Document VeBBV7DxeE0VKD8yVYD9yJgo

La Seresien JGiesy@aol.com & 12/11/2006 02:24AM To sparen To wkreagen@mmm.com sm=e cri dlbacon@mmm.com cc bee Subject confidential roFYI: EAI SISpL 0 Something of interest because of what box it would classify compounds into. ees=~tor manuscriptE S052778b. pdf 212255..000011 EExxhhiibbiitt 22112255 State of Minnesota v. 3M Co., Court File No. 27-CV-10-28862 3MA01461356 ' EEssttrrooggeenn--LLiikkee PPrrooppeerrttiieess ooff PPeerrfflluuoorrooooccttaannooiicc 2 2 AAcciidd ((PPFFOOAA)) aass RReevveeaalleedd bbyy VViitteellllooggeenniinn 3s EExxpprreessssiioonn iinn RRaarree MMiinnnnoowwss ((GGoobbiiooccyypprriiss rraarruuss)) 4 4 5S YYaannhhoonngg WWeeli'1, JJiaayyin DDaai"/,*,MMiinn LLiiun.2, JJiiaannsshhee wwaangn'l., MMiuqgi XXou,1, JJinommiaoo ZZhha.3, ZZiijiaan WWaann?l 6 6 11 IInnssttiittuutee ooffZZoooolologgy.y, CChhiinneessee AAccaaddeemmyyooff SScciieenncceess, BBeeiijjiinngg,, 110000005800., PP.RR.. CChhiinnaa., 7722 TThhee SSwwiirree IInnssttiittuuttee ooff MMaarriinnee SScciieennccee,, DDeeppaarrttmmeenntt ooffEEccoollooggyy && BBiiooddiivveerrssiittyy,, UUnniivveerrssiittyy 8 5 ooffHHoonngg KKoonng,, PPookkffuullaamm RRooaadd,, HHoonngg KKoonngg SSAARR,, PPR.R.. CChhiinnaa,, 9533 RReesseeaarrcchhCCenentteerrffoorr EEccoo--EEnnvviirroonnmmeennttaallSSciceienncecse,s, CChhiinneessee AAccaaddeenmnyyooff SScciieenncceess,, BBeejiijinngg,, 010 110000008855,, PPR.R.. CChhiinnaa 111 EEm-maiaill: ddaaijjyy@@iioozz.aacc.ecnn 1122 CCoormrpesopnodnidinngg utr: author: #+5866--1100--6G226635448S0022; ffaox:: 4+5866--1100.-662255665566889:; EEm-amiali:l: didaijv io ac 1Zvioz.ac en 22112255..00000022 M3MAOA101d4B61133S577 I AAbbssttrraacctt 22 PPeerrlflluuoorrooooccttaannooiicc aacciidd ((PPFFOOAA)) iiss oonnee ooff iimmppoorrttaanntt ppeerrfflluuoorriinnaatieedd ccoommppoouunnddss ((PPFFCCss)) wwiitthh 5 3 vvaarriioouuss aapppplliiccaattiioonnss aanndd hhaass bbeeeenn wwiiddeellyy sspprreeaadd iinn tthhee eennvviirroonnmmeenntt,, wwiillddlliiffee aanndd hhuummaanns,s. 4+ TThhiiss ssttuuddyy iinnvveessttiigsaatteedd tthhee eeffffeeccttss ooff wwaatteerrbboormnee PPFFOOAA oonn lliivveerr eessttrrooggeenn--rreessppoonnssiivvee ggeennee., 55 vviitteellllooggeenniinn ((VVitgg)),, eexxpprreessssiioonn aanndd ggoonnaaddaall ddeevveellooppmmeenntt iinn aa ffrreesshhwwaatteerr ffiisshh,, rraarree mmiinnnnooww 66 ((GGoobbliooccyypprriiss rraarruuss)).. TThhee eexxpprreessssiioonn ooff VVitgg wwaass ddeetteerrmmiinneedd uussiinngg rreevveerrssee ttrraannssccrriippttiioonn 77 ppoollyymmeerraassee cchhaaiinn rreeaaccttiioonn ((RRTT--PPCCRR)) tteecchhnniiqquueess,, aanndd iiddeennttiiffiieedd uussiinngg eennzzyymmee--lliinnkkeedd 88 iimmmmuunnoossoorrbbeenntt aassssaayy ((EELLIISSAA).). AA ssiiggnniiffiiccaanntt iinnccrreeaassee ooff VVitgg eexxpprreessssiioonn iinn tthhee lliivveerrss ooff bbaotthh 99 mmaattuurree mmaallee aanndd ffeemmaallee rraarree mmiinnnnoowwss wwaass oobbsseerrvveedd aafftteerr 1144 aanndd 2288--ddaayy eexxppoossuurree t(o0 PPFFOOAA,, 1100 iinnddiiccaattiinngg tthhaatt PPFFOOAAccoouulldd iinndduuccee tthhee ssyynntthheessiiss ooff YVitgg.. TThhee ddeevveellooppmmeenntt ooff ooooccyytteess iinn tteesstteess 1111 eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA aallssoo pprroovviiddeedd tthhee eevviiddeennccee ooff eessttrrooggeenniicc aaccttiivviittyy iinn mmaaleless.. TThhee oovvaarriieess ooff 1122 eexvppoosseedd ffeemmaalleess uunnddeerrwweenntt ddeeggeenneerraattiioonn aass rreeppoorrtteedd iinn ootthheerr ssppeecciieess eexxppoosseedd t1o0 n13 eennvviirroonnmmeennttaall eessttrrooggeennss. TThhiiss pprreelliimmiinnaarryy ssttuuddyy iinnddiiccaatteess tthhaatt PPFFOOAA ccaann bbee ccoonnssiiddeerreedd aass aa 1144 ccaannddiiddaattee ooff eessttrrooggeenniicc ccoommppoouunnddss wwiithh tthhee ppootteennttiiaall t0o iinndduuccee hheeppaattiicc eessttrrooggeenn--rreessppoonnssiivvee 1155 ggeenneess iinn mmaallee rraarree mmiinnnnooww.. TThheessee,, ttooggeetthheerr wwiitthh ootthheerr rreeppoorrtteedd,, ddaattaa oonn rraarree mmiinnnnooww ssuuggggeesstt 1166 tthhaatt tthhiiss ffiisshh pprroovviiddeess aa ggoooodd mmooddeell ffoorr aasssseessssiinngg eennddooccrriinnee ddiissrruuppttiioonn bbyy eennvviirroonnmmeennttaall 1177 eessttrrooggeennss.. 22112255..00000033 2 33MMAAO011446611335588 I IInnttrroodduuccttiioonn 22 TThhee ccoommmmerecrciiaall uussee ooff ppeerrfflluuoorriinnaatteedd ccoommppoouunnddss ((PPFFCCss)) ffoorr ddiiffffeerreenntt aapppplliiccaattiioonnss dduurriinngg 35 sseevveerraall ddeeccaaddeess hhaass rreessuulltteedd iinnaabrboroaadd ddiissttrriibbuuttiioonnofosftstaabbllee pprreeccuurrssaorrss//mmeettaabboolliitteess iinn aanniimmaallss 44 ffrroomm tteermreessttriiaall aannddaqauqautaiticc eennvviirroonnmmeennttss ((11--1100)) DDeessppiittee tthhee wwiiddeesspprreeaadd ooftf htheessee ccoommppoouunnddss,, Ss 5 rreellaattiivveellyy lliitttlee iiss kknnoowwnn ooftfhtheeiirr ffaattee aanndd eeffffeeccttss oonnaanniimmaallss ((1171,, 1122)).. TThhee eevviiddeenncceess tthhaatt PPFFCCss 66 mmaayy ddiissttuurrbb tthhee eennddooccrriinneessyysstteemm aarree iinnccrreeaassiinngg aanndd ddeesseerrvvee ffuurrtthheerr iinnvveessttiiggaattiioonn. 77 PPeerrfflluuoorrooooccttaanncoiicc aacciidd ((PPFFOOAA)) iiss aa rreemmaarrkkaabbllyy ssttaabbllee ccoommppoouunndd tthhaatt ddooeess nnoott uunnddeerrggoo 8 pphhoottoollyyssiiss., hhyyddrroollyyssiiss aanndd bbiiooddeeggrraaddataitioonn.. IItt hhaass bbeeeenn sshhoowwnn ttoo pprroodduuccee hheeppaattoommeeggaallyy, 99 iinndduuccee hheeppaattiicc ppeerrooxxiissoommeess,, iinnccrreeaassee fBl--ooxxiiddaattiioonn aanndd aalltteerr eennddooccrriinnee ffuunnccttiioonn iinn rrooddeennttss 11o0 ((1133--1188)).. IInn tteelleeoossttss,, cciirrccuullaattiinngg sseexx sstteerrooiidd lleevveellss iinn aa ffrreesshhwwaatteerr ssppeecciieess,, ffaatthheeaadd mmiinnnnooww 1111 ((Piimmeepphhaalleess pprroommeellaass)),, ccaann bbee aaffffeecctteedd ssiiggnniiffiiccaannttllyy bbyy eexxppoossuurree ttoo fflluuoorriinnaatteeddcchheemmicicaallss ((1/99,, 1122 2200)). HHoowweveevre,r, tthhee ppootteennttiiaall ooff PPFFOOAA ffoorr eessttrrooggeenn--liikkee pprrooppeerrttiieess iinn tteelleeoossttss hhaass llititlee bbeeeenn 1133 rreeppoorrtteedd.. 