEuTmsESx-s8t-r5)a.c1t Using ESS Analysis of Serum Extract Using ES/MS Page 3019 33MM_MMNNo011e6B6s6008822 22881144..00008866 99..11 FaFrrreeessshhtommraeatdtriiixxn cssattaapnnpddeaadrrddassutaaorrveeiapplrrseeppoararrceeaddpwwpieittdhh 1eeaaccmhhLaanncaaellnyytssriiissf.ugEEexxtttrruaabccettseedudntssittlaanannddaaalrryddsssisaanndd ssaammpplleess are stored in capped autovials or capped 15 mL centrifuge tubes until analysis. 99..22 IIaffpapanrnaoalxlyyissmiiasstwweilillyll bb4ee Cdd,eellaoayryeeaddt,,reeoxxottrrmaaccttteeemddpessrttaaatnnuddraaerr,ddssunaatnnilddasnsaaalmmyppslileesscsaccnaannbbbeeeprreeerfffrioiggreemreraadtt.eedd aatt approximately 4 C, or at room temperature, until analysis can be performed. 10.0 QuALITY CovTROL 1100..01 QSoUlAvLenITtYBlCaOnkNsT,RMOeLthod Blanks and Matrix Blanks 10.1 Solvent Blanks, Method Blanks and Matrix Blanks 1100..11..11 SeSoaolclvhvbeeanntttcbbhllatannokkssd,,emmteeerttmhhioonddebbclloaannntkkassmiaannnaddtimmoaanttrroiirxx cbballaranrnykkossvaaerrree pprreeppaarreedd aanndd aannaallyyzzeedd wwiitthh each batch to determine contamination or carryover. 1100..11..22 AAnnaallyyzzee aa mmeetthhoodd bbllaannkk aanndd aa mmaattrriixx bbllaannkk pprriioorr ttoo eeaacchh ccaalliibbrraattiioonn ccuurrvvee.. 1100..22 MMaattrriixx SSppiikkeess 1100..22..11 MMraetacrtorivixxerssyppieikfkfeeissciaaerrneecypp.rreeppaarreedd aanndd aannaallyyzzeedd ttoo ddeetteerrmmiinnee tthhee mmaattrriixx eeffffeecctt oonn tthhee recovery efficiency. 1 1100..22..22 MMreaacttorrviiexxrssyppifikokree eddauucpplhliicacnaaattleeyssteaa.rree pprreeppaarreedd aanndd aannaallyyzzeedd ttoo mmeeaassuurree tthhe pprreecciissiioonn aanndd tthhee recovery for each analyte. . 1100122.:33 AAmninanalliyymzzueemaaommaf2attrrsiixpxisskppeisikkpeeeaarnndbdatmmcahat.trriixx ssppiikkee dduupplliiccaatteeppeerrffoorrttyy ssaammpplleess,, wwiitthh aa minimum of 2 spikes per batch. 1100..22..44 MMthaeattririniixxtissalppiickkaeeliaabnnraddtimmoanattrcriiuxxrvssepp.iikkAeedddduuiptpliliioccnaaattlee sccpooinnkcceeencntotrnracatetiinootnnrssatwwiiiollnllsffaumlllaiiynnftthahlee immniitddh--erraalnnoggwee-ooff trrhaaennggineeitooifatflthhceealiiinbniirttaiiatailloccnaallciiubbrrrvaaetti.ioonnAccduudrrivvteieo..nal spike concentrations may fall in the low- 1100..33 CCoonnttiinnuuiinngg CCaalliibbrraattiioonn VVeerriiffiiccaattiioonnss 1100..33..11 CtChooenntctiainnliuubiirnnaggticcoaanlliicbburrraavttieioonn vveerriiffiiccaattiioonnss aarree aannaallyyzzeedd ttoo vveerriiffyy tthhee ccoonnttiinnuueedd aaccccuurraaccyy ooff the calibration curve. 1100..33..22oAAfnnoaanlleyyzzeepeaarmmbiaitddc--hrr.aannggee ccaalliibbrraattiioonn ssttaannddaarrdd aaffteerr eevveerryy tteenntthh ssaammppllee,, wwiitthh aa mmiinniimmuumm of one per batch. 1C1110.0ACUALIBBRRATIAONTANDISTOANNDAARDINZATDIONSTANDARDIZATION 1111..11 AAavnneaarllayygzzeeeottfhheetweexxotstrrtaaaccnttededadrmmdacatutrrriivxxesssttwaainnlddlaabrreddsspplproirtiootrredttoboyaalnniddneffaoorlllrloeowgwiirnneggsseeiaaoccnhh(ssyeett=oomffyeexxt+rtraabc)ct,stsw..eiTTghhheeted alV/vxxe,,ranngooett offoofrrtccweedod ttshhtarronoudugagrhhdzzceeurroorv,,ueusssiiwnngigllMMbaeasspsslLLoytytnenxdoobrryootlithnheeerarrssruueiigttaarbbellseesissooonfftt(wywaa=rreem. y + b), weighted 1111..22 IIsftfatthnhedeaccruudrrcvvueerddvooeee(ssifnnnooettcmmeseeseeattryrr)eeqqauuniidrreermmeeaennntatsls,y,zppeee.rrffoorrmm rroouuttiinnee mmaaiinntteennaannccee oorr rreeeexxttrraacctt tthhee standard curve (if necessary) and reanalyze. 1111..33 FFuosoerr tpphuuerrpplooossweesseonofdfoafacctcchuureraacccayyliwwbhrhaeetnnioqqnuucaaunnritvitteattriianntgghellroowtwhalleenvvteelhlsseoofflfalannraaallnyytgteeeo,,fiittmmhaeayystbbaeennndeaecrcedesscssuaarrrvyye.ttoo uEEcaxsxleaaimmbtphrlpaeetle:ilo:onwwwcehuhnreedvnneoaacfttotttenhemsemippsctttaiiinlnnigbggorttafoottioqqhunueaancnstuttiriattvnaaedtteearraaadtpphspperfrroortxxohimiammna5atttpheeplelybyfut11lo00l rp1pa0ppn0bbgopeofpfoabanfnarthlaaytleythteesert,,atngghedeananneredrtrahactetueefr2valle. crrraeaanglnirggbeeersasootiiffoottnnhheewceucciruugvrrhevvteecion((n5g5soppifspphtbbiintgtgooho11cfo00tn0h0c00eenppstptpabrb)na).td.iaorTTndhhsisisstfrawwonidmilalllr5drrseep.ddpuubcceetoiinn1aa0cc0ccuuprrpaabccyyraaattthttreriirbbutuhtteaednd tttohoelliifnuneelalarr regression weighting of high concentration standards. Analys.isof SerEEuTmmSEsx-8at-rs5a.sc1t Using ESMS Analysis of Serum Extract Using ES/MS Page dof9 Page 4 of 9 22881144..00008877 33MM_MMNNo011668686008833 L0 1o2.p0ePoRcO0 gCEoDwUrReESs00000000 1122..11 AAccqquuisisiittiioonn SSeett uupp 1122..11..11 CfClililiccekknaoomnne usststaairrnttgbbMuuOtttt-ooDnnAiiYnn-ttlhhaeesAAtccqdquiuigsiistiiottiifooynneCCaoron-ntstraroomllplPPaeannenelu.lm. bSSeeertt,uuappssaaigssnaammappmlleeetllhisstot..d AAssssiiggnnaa (MS) fffioolrrenaaaccmqquueiirruiisnniggn,,gaaMnnddOtt-yyDppAee Yiinn-Issaaasmmtppdllieegiddteeossccfrryiipeptatiiro-onsnassm. ple number, assign a method (MS) 1122..11..22 TTSoIoRccr(reeSaaitnteeglaae mmfeoetnthhRooeddcoccrlliidccikkngoo)nnossrccaaMnnRbbMuu.ttttoonnSeiitnn ntthiheezaAAtccqiquouinsisiMittoiioodnneccoaonsnttarrpoopllrppoaapnnreielaltaaenndadnssdeellmeeacctsts t1SSoI0IRR44s99.(99SiSoonarrgvlooeetthhaIeoecrqrnuaaiRppsepipcrtriooooprpnrdriiimnaaetgttee)hmmooadra.ssMsseIeRssfM.M.AAS/SffuMuelltSl IssoiccnnaasinnztaiirsstuimuuoessnunuatMalsllloyaydrcceeoolealllmseepccalttpeoepdydreoaadpll,oorninaaggdtdewwiitmititahohdnttamhlheeass ppS`rrIGoRoUddsIu.uDccEtSt aTiiovoOnne ffaDrrcaAaqgguTmmiesAeinnttiAtoaaCtntiiQomoUnneItiihnSnoffIodoTrr.mImaIOatftNiiMoonfnSor/mmMaaadySydibbitneeisocctnoroalulllmleeiccenttnefetdods.r.maarSSeteeieceomnMMpaiilnccodrryooeMmmda,RassaMssddMM(iatMaisuoslsnstLLaiylypnnlexx RGReeUaacIcDttiiEoonnTMMOootDtoiiArtioTnriAgn)gA.).CQUISITION for additional information and MtLM (Multiple 1122..11..33 TsTytypapinicdcaaalrllldyysttahhneedaanenanlaydlytsitiwcciaaltlbhbaaatstcechhtorruufnnexssteerqqauuceetnneccdeebmbeaegtgriiinnxssswwtiaitnthhdaarasdseset.tooff eexxttrraacctteedd mmaattrriixx standards and ends with a set of extracted matrix standards. = " 12.