114 NNaattuurraall eessttrrooggeennss,, ssuucchh aass 1177~f-heessttrraaddiiooll ((EE22),), rreegguullaattee tthhee eessttrrooggeenn--rreessppoonnssiivvee ggeenneess bbyy 1155 bbiinnddiinngg 0toaa ssppeecciiffiicc eessttrrooggeenn rreecceeppttoorr ((EERR),). TThheenn tthhee eessttrrooggeenn--EERR ccoommpplleesx iinntteerraaccttss wwiitthh tthhee 1166 eessttrrooggeenn rreessppoonnssiivvee eelleemmeennttss ((EERREESs)) ooff tthhee ttaarrggeett pprroommootteerr ggeenneess aanndd aaccttiivvaatteess tthhee 1177 tsraannssecrriippttiioonn ooff eessttrrooggeenn--rreegguullaatteedd ggeennee ((2211,, 2222)).. AAmmoonngg tthhee eessttrrooggeenn--rreessppoonnssiivvee ggeenneess, 118s vviitteellllooggeenniinn ((VVitgg).), tthhee pprreeccuurrssoorr oofftthheeeenggg yyoollkk pprrootteeiinnss., iiss ssyynntthheessiizzeedd iinn tthhee lliiveerr ooff ffeemmaallee 1199 tteelleeoossttss iinn rreessppoonnssee ttoo eennddooggeennoouuss eessttrrooggeennss., ttrraannssppoorrtteedd ttoo tthhee oovvaarryy tthhrroouugghh tthhee bblloooodd 2200 ssttrreeaammaanndd iinnccoorrppoorraatteedd iinnttoo tthhee viitteellllooggeenniicc ssttaaggee ooooccyytteess ((2233)). AAhhiigghh lleevveell ooff ppllaassmmaa aannddi/oorr 2211 hheeppaattiicc VVitgg iiss oobbsseerrvveedd iinn mmaattuurree ffeemmaaleless,, wwhheerreeaass VVitgg lleevveellss iinn mmaalleess aanndd sseexxuuaallllyy 222 iimmmmaattuurree iinnddiivviidduuaallss aarree rreellaattiivveellyy llooww oorr eevveenn uunnddeetteeccttaabbllee.. IIt iiss kknnoowwnn ttoo ddaattee tthhaatt aa 3 22112255..00000044 33MMAAO011446611335599 1 nnuummbbeerr ooff eennvviirroonnmmeennttaall eessttrrooggeennss,, ssuucchh aass aallkkyyllpphheennoolliicc ccoommppoouundnsd,s, tthhee ppeessttiicciiddeess., ccaann 22 iinndduuccee tthhee VVitgg ssyynntthheessiiss iinn mmaaleless.. TThheerreeffoorere,, tthhee ssiiggnniiffiiccaanntt iinnccrreeaasseeooffVVitgg iinn tthheeppllaassmmaaooff a3 35 mmaallee iiss ccoonnssiiddeerreedd aass aa sseennssiittiivvee bbiioommaarrkkeerrooff eexxppoossuurree t1o0 aann eessttrrooggeenniicc cchheemmiiccaall ((2244)). 44 IInntthhee pprreesseenntt ssttuuddyy aa ffrreesshhwwaatteerr tteelleeoosst,t, rraarree mmiinnnnooww ((GGoobbiiooccyypprriiss rraarrnuss)),, wwaass uusseedd.. TThhiiss 5Ss gcoonnoocchhaorriisstticc ssppeecciieess hhaass mmaannyy aattttrraaccttiivvee ffeeaattuurreess tthhaatt mmaakkee iittasausiutitaabbllee oorrggaanniissmm iinn aaqquuaattiicc 66 ttooxxiicciittyy tteesstts,, iinncclluuddiinngg sseennssiittiivviittyy 1to0 cchheemmicicaallss,, ssmmaallll ssiizzee,, wwiiddee tteemmppeerraattuurree rraannggee,, eeaasslilyy 77 bbeeiinngg ccuullttuurreedd iinn llaabboorraattoorryy aanndd sshhoorrtt dduurraattiioonn ooff eemmbbrryyoonniicc ddeevveellooppmmeenntt ((2255:-2258)).. TThhee 85 oobbjjeecctitveiovofef tthhee pprreesseenn:t ssttuuddyy wwaass tfoo eevvaalluuaattee tthhee 1in vvivoo eeffffeeccttssooffwwaatteerrbboormnee PPFFOOAA oonn bbaotthh 99 mmaattuurree mmaallee aanndd ffeemmaallee rraarree mmiinnnnoowwss uunnddeerr ccoonnttiinnuuoouuss ffllooww--tthhrroouugghh ccoonnddititiioonnss.. WWee 1100 eexxaammiinneedd iinntteeggrraatteeddilyy tthhee vviitteellllooggeenniinn ggeennee iinndduuccttiioonn iinn tthhee lliivveerrssooffmmalalee aanndd ffeemmaallee rraarree 1111 mmiinnnnoowwss uussiinngg ppoollyymmeerraassee cchhaaiinn rreeaaccttiioonn ((PPCCRR)) tteecchhnniiqquueess,, aanndd mmeeaassuurreedd tthhee VVitgg uussiinngg 1122 eennzsyymmeel-ilinnkkeedd iimmmmuunnoossoorrbbeenntt aassssaayy ((EELLIISSAA).). IInn aaddddiittiioonn,, tthhee hhiissttooppaatthhoollooggiiccaall cchhaannggeess iinn 1133 rraarree mmiinnnnooww ggoonnaaddss wweerree eexxaammiinneedd uunnddeerr aa lliigghhtt mmiiccrroossccooppee aatt tthhee eenndd ooff tthhee eexxppeerriimmeenntt,, 1144 wwhhiicchh pprroovviiddeedd iinnssiigghhttss iinnttoo tthhee eeffffeeccttssooff PPFFOOAAoonn rreperopdrucotivdehhueeacallttthhoionnvtthheiiss ssppeecciieess.. 1155 1166 MMataeterriiaallss aanndd MMeetthhooddss 1177 CChheemmiciaclasl.s. PPeerrfflluuoorrooooccttaannooiicc aacciidd ((PPFFOOAA,, 9988%%)) wwaass ppuurrcchhaasseedd ffrroomm AAccrrooss OOrrggaannicicss. 1188 ((GGeeoell,, BBeellggiiuumm).). ApAoploylcylcolonnaall aannttiisseerruumm ((aannttii--VVitgg)) tthhaatt wwaass rraaiisseedd iinn rraabbbbiittss aaggaaiinnsstt ccaarrpp wwaass. 1199 ggeenneerroouussllyy pprroovviiddeedd bbyy PPrrooffeessssoorr XXiuu.. AAnnit-i-rraabbbbiitt iimmmmuunnooglgolobbuulliinn GG ((I1gGG)) ccoonnjjuuggaatteedd wwiitthh 2200 hhoorrsseerraaddiisshh ppeerrooxxiiddaassee ((HHRRPP)) wwaassppuurrcchhaasseedd ffrroomm PPrroommeeggaa,, UUSSAA. 2211 FFiisshh aanndd eexxppoosseedd eexxppeerriimmeennt.t. AAllll rraarree mmiinnnnoowwss wweerree oobbttaaiinneedd ffrroomm llaabboorraattoorryy hhaattcchheerryy. 2222 TTwwoo hhuunnddrreedd aanndd ffoorrttyy mmaattuurree mmaallee aanndd ffeemmaallee rraarree mmiinnnnoowwss ((asbboouutt 99 mmoonntthhss oolldd wwiitthh bbooddyy 4 22112255..00000055 33MMAAO011446611336600 1 wweeiigghhtt ooff1.41.400..44 gg aanndd ttoottaall lleennggtthhooff 4477..77 33..66 mmmm)) wweerree rraannddoommllyy aassssiiggnneedd tfoo eeiigghhtt 2200--LL. 22 gcllaassss ttaannkkss ((3300 iinnddiivviidduuaallss ppeerr ttaannkk)) aanndd aacccclliimmaatteedd ffoorr aa wweeeekk.. FFiisshh wweerree ssuupppplliieedd wwiitthh 33 ddee--cchhlloorriinnee ttaapp wwaatteerr uunnddeerr ccoonnttiinnuuoouuss ffllooww--tthhrroouugghh ccoonnddiittiioonnss aattaatetemmpeprearattuurree ooff 2255+ 22oCc 44 aanndd aa pphhoottooppeerriioodd ooff 1166:88 hh ((liigghhtt:ddaarrkk)). FFiisshh wweerree ggeenneerraallllyy ffeedd wwiitthh aa ccoommmmerecrciiaall ggrraannuullee 5 ffoooodd ((TTrreeaa,, GGeerrmmaannyy)) aatt aa ddaaiillyy rraatteeooff 0.10.%1% bbooddyy wweeiigghhtt. WWaassttee aanndd uunneeaatteenn ffoooodd wweerree 66 rreemmoovveedd ddaaiilly.. FFiisshh wweerree rraannddoommllyy aassssiiggnneedd ttoo oonneeooff tthhe e44 ttrreeaattmmeennttss aafftteer tthhee oonnee--wweeeekk 77 aacccclliimmaattiioonn,, tthhee ccoonnttrrooll oorr eexxppoosseedd 0to PPFFOOAA ccoonncceennttrraattiioonnss ooff 33., 1100 oorr 3300 mmgg//LL.. TThhee ffllooww 88 rraatteeoofftteesstt ssoolluuttiioonn wwaass8 LL//hh,, aanndd aaccttuuaall PPFFOOAA ccoonncceennttrraattiioonnss iinn ttaannkkss wweerree nnoottvevreirfiifieeddbbyy 99 cchheemmiiccaall aannaallyysissis.. EExxppeerriimmeenntt llaasstteedd ffoorr 2288dd.. 1100 GGoonnaaddaall HHiissttoollooggyy.. TToo iinnvveessttiiggaattee tthhee hhiissttooppaatthhoollooggiiccaall cchhaannggeess iinn rraarree mmiinnnnooww ggoonnaaddss,, 1111 tteenn mmaalleess aanndd tteenn ffeemmaalleess wweerree ccoolllleecctteedd aat tthhee eenndd ooff tthhee 2288dd eexxppoossuurree ffrroomm ceaacchh ttrreeaattmmeenntt.. 1122 FFoorr ceaacchh ffiisshh,, ggoonnaaddaall ttiissssuuee wwaass eexxcciisseedd ffrroomm tthhee mmiiddddllee ppoorrttiioonnooff oonneeoofftthhee ttwwoo lloobbeess,, 1133 ffiixxeedd iinn 1100%% ffoorrmmaalliinn ssoolluuttiioonn.. TTiissssuueess wweerree ddeehhyyddrraatteedd iinn eetthhaannooll,, eemmbbeeddddeedd iinn ppaarraaffffiinn 1144 wwaaxx,, sseeccttiioonneedd ttrraannssvveerrsseellyy aatt 44-55 um,~-tm, mmoouunntteedd oonn sslliiddeess aanndd ssttaaiinneedd wwiitthh hhaaeemmaattoosxyylliinn aanndd 1155 eeoossiinn. FFiisshh sseexxeess aanndd tthheeiirr mmaattuurraattiioonn wweerree ddeetteerrmmiinneedd oonn tthhee bbaassiiss ooff tthhee ggoonnaaddaall ssttrruuccttuurree 1166 aanndd tthhee ddeeggrreeeeooffeeggeg aanndd ssppeerrmm cceellll ddeevveellooppmmeenntt,, rreessppeecctiivveellyy ((2299., 3300)).. 