<"1. .4 SsSaaammmpplplel.eessaSaroreelavanenanaltlyybzzleeaddnkwwsiitsthhhoaauclcodonnbtteiinnauuniiannlggyzcceaadlliibpberraraittioiodonincccahhlleeycckktoiinnmjjoeenccittetedodraaffpttoeesrrsieebvvleeerryyanttaeelnnyttthhe . cscaaammrrrpyylooevv.eerrSaaonnlvddeanarrteeblnnaoonttkccsoonsnhssioiddueeldrreebddessaaanmmappllyleezssedbbuupttemmriaoaydybicbeaelliiynncctolluudmdeeoddanaistsossruupccohhssible analyte 1122.22 UUssiinngg tthhee AAuuttoossaammpplleerr 1122..22..11 SSeett uupp ssaammppllee ttrraayy aaccccoorrddiinngg ttoo tthhee ssaammppllee llisstt pprreeppaarreedd iinn SSeeccttiioonn 1122..11.1.1.. 1122..22..22 aSSneeattl--yuusppt ttchhoeensHHiPdP1e11r10s00a0/p/apaurutotoporssiaaammtpepllfeeorrraaottpttthhieemaffloollrlloeoswwpiionnngsgecc.oonRndedicittoiioronndssaoocrrtuaaattlcccooonnndddiiitttiiiooonnnssstthnheethe aiinnnssattlryrusumtmecennottnslloiodggebbroosookak:p:propriate for optimal response. Record actual conditions in the 1122..22..22..11 SSaammppllee ssiizzee== 1100 LI.tL iinnjjeeccttiioonn 1122.222.2..22 IInnjjeecct/tssaammppllee == 11 1122.22.22.33 CCyycclleettiimmee == 1133..55 mmiinnuutteess 1122.222.2..44SoSlovlveennttrraammpp == Time MeOH AAmmmmoo2nn.i0iuummmMaacceettaattee [o0o.0m0 riainn. [404%0% | 6600%% | [88s.50omminn. To 90% [iv 10% | [l11o.0mranin. 0900%% | 1010%% | C212o.0mrainn.1a40%% | 660%% | 1122..22..22..55 PPrreessss tthhee""SStatartrt"" bbuuttttoonn.. 1122.33 IInnssttrruummeenntt SSeett--uupp 1122.33..11 RReeffeerr ttoo EETTSS--99--2244..00 ffoorr mmoorree ddeettaaiills.. 1122:.33..22 CChheecckk tthhee ssoollvveenntt lleevveell iinn rreesseerrvvooiirrssaanndd rreeffiilll iiff nneecceessssaarryy.. Analys.isofSerEEumTTSsE-sx8t-sr5a.cltUsing ESMS Analysis of Serum Extract Using ES/MS PPaaggee 5ooff99 33MM_MMNNo01166B6s6008844 22881144..00008888 1122..33..33 CtChhheeectcikpk. tthhTeehssettaatiiinnplleessshssoussltteedeelbl eccaafppliailtlllaawrriyythaattnttohhejeeaegnngddeodofeftdthgheees.pprrooIbbfeet..heUUtsispeeiaasnnfoeeyuyenepdpiiteeocceebett:oo cchheecckk utuhnnessaattitipiss.ffaaTccthtooerryyti,,pddsiihssaoassussledemmbbbelleeflttahhteewppirrthoobbneeoaajnnagddgrreeedpplleaadccgeeettshh.ee Issfttaatiihnnelleetssipss ssisteeefeo!luccnaapdpiiltllolaarrbyye.. 12.3.4 12.3.4 SSOebetst eHHrPPvLLeCCdropppuulmmetppsttcooo""mOOinnn"g"..oSSuetetot ftthhteeheffllotowiwpottfoot11h00e--p5rSo00b00e.uulLiA/mmlilinnoowrortaoasseqaauppiplpriroboprprairtaieattefe.o.r approximately 10 Observe droplets approximately 10 minutes. coming out minutes. of the tip of the probe. Allow to equilibrate for 1122..33..55 TTaruuorrunnnoodnnttthhheeetinnpiittorrfooggteehnne..prAAobeff.iinneeRmmeiaissdttjussshhtoouutllhddebbteeipoeefxxppteehllleleeddprwwoibittehhifnnoononniimttrirosotggeeinsn ollebesaakekirinvngeg.d. around the tip of the probe. Readjust the tip of the probe if no mist is observed. 1122..33..66 TcThhhaeeniignnessittnrruumomreednnettruutssoeeosspttthhieemssieezepptaahrraeammereettseeprrossnsaaett:tthhee ffoolllloowwiinngg sseettttiinnggss.. TThheessee sseetttiinnggss mmaayy change in order to optimize the response: 1122..33..66..11 DDrryyiinngg ggaass 225500--440000 lliitteersr/shhoouurr 1122.33..66.22 EESSII .nneebbuulliizziinngg ggaass 1100--1155 llitteerrss/hhoouurr 1122.33..66.33 HHPPLLCC ccoonnssttaanntt ffllooww mmododee,, ffllooww rraattee1100 -- 550000 WgLi/mnin . 1122..33..66..44 PPHrrPeeLssssCuurriees <<op44e00r00atbbiaanrrg((cTTohrhriiessctpplaya.rr)aammeetteerr iiss nnott sseett,, iitt iis aa gguuiiddee ttoo eennssuurree tthhee 1 HPLC is operating correctly.) 123.7 Carefully guide the probe into the opening. Inst probe until t il not go any . =" Cffularrtrtheheferur.l.lyCCoognrunmiedeceettthttheheepvrvoooblltteaagigneetoccaatbbhlleeessopttooetnthihneeg.pprrooIbnbese.e.rt probe until it will not go any 1122..33..88 PPtraripinnettdttihhneetottuutnnheee ppiaanggsete,r,uwwmieittnhhtitltssogppaarraammeetteerrss,, aanndd tstoorree iitt iinntthhee ssttuuddyy bbiinnddeerr wwiitthh aaccooppyy. taped into the instrument log. 1122..33..99 UUanssaiilnnyggsittshhoeefccbrriooosslsso--gffillocoawwl ccmooautunrnittceeerrseelleeccttrrooddee iinn tthhee EESS//MMSS ssoouurrccee iiss rreeccoommmmeennddeedd ffoorr tthhee analysis of biological matrices. 11223.3..1100CCMllaiiccskkLooynnnssttaavrrettrsbbiuuottnttsoo,nnsiiennettahhpeepArAoccpqqruuiiasistiiettiiMoonansCCsooLnnyttrnrooxllUPPSaanEneeRll'((StthhGiissUmmIDaaEyy)vv.aarryyPraaemmssoonntgghe start bMbuutattstosonLn.y.rLEExnnsvsueurrrseeiossnttaasrr,ttasaenneddeaepnnpddrosspaarmmiapptleleeMnnuuamsmsbbLeeyrrniixnnccUlluSuddEeeRss 'aaSllll GssaaUmmTppDlleeEss).ttooPbbreeesaasnnatahllyyezzesedtda..rt 1133..00 DATA ANALYSIS AND CALCULATIONS DATA ANALYSIS AND CALCULATIONS 1133..11 CCaallccuullaattiioonnss:: 1133..11.44 CCaallccuullaattee mmaattrriixx ssppiikkee ppeerrcceenntt rreeccoovveerriieess uussiinngg tthhee ffoolllloowwiinngg eeqquuaattiioonn:: %%RRececoovveerryy== OBObbsseaerrvveecddRRe`kseEsuxulplegttc--teBrdaRcekosgurlotuundnRReessudulltt xx 110000 Expected Result 1133..11.55 CCaallccuullaattee ppeerrcceenntt ddiiffffeerreennccee uussiinngg tthhee ffoolllloowwiinngg eeqquuaattiioonn: %% DDiiffffeerreennccee == EExpex ctedp CCooEnnxe cep.e-c-Ctc CaeladclcuCt uollnaactt.eee ddCCod onnce.. xx 110000 Expected Cone. 1133..11..66 CCaallccuullaattee aaccttuuaall ccoonncceennttrraattiioonnooffPPFFOOSS,, oorr ootthheerr fflluuoorrooechheemmiiccaall,, iinn mmaattrriixx (0uxgg//mmLL):): (n(ngg ooffPPFFOOSSctaallcc.ffrroommssttdd. CCuurrvveexx DDililuuttiioonnFFaaccttoorr'}) xx L1ulgag. (i(tIniitilalVVoolluummeeooffFmimanaatltrriiVxxo((lmmuLmL)e)++(mmmLLL)ooffSSuurrrrooggaatteeSSttaannddaarrdd)) 11000000 nngg Final Volume (mL) Analysisof SerEmuTmsSEe-x8ts-r5a.1ct Using ESAS Analysis of Serum Extract Using ES/MS 22881144..00008899 PPaaggees6 ooff9 33MM_MMNNo01166B6s6008855 1144.00 METHOD PERFORMANCE METHOD PERFORMANCE 14.1 14.1 MM maetetrthhiooxddspDDeceeitfteieccc.ttiiooPnnleLLaiismmeiittsc((eMMEDDTLLS)-) 8aa-nn4dd1LL,iimmAitittotoaffcQQhuumaneatnnittittaBat,tiiofoonnr ((aLLOlOsGQi))ngaaorreef mmceuetrtrhheoonddt,, vaaannlaailldyyattteee,,daanndd MDL and LOQ matrix specific. vPalleuaesse see ETS-8-4.1, Attachment B, for a listing of current validated 142 M SoDlvLenatndBlLaOnkQs,vaMleutesh.od Blanks, and Matrix Blanks 14.2 S14o.l1v.e1ntSBollvaennktsb, aMrkesth,omdetBhloadnkblsa,nakns,daMndatmraixtiBxlabnlaknsks values are must be below the 14.2.1 TSoowlevsetntsbtalanndkasr,dminetthheodcablliabnrkatsi, oanncdurmvea.trix blanks values are must be below the 143 CalibraltoiwonesCt usrtavnedsard in the calibration curve 14.3 C14a3l.ib1raTthioenCvuarlvueesfor the calibration curve must be 0.980 or beter 14.3.1 The r2 value for the calibration curve must be 0.980 or better. 14.4 14.4 MMaattrriixx SSppiikkeess 14.4.1 14.4.1 McMoanatctrreiinxxtrsspapitikkieeonppeerrcceenntt rreeccoovveerriieess aarree mmuusstt bbee wwiitthhiinn _+ 3300%%oofftthhee ssppiikkeedd 145 ContinucionngceCnatlraitbiorant.ion Verifications 14.5 C14o5n.t1inuCoinngtiCnuailnibgrcaatliiobnraVtieornivfeicraiftiiocantsion percent recoveries must be & 30%ofthe spiked : 14.5.1 . ...:. Cccooonnncceteinnnturtriaanttgiiooncn.a.libration verification percent recoveries must be +__ 30% of the spiked * 1144..66 IpIffeccrrrfiitoteerrrmiieaadlliiosstnteedtdhiienn stthyhiissstmmemeetethhnoodddsppaemerprfflooerrsmmraaennaccneealssyeezccettdiiooonnriisosnnt'h'ttermmeaetct,,timmoanaisinnattseenndaaenntcceeermmmianaeyydbbbeey the pSannearalflyoystrs.mt. eDDdoooccnuumtmheeenntstylaslltlemaaccttaiinoodnnsssiainnmttphhleeesaapprpepraronopaprlryiiazateteedllooorggbboootohokek.r. actions as determined by the 147 14.7 I1ffododatatntaaostareredetotoon bbtaeeblrreeesppooarrnttdeedddiwwshchueesnnseppdeerriffnootrrmhmeaatnneccxeet ccofritittherreiiaarhehpaaovvreet not not been been met, met, the the datamustbe: data must be footnoted on tables and discussed in the text of the report. 15.0 POLLUTION PREVENTIONAND WASTE MANAGEMENT 15.115.0 15.1 PpSSOiaapLmmepLtptlUleeeTweeIaOxxsttNrtraae~ccRtit EwwdVaaisEssttpNeeoTsaaIennOdddNiffnAllabNamrmDommkW aaebbnAlleeSglTssaoEosllsvM veceAnontntNtiiAassiGddniEeissrMppsooElssNoeecTddaiitnnehhiiignghhthBBeTTlUaUboccrooantntotaraiyin.neerrss,, and glass and glass pipette waste is disposed i.n broken glass containers located in the laboratory. loRecoms 16.0 RECORDS 16.1 Each page ge ner ated for a stu d y m ust have the following information included cithes in the 16.1 Ehhieneataaceddhgeerprraatoogirroenhhgaamennenddtehwwroardriti,ettdttesefnanomoorpnnlaettshhtneueadmppyaeagg,mee:eu:xsttssctthauucaddtvyyieooontrhrdeppartrfooeoj,jleelodccitwtlnnaintuuigmmobnibenaerfrco,,trmaaoccraqqut(uiiioFissnaiipttiipinolocninlcummadbeeletetdhh)o,oedidta,,hnedr in the iaannnataellygysrtsa.t.tion method, sample name, extraction date, dilution factor (if applicable), and 1166..22 PParpriipnnrttoptthrhieeatttuuennseetppuaadgygeef,,olssdaaemrm.pplleeColliipsstty,, atahnneddseaapccqaquguiiessisittiaioonnndmmteaetpthheooiddntfforrotomhmeMMinaassstsrsLuLymenynxntttoxoruniinlnoccgll.uuddeeiinntthhee 1166..33 Palpoptrtohperiactaelisbtruadtiyonfocldurevr.e Pstloortethientchaelisbtruadtiyonfocludervre bCyolpiyntehaesreegpreasgseisona,nwdetiagpheteindtoLtxh,etihnesntrpurminetntthreusnelogrga. phs by linear regression, weighted l/x, then print these graphs and and 16.4 store Print in the study folder. data integration summary, integration method, and chromatograms, from MassLynx, 16.4 and store in the study Print data integration and store in the study folder. summary, folder. integration method, and chromatograms, from MassLynx, 165 16.5 S`SAuutmmtmmaacrahirmizzeeentddaaAttaafuuosrsiinanngg essuuxiaittmaapbbllleee ssooofffattwwsaaurreemm((EaExrxcyceelslp55r.e.00a))dsaahnneddetss.ttoorree in in th the study study folder, folder, see see Attachment A for an example era summary spreadsheet. An.sEofymSessEuTeSE-s8x-a5yc.1t Using ESMS Analysis of Serum Extract Using ES/MS Page of Page 7 of 9 22881144..00009800 W3M_MNMON106186656008856 1166..66 aBBnaadcckklouucppateeilloeenccottfrrobonnaiiccckdduaapttaaettlooeacaptpprpronoriopcprdiriaaatttaee mmeeddiiuumm.. RReeccoorrdd iinn ssttuuddyy nnootteebbooookk tthhee ffiillee nnaammee and location of backup electronic data. 17.0 TABLES, DIAGRAMS, FLOWCHARTS, AND VALIDATION DATA 17.117.0 17.1 Attachment A: ETS-8-5.1 Data summary TABLES~ DIAGRAMS~ FLOWCHARTS,~ AND Attachment A: ETS-8-5.1 Data summary sVsppArreeLaaIdDdssAhheTeeIetO.t.N DATA 1188..00 RREEFFEERREENNCCEESS 1188..11 FFcAAomCCpTTo--uMMn-d-44s.1f1,,r"o"EEmxxSttreraarccuttmiioofnnooroffAnPPaoolttyaasssisssiiuUumsmiPPneegrrftHllPuuLooCrro-oEoolcctetaacnnteerssouusllpfforonnaayatt/eeMaoosrrsOOtSthpheeercrtFFrllouumooerrtoorccyhheemmiiceaall compounds from Serum for Analysis Using HPLC-Electrospray/Mass Spectrometry 1188..22 EETToTSnS-i-9z9-a-2t24i4.o.0n0,M,a""sOOsppeSerpraeatctiitoornnomaaenntddeMMraQaiuinnattteernnaoannIccIeetroofiftplthheeequMMaidicerrruoopmmoalasesssSAyAstttmmeoomssspp"hheerriicc PPrreessssuurree: Ionization/Mass Spectrometer Quattro II triple quadrupole Systems" 1188..33 TThhee vvaalliiddaattiioonnrreeppoorrtt-aassssoocciiaatteedd wwiitthh tthhiiss mmeetthhoodd iiss EETTSS--88--44..00 && 5&.00-~VV--11.. 1A 90 mecrepbocowents 00 o ? 1199..11 EECTToSS-m-8p8-o-44u..n11,d,s""EEfxxrttorrmaaccSttieioornnuomofffPPoroottAaanssassliiyuusmmisPPUeesrrfifllnuugoorrHooPooLceCtt-aaEnnleeessucultlffrooonnsaapttreeaooyrr/MOOattshhseerrSFFpleluucootrrroooccmhheeetmmriyic"caall Co~.m,pounds from Serum for Analysis Using HPLC-Electrospray/Mass Spectrometry" Y 2200.00 RReEvViIsSIiOoNnsS RNeRvueimvsbisieioornn. Reason ForRevision RReeDvvaiistsiieoonn 1 Number. 1 SSSeeeccctttiiiooonnn6.611.1.12..12ACCvlelaarrraiifgfiieccoaafttiiootnnwRoooeffaIcHs-uIoPrPnv11e1F1s0,0o00rnsoRsytyesssvtttieesamminocdnacoromdmpvopanolenueensnt,tssa.re used for 0044D//00a22t/e/9999 ppSSlleeooccttttttiiiiononnngg l1l1ii21n.n.2ee1.aa2r.rA4rrveeeggCrrrlaeeagssressiiifooionfcnataatwnniooddnocaafuddsrddoveeleddsv,tethhnneeott11r/s/axxtmapwwn.edeiaiggrhdhttviinanglgouoefsft,thhaeereccuuursrvevede..for SeSSceetccittiiooonnn 111772...112.2CCh.h4aanCnggleaedrdiftifrerooatmmioanattotatfcshaomlcveehnntmtBBretatmoonpAAt... `Anal.y oEf STerEsuTmSsE-x8t-tr5a.1ctUsingESMS AnalySis of Serum Extract Using ES/MS 22881144..00009911 PPaaggee8Booff s9 33MM_MMNNo01166B686008877 LLaabboorraattoorryy SSttuuddyy ## Fon Study: Test Mat~ial: Matrix/Final Solvent: LL ----- Method!Revision: in Analytical Equipment System Number: Instrument Software/Version: = Filename: 3R-Squared Value: reSlope: 2 iar Y Intercept: Date of Extraction]Analyst: . Date of Analysis/Analyst: F[aT |a | | Group Sample# Concentration u~/mL Initial VoL mL Dilution Factor Final Cone. upJmL rr Slope: Taken from linear regression equation. GGrroouupp//DDoossee:: TTaakkeenn ffrroommtthheessttuuddyy ffoollddeerr.. ETAT pee `SSaammppllees#:: TTaakkeenn ffrroomm tthhee ssttuuddyy ffoollddeerr.. aE Concentration (ug/mL): Taken from the MassLynx integration summary. 