1177 RRNNAA EExxttrraaccttiioonn,, GGeennee EExxpprreessssiioonn QQuuanatnitfifiiccaattiioonn TToottaall RRNNAA aanndd ffiirrsstt ssttrraanndd ceDDNNAA 1188 ssyynntthheessiiss wweerree ppeerrffoorrmmeedd aass ddeessccrriibbeedd iinn tthhee mmaannuufafactcuturreerr''ss pprroottooccool.l. BBrriieeflfyly,, ffoorr eeaacchh 1199. iinnddiivviidduuaall mmaallee oorr ffeemmaallee aannaallyyzzeedd,, ttoottaall RRNNAA wwaass eexxttrraacctteedd ffrroomm 2200 mmggooff lliivveerr ttiissssuuee uussiinngg 2200 RRNNeeaassyy MMiinni KKiitt ((QQiiaaggeenn,,GGeerrmmaannyy))aanndd ttrreeaatteedd wwiitthh RRNNaassee--ffrreeee DDNNaasse1eI ((QQiiaaggeenn,, GGeerrmmaannyy)) 2211 ttoo rreemmoovvee aannyy rreemmaaiinniinngg ggeennoommiicc DDNNAA. TThhee aapppprrooxxiimmaattee 11 uj.lgg ooff ttoottaall RRNNAA ffoorr eeaacchh ssaammppllee 2222 wwaass ccoonndduucctteedd rreevveerrssee ttrraannssccrriippttiioonn uussiinngg oolliiggoo ((d4TT)hss pprriimmeerr ((PPrroommeeggaa,, UUSSAA)) aanndd MM--MMuuLLVV 22112255..00000066 33MMAAD011446611336611 | rreevveerrssee ttrraannssccrriippttaassee ((NNeeww EEnnggllaanndd BBiioollaabbss,, UUSSAA)) wwiitthh iinnccuubbaattiioonn aatt 4422 CC ffoorr 6600 mminin,, 22 ffoolllloowweedd bbyy a2t19955 oCc ffoorr$5 mminin,, aaccccoorrddiinngg ttoo tthhee ssuupppplliieerr''s iinnssttrruuccttiioonnss.. 33 TThheevavrairaiattiioonnss iinn VVitgg mmRRNNAA eexxpprreessssiioonn iinn mmaallee lliivveerrss wweerree eevvaalluuaatteedd bbyy sseemmii--qquuaanntitittaaitiivvee 4+ RRTT--PPCCRR uussiinngg tthhee [~-aaccttiinn aass aann iinntteermnaall ccoonntrtrool.l. AA ccyyccllee nnuummbbeerr wwiitthhiinn tthhee eexxppoonneenntitiaall pphhaassee: 5Sof tofhthee aammplpiliffiiccaattiioonn ccuurrvvee wwaass cchhoosseenn ffoorr qquuaannttiiffYyiinngg tthhee eexxpprreessssiioonn oofVfVitgg ggeennee.. VVitgg pprriimmeerrss 66 wweerree ddeessiiggnneedd oonn tthhee bbaassiiss ooff sseeqquueennccee iinn oouurr CeDDNNAA lliibbrraarryy aavvaaiillaabbllee iinn GGeennBBaannkk 77 ((EEEE3092248898)): ffoorrwvaardd: 5S'-- AACCAAAAAAGGTTCCAACCTTGGCCCCAAAAGGGGTTTT -33,', rreevveerrssee: 55'- 8 AAAATTGGGGTTAAAAGGAAGGTTTTCCCCGGTTCCTTGG --33".'. TThhee pprroodduucctt ssiizzee wwaass 336644 bbpp.. PPCCRR wwaass ppeerrffoorrmmeedd 99 uussiinngg PPCCRR MMaasstteerr MMiixx ((PPrroommeeggaa,, UUSSAA)) iinn 2255 1u1lL. ccoonnttaaiinniinngg 11 x PPCCRR bbuuffffeerr,, 220000 u11MM ooff 1100 ddNNTTPP aanndd 00..55 u11MM ooff eeaacchh pprriimmeerr sseet.t. PPCCRR aammplpiliffiiccaattiioonn ooffVVitgg wwaassccaarrrriieedd oouutt ffoorr 3300ccyycclleess 1111 wwiitthh tthhee ffoolllloowwiinngg pprrooffiillee:: ddeennaattuurraattiioonn aatt 9944oCc ffoorr$5 mmiinn,, pprriimmeerr aannnnceaalliinngg aatt 6600oCc ffoorr 4400'ss., 1122 pprriimmeerr eexxtteennssiioonn aatt 7722oCc ffoorr 4400'ss,, aanndd wwiitthh aa ffiinnaall eexxtteennssiioonn ppeerriioodd ooff 7722oCc ffoorr5 mmiinn. TThhee 1133 PPCCRR aammplpiliffiiccaattiioonn ooff fB--aaccttiinn wwaass ccaarrrriieedd oouutt ffoorr 2277 ccyycclleess uussiinngg ssppeecciiffiicc ~f--aaccttiinn pprriimmeerrss 1u4o ((ffoorrwwaarrdd: 55'G-GCCCCGGITGGAACCCCTTGGAACCTTGGAACCTTAACC-3,', rreevveerrssee:: 1155 5S'"-GGCCAAAAGGAATTTCTCCACTAATCACCCCAACGAAA-G3A'-)3') wwiilthh tthhee ffoolllloowwiinngg tteerrmmooccyycclleerr pprrooffiillee:: 4400's saatt 9944oCc,, 1166 pprriimmeerr aannnneeaalliinngg aait 6600oCc ffoorr 4400 ss., aanndd pprriimmeerr eexxtteennssiioonn aat 7722oCc ffoorr 4400's.s. TThhee pprroodduucctt ssiizzee 1177 wwaass 227722 bbpp.. TThhee bbaanndd ddeennssiittiieessooff tthhee rreessuullttiinngg pprroodduuccttss wweerree mmeeaassuurreedd uussiinngg tthhee BBaannddileeaaddeerr 1188 SSooffttwwaarree. EEaacchh aannaallyyssiiss wwaass rreeppeeaatteedd tthhrreeee ttiimmeess aanndd nnoorrmmaalliizzeedd aaggaaiinnsstt bB--aacctitinn.. 1199 QQuuanatnittitaattiivvee RRTT--PPCCRR wwaass ppeerrffoorrmmeedd ttoo eevvaalluuaattee tthhee VVitgg eexxpprreessssiioonn ooff ffeemmaalle lliivveerrss uussiinngg aa 2200 QQuuaannttiiTTeecctt SSYYBBRR GGrreeeenn PPCCRR kkiitt ((QQiiaaggeenn,, GGeerrmmaannyy)) aanndd SSttraattaaggeennee MMyx33000000PP GqPPCCRR ssyysstteemm 2211 ((SSttrraattaaggeennee,, UUSSAA)) iinn aa 2200 u11l1 ttoottaall rreeaaccttiioonn vvoolluummee iinncclluuddiinngg 1100 1u1l1 oof2f2 x QQuuaannttiiTTeecett SSYYBBRR 2222 GGrreeeenn PPCCRR mmaasstteerr mmiixx,, 11 1p1ll ecDDNNAA tteemmppllaattee,, aanndd 00..55 u11MM eeaacchh ooff ttaarrggeett ssppeecciiffiicc pprriimmeerr.. TThhee 6 22112255..00000077 I3MMAAD011446611336622 1 pprriimmeerrss wweerree tthhee ssaammee aass aabboovvee.. TThheerrmmaall ccyycclliinngg ccoonnddiittiioonnss wweerree aass ffoolllloowwss:: 9955 CC ffoorr 1155 22 mmiinn,, aanndd 5500 ccyycclleess oof 9944foCc ffoorr 115S sseecc., 6600 oCc ffoorr 3300 sseecc aanndd 7722 oCc ffoorr 3300 sseecc.. AAfftteerr PPCCRR,, aa 33 mmeellitiinngg ccuurrvvee aannaallyyssiiss wwaass ppeerrffoorrmmeedd ttoo ddeemmoonnstsrtraattee tthhee ssppeecciiffiicciittyy ooff tthhee PPCCRR pprroodduucct,t, aass 44 ddiissppllaayyeedd bbyy aa ssiinnggllee ppeeaakk ((ddaattaa nnoott sshhoowwn)n,) EExveerryy ssaammppllee wwaass ddeetteerrmmiinneedd iinn ttrriipplliiccaattee.. AAfflteerr 55 vveerriifYfiinngg tthhaatt tthhee eeffffiicciieenncciieess ooff aammppliliffiiccaattiioonn ooff VViteg aanndd iinntteermnaall ccoonnttrrooll ~p--aaccttiinn wweerree 66 aapppprrooxxiimmaatetellyy eeqquuaall., ffoolldd ddiiffffeerreenncceess iinn VVitgg eexxpprreessssiioonn ((ccoommppaarreedd tfoo ccoonnttrrooll)) wweerree ccaallccuullaatteedd 77 uussiinngg tthhee 22 OCT -DeltaDeltaCT mmeetthhoodd ((3311)). 8 MMeeaassuurreemmeenntt ooff LLiivveerr VVitgg LLeevveell.. 3300 mmggoofflliivveerr ttiissssuuee ffrroomm eeaacchh iinnddiivviidduuaall mmaallee oorr ffeemmaallee: 99 aannaallyyzzeedd wwaass ssoonniiccaatteedd iinn 550000 u1-1L-L ooff iiccee--ccoolldd PPBBSS bbuulffeerr ((pplHl 77..66)) oonn iiccee ffoorr 5$ mmiinn wwiitthh 1100 ssoonniiffiieerr ((DDiiggiittaall SSoonniiffieerr,, UUSSAA).). CCeelllluullaarr ddeebbrriiss wwaass rreemmoovveedd bbyy cceennttrriiffuuggaattiioonn aatt 1122000000g ffoorr 111 12200 mmiinn aatt 44 CC., aanndd tthhee ssuuppeermnaattaanntt wwaass ccoolllleecctteedd aanndd ssttoorreedd aatt --8800 oCc uunnitill uusseedd ffoorr ffuurrtthheerr 1122 aannaallyyssiiss. LLiivveerr VVitgg lleevveell wwaass mmeeaassuurreedd uussiinngg tthhee hheetteerroollooggoouuss ccoommppeettiitiivvee EELLIISSAA mmeetthhoodd aass 1133 ddeessccrriibbeedd iinn rreeffeerreennccee ((3322,, 3333)) wwiitthh aa llitltlee aaddjjuussttmmeennt.t. BBrriieeflfyly. , tthhee 9966 mmiiccrroo--wweellll ppllaattee wwaass. 