2 ha Initial Volume (mL): Taken from the study folder. Dilution Factor: Taken from the study folder. Final Cone. (ug/mL): Calculated by dividing the initial volume from the concentration senrwertnon,suoiwerSZillomme Attachment A: Summary Spreadsheet ETS-8-5.1 Ana137sis of Serum Extract Using ES/MS 22881144..00009922 soresPage 9 of 9 3M MN01666088 33MM EENNVVIIRROONNMMEENNTTAALL LLAABBOORRAATTOORRYY MMEETTHHOODD AANNAALLYYSSIISS OOFF PPOOTTAASSSSIIUUMM PPEERRFFLLUUOORROOOOCCTTAANNEESSUULLFFOONNAATTEE OORR OOTTHHEERR FFLLUUOORROOCCHHEEMMIICCAALLSS IINN LLIIVVEERR EEXXTTRRAACCTTSS UUSSIINNGG HHP~LLCC--EELLEECCTTRROOSSPPRRAAYY//MMAASSSS SSPPEECCTTRROOMMEETTRRYY MMeetthhoodd NNuummbbeerr:: EETTSS--88--77..00 AAuutthhoor:r: LLiissaa CClleemmeenn,, GGlleennnn LLaannggeennbbuurrgg # AApppprroovveedd BByy:: AAddooppttiioonn DDaattee:: RReevviissiioonn DDaattee:: Laboratory Manager Laboratory Manager DDaattee GGrroouupp LLeeaaddeerr DDaattee Technical Reviewer : Technical Reviewer DDaattee 0 SCOPE AND APPLICATION 11..01 SScCoOpeP:E AThNiDsAmPePtLhoICdAiTsfIoOrNtheanalysisof iver extracts for fluorochemical surfactants using 1.1"HSHcPPoLLpCeC:-eellTeehcctitsrroomsspperrtahayoy//dmmiaasssfssossrppteehccettrraoonmmaelteyrtsryiy.s. of liver extracts for fluorochemieal surfactants using 11..22 AoAtpphpeplrliicciaoanbbillzeeabCCloeommcpopmoopuuonundndsds:s:.FFlluuoorroocchheemmiiccaall ssuurrffaaccttaannttss oorr ootthheerr fflluuoorriinnaatteedd ccoommppoouunnddss,, oorr other ionizable compounds. 1.3 1.3 M Mreaptaortrriticceess:: RRaabbbbitit,, rraatt,, bboovviinnee,, mmoonnkkeeyy lliivveerr,,oorrootthheerrttiissssuueessaass ddeessiiggnnaatteedd iinntthhee vvaalliiddaattiioonn report. Word 695 Word 6/95 Ese ETS-8-7.0 Anais ofLiver ExtraUsingESMS Anal;sis of Liver Extract Using ES/MS PPaaggee 110o6f1100 22881144..00009933 33MM_MMNNo0116666s6008899 20 SUMMARY OF METHOD. 2.12.0 2.1 SUTTHhMPhiLiMssC-AmmeeRletYethhcooOtddrFoddMseepsEsrccTarrHiyibb/OeemssDastthsheesapanenacaltlyycssoiimsseolofrfyuf,louorororocscihmheiemlmiarcicasayllssstuuerrmffaaaccsttaaannptptssroeepxxrtitrraaatcce.tteeddTffhrroeomamnllaiilvvyeesrrisuussiiisnngg HptpheePerrLffpooCerrrm-mfeeelleuddocbbrtroyyoosmmcpotorananniyeitt/soomurrliiafnnsoggsnaasatpsseeiicnn(tggPrlloFeemOiiSoeo)ntnrycac,hnhaiaororranac,sctitemverriizilssattr=iiccs4yoo9s9ftf.aeamppAaaadrrdsttiiiatccipuuolplnaararrolpffllrylui,uaootrsreoao.ccmhhpTeelhmmeiesiccaamanlal,a,ylsysuubsicceshhisaass tdaahennetaaellpycyetzzireefnddlguuuodssraiiounnoggghcaattaettnraaeninsdoudenlemsfomonfmmaattasehsses(PssspeFpleeOecccStttrr)eoodammnepeiatotreenerr,ntttrooni/fzfounu=rtthh4ee9rr9vv. eerAriiffdyydittthhioeeniiaddleelnynt,tiittsyyamooffpaalecscoommmappyoobuuenndd bbyy detecting daughter ions of the selected parent ion. 33..00 DEFINITIONS DEFINITIONS 33..11 syAsAtttemmmososspaplhhleoerwriifccorPPrvraeerssissouuurrseemIIeootnnhiizzoaadttsioioofnni((oAAnPiPIzI)a):t:iTTonhheebyMMiuitccirrlooizmmianagsssvsaQQruiuaoatuttstrrsooouIIIrctterrisip,plleeprqqouubaaedsdr,ruuappnoodllee iPisnnyrtteseetsrresffmauacrcseeessa.c.llhoeTTwmhhieefcsosaeerlviiInnaoccrnliliuouzdudaeestibbmouunettt(haaArroeedPsnn)oo,ottflTliiiohmmeniirittzemeaddotsittopoo:nr: aEbEylyl,eeuccettttircrlo.iozssippTnrrghaaeyyvaiIIroooinnnoiiiuzzzsaaatttsiiioooounnnrpc((rEeEoSsScI,Ie)p)s,,rsoAAbitntemmsot,hsoepasshpnee.hdreirci,c Ptteerccehhsnnsuiiqqrueueecsshooeccmcciuucrrassl aIaotnaaittzmmaotoissoppnhhe(erAriiPcccppIrr)e,essTssuhurreeerm((iio.e.s.pnnraooytt,uuenntdcde.errTahvveaaiccouunuuimmz)a.)t.ion process in these " 33.22 presEEslulreeecc,ttrrwoohssepprrreaabyyyIliooonnniiszziaanttsiiooolnnut((iEEoSSn,,aEErSeSItI)):r: aaammneetsthhfootddeooortffhriieoogennaiidzzsaattpiiohoannsppeveeirrfafotorirmnmeeyddcaahttaarattgmmeodossdpprhhoeperlrieiccts : pTTrhheeesssseeurccehh,aawrrggheeeddreddbrryooppiloleenttsssiaanrreesopplrurootiddouuncceaerddebbtyyrattnhhseefeaarpprpepldliicctaaottiitohonne oogfafasa psshttrraoosnenggveeilaleetccitntrryiicccaalhl affiireegllded.d. droplets. 33.33 (MSMM/aMasSss)s:SSppTeehcctetrrAooPmmeIettQrruyya,,tMMtraaosssIsI SStrppiepeclcettrqrouoammdeerttueeprrol((MeMSmS)a),s, sTTasapnneddceetmrmomMMeatasesrss iSSsppeeeqccuttirrpoopmmedeettweeirrth two `q(qmMuuaaasSddrt/rMuuoppSoocl)hl:eearmmTgaheassesrsaAtssieePollIee(ccQmtti/iuvzvaee)ttddareeonttdeeIcIcsttutoorbirrspsseleqaaunnqeddunataadlccyrooudllplesiotsieliecootnnmedcca.eelslls.l.AsspITioeonnncgsstrloaaermrMeeeSssteeellrmeeiccasttyiievvqbeeuellyyipeddpmiiepssdlccrorwiiymmeiitidhnnaaftttwoeerddoibboyyn admdeneatdtseescctthttiioeoosnncehoofarrrragaagennmreiiaonotntnisommma(amayyy/bbzb)eeeassaneenldleaecclsttuyeebzddesediinqniuttnhehnteehtlffeyiirrsssdettecqqtoeuuncaadtdderqrduuu.papodoAlrleue,sp,ionfflrgreala.gegmmMeenSnttemeddayiinnbttehheeemccoopllllloiissyiieoodnn cel, for ion cell, and these fragments may be analyzed in the second quadrupole. 33.44 triplCCeooqnnuvavedenrntutipiooonnlaeall(vpvsos.s.tZZ-1-ss9pp9rr8aa)yyutppirlrioozbbeeea ii"nnZtt-eesrrpffraaaccyee":: cTTohnhfeeorllaamttaeetssittommno.oddeTelhlsseoofsfpMMriaicycrreoommmitaatssessdQQfuruaoatmtttrraoo ITII tdpprirriropoelbbceeetlqiiysusaaootdrrtrtthuhheopogogcooloennnaa(elplaottpoosetrttht1hue9er9ecc8,oo)nnaueefteiaalrppiezeprertatuasursre"ie.Zn.g-sIItpnnhrtrathoyheeu"gccchooonnanvvfetoenonrtrmtitiouoanontiauaolslnpcc.aootnTnfhfhoowerrammsyapaitrtnaiioyotnnheemiittciiiotsstueaandiitmemfrereoddm a medelalieerieccntcttrrtooleyddneaea..ntctThTeehhaooceuuoggnthhheettahhspeeaemrccetoo.unnrfefiHi,ggoauuwirrdeaaevttriieooprnna,siissZi-nddsigipffffrteeharrryeeonncutt,o,gmhtthphaoeentmmoeenrettttuhhsoooduadssnsodpofacfotoohpnepwvreeaarnyatttiiiionoonnnt,ah,lecccllceeooaamnnupiinnnotggne,,er ananntdds are `nmncooaottmincpctaooetmmnipabpanltaecitiebwblilaeetrhewwiotihttthehhesoorannmZee-easa.npnoroHtathhyoeewrsr,y,esvbbteuuetrmt,sooZ,nn-lelsyytpcwrw)aiiytthhcossiimmmipilloaanrressnyytssstteaemnmdss ((ciio.e.n.vZZe--nsstppiorrnaayyalcccooommmppopononenenentntstssaarareree compatible with other Z-spray systems, etc.) 33.55 QuatMMtarasosssITLLtyyrinnpxxleSSqoouffattdwwraaurrpeeo::leSSsyyysssttteeemmms.ssooffCttuwwraarrereentddleeyssiiMggannseeddsLffooyrrntthhheeasssppWeeicciniffdiiccooowppseer9raa5ttiiaoonnndooWftfihthneedssoeewsNT Q4i4n..u0s0atvvrteteurrrmosseiinoIoItnnsts(.r.iMpiAAlcelllrlqovvumeeaarrdsssriisouonpQnsusoalaaetrrteesryssosIiitmmeimillararsir...plCFFeouoqrrruraemmdnoortrluryeepoMddleeetatasaiMsillLasssyrrsneexLffeeyhrrnattxsooW ottrhhieeMnammdasoanwsnuLusayal9nl5xssppaNeenccTdiiffWiiUccsiettnorod'ttoshhweesNT iGGnuusitdirdeue)m.). ent (Micromass Quattro II triple quadrupole MassLynx or MassLynx NT User' s 44..00 WARNINGS AND CAUTIONS 41 WHAeRaNltINhGaSndANSDafCetAyUWTaIOrnNiSngs: 4.1 Health and Safety Warnings: 44..11.11 UUemsspeelccoaayuusttiiaoonvnowwlititathhgettohhfee vvaooplplttraaoggxeeimccaaatbbleleelssy ff5oo0rr0tt0hheeVopplrrtoosb.bee.. WWhheenn eennggaaggeedd,, tthhee pprroobbee employs a voltage of approximately 5000 Volts. Ana.lEyofsLmiivEessTrSEex-8tr-07ac.0t Using ESMS Anal}sis of Liver Extract Using ES/MS Page 2010 Page 2 of 10 33MM_MMNNO011668656009900 22881144..00009944 44..11..22 WaWnhhdeencnlohhtaahnnidndgll.iinngg ssaammpplleess oorr ssoollvveennttss wweeaarr aapppprroopprriiaattee pprrootteeccttiivvee gglloovveess,, ceyyeewweeaarr,, and clothing. 44.22 CCaauuttiioonnss:: 442.2..11 OpOrppeeesrsraauttreeettehhxeecsesooelldvvseen4nt0t 0ppuubmamrpp,sstbbheeellHooPww1aa1b0ba0acckvkilpplrreenssisstuuarrteeeoofafu44to00m00abbtaiarcr ((s55h88u00t00doppwssn)i..). IIfftthhee bbaacckk pressure exceeds 400 bar, the I-P1100 will initiate automatic shutdown. 44.22.22 DDoonnoottrruunn ssoollvveenntt ppuummppss ttoo ddrryynneessss.. 55..00 IIbN'TTEERRFFEERREENNCCEESS 55..10 TTstOoormmaiginneiimmoriizzaeeniiynnttpeearrrffteoerrfeenniccneessstrwwuhmheeennntaaatnniaaollynyzztiinhnaggtsscaaommmpplelesess,i,nTTceeoffnlltooannctsshhwaalilltl hnnootthtbebeesauumsspeelddeffooorrr essxaatmmrappcltlee. storage or any part of instrumentation that comes in contact with the sample or extract. 6.0 EQUIPMENT " 66..01 6.1 EQEE`mqUqouuIdPiiippMfmimcEeeaNntntiTtollniissstiteneddtbbheeellrooawwwmmdaaaytyabbaeesmmmoeodtdihiffoiieeddddiiennviooarrtddieeornrstt.oo ooppttiimmiizzee tthhee ssyysstteemm.. DDooccuummeenntt aannyy. modifications in the raw data as method deviations. . 6.1.1 MMelieicccrrtoormomsaapssrssayQQuiuaoantitttzrraootiIIoIInttrrsiioppullreeceqq.uuaaddrruuppoollee MMaassss SSppeeccttrroommeetteerr eeqquuiippppeedd wwiitthh aann 6.1.2 PHealInPePd1c1t1ar1u0o0ts00opsrlloaaowymwpilppoeuunrllisszeeatssiooolnlvveesnontut rppcuuemm. ppiinngg ssyysstteemm,, ssoollvveenntt ddeeggaasssseerr,, ccoolluummnn ccoommppaarrttmmeenntt,, and autosampler 7.0 SUPPLIES AND MATERIALS 7.17.0 7.1 Supplies SUPPLIES AND Supplies MATERIALS 77..11..11 HHiigghh ppuurriittyy ggrraaddee aaiirr rreegguullaatteedd ttoo aapppprrooxxiimmaatteellyy 110000 ppssii ((hhoouussee aaiirr ssyysstteemm)) 77..11..22 HHinPPtLLheCCraaannwaallydytatiitccaaall ccoolluummnn,, ssppeecciififcistctoosbbeeddeetteerrmmiinneedd bbyy tthhee aannaallyysstt aanndd ddooccuummeenntteedd 77..11.33 iCCnaatpphppeeerddawaauuttdooavvtiiaaallss oorr ccaappppeedd i15 mmil cceennttrriiffuuggee ttuubbeess 8R 80.0 ReEAGAENTc S ~EST~Nu'~XT m~S SANDSTANDARDS 88.11 RReeaaggeennttss 88..11..11 MMeetthhaannooll,, HHPPLLCC ggrraaddee oorr eeqquuiivvaalleenntt 88..11.22 MM1,iiolllril-Qe-qTQuMiTMvawwlaeatntete,rr (a(AnAdSSTTbMeMpttryyoppveeiIdI))e,,daalblllywwaaatMteeirrluulss-eeQddiTinnOCtthhiiPsslmmuseettshhyoosddtseshmhooouurlldodtbbheeerAAvTTenSSdMMorttyyppee: I, or equivalent, and be provided by a Milli-Q TOC Plus system or other vendor 88..11..33 AAmmmmoonniiuumm aacceettaattee,, rreeaaggeennttggrraaddeeoorr eeqquuiivvaalleenntt 88..11.33..11 W Whheenn pprreeppaarriinnggddififffeerreennttaammouonutnststthhaann tthhoossee lliisstteedd,, aaddjjuusstt aaccccoorrddiinnggllyy.. 88.11.33.22 22`..a00mmmmoMMniaaummmmmacooentnaiituuem,m Paacoceeuttraattieentssooolluut2tii0oo0nn:0: WWmeLeiiggvhholaauppmpperrtoorxxiicimmcaaotnteetllayyin00e..r3300c00onggtaining 2ta2me00m00mp00eormmnaiLLtuumMMreiialllcile-Qt-aTQteMTM. Pwwaoatuteerrr,,inmmtoiixxauu2nn0tti0ill0aalmll sLsoolvliioddlssuaamrreeetddriiicsssscooollvvneetdad.i.neSSrttcooorreentaaattinrrionoogomm temperature. AsaA iofLivEe) rTES-8x-7.t0 UsrinagEcSMtS Analysis of Liver Extract Using ES/MS PPaaggee 330o1f1100 22881144..00009955 33M_MNMON106186666009911 88.22 SSttaannddaarrddss 88..22..11 TTpyrypepipicacaralellldyy dttwuwrooinmmgeettthhheooeddxtbbrllaaacnntkkisso,,nttwpwrooocmmeadatutrrrieixx. bbllRaaennfkkessr,, ataonnddETeeSiig-ghh3tt-ee6ee.nn0mmaattrriixxssttaannddaarrddssaarree prepared during the extraction procedure. Refer to ETS-8-6.0. 2.0 SAMPLE HANDLING. 9.19.0 9.1 SAFFarrM reeePssshLhtEommraHeatdtArriNiixxnDscsLttaIaaapnNnpddGeaadrraddusstoaavrrieeapplrrseoeppraarrceeaddpwwpieittdhh 1ee5aaccmhhlaacnneaalnlytysrsiisifs..ugEeExxttutrrbaaeccstteeudndtisslttaaannnddalaayrrsddisssaanndd ssaammpplleess are stored in capped autovials or capped 15 ml centrifuge tubes until analysis. 99.22 ItIffemaapnneaalrlyyastsiuissreww,iilllolrbbeereddferelilaagyyereeaddt,,eedexxatttrraaaccpttpeerddoxssittamanandtdaearlrddyss4aannCdd,ssuaanmmiippllleaenssammlayasyyibsbeceassnttoborereedpdeaarttforrroomoeomdm. ~ temperature, or refrigerated at approximatdy 4 C, until analysis can be performed. 0.0 QUALITY CONTRO! 111000...011 QMMUeetAthhLooITddYBBCllaOannNkkTssRaaOnnLdd..MMatartriixx BBllaannkkss 1100..11..11 eSSaoocllhvveebnnatttbbcllhaanntkokssd,,emmteeerttmhhioonddebbclloaannntkkassm,,iaannnaddtimmoanattroriirxxcbbalrlaarnynokkvsseraa.rree pprreeppaarreedd aanndd aannaallyyzzeedd wwiitthh each batch to determine contamination or carryover. " 1100..11..22 AAnnaallyyzezaea mmeetthhooddbbllaannkkaanndd aa mmaattrriixx bbllaannkkppririoorr ttoo eeaacchh ccaalliibbrraattiioonn ccuurrvvee.. 