1144 pprree--ccooaatteedd wwiitthh 775500 nngg//mmLL ppuurriiffiieedd ccaarrpp YVitgg aanndd tthheenn iinnccuubbaatteedd aatt 44 oCc ffoorr oovveemringighth.t. 1155 SSttaannddaarrddssooffppuurriiffiieedd ccaarrpp VVitgg wweerree ddiilluutteedd wwiitthh 00..0055 MM TTrriiss--HHCCIl ((ppHH 77.5).5)ccoonnttaaiinniinngg 00..0055%% 1166 TTwweeeenn--2200,, 00..99%% NNaaCCll ((TTTTBBSS)) wwiitthh 33%% BBSSAA iinn aa 1t\w:vooffoolldd sseerriieess ffrroomm 22000000 ng/mL. t0o 77..88 1177 nim, tthheenn mmiixxeedd ((11::11,, vA) wwiitthh ddiilluutteedd ant-Vig ((1117000) iinn 9906 mmiiccrroo--wweellll plate aanndd tthheenn 1188 iinnccuubbaatteedd ffoorr 1166 hh aatt 44 CC.. 110000 pLof each pre-incubated solution was dispensed in triplicate 1199. iinnttoo tthhee ccooaatteedd plate. ffoolllloowweedd by iinnccuubbaattiioonn ffoorr 11 hh ffoorr 3322 CCafatfeterr wwhhiicchh itt wwaass wwaasshheedd ffoouurr 2200 tdiimmeess wwiitthh TTTTBBSS.. AA sseeccoonndd aannttiibbColddyy aannttii--rraabbbbiitt 1eG conjugated with HRP (prepared ai a 2211 ffiinnaall ddiilluuttiioonn ooff 1112500) wwaass aaddddeedd ttoo eeaacchh wweellll (100 ul. ppeerr well). AAfftteerr 11 hhaatt 3322CC,, tthhee 22 second antibody was remosed and the plate was wwaasshheedd ffiivvee ttiimmeess.. 00..1 MM cciittrraattee bbuuffffeerr (pI} 7 22112255..00000088 33MMAAO011446611336633 150) containing 00.44 mg/mL. of o-phenslenediamine (Ameresco. USA) aanndd 00.1155%% (v/v) 22 hydrogen peroxide was aaddddeedd ((l10000 uLivell). The plate was gently agitated aanndd tthheenn 33 iinnccuubbaatteedd aatt rroooomm tteenm1ppeer:arattuurree ffoorr 115 mminin.. TThhee optical density wwaass mmeeaassuurreedd aatt449922 nnernn wwiitthh aa 44 mmiiccrroottiitteerr plate rreeaaddeerr.. TThhee ccoonncceennttrraattiioonn ooff Vig iinn lliivveerr vwvaass nnoorrmmaalliizzeedd ttoo protein mmaassss ooff 55 tthhee comesponding sample aanndd expressed iinn neue protein. PPrrootteeiinn ccoonncceennttrraattiioonn wwaass 66 mmeeaassuurreedd bbyy tthhee BBrraaddffoorrdd mmeetthhoodd ((3344)) uussiinngg BBSSAAaass ssttaannddaarrdd.. 77 SSttaattiissttiiccaall aannaalylysissis.. AAllll vvaalluueess aarree eexxpprreesssseedd aass mmeeaann + $S..DD.. TThhee ssttaattiissttiiccaall pprrooggrraamm SSPPSSSS 88 ((vveerrssiioonn 1133..00)) wwaass uusseedd t1o0 ccoolllleecctt aanndd aannaallyyzzee aallll ddaattaa.. OOnnee--wwaayy aannaallyyssiiss ooff vvaarriiaannccee 99 ((AANNOOVVAA)) wwaass uusseedd ttoo ddeetteerrmmiinnee tthhee ssttaattiissttiiccaall ddiiffffeerreennccee bbeettwweeeenn tthhee tteesstt ggrroouuppssaanndd ccoonnttrrooll 1100 aanndd pp <<00..0055 wwaass ccoonnssiiddeerreedd aass ssiiggnniiffiiccaannt.t. n11 1122 RReessuullttss aanndd DDiissccuussssiioonn 1133 HHiissttooppaatthhoollooggyy.. IInn tthhee ccoonnttrrooll,, bbootthh mmaallee aanndd ffeemmaallee rraarree mmiinnnnoowwss wweerree iinn mmaattuurree wwiitthh 1144 sseemmiinniiffeerroouuss twubbuulleess aanndd ssppeerrmm dduuccttss wweerree ffiillleedd wwiitthh ssppeerrmm iinn tthhee tteesstteess aanndd vviiteellllooggeenniicc 1155 ssttaaggee ooooccyytteess ddoommiinnaanntt iinn tthhee oovvaarriieess,, rreessppeeccttiivveellyy ((FFiigguurree llaa,, bb)).. TThheerree wwaass nnoo eevviiddeennccee ooff 1166. ddeeggeenneerraattiioonn iinn bbootthh tteesstteess aanndd oovvaarriieess iinn tthhee ccoonntrtrool.l. FFoorr mmaattuurree ffeemmaalleess eexxppoosseedd ttoo 33., 1100 1177 aanndd 3300 mmgg//LL PPFFOOAA ffoorr 2288 dd,, vviitteelllooggeenniicc ssttaaggee ooooccyytteess iinn oovvaarriieess wweerree uunnddeerr ddeeggeenneerraattiioonn 1188 ((aattrreessiiaa)) ((FFiigguurree 22aa,,bb, c)).. FFoorrmmatauturree mmaalleess eexxppoosseedd t1o0 33 mmag//LL PPFFOOAA,, tthheetteesstteess wweerreessiimmililaarr 1199 t1o0 tthhoossee iinn tthhee ccoonntrtrool.l. FFoorr mmaalleess eexxppoosseedd ttoo 1100 mmgg//LL PPFFOOAA,, pprriimmaarryy--ggrroowwtihh ssttaaggee ooooccyylteess. 2200 ((pprreevviitteellllooggeenniicc ooooccyytteess)) ddeevveellooppeedd iinn tteesstteess ((tihhrreeee oouutt ooff tteenn mmaalleess)) ((FFiigguurree 33aa,, bb)).. SSuucchh 2211 tteesstteess--oovvaa wweerree nnoott iinn mmoorree aaddvvaanncceedd ssttaaggee iinn mmaalleess eexxppoosseedd ttoo hhiigghheerr ccoonncceennttrraattiioonn ooff 3300 2222 mmgy/L PPFFOOAA ((oonnee oouutt ooff tteenn mmaalleess)) ((FFiigguurree 33cc)).. IInn aaddddiittiioonn,, iinn tteesstteess ffrroomm ccoonnttrrooll mmlalee rraarree 8 22112255..00000099 I3MMAAO011446611336644 1 mmiinnnnoowwss aanndd eevveenn iinn tthhee PPFFOOAA ccoonncceennttrraattiioonn 33 mmyg/.L, sseemmiinniiffeerroouuss ttuubbuulleess wweerree ffiilllleedd wwiitthh 22 llaarrggee nnuummbbeerrss ooff ffeerrtiillee ssppeerrmm.. HHoowweveevre,r, tthhee nnuummbbeerr ooff ssppeerrmmss aanndd vvaarriioouuss ssttaaggeess ooff ggeerrmm 35 ecelllss wwiitthhiinn tthhee ssppeerrmmaattooggeenniicc ccyyccllee iinn tthhee PPFFOOAA ttrreeaattmmeenntt aatt 1100 aanndd 3300 mmyg//LL wweerree lloowweerr 44 tthhaann iinn ccoonnttrrooll mmaalleess. 5Ss SSiimmiilliarr tteesstteess-oovvaa hhaavvee aallssoo bbeeeenn oobbsseerrvveedd iinn mmaallee rraarree mmiinmnoowwss eexxppoosseedd ttoo 66 1Va7cac-tehthyynynlyelsetsrtraaddiiooll ((EEEE22)),, 44--nnoonnyyllpphheennooll ((NNPP)) aanndd ddiieetthhyyllssttiillbbeessttrooll ((DDEESS)) ((3322., 3335)).. GGrraayy 77 aanndd MMeettccaallffee ((3366)) rreeppoorrtteedd tthhaatt NNPP ccoouulldd iinndduuccee tteessttiiss--oovvaa iinn mmaallee mmeeddaakkaa ((OOrryyzziiaass llaattiippeess)).. 8 LLaannggee eett aall ((3377)) aallssoo rreeppoorrtteedd lloonngg tteerrmm eexxppoossuurree ttoo EEEE22 rreessuulltteedd iinn tthhee ffoorrmmaattiioonn ooff 99 tteessttisi-soovvaa aanndd tthhee aappppeeaarraannccee ooff sseexx rreevveerrssaallss iinn mmaallee ffaatthheeaadd mmiinnnnoowws.s. HHoowweevveerr,, nnoott aallll 1100 ssttuuddiieess sshhoowweedd tthhaatt ffiisshh eexxppoosseedd t1o0 eennddooccrriinnee ddiissrruuppttoorrss ccoouulldd bbee ddeetteecctteedd wwiitthh tteesstteess--oovvaa. 1111 FFoorr eexxaammplpele,, mmaallee ffautthheeaadd mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo EE22 aanndd EEEE22 ffoorr 22--33 wweeeekkss oonnllyy eexxhhiibbiitteedd tthhee 1122 bblloocckk ooff ssppeerrmmaattooggeenneessiiss aanndd tthhee hhyyppeerrppllaassiiaa ooff sseerrttollii ccaellllss ((3388));; ssiimmiillaarr cchhaannggeess wweerree 1133 oobbsseerrvveedd iinn mmaalleessooffzzeebbrraaffiisshh ((3399)).. 1144 OOvvaarriiaann cchhaannggeess ooff ffeemmaalleess eexxppoosseedd ttoo cessttrrooggeennss hhaavvee bbeeeenn oobbsseerrvveedd tthhrroouugghh hhiissttoollooggiiccaall 1155 eexxaammiinnaattiioonn iinn sseevveerraall ffiisshheess.. FFoorr eexxaammppllee,,ooooccyyteess iinn ffeemmaallee ffaatthheeaadd mmiinnnnoowwss ((PPiimmeepphhaalleess 1166 pprroommeellaass)) eexxppoosseedd t1o0 wwaatteerrbboormnee EE22 ffoorr 1144dd eexxhhiibbiitteedd ddeeggeenneerraattiivvee cchhaannggeess ((3388)). MMaattuurree 1177 ffeemmaalleess ooffz7eebbrraaffiisshh ((DDaanniiao rreerriioo)) eexxppoosseedd t1o0 1177aa--eetthhyynnyylleessttrraaddiiooll ((EFEE22)) ffoorr 2244 dd ccaauusseedd tthhee 118s ddeeggeenneerraattiioonnooffvviitteellllooggeenniicc ssttaaggee ooooccyytetess,, tthhee rreedduuccttiioonn ooff yvoollkkss iinn ooooccyytteess aanndd tthhee ddeeccrreeaassee 1199 ooff tthhee ggoonnaaddoossoommaaitiicc iinnddeexx ((GGSSI)) ((3399)).. SSiimmiillaarr iinn tthhiiss ssttuuddyy., oovvaarriieess ooff mmaattuurree ffeemmaalleess 2200 eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA ffoorr 2288 dd uunnddeerrwweenntt ddeeggeenneerarattiioonn.. TThhee rreessuullttss ooff tthhee pprreesseenntt ssttuuddyy iinnddiiccaattee 2211 tthhaatt rraarree mmiinnnnooww iiss aa sseennssiittiivvee ffiisshh ssppeecciieess ttoo eennddooccrriinnee ddiissrruuppttoorrss wwiitthh tthhee ffoorrmmaattiioonn ooff 9 22112255..00001100 33MMAAO011446611336655 1 tteesstteess--oovvaa iinn tthhee tteesstteess aanndd tthhee ddeeggeenneerraattiioonn ooff vviitteellllooggeenniicc ssttaaggee ooooccyylteess iinn oovvaarriieess aafftteerr 22 eexxppoossuurree 0to PPFFOOAA. 