1100.22 MMaattrriixx SSppiikkeess 1100..22..11 MMreaacttorrviixexrssyppeiikfkfeeissciaaerrneecypp.rreeppaarreedd aanndd aannaallyyzzeedd ttoo ddeetteerrmmiinnee tthhee mmaattrriixxefefffeecctt oonn tthhee recovery efficiency.. 1100..22..22 MMraeatctrorivixxerssyppifikokree eddauupcplhliiaccnaaatteleysstaaerree pprreeppaarreedd aanndd aannaallyyzzeedd ttoo mmeeaassuurree tthhee pprreecciissiioonn aanndd tthhee recovery for each analyte. 1100..22..33 A`Anmnaialnlyiyzmzeuemaaommaf2attrrsiipxxisskppeisikkpeeeaarnnbddatmmcahat.trriixx ssppiikkee dduupplliiccaattee ppeerr ffoorrttyy ssaammpplleess.. WWiitthhaa minimum of 2 spikes per batch. 1100..22..44 MMtaheattririniixxtissappliickkaeeliaabnnrddatmimoaanttrcriuixxrvssep.piikkeAedddduuiptpliliioccnaaattlee sccpooinnkcceeencntotrnracatetiinootnnrssatwwiiiollnllsfaalmlllaiiynn fttahhlele immniitddh--erraalnnoggwee-ooff trrhaaennggineeitooiftaflthhceealiiinbniirttaiaatilloccnaalcliiubbrrrvaaetti.ioonnAccduudrrivvtieeo.nal spike concentrations may fall in the low- 1100..33CoCnotnitninuuiinngg CCaalliibbrraattiioonn CChheecckkss 1100..33..11 CtChooenntctiainnliuubiirnnaggticcoaanlliicbburrraavtteiio.onn vveerriiffiiccaattiioonnss aarree aannaallyyzzeedd ttoo vveerriiffyy tthhee ccoonnttiinnuueedd aaccccuurraaccyy ooff the calibration curve. 1100.,33..22 ApAennraalblyyazzteechaa mmiidd--rraannggee ccaalliibbrraattiioonn ssttaannddaarrdd eevveerryy tteenntthh ssaemmppllee,, wwiitthh aa mmiinniimmuummooffoonnee per batch. 11.0 CALIBRATION AND STANDARDIZATION 1111..01 CAAnaLlIyBzReAtThIeOeNxtAraNcDteSdTmAaNtDriAxRsDtaIZnAdaTrIdOsNprior to and following; cachsetofsample extracts. 11.1 `ATwTehnhieeaglahayvvtzeeeerdrtaahgg1e/eexoe,oxfnfttortawwtcoofteossdrttcamaenndaddttaarhrridxrdoccsutuugarrhnvvdeetashswrewdioslirlllpibgrbieieop,rpluotlsootitttaneengdddbMbyafyolslisllinoLneweyaainrnrrxgereogegrrareocesthsshssieieoortnnsot((fya=ysb=almmmepxxlseo++fetbbx)w)t,,ararcets. weighted l/x, not forced through the origin, using MassLynx or other suitable sot~avare. 1111..22. IIsfftttahhneedaccruudrrcvvueerddvooeeeGssFnnnooetct emmseseeaetrtyrr)eeqqauuniidrreermmeaeennnattlssyzppeee.rrffoorrmm rroouuttiinnee mmaaiinntteennaannccee oorr rreeeexxttrraacctt tthhee standard curve (if necessary) and reanalyze. Anaty|sis ofLivEEerTsSE-x8te-r7a.c0t Using ESMS. AnalYsis of Liver Extract Using ES/MS PPaaggee d4ootf1100 22881144..00009966 33MM_MMNNo011668686005922 113 11.3 FuFsooerr tpphuuerrpplooossweesesonofdoffaacctcchuuerraacccayyliwwbhrhaeetnnioqqnuucaanuntrtivitteaattriianntgghellroowtwhallenevvetelhlsseooffuflalannaralalynytgteee,,oifittt hmmaeayystbbaeennndeaecrcedesscssuaarrrvyye.ttoo EuEcxasxlaeaimmbtphrlpaeetle.ilo:onwwwcehuhnreedvnneoaacfttotttenhemsemippsctttaiiinlnnigbggorttafootioqqthunueaancnstuttiriatvtanaetdteearraaadtpphspperfrroortxxohiimammna5atttpehelpelyybfut11lo00l r1ppa0ppn0bbgoepofpfoabafnnrathaaltleyyhtteseert,,atngghedeananneredrtrahactetueefruvaalel. crrraeaanglnirggbeeersoasotfiifoottnnhheewceucciruugvrrhevvteecion((n5g5osppfispphtbbiingttgoohoc11fo00tnh00c0e0enspptptpabrb)na).dt.iaorTTndhhsisisstfarwwonidmilalllrd5ersed.pdupucbceetoiinn1aa0cc0ccuuprrpaabccyyraaattthttreriirbbutuhtteaednd tttohoelliifnuneelaalrr regression weighting of high concentration standards. 2.0 PROCEDURES 1122..01 PARcqOuCiEsiDtUiRonESSet up. 12.1 Acquisition Set up 1122..11..11 SSeett uupp tthhee ssaammppllee llisstt. 1122..11..11..11 lAAestsstsieigrgonnfaathssaeammapplllpeehallibssettffisiltelaenrnatamimneeguuwssiiitnnhggaMMOO--DDAAYY-a-lsastt ddiiggiittooffyyeeaarr--iinnccrreeaassiinngg 12.1.1.2 lAeststeirgnofathmeetahlpohda(beMtSstfailret)infgorwaicthquairing 11112222....1111....1111...23.3 ATAAsyssspssiiiegggnnnianaansnmaHHmePpPthlLLeoCCdde(ppsMrrcoorSgigprrfatialimemo)n((sfIIonnarllneeadttcffvqiilulaeeil))ripnogsition numbers 12.1.1.4 Type in sample descriptions and vial position numbers .: 12.1.2 TTspooeccctrreeraoatmteeetaaermmehetethhaoodiddnccgllsiiccakknodonnsmemleetecththooSddIRiinn(StthihneegAAlcecqqIuouinsisiiRtteiiocononrccdooinnnttgrr)oolloppraaMnneeRll Mtthhee(nnMummltaaisspssle: . RsoRpteehaeaecccrtttriiaooopmnnpreMMotoepnorrinithiaotetoraeirdinmnignag)ss).ss.esaSS.needttAsIIeoolfnneuiilczzltaasSttiicIooRnani(nMMSoioundsdgeuelaeaalIssyoaancppopRplrlreooecpcportrireidadaittnaeelgaao)nnnoddgrmwmMiaatsRshssMttth0oe(4M4S99Iu9R9lst.ooiprrleSave. aoafccrtqhqaueguirmisseaiintpttiipoaornntoimmpoernetiatihhtnoeofddo.m.ramsaIIsffteiMMso.Sn'S. //AmMMafSySulbiilnensssccttarorulnulmmeisceetnnuettsdss.uaaaRlrrleeeyfeecemmorplplltelooocyytMeeeiddd,c,araalooddmdndiagitstiiwsoonniMtaahall stpphsrreLooyddSunuIcxc~tt .iioonSnave fGrUagImDeEntTatOioDn AinTfoArmAaCtiQoUnImSaIyTbIeOcNolfloerctaeddd.itRioenfaelritnofMormicartoimonaassndMMaRssML.ynx GUIDE TO DATA ACQUISITION for additional information and MRS. 12.1.3 12.1.3 TTmyayptpiricicaxalllslyytattnhhdeearaadnnsa.allyyttiiccaall bbaattcchh rruunn sseeqquueenncceebbeeggiinnssaannddeennddsswwiitthhaa ssettoofefxetxrtraacctteedd matrix standards. 1122..11..44 aSSfaaemmrppleleevsseraayrreeteaannntaahllysyzazmeepddleww.iitthhSaaolccvooennntttiinnbuuliiannngkgsccaasllhiiobburrlaadttiiobonnevvaeenrraiilffiiycczaaettdiioopnneriiinnojjedeCiccttaeelddlysstttaaonndmdaoarrndditor apfotsesribelveeraynatleynttehcsaarmrypolev.erSaonldveanrtebnloatnkcsonsshioduelrdedbesaamnpallyezsebdutpemraioydibcealilynctloudmedonaistor such. possible such. analyte c .arryover and are not considered samples but may be included as 12.2 12.2 UUssiinngg tthhee AAuuttoossaammpplleerr 12.2.1 12.2.1 SSeett uupp ssaammppllee ttrraayy aaccccoorrddiinngg ttoo tthhee ssaammppllee llisstt pprreeppaarreedd iinn SSeeccttiioonn 1122..11..11. 1122..22..22 SaSneeattl--yuuspptttchhoeensHHiPdP1e11r10s00a0/p/apaurutotoporssiaaammtpepllfeeorrraaottpttthhieemaffloollrlleooswwpioinnngsgecc.oonRndedicittoiioronndssaoocrrtuaaattlcccooonnndddiiitttiiiooonnnsssttihhneethe iainnnssattlryrusumtmecenontnt slloiodggebbroosooakkp::propriate for optimal response. Record actual conditions in the 1122..22..22..11 SSaammppllee ssiizzee == 1100WIxLLiinnjjeeccttiioonn 1122..22..22..22 TInnjjeecctt/ssaammppllee == 1| 1122..22..22..33 CCyyccllee itimmee == 9 mmiinnuutteess Analysis of LivEGeTrSEex-8tr-)7a.c0t Using ESMS Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00009977 Page 5010 Page 5 of 10 33MM_MMNNO011668686009933 1122..22..22..44 SSoollvveenntt rraammpp ccoonnddiittiioonnss TTiimmee MeOH Ammo22n.i00ummmMMacetate Ammonium acetate 0.00 rain. 4O% 60% [r1o.0mmiinn. 1"a400%% | 6600%% | [a4s.5mmiinn. T9o 5% |s55%%e| [S6.s5 mrainn. TT" o9s5%% 55%% | [r7o.0mmiinn. "T 40% | ap 6060%%e| Co9.0mmi. To4w 0% [6m 60% | 1122.22.22.55 PPrreessss tthhee ""SSttaarrtt"" bbuuttttoonn,. 1122..33 IInnssttrruummeenntt SSeett--uupp _ 1122..33..11RRe`TferifeperlrettQoouEEaTdTSrS-u-9p9-o-2l24e4..M00,a,s""sOOppSepereraactttiirooonnmaeantndedrMMFaiaitintntetedennwaainntccheeaoonffAttthhmeeoMMsipichcreroormimcaassPssreQQssuuuaratettt:rroo IIII ITIoornnipiizzleaatt0iiouonnadSSroouuuprrcocelee,,""MffooarrssmmSoorpreeecddteretotaamiillses..ter Fitted with an Atmospheric Pressure !122..33..22 CChheecckk tthhee ssoollvveenntt lleevveell iinn rreesseerrvvooiirrss aanndd rreeffiillll iff nneecceessssaarryy.. 12:3:3 12.3~3 CtChhheeetccipkk. tthhTeehssettaatiiinnpllesesshssoussltteedeelbl eccaafppliailtlllawariryythaattnttohhjeeaeegnngddeodofeftdthgheeesp.prrooIbbfeet..heUUtsspeeaiasnnefyoeyeuneppdiieetcoceebtetoo cchheecckk tuuhnnessaattitipiss.ffaaTcctthooerryyt,i,pddsiishsaaossussledemmbbbelleefittahhteewppirrthoobbneeoaajnangddgrreeedpplleaadccegeettshh.ee Issfttaatihinnelleetssipss ssistteefeeolluccnaapdpiiltllolaarrbyy.e. 1122..33..44 TTuurrnn oonn tthhee nniittrrooggeenn. 1122..33..55 OOheppaeetnnerttshhee ttuunnee ppaaggee.. CClliicckkss oonn ooppeerrataettoeo iinriittiiaattee ssoouurrccee bblloocckk aanndd ddeessoollvvaattiioonn heaters. 1122..33..66 OOppeenn tthhee IInnlleett EEddititoorr.. 1122..33..66..11 SSeett HHPPLLCC ppuummpp ttoo ""OOnn"" 1122:.33..66.22 SSeett tthhee ffllboww ttoo 1100 ---550000 uuLl/mmiin oorr aass aapppprroopprriiaattee 1122..33..66..33 eOOxbbpsseeelrrlvveeed dwdrirootphpllenetotssncciootmmrioignneggn ooluuetatokofifngtthhaeeritoipuponodffttthhheeetppprrooobfbete..heAAfpfirionnbeee.mmRiisesttasdshhjoouuuslltddtbbheee titeixppopoeflftlethhdeewppirrtohobbneeoiifnfnniotorommgieissntt liiessaookbbisnseegrrvvaeeroddund the tip ofthe probe. Readjust the 1122:.33..66..44 AAllllooww ttoo eeqquuiilliibbrraattee ffoorr aapppprrooxxiimmaatteellyy 1100 mmiinnuutteess.. 1122:.33.77TcThhheaeniignnessttirnruumomreednnettruutssoeeosspttthhieemssieezeppaatrrhaaemmreeettseeprrossnsaatet:tthhee ffoolllloowwiinngg sseettttiinnggss.. TThheessee sseettttiinnggss mmaayy change in order to optimize the response: 1122..33..77..11 DDrryyiinngg ggaass 225500--440000 lliitteerrss//hhoouurr 1122..33..77..22 EESSI nneebbuulliizziinngg ggaass 1100--1155 llitteerrss//hhoouurr 1122:.33..77..33 HHPPLLCC ccoonnssttaanntt ffllooww mmooddee ffllooww rraattee 1100 -- 550000 LIx/Lm/miinn 1122.33..77.44 PPHrrPeeLssssCuurriees <<op44e00r00atbbiaanrrg((cTTohhriirsseppcaatrrlaa)ymmeetteerriis nnoott sseett,, iittiiss a gguuiiddee ttoo eennssuurree tthhee HPLC is operating correctly.) 12.3.7.5 Source block temperature 150 12.3.7.5 Source block temperature 150 1122.33..77.66 DDeessoollvvaattiioonn tteemmppeerraattuurree 225500 An_aEofimLivssEerTeSEx-a8tr-7a0c.0tUsingESS Anal]Tsis of Liver Extract Using E$/MS PPaaggees6 ooff 1100 22881144..00009988 33MM_MMNNo01166686009944 1122..33..88 PtPraripinnettdtthihneetottuutnnheee ppianagsgete,r,uwwmieittnhht iilttsosgppaarraammeetteerrss,, aanndd ssttoorree iitt iinn tthhee ssttuuddyy bbiinnddeerr wwiitthhaca ocoppyy taped into the instrument log. 1122.:33.99 CCMlaliisccskkLooynnnxssttaavrrettrsbbiuuottnttsoo,nnriienfnettrhheetoAAaccpqqpuuriosispiirttiiioaontneCCMoonantstrrsooLllyPPnaaxnneeUllse((trhh'iisss Gmmuaiaydye)vv.aarryyEnaasmmuoornneggstart and MeennaddssssLaammypnplxleevnneuursmmibobenersr, iirnneccflleuurddteeoss aaalplllpssraaommpprplilaeetssettMoo bbaseesLaannyaanllxyyzzUeedds..er's Guide). Ensure start and 13.0 DATA ANALYSIS AND CALCULATIONS 13.113.0 13.1 Calculations: DATA ANALYSIS Calculations: AND CALCULATIONS 1133..11..44 CCaallccuullaattee mmaattrriixx ssppiikkee ppeerrcceenntt rreeccoovveerriieess uussiinngg tthhee ffoolllloowwiinngg eeqquuaattiioonn:: %% RReeccoovveerryy == OOBbsbesaerrvveecddRReEksexuspuletlgtc-t-eBrdaRcekosgurlotuundRnResesudulltt xx 110000 Expected Kesult 1133..11.55 CCaallccuullaattee ppeerrcceenntt ddiiffffeerreennccee uussiinngg tthhee ffoolllloowwiinngg eeqquuaattiioonn:: % % Difference Difference = = E ExpexctedpCCooEnxneepe.e-c-CtcCaeldaalcCutuolnlaactt.eeeddCCodonne,. xx 110000 Expected Cone. By 1133..11.66 CCaallccuullaattee aaccttuuaall ccoonncceennttrraattiioonnss iinn mmaattrriixx (ug/g): . " ""~" (0(n8gooffPPFFOOSScca(alilccn..iftfriroaolmmsWtsetdid.g. ChCuuorrvfveLexixvDeiDrl(iulgut)tiioonnFFaaccttoorr)) xx 11L0u~0gg0. ng Final Volume (mL) (Initial Weight of Liver (g) Final Volume (mL) 1000ng 1M 184.00 e METHr OD PH ERFORo MANp CE PERFORMANCE 1144..11 MM`meaetttrhhiooxddspDDeceeitfteieccc.ttiiooRnnefLLeiirmmititto((EMTDSDL-L8)-)6aa.nn0dd,LLAiitmmtiitat coohffmQQueaunnattnBittitaafttoiiroonan l((iLLsOtOiQQngo))faacrreeurmmreetethhnoodvda,,liaadnnaaatllyeytdteeM,, aaDnnLdd and LOQ values. matrix specific. Refer and LOQ values. to ETS-8-6.0, Attachment B for a listing of current validated MDL 1144.22 SSoollvveenntt BBllaannkkss,, M Meetthhoodd BBllaannkkss aanndd MMaattrriixx BBllaannkkss 1144..22..11 SiSnooltlvvheeenncttalbbillbaarnnakktssi,,onmmec~uttrhhvooe.dd bbllaannkkss,, and and mmaattrriixx blanks blanks must must be be below below the the lowest lowest standard standard in the calibration curve. 1144.33 CCaalliibbrraattiioonn CCuurrvveess 1144..33..11 TThhee r2 vvaalluuee ffoorr tthhee ccaalliibbrraattiioonn mmuusstt bbee 00..998800 oorr bbeetttteerr. 14.4 14.4 M Maattrriixx SSppiikkeess 1144..44..11 MMaattrriixx ssppiikkee ppeerrcceenntt rreeccoovveerriieess mmuusstt bbee wwiitthhiinn :!: 3300%%oofftthhee ssppiikkeedd ccoonncceennttrraattiioonn.. 145 14.5 CCoonnttiinnuuiinngg CCaalliibbrraattiioonn VVeerriiffiiccaattiioonn 1144..55..11 CCspooinnktteiidnnuuciionnnggceccnaatllriiabbtrriaaottniio.onn vveerriiffiiccaattiioonn ppeerrcceenntt rreeccoovveerriieess mmuussttbbeewwiithtinh+3i300n%%ooff tthhee spiked concentration. 