33 VViitteellllooggeenniinn mmRRNNAA LLeevveellss iinn LLiivveerr.. FFiigguurree 44a aanndd bb sshhoowweedd aann aaggaarroossee ggeell ddiissppllaayyiinngg 4+ tthhee vviitteellllooggeenniinn aanndd bP--aaccttiinn pprroodduuccttss ggeenneerraatteedd iinn tthhee RRTT--PPCCRR rreeaaccttiioonnoofftotottaall RRNNAA iissoollaatteedd Ss 5 ffrroomm tthhee lliivveerrss ooff iinnddiivviidduuaall mmaallee rraarree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA ffoorr 1144 aanndd 2288 dd., 66 rreessppeecctitivveleyl.y. TThhee vviitteellllooggeenniinn--ssppeecciiffiicc DeDNNAA bbaanndd,, wwhhiicchh mmiiggrraatteess aatt aann eeffffeeccttiivvee pprreeddiicctteedd 77 mmaassss ooff 336644 bbuassee ppaaiirrss ((bbpp)),, wwaass ggeenneerraatteedd wwiitthh tthhee VVitgg pprriimmeerr ppaaiirr.. TThhee fPr-aaccitiinn 85 aammplpiliffiiccaattiioonn pprroodduuccttss oobbsseerrvveedd iinn ttoottaall RRNNAA ffrroomm lliivveerrss hhaavvee aa mmaassss ooff aapppprrooxxiimmaatteellyy 227744 99 bbpp.. FFiigguurree 4dcc aanndd dd sshhoowweedd tthhee rreellaattiivvee VVitgg eexxpprreessssiioonn lleevveellss ooff iinnddiivviidduuaall rraarree mmiinnnnoowwss iinn 1100 ccoonnttrroollss aanndd 33,, 1100 aanndd 3300 mmgg//LL. ooff PPFFOOAA ffrroomm tthhee ssaammee eexxppeerriimmeenntt aafftteerr 1144 aanndd 2288 dd,, 1111 rreessppeecctitivveleyl.y. AAnn AANNOOVVAA wwaass ppeerrffoorrmmeedd oonn ddiiggiittaall vvaalluueess ooff ppiixxeell ddeennssiittyy rraattiiooss ffrroomm tthhoossee. 1122 aaggaarroossee ggeellss tthhaatt yyiieellddeedd ggrraapphhiiccaall ddaattaa,, aass sshhoowwnn iinn FFiigguurree 44cc aanndd dd.. TThhee uupp--rreegguullaattiioonn ooff 1133 lliivveerr VVitgg mmRRNNAA wwaass oobbsseerrvveedd iinn mmaallee rraarree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo 1100 aanndd 3300 mmgg//LL PPFFOOAA ffoorr 1144 1144dd,, bbuutt tthheerree wwaass nnoo ssiiggnniiffiiccaanntt ddiiffffeerreennccee iinn tthhee eexxpprreessssiioonn lleevveell ooff lliivveerr VVitgg iinn mmaalleess 1155 eexxppoosseedd 1to033 mmgg//LL PPFFOOAA ccoommppaarreedd 1to0 tthhee ccoonnttorlo.l. TTrreeaattmmeennttss ooff aallll ggrroouuppss pprroodduucceedd 1166. ssiiggnniiffiiccaanntt cchhaannggeess iinn VVitgg ggeennee eexxpprreessssiioonnrerlealattiivvee ttoo tthhee ccoonnttrrooll ggrroouupp aafftteerr 2288dd eexxppoossuurree.. 1177 RReeaall-ttiimmee qquuaannttiittaattiivvee PPCCRR wweerree ppeerrffoorrmmeedd oonn ffeemmaallee rraarree mmiinnnnooww hheeppaattiicc ssaammpplleess ooff 1188 eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA.. fPa-accttiinn wwaass uusseedd aass eennddooggeennoouuss ccoonntrtrool.l. TThhee rreessuullttss iinnddiiccaatteedd tthhaatt tthhee 1199 mmRRNNAA eexxpprreessssiioonn ooff VVitgg wwaass ssiiggnniiffiiccaannttllyy hhiigghheerr iinn ffeemmaallee ttrreeaattmmeenntt ggrroouuppss ((1100 aanndd 3300 2200 mmgL/L)) ffoorr 1144 dd aanndd 2288 dd tthhaann tthhoossee iinn fFeemmaallee ccoonntrtorol,l, eessppeecicailallyly, , aa 3377 ffoolldd iinnccrreeaassee iinn 3300 2211 mmgg/LL PPFFOOAA twreeaattmmeenntt ggrroouupp ffoorr 2288dd ((FFiigguurree 44dd)).. 10 22112255..00001111 33MMAAO011446611336656. I LLiivveerr VViitteellllooggeenniinn CCoonncceenntrtraattiioonn.. AAfftteerr 1144 dd ooff eexxppoossuurree tfoo PPFFOOAA,, lliivveerr VVitgg 22 ccoonncceennttrraattiioonnssooffmmalaleess rraannggeedd ffrromom0.30.939 nngg//1-u1gg pprrootteiinn iinn tthhee ccoonnttrrooll t1o0 99..5533 nngg/1/-u1gg pprrootteeiinn iinn 33 3300 mmyg/LL PPFFOOAA eexxppoossuurree ggrroouupp ((FFiigguurree 5Saa)).. TThheerree wwaassaann aappppaarreenntt iinnccrreeaassee iinn lliivveerr VVitgg uupp ttoo 410.06.699 nngg/1/-u1gg pprrootteeiinn iinn mmaalleess eexxppoosseedd ttoo 33 mmgg//LL PPFFOOAA,, bbuutt tthhiiss wwaass nnoott ssttaattiissttiiccaallllyy ssiiggnniiffiiccaanntt 5S LLiivveerr VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss ooff mmaalleess eexxppoosseedd t1o0 1100 aanndd 3300 mmgg//LL PPFFOOAA aafftteerr 1144 dd wweerree 66 ssiiggnniiffiiccaannttllyy iinnccrreeaasseedd ccoommppaarreedd ttoo tthhee ccoonnttrrooll,, ii..e. tthhee VVitgg ccoonntteenntt wwaass aapppprroosxiimmaatteellyy 2200 77 ttiimmeess hhiigghheerr tthhaann tthhaatt iinn tthhee ccoonntrtrool.l. AAfflteerr 2288 dd ooff eexxppoossuurree ttoo PPFFOOAA,, lliivveerr VVitgg 88 ccoonncceennttrraattiioonnssooffmmalaleess rraannggeedd ffrromom0.20.121 nngg/1/-1gg pprrootteeiinn iinn tthhee ccoonnttrrooll ttoo 44..8855 nngg/1/-u1gg pprrootteeiinn iinn 99 1100 mmyg/LL PPFFOOAA eexxppoossuurreeggrroouupp ((FFiigguurree S5aa)).. MMaaxxiimmuumm lliivveerr VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss wweerree bbeettwweeeenn 10 10 11.8877 nngg/1/-1gg pprrootteeiinn aanndd 44..8855 nngg/1/-1gg pprrootteeiinn aatt 33 aanndd 1100 mmgg//lL. PPFFOOAA eexxppoossuureres,s, rreessppeeccttiivveellyy. 1111 LLiivveerr VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss ooff mmaalleess eexxppoosseedd t1o0 33 aanndd 1100 mmgg/L PPFFOOAA aaffteerr 2285 dd wweerree 1122 ssiiggnniiffiiccaannttllyy iinnccrreeaasseedd ccoommppaarreedd ttoo ccoonntrtroolsls.. HHoowweveevre,r, lliivveerr VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss ooff mmaalleess. 1133 eexxppoosseedd t1o0 3300 mmog//LL PPFFOOAAafaftteerr2288dd wweerree ssiiggnniiffiiccaannttllyy ddeeccrreeaasseedd ccoommppaarreedd t1o0 eexxppoossuurree tto0 33 1144 aanndd 1lO0 mmgg//LL PPFFOOAA ttrreeaattmmeennttss,, wwhhiicchhmmaayybbeedduuee t1o0tthhee ddamaagemooffatthheglliivveeerrss iinn mmaalleess.. TThheerree 1155 wwaass aa ssuubbsseeqquueenntt ddeeccrreeaassee iinn lliivveerr VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss ooff mmaalleess eexxppoosseedd (to0 1100 aanndd 3300 mmgg//LL 1166 PPFFOOAA bbeettwweeeenn 1144 aanndd 2288 dd eexxppoossuurree ttoo PPFFOOAA ((FFiigguurree 5Saa)).. LLiivveerr VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss ooff 1177 ffeemmaalleess rraannggeedd ffrroomm 11..1177 nngg/1/-1gg pprrootteeiinn iinntthhee ccoonnttrrooll t0o 44..7755 nngg/1/-1gg pprrootteeiinn iinn 1100 mmgg//LL PPFFOOAA 1188 eexxppoossuurree ggrroouupp ffoorr 2288 dd..LLiivveerr VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss ooff ffeemmaallee ffrroomm 1100aanndd 3300 mmgg//LL ttrreeaattmmeenntsts. 1199 ffoorr 1144 aanndd 2288 dd wweerree ssiiggnniiffiiccaannttllyy iinnccrreeaasseedd ccoommppaarreedd ttoo ccoonntrtroolsls., hhoowweevveerr tthhee lliivveerr VVitgg. 2200 ccoonncceennttrraattiioonnssooffffeemmaalleesseexxppoosseedd ttoo 33 mmgg//LL ffoorr 1144 dd wweerree nnoott ssiiggnniiffiiccaanntt ((FFiigguurree 55bb)). 