1144.66 IIpffeccrrrfiiotteerrrmiieaadlliiosstnteetddhiiennstthhyeetmmeemettahhnoodddsppaeemrrpffoloerrmsmaarennaccneealssyeeczctetiidoonnoraabree ennoottammcetetit,o,nmmsaaaiisnntdteeenntaarnnccmeeimmnadayybbbyeehe paanneaarlflyoyssrtmt.. eDDdoooccnuumtmheeennsttyalsltllemaaccttaiinoodnnsssiainnmttphhleeesaappreppraronopaprlryiiazateteedllooorggboboothooekkr.. actions as determined by the AnaofiLivsEEeTrsSE-xs8t-r7ao.c0e Using ESAS Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00009999 PageTo10 Page 7 of 10 33MM_MMNNo011668686009955 14.7 14.7 If1Ffooddtaanttoaataaerrdee totoonbbteaeblrreeesppaoonrrdtteedddiwwshcheuesnnseppdeerriffnootrrmhmeaantneccxeetoccfrriittteehrriiaarehhpaaovvreet not not been been met, met, the the data data must must be be footnoted on tables and discussed in the text of the report. 15.0 POLLUTION PREVENTION AND WASTE MANAGEMENT 15.115.0 1S,1 PSpSOiaapLmmepLtpltUleeeTwIeeaOxxstNttrraaePccRtit EwwdVaiasEsstptNeeoTsaaIennOdddNiffnAllabNamrmDommkW aaebbAnlleeSglTssaoEosllsvvMceeAnontntNtiiaAssiGddnieiEssrMpspooElssNoeecdTdatiienndhhiiingghhtBBhTTlUaUboccrooantntotaraiyin.neerrss,, and glass and glass pipette waste is disposed in broken glass containers located in the laboratory. 160 Recorps 16.116.0 16.1 REhEeEaaaCccdhhOeRrppaaDoggrSeehggaeennndeerwraartiteetddteffnoororansattshtuueddpyyagmme:uussttsthhuaadvvyeeottrhheeprffooojllellocotwwniinnuggmbiinenrffo,orrmamcaaqttuiiioosnnitiiinnoccnllumudedeetddhoeedii,tthheerr iinn tthhee hiiannneattaeledyggserrtraa.ttoiioronnhammneedtthhwoodrdi,t,tessanammoppnlleethnneaammpeaeg,,eee:xxttsrrtaauccdttyiiooonnrddpaarttoe,j,eddciitllunuttuiiomonnbfefaar,ccttaoocrrq(GuiFifsaaitppipopllniiccmaabbelltehe)o,, daa,nndd 1166..22 analyst. Print the tune page, sample lis, Papripnrtopthriesttuensetpudaygef,olsdaemr.plCeolipsty, eatnnheddseaaccpqqauuigisesiisttiiaoonnndmmteeattphheooiddn tfforrotomhme MMinaassstssrLuLymyennnxt ttroouniinlnoccgll.uuddee in in the the . 1166:.33 PPsaltploooptrtrteothhipeenritacchataeelliisbsbttrruuaaddttiiyyoonfnfcooculluddreervrvre.ebbCyyollpiinyneetaahrrerrseeeggprreeassgsseiisoonna,,nwdweetiaiggphhetteienddtol1/xtxh,,etthihneesnntrppuirmnintetnttthhreeussneelgogrgraa.pphhssaanndd store in the study folder. : . 1166..44. PParnriidnnttStddoaartteaaiiinnnttteehggerrasatttiiuoodnnyssfuuommldmmeararryy,, iinntteeggrraattiioonn mmeetthhoodd,, aanndd cchhrroommaattooggrraammss ffrroomm MMaassssLLyymnxx 1166.55 an~i ~tore in the study folder. `SSAuutmmtmmaacrahrimizzeeentddaaAttaafuuosrsiiannngg essuxuiaittmaapbbllleee ssooofffattwwsaaurreemm((aEErxxcyceelslp55r.e.0a0d+4s))heaaenntdd. ssttoorree iinn tthhee ssttuuddyy ffoollddeerr,, refer refer to to 1166..66 ABBanaatdctcakklcohuucppmateleiloenenctocttAfrrobofnaioicccrkdadunaatpteaaxettlaooemcaatppprlpopernroioocpfpradriiaaasattu.eemmmmeedadiriyuumms.p.reRRaedeccsohorerdedti.inn study study notebook notebook the the ile file name name and location of backup electronic data. 17.0 TABLES, DIAGRAMS, FLOWCHARTS, AND VALIDATION DATA 1177..01 TAAttBaLcEhSm~eDntIAAG:RAEMTSS-~8-F7L.O0WDCaHtAaRsTuSm~mAaNrDy VspArLeaIDdsAhTeeIOt N DATA 17.1 Attachment A: ETS-8-7.0 Data summary spreadsheet 5.0 REFERENCES 18.118.0 18.1 RFFCEAAoFCmCETpT-Ro-MEuM-Nn2-dC.2sE1.1S,f, o""EEmxxtLtrriaavccettriiofononorofAfnPPaoloyttsaaisssssiiUuusmminPPgeerrHlfPluuLooCrr-ooEooclctetacantneresosusulplffrooannyaa/ttMeeaoosrrsOOSttphheeecrrtrFFollumueootrroorccyhh"eemmiiccaall 18.2 18.2 ECETToTonSmSi-z-9pa9-ot-2iu24on4.nd./00sM,,i~a""rsOOospmpeSerpLraeaitcvtiiteoorrnnofmoaaenrntddAerM MnaaQailuyinnastitteseinnUaoasnniIccneegotoiIfp-ft[ltPhehLeeqCuM Ma-iEdicerlrreuoocpmtmoraolasesspssSryAAastyttm/mMeoomsasspsp"hsheSerrpiiceccPPtrrroeesmsssueurtrere:y" 18.3 Ionization/Mass The validation r Spectrometer Quattro II eportassociatedwith this tmrieptlheoqduaisdEruTpSo-l8e-S6.y0ste&ms7". 0-V-1 18.3 The validation report associated with this method is ETS-8-6.0 & 7.0-Vol 19.0 AFFECTED Documents 19.119.0 19.1 EAE`TTFCSFSo-Em-8gCp--6oT6.uE.0n0D,d, sD""EEOfsxrCctorUramaMccLttEiiiovNoennTroSofofrPPFoouttaaissdssifiuoumrmAPPneearrlffyllsuoiorsrooUooscictntaagnneHesPsuuLllCff-ooEnnlaateteectoorrroOOstpthhreaerry/FFMlluauoosrsroocchheemmiiccaali CSSppoeemcctptrroooummneedntsrryyf""rom Liver or Fluid for Analysis Using HPLC-Electrospray/Mass AlofLiivEEeTr1S8E-x88-a27c.00tUsing ESS Analysis of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00110000 PPaaggees8ooff 1100 W3M_MNMON106186656009966 2200.00 RRevEivsistIonNss Number ReRveivsisiioonn Number ReRaesasoonnFFoorrRReveivsisiioonn Date RReevviissiioon Date : 2, ETsat0 AAnnaallyys~i'issooffLLivivEeerTrESEx-xt8tr-r7aa.cc0ttUUssiinnggEESS/MMSS. 22881144..00110011 Fage9at10 Page 9 of 10 33M UMNNO011666656009977 LLaabboorraattoorryy SSttuuddyy ## sTStueutadyyM: eal: MMTMeaeastttthriiMoxcd/FaFRtiieennvraiaialsl:iSSooonlevesntt: MAAInnneasaltthlyryotutidmicce/aRanllteSEEvoqiqsufuiiowippnamm:reeenntVt eSSryysssittoeenmm Number Number: FFIRniiSlsleternanuaammameeern: t Sof~vare/Version: Vatu: P,-Squared Value: SYiipnei:xept Slope: Deof Exrcton/nayst Y Intercept: Date of Extraction/Analyst: DDaattee ooff AAnnaallyyssiivsA/Ananlaylsyts:t: -" [GorGroup Dose erogreToe1 Tor[0] Sample# Concentration n~/~ Initial Wt. g Dilution Factor Final Con. up/g SSGirlooappuepe:/DTTooaskkeem:n ffTrraookmmeFnlfionoeeamrrrheegeprseesssiyioonnfSeoqlqduueatrtiioonn. GSCSoaarnmmocpupelplnee/tD#:r:oastTTeia:oknTea(nakfraerkoon:mmfrothehTmeeasktshntetuendyfsytrufoodomdyledtrfeho:rel.dMers. s yx eatinsummary. DCIinioltitnaaitcalielonWWnterFt.a.a(tc(iggtoo):n:r:(TTrieagTkk/ageek)nn:efnfTorfoarmmkotemtnheefhrsesottsmuacdaytyhfyefoolMoldddeaersre.sLyax integration summaxv. Fina Cone. (ug: Calctatebyd dividing he Dilution Factor: Taken from the study folder. Final Cone. (ug/g): Calculated by dividing the til initial vvoolluummeeffri'oommththeeccoonncceenstrsaitioonn AAtatacchmheentAnA:: SSuummmmaarryy SSpprreeaaddasbheeeet`t AnsysofLEivTEerTSESx8-t8r7-a70c.0t UsingESMS Analys~s of Liver Extract Using ES/MS 22881144..00110022 Page 100110 Pag I0 of I0 W3M_MNMON106186656009988