2211 TThheerree wweerree mmaannyy eevviiddeenncceess tthhaatt eessttrrooggeenn ccoommppoouunnddss ccoouulldd iinndduuccee tthhee lliivveerr VVitgg ooff mmaalleess 2222 iinn ffiisshheess.. ZZhhaa eettala.l. ((3355)) rreeppoorrtteedd tthhaatt ppllaassmmaa VVitgg iinn mmaallee rraarree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo ddiiffffeerreenntt 11 22112255..00001122 I3MMAAO011446611336677 1 ccoonncceennttrraattiioonnss ooff EEEE22 aanndd NNPP wweerree ssiiggnniiffiiccaannttllyy hhiigghheerr tthhaann mmaalleess iinn tthhee ccoonntrtrool.l. AA ssiimmiillaarr 22 rreessuulltt wwaass aallssoo oobbutaaiinneedd iinn aa ssttuuddyy tthhaatt eexxppoosseedd rraarree mmiinnnnooww ffoorr 111188 dd ttoo ddiiffffeerreenntt 33 ddiieetthhyyllssttiillbbeessttrrooll ((DDEESS)),,aanndd tthhee lleevveell ooffVVitgg iinndduuccttiioonn iinn wwhhoollee bbooddyy hhoommooggeennaatteess iinnccrreeaasseedd 44 ssiiggnniiffiiccaannttllyy,, aallmmoosstt tthhee ssaammee aass tthhaatt oofftthhee ffeemmaalleess iinn tthhee rreepprroodduuccttiivvee pphhaassee ((3322)).. HHaarrrriieess eett 55 aall.. ((4400)) rreeppoorrtteedd tthhaatt mmaallee ffaatthheeaadd mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd t(o0 4485.88--5588.66 1w-1/gL/L NNPP hhaadd ppllaassmmaa VVitgg 66 lleevveellss 44000000--55000000 ttiimmeess hhiigghheerr tthhaann mmaalleess iinn ccoonntrtrool.l. PPaawwlloowwsskkii eettala.l. ((4411)) rreeppoorrtteedd tthhaatt tthhee 77 lleevveellooff VVitgg iinn ppllaassmmaa ooff mmaattuurree mmaallee aanndd ffeemmaallee ffaatthheeaadd mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo 11 nngg//LL EEEE22 88 wwaass ssiiggnniiffiiccaannttllyy eelleevvaatteedd.. UUssiinngg VVitgg pprrootteeiinn aannaallyyssiiss,, KKaanngg eett aall.. ((4422)) rreeppoorrtteedd tthhaatt hheeppaatiticc: 99 VVitgglleevveellss wweerree ssiiggnniiffiiccaannttllyy iinnccrreeaasseedd iinn mmaalleemmededaakkaaeexxppoosseedd ttoo 5500..99 1u-1gg NNP/LPffooLrr2211 dd.. OOnn 1100 tthhee ootthheerr hhaanndd,, TTaabbaattaa eett aall.. ((4433)) oobbsseerrvveedd mmaarrkkeeddllyy iinnccrreeaasseess iinn tthhee sseerruumm VVitgg 1111 ccoonncceennttrraattiioonnss ooff mmaattuurree mmaallee mmeeddaakkaa aafftteerr 2288 dd ooff eexxppoossuurree t1o0 11000000 u1-1gg bbiisspphheennooll AA 1122 ((BBPPAAY)/LL. KKaanngg eettaall ((4444)) ddeemmoonnststrraatteedd tthhaat ccooncnecnterantiotnrsooafftlliiivveeorrVnVistgg iinnccrreeaasseedd ssiiggnniiffiiccaannttllyy 1133 iinn mmaallee mmeeddaakkaa iinn tthhee rreepprroodduuccttiivvee pphhaassee ttrreeaatteedd wwiitthh BBPPAA aatt 33112200 u11gg//LL ffoorr 2211 dd.. HHoowweevveerr,, 1144 tthhee YVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss iinn mmaalleess ddiidd nnoott aallwwaayyss iinnccrreeaassee wwiitthh tthhee iinnccrreeaassee ooff eexxppoossuurree 1155 ccoonncceenntrtraattiioonnss.. FFoorr eexxaammppllee,, iinn tthhiiss ssttuuddyy,, tthheerree wwaass aa ssuubbsseeqquueenntt ddeeccrreeaassee iinn lliivveerr VVitgg 1166 ccoonncceennttrraattiioonnss ooff mmaallee rraarree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd t1o0 1100 aanndd 3300 mmgg//LL. PPFFOOAA bbeettwweeeenn 1144 aanndd 2288 dd 1177 eexxppoossuurree t(o0 PPFFOOAA.. IItt mmaayy bbee dduuee t1o0 tthhee ddaammaaggee ooff tthhee lliivveerrss ooff mmaallee rraarree mmiinmnoowwss aatt hhiigghheerr 1188 eexxppoossuurree ccoonncceennttrraattiioonn ooff PPFFOOAA,, oorr iitt iiss lliikkeellyy tthheerree iiss aa mmaaxxiimmuumm lleevveell ooff lliivveerr VVitgg. 1199 ccoonncceennttrraattiioonnss ccaann bbee rreeaacchheedd iinn lliivveerrss ooff mmaallee rraarree mmiinnnnoowws.s. IInn bbootthh mmaallee aanndd ffeemmaallee 2200 zzeebbrraaffiisshh eexxppoosseedd ttoo hhiigghheerr EEEE22 ccoonncceennttrraattiioonnss wwiitthh lloonnggeerr ttrreeaattmmeenntt ttiimmee,, ppllaassmmaa VVitgg. 2211 ccoonncceennttrraattiioonnss aallssoo sshhoowweedada ddeeccrreeaassee ((3399)). 12 22112255..00001133 33MMAAO011446611336688 1 TToodadtaet,e,ssttuuddiieessoonn eennddooccrriinnee ddiissrruuppttiinngg ccaappaacciittiieessofofflfluuoorriinnaatteedd ccoommppoouunnddss aarree lliitttllee.. LLaauu 22 eettaall. ((1198)) hhiigghhlliigghhtteedd tthhaatt Mfluuoorriinnaatteedd ccoommppoouunnddss ccaauusseedd tthhee ddiissttuurrbbaanncceessoofftthhee tthhyyrrooiidd ggllaanndd. 35 MMaarraass eett aall.. ((4435)) ffoouunndd tthhaatt66::22 fflluuoorrootteelloommeerr aallccoohhoollss l1HH,, l1HH,, 22HH,, 22HH.,p-eprefrlfluuoororoooctcatann-1-l--ooll 44 ((FFTTOOHH)) aanndd 11HH,, 11HH,, 22HH,,22HH,--ppeerrfflluuoorroo--ddeeccaann--11--ooll ((88::22 FFTTOOHH)) bbeehhaavvee lliikkee xxeennooeessttrrooggeennss iinn 55 vviittrroo,, bbuutt PPFFOOAA sseeeemmeedd nnoott too ppoosssseessss eessttrrooggeenn--lliikkee pprrooppeertritieess.. WWhhiillee iinn vviitroo aassssaayyss mmaayy nnoott 66 ppeerrffeeccttllyy rreefflleecctt tthhee ttrruuee iinn vviivvoo rreessppoonnssee ooff ffiisshh t1o0 tthhee ssaammee ccoommppoouunndd.. OOaakkeess eett aall.. ((1188)) 77 rreeppoorrtteedd tthhaatt VVitgg iinn iimmmmaattuurree rraaiinnbbooww ttrroouutt wwaass eelleevvaatteedd iinn bbootthh sseexxeess ffoolllloowwiinngg eexxppoossuurree ttoo 8 33 mmeg//LL ppeerrfflluaoorrooooccttaanneessuullffoonnaattee ((PPFFOOSS)),, aa ssttrruuccttuurraallllyy ssiimmiillaarr cchheemmiiccaall ooff PPFFOOAA ffoorr 1122 dd., 99 wwhheerreeaass nnoo ssiiggnniiffiiccaanntt cchhaannggeess iinn ppllaassmmaa VVitgg ccoonncceennttrraattiioonnss wweerree oobbsseerrvveedd iinn aadduulltss 1100 ffoolllloowwiinngg PPFFOOSS eexxppoossuurree.. 1111 TThhee ssttrruuccttuurree ooffPPFFOOAA iiss nnoott ssiimmiillaarr to tthhaatt oofefsetsrtrooggeenn;; tthheerreeffoorree,, iitt ccaann nnoott aacctt aass eessttrrooggeenn 1122 mmiimmicicss.. HHoowweveevre,r, oouurr ddaattaa hhaavvee cclleeaarrllyy ccoonnffiirrmmeedd tthhee eessttrrooggeenniicc aaccttiioonn ooff PPFFOOAA,, eevveenn 1135 tthhoouugghh iittiiss nnoott cclleeaarr hhooww tthhee eennddooccrriinnee ssyysstteemm iiss ddiissrruupptteedd bbyy PPFFOOAA.. PPFFOOAA mmaayy cchhaannggee tthhee 1144 rraattiioo ooff eennddooggeennoouuss 1177~f--eessttrraaddiiooll ((EE22)):tteessttoosstteerroonnee ((T1)),, wwhhiicchh ccrreeaatteedd aann eessttrrooggeenniicc mmiilliieeuu 1155 aanndd hhaavvee pprrooffoouunndd bbiioocchheemmiciacla,l, pphhyyssiioollooggiiccaall,, rreepprroodduuccttiivveeaanndd ddeevveellooppmmeennttaall ccoonnsseeqquueenncceess.. 1166 FFiirrsstt., aann iinnccrreeaassee iinn tthhee lleevveell oorr aaccttiivviittyy ooff aarroommaattaassee., wwhhiicchh ccaattaallyysseess tthhee ccoonnvveerrssiioonnooffTT ttoo 1177 EE22,, ccoouulldd lleeaadd 1to0 eelleevvaatteedd lleevveellssooffeennddooggeennoouuss eessttrrooggeenn aanndd ddeeccrreeaasseeddTT lleevveellss.. SSeeccoonndd,, tthhee 1188 iimmppaaiirreedd mmeettaabboolliissmm ooff EE22 ccoouulldd aallssoo ccoonncceeiivvaabbllyy lleeaadd ttoo uunnbbaallaanncceedd sseexx hhoorrmmoonnee rraattiiooss iinn 1199 kkeeyy oorrggaannssoorrttiissssuue.s. EEiitthheerroofftthheessee mmeecchhaanniissmmss ccoouulldd lleeaadd tfoo eennhhaanncceedd pprroodduuccttiioonnooffVVigtg. 2200 aannddapaopsoistitiivvee rreessppoonnssee sshhoowwnn iinntthhiissssttuuddyy. 2211 IInn mmaammmamlasl,s, PPFFOOAA eexxppoossuurree hhaass bbeeeenn sshhoowwnn ttoo iinndduuccee aarroommaattaassee ccyytioocchhrroommee PP4A5S0O 2222 aaccttiivviittyy., wwiitthh tthhee ccoonnsseeqquueenntt rreedduuccttiioonnooffTTcocnocnocmoimtiatanntt wwiitthh iinnccrreeaassee iinn E22 ((4466)).. IInn tteelleeoossttss,, 13 22112255..00001144 33MMAAO011446611336699 1 aalltthhoouugghh mmaattuurree mmaallee ffaatthheeaadd mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd (to0 00.33 mmgg//LL PPFFOOSS ffoorr 2211 dd eexxhhiibbiitteedd 22 ddeeccrreeaasseedd aarroommaattaassee aaccttiivviittyy aanndd eelleevvaatteedd ccoonncceennttrraattiioonnooffTT., lliitttllee eevviiddeenncceessooffininccrreeaasseedd 33 aarroommaattaassee wweerree sseeeenn iinn ffiisshheess eexxppoosseedd t(o0 PPFFOOAA.. CCiirrccuullaattiinngg TT wwaass ssiiggnniiffiiccaannttllyy rreedduucceedd iinn 44 bbootthh mmaallee aanndd ffeemmaallee ffaatthheeaadd rmminnnnoowwss aatt PPFFOOAA ccoonncceennttrraattiioonnss aabboovvee 11.00 mmgg/L/.L, wwhhiillee 5Ss cciirrccuullaattiinngg EE22 wwaass aalltteerreedd wwiitthh PPFFOOAA eexxppoossuurree,, bbuutt wwiitthh ssiiggnniiffiiccaanntt rreedduuccttiioonn aatt 66 ccoonncceennttrraattiioonnss aabboovvee 3300 mmgg//LL. iinn ffeemmaallee ffaatthheeaadd mmiinnnnoowwss ((1199)).. TTeessttoosstteerroonnee wwaass rreedduucceedd 77 eeqquuaallllyy iinn bbootthh sseexxeess oofffafatthheeaadd mmiinnnnooww., ssuuggggeessttiinngg tthhaatt PPFFOOAA aaffffeecctteedd ooooccyytteess iinn ffeemmaalleess iinn 8 mmuucchh tthhee ssaammee wwaayy aass LLeeyyddiigg cceellllss iinn mmaaleless.. PPFFOOAA mmaayy aallssoo iimmppaaiirr sstteerrooiiddooggeenneessiiss bbyy 99 lliimmiittiinngg cchhoolleesstteerrooll ((pprreeccuurrssoorr mmoolleeccuullee ffoorr sstteerrooiidd pprroodduuccttiioonn)) aavvaaiillaabbiilliittyy,, aass hhaass bbeeeenn 1100 sshhoowwnn iinn rraaitss ((4477)).. IImmppaaiirrmmeennttss iinn ssppeecciiffiicc cchhoolleesstteerrooll--trraannssppoorritningg. pprrootteeiinnss hhaavvee bbeeeenn 1111 aattttrirbiubteudtettood ffrreeee rraaddiiccaallss pprroodduucceedd bbyy eennzzyymmee ssyysstteemmss,, ssuucchh aass ffaatttyy aaccyyll--CCooAA ooxxiiddaassee ((FFAAOO)) 212 E(EC31.33.99).3). 1133 IInn ssuummmmaarryy,, PPFFOOAA hhaass bbeeeenn ddeemmonosnisrtaratetedd., ffoorr tthhee ffiirrsstt ttiimmee,, ttoo iinnccrreeaassee ssiiggnniiffiiccaannttllyy lliivveerr 144 VYitgg ccoonncceennttrraattiioonn aanndd iinndduuccee tteessttiiss--oovvaa ggoonnaadd iinn mmaallee rraarree mmiinnnnoowwss.. HHoowweevveerr,, oonnllyy 1155 rreellaattiivveellyy hhiigghh eexxppoossuurree ccoonncceennttrraattiioonnss ooff PPFFOOAA ((1100 aanndd 3300 mmgg//LL ffoorr 1144dd,; 33 aanndd 1100 mmgg//LL 1166 ffoorr 2288 dd)) iinndduucceedd tteesstteess--oovvaa aanndd ccaauusseedd sseevveerree lleessiioonnss ooff lliivveerrss aanndd ggiillllss ((ddaattaa nnoo sshhoowwnn)). 1177 TThhiiss llaabboorraattoorryy ssttuuddiieess ssuuggggeessttss tthhaatt PPFFOOAA sshhoouulldd bbee ccoonnssiiddeerreedd aass aa ccaannddiiddaattee ooff 1188 eessttrrooggeenniicc--lliikkee ccoommppoouunnddss wwiitthh tthhee ppootteennttiiaall ttoo iinndduucceedd hheeppaattiicc eessttrorgoegne-rne-sproensspivoenggseeinneveses iinn 1199. mmaallee rraarree mmiinnnnooww,, aalltthhoouugghh tthhee mmeecchhaanniissmm vviiaa wwhhiicchh sstteerrooiidd pprrooffiilleessaarreealatlteerreedd iiss uunncceerrttaaiinn, 2200 aanndd tthhee mmeecchhaanniissmm ooff tthhee ddeevveellooppmmeenntt iinn tthhee tteesstt--oovvaa iinn raarree mmiinnnnooww wwiitthh PPFFOOAA eexxppoossuurree iiss 2211 uunnkknnoowwnn.. FFuurrtthheerr rreesseeaarrcchh iinn tthhiiss aarreeaa wwoouulldd bbee ddeessiirraabbllee,, wwiitthh ppaarrttiiccuullaarr aatttteennttiioonn ggiivveenn ttoo 2222 tthhee ssttaattuuss ooff eennzzyymmeess iinnvvoollvveedd iinn sstteerrooiidd mmeettaabboolliissmm.. TThheessee ddaattaa ccoommbbiinneedd wwiitthh ootthheerr 14 22112255..00001155 33MMAAO011446611337700 1 rreeppoorrtteedd ddaattaa iinnddiiccaattee tthhaatt rraarree mmiinnnnooww pprroovviiddeess aa ggoooodd mmooddeell ffoorr aasssseessssmingg eennddooccrriinnee 22 ddiissrruuppttiioonn bbyy eennvviirroonnmmeennttaall eessttrrooggeennss.. 22112255..00001166 15 33MMAAO011446611337711 I FFiigguurree 11.. RRaarree mmiinnnnooww ggoonnaaddss iinn tthhee ccoonnttrrooll.. ((a1)) MMaattuurree tteessttiiss sshhoowwiinngg sseemmiinniiffeerroouuss 22 ttuubbuulleess ((SSTT)) aanndd ssppeerrmm dduuccttss ((SSDD)) wweerree ffiilllleedd wwiitthh ssppeerrmm ((xx 4400)).. ((bb)) MMaattuurree oovvaarryy 33 sshhoowwiinngg vvaarriioouuss ssttaaggeess ooff ooooccyyttee ddeevveellooppmmeenntt ((Xx 4400)).. CCOO,, ccoorrttiiccaall--aallvveeoolluuss ssttaaggee ooooccyyttee;; 4+ PPOO,, ppriiimmaarryy--ggrroowwtthh ssttaaggee ooooccyyttee;; VVOO,, vviitteellllooggeenniicc ssttaaggee ooooccyyttee.. 5S FFiigguurree 22.. OOvvaarriieess ooff mmaattuurree ffeemmaallee rraarree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA ffoorr 2288 dd,, sshhoowwiinngg 66 tthhee ddeeggeenneerraattiioonn ooff vviitteellllooggeenniicc ssttaaggee ooooccyyttee ((aattrreessiiaa)).. ((aa)) 33 mmeg/!LL, PPFFOOAA ((Xx 4400)).. ((bb)) 1100 77 mmgg//LL PPFFOOAA ((xx 110000).). ((c)) 3300 mmgg/!LL PPFFOOAA ((xx 110000),). PPOO,, pprriimmaarryy--ggrroowwtthh ssttaaggee ooooccyyltees; VVOO,, 85 vviitteelllooggeenniicc ssttaaggee ooooccyyttee.. 99 FFiigguurree 33.. TTeesstteess--oovvaa ooff mmaallee rraatree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA ffoorr 2288 dd.. ((aa)) 1100 mmgg/!lL. 1100 PPFFOOAA,, sshhoowwiinngg sseemmiinniiffeerroouuss ttuubbuulleess ((SSTT)) wweerree ffiilllleedd wwiitthh ssppeerrmm aanndd ssccaatttteerreedd 1111 pprriimmaarryy--ggrroowwtthh ssttaaggee ooooccyytteess ((PPOO aanndd aarrrroowwss)) ((Xx 220000)).. ((bb)) 1100 mmgg//LL. PPFFOOAA,, sshhoowwiinngg 1122 mmoorree ddeevveellooppeedd PPOO wwiitthh ssoommee eeaarrlliieerr ddeevveellooppmmeennttaall aoooccyylteess ((aarrrroowwss)) ((x< 440000)).. ((cc)) 3300 1135 mmgg//LL PPFFOOAA,, sshhoowwiinngg sseemmiinniiffeerroouuss ttuubbuulleess ((SSTT)) aanndd ssppeerrmm dduuccttss ((SSDD)) wweerree ffiilllleedd wwiitthh 1144 ssppeerrmm aanndd ssccaatttteerreedd ppriiimmaarryy--ggrroowwtthh ssttaaggee ooooccyytteess ((aarrrroowwss)) ((Xx 110000)).. 1155 FFiigguurree 44.. ((aa,,bb)) AA rreepprreesseennttaattiivvee aaggaarroossee ((11..88%%)) ggeell iimmaaggee ooff aammppliliffiiccaattiioonn pprroodduuccttss ooff 1166 vviitteellllooggeenniinn ((VVitgg:; mmoolleeccuullaarr ssiizzee 336644 bbaassee ppaaiirrss)) aanndd fP--aaccttiion iinntteerrnnaall ssttaannddaarrdd 1177 ((mmoolleeccuullaarr ssiizzee 227722 bbaassee ppaaiirrss)) iinn iinnddiivviidduuaall mmaallee rraarree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA.. CC~2:: 1185 ffeemmaallee ccoonnttrrooll;; CC-c):: mmaallee ccoonnttrrooll:; MM:: 11 kkiilloobbaassee DDNNAA mmaarrkkeerr,, ((aa)) eexxppoosseedd ffoorr 1144 dd,, ((bb)) 1199 eexxppoosseedd ffoorr 2288 dd.. ((c)) GGrraapphhiiccaall aannaallyyssiiss ooff tthhee rreellaattiivvee bbaanndd iinntteennssiittiieess ((ppiixxeell ddeennssiittiieess)) 2200 iinn mmaallee ccoonnttrroollss aanndd mmaalleess eexxppoosseedd ftoo 33,, 1100 aanndd 3300 mmyg/!LL PPFFOOAA,, ddiiggiittiizzeedd ppiixxeell ddeennssiittyy 2211 vvaalluueess wweerree ccaallccuullaatteedd aass VVitgg//((BP--aaccttiinn)),, eexxpprreesssseedd aass mmeeaannss =SS..DD.. TThhee aasstteerriisskkss ddeennoottee 222 ssiiggnniiffiiccaanntt ddiiffffeerreennccee ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll aatt pp << 00..0055.. TThhee eerrrroorr bbaarrss iinnddiiccaattee ssttaannddaarrdd 16 22112255..00001177 I3MMAAO011446611337722 I ddeevviiaattiioonn ooftfthhee mmeeaann.. ((d)) RReeaall--ttiimmee qquuaannttiittaattiivvee PPCCRR aannaallyyssiiss ooffVVitgg ggeennee iinn tthhee ffeemmaallee 22 lliivveerr ooff rraarree mmiinnnnooww.. EExxpprreessssiioonn lleevveellss iinn tthhee lliivveerr ooff ffeemmaallee rraarree mmiinnnnoowwss eexxppoosseedd tfoo 35 PPFFOOAA ffoorr 1144 dd aanndd 2285 dd wweerree qquuaannttiiffiieedd uussiinngg rreeaall--ttiimmee qquuaannttiittaattiivvee PPCCRR.. BBaarrss 4+ rreepprreesseenntt tthhee ffoolldd cchhaannggee ooff eexxppoosseedd vveerrssuuss ccoonnttrrooll.. IInnddiivviidduuaall tfoottaall lliivveerr RRNNAA ssiixx ffiisshh 55 wwaass uusseedd,, fB3--aaccttiinn wwaass uusseedd ffoorr nnoorrmmaalilizzaattiioonn.. MMeeaassuurreemmeennttss wweerree rreeppeeaatteedd tthhrreeee ttiimmeess,, 66 tthhee aasstteerriisskkss ddeennoottee ssiiggnniiffiiccaanntt ddiiffffeerreennccee ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll aatt pp << 00..0055,. TThhee eerrrroorr bbaarrss 77 iinnddiiccaattee ssttaannddaarrdd ddeevviiaattiioonn ooff tthhee mmeeaann.. FFoorr ffiigguurree 44 ((c,, dd)) aanndd ffiigguurree S5,, nnuummbbeerrss ooffffiisshh 85 aarreeggiivveenn iinn ppaarreenntthheesseess.. 99 FFiigguurree 55.. VViitteellllooggeenniinn ((VVitgg)) ccoonncceennttrraattiioonnss iinn mmaattuurree aadduulltt rraarree mmiinnnnoowwss ((GG.. rraarruuss)) 1100 eexxppoosseedd ttoo PPFFOOAA.. VVaalluueess aarree mmeeaannss + SS..DD.. TThhee aasstteerriisskkss ddeennoottee ssiiggnniiffiiccaanntt ddiiffffeerreennccee 1111 ffrroomm tthhee ccoonnttrrooll aatt pp << 00..0055.. TThhee eerrrroorr bbaarrss iinnddiiccaattee ssttaannddaarrdd ddeevviiaattiioonn ooff tthhee mmeeaann.. ((a8)) 1122 iinn mmaalleess,, ((bb)) iinn ffeemmaalleess.. 22112255..00001188 17 I3MMAAO011446611337733 Wi w ~gwa8 diaya,ReSlEIpbIE CAEeRNte, XsSa,aOEtko a PPeora ESR BOR NER RSA E ol iRSa M GXPoane 0 elaet t me Ex10hChe fSrieHTEdaSdiy eUwneai Blaeng BleaSR )haLite im i Fig 5; 5 Leal PeNnaCdeUrE Hs )8z a3 C JoenlohneimAg lpeadt 340N4200+44 ec GV Gea H ag i aaf k, Gy4 / -- a aS2E2 , 2 2 FFiiggurwe|e1 22112255..00001199 "18 3MMAAo0I164161337744 ar j CGI oa Wet] apie | 1onig c EpRRTon Sha, fi WChuIm) HRS, Xe 2 & .2 .3 Figure 2 4 19 21255..00020 aor 3MA01461375 oat1H Fn e A r TN Fitea) SES Beak f Aarde Fe AS n = FR ava eonn FL :Sint SSE 3 Xess Lo RS a oie Rr 55. PrAaSEgpeSSokSeaFuitReei E HiaC b eS lm Eman Tu Re ; > 2 s Fines 3 Figure 3 ` 4 20 212255..002211 shores 3MA01461376 Co mt mr wma # M ---Emmet maaaal. | CN dm et wm b - - - ToPinwame Se le rin -------+--H~"<~tin 2 3 . 4 s Feet ab) 5 Figure 4 (a, b) 22112255..00002222 21 awonsersrr 3MA01461377 on0.8 5 l--= n-- ,...... c 0.6 (J 1 ? """'eI. 2 w ~ 0.4 3 ~ 'iii c 2cQj LY Qj 0.2 i w c>:<: c -Control IZZ2]3 mg/L ~10mg/L ITID30mg/L (5) * (4) * w ae 0.0 14d on (7) (7) * * 9 0) ae 28d 2 oa 60 BE c 0 i Bam 'iii 50 "'~ a. >< ~ 40 c i 2 Q) Ol iT. >Ol c 'Qj 10 $1 gal "'Ocl .<: (J 5 ie "0 0u.. d -control ~Jmg/L ~1Dmg/L ITill 30 mg/L (5) (4) :(7) l m o oe 14 d 28 d `3 4 5 . 6 7 . Fes 8 Figure 4 (c, d) , 9 =22 22112255..00002233 3aMwAo0r1d4e61t3T7a8 a 2i] T ee m EonEt, ~'2 (5) (4) c. 6 * * -control [72'Zl 3 mgtl ~10mg/L IIIIIl 30 mgll g.sCl ~ Cl c: 5 0 : 4 (7) ~ 'E i~ c: 0 2 ll 2 (oul >Cl o(7) W217 14 d 28 d 2,2 3 b ' 8 ie~ j c.s Cl ~ Cl 2sc: 0 4 ie 0? ~'E Q) (.) c: He 0 2 ll 2>Cl -control [72'Zl 3 mgll jazi ~10mg/L EEmEam IIIIIl 30 mg/L ?(4) Ve? o J0 4 5 ` Fgwes 6 Figure 5 21255..00024 a23 a3MwoAt0s14s6t1s3r7s9 I AAcckknnoowwlleeddggeemmeennttss 22 TThhiiss rreesseeaarrcchh wwaass ssuuppppoorrtteedd bbyy tthhee NNaattiioonnaall NNaattuurraall SScciieennccee FFoouunnddaattiioonn ooff CChhiinnaa 5 3 ((200667777006600)), aanndd tthhee ITnonnoovvaattiioonn PPrrooggrraamm ooff tthhee CChhiinneessee AAccaaddeemmyy ooff SScciieenncceess 44 ((KKSSCCXX22--$SWW-1-2128g)),, NNaattiioonnaall BBaassiicc RReesseeaarrcchh PPrrooggrraammooff CChhiinnaa ((22000033CCBB44115500050)5.). TThhee aauutthhoorrss 5 wwoouulldd lliikkee ttoo tthhaannkk PPrrooffeessssoorr YYiinngg XXuu ooftf hthee IInnsstiittuutteeooffHHyyddrroobbiioollooggyy,, CChhiinneessee AAccaaddeemmyy ooff 66 SScciieennccese,s, wwhhoo ggeenneerroouussllyy pprroovviiddeedd tthhee aannttiibbooddyy aanndd ggaavvee ssuuggggeessttiioonn aabboouutt EELLIISSAA 77 eexxppeerriimmeenntt. 85 LiLtietreraattuurree CCiitteedd 99 ((11)) GGiieesys,y, JJ.PP:.; KKaannnnaann,, KK.. GGlloobbaall ddiissttrriibbuuttiioonn ooff ppeerrfflluuoorrooooccttaannee ssuullffoonnaattee iinn wwiillddlliiffee. 1100 EEnnvriornon.. SSecti.. TTeecchhnnool!.. 2200001.1, 3355,, 11333399--11334422,. 111 ((22)) GGiieesys.y, JJ.PP;.; KKaannnnaann,, KK.. PPeerrfflluuoorroocchheemmiiccaallssuurrffaaccttaannttss iinn tthhee eennvviirroonnmmeentn.t. EEnnvviirroonn.. SSccii. 122 TTeecchhnnool.l. 22000022,, 3366., 14466AA--115522AA. 1135 ((33)) PPrreevveeddoouurrooss,, KK..:; CCoouusisnins,s, IL.TT;.; BBuucckk,, RR.CC;.; KKoorrzzeenniioowwsksik,i, SSH.H.. SSoouurrcceess,, ffaattee aanndd 1u4 ttrraannssppoorrttooffppeerrflluuoororcoarcbaorxbyllaatxteeyss..EEnnvviirroonn.. SScc.i. TTeecchhnnool!.. 22000066,, 4400,, 3322--4444.. 1155 ((44)) SSoo,, MMK.K;.; TTaanniiyyaasus,uS,S:; YYaammasahsihtitaa,, NN;.; GGiieessyy,, JJ..PP.;; ZZhheenngg,, JJ..; FFaanngg,Z,Z;.; IImm,, SS.HH.;.; LLaamm,, 1166 PP.KK. PPeerrlfluuoorriinnaatteedd ccoommppoouunnddss iinn ccooaassttaall wwaatteerrssooff HHoonngg KKoonngg., SSoouutthh CChhiinnaa,, aanndd KKoorreeaa.. 1"7 EEnnvviirroonn.. SSecii.. TTeecchhnnool!.. 22000044,, 3358,, 44005566--44006633,. 1188 ((55)) MMaarritnin,, JJ.WW:.; SSmmiitthhwwiicckk,, M.MMM.:; BBrraauune,e, BB.MM;.; HHoocekksisrtraa,, PPF.F..; MMuiurir,, DD..CC:.; MMaabbuuryr,ySA.,A. 1199 IIddeennttiffiiccaatiioonn ooff lloonngg--cchhaaiinn ppeerrfflluuoorriinnaatteedd aacciiddss iinn bbiioottaa ffrioomm tthhee CCaannaaddiiaann AArrccttiicc.. 2200 EEwnviirroonn. SSecti. TTeecchhnnool!,. 22000044,, 3388,, 337733--338800,. 24 22112255..00002255 33MMAAO011446611338800 1 ((6)) SSmmitithhwwicick,k, MM;.; MMuuirir,, DD.CC;.; MMaabburuyr,y, SS..AA:.; SSoolloommoonn., KKR.R;.; MMaratritnin,, JJ.WW;.; SSoonnnnee,, CC..; 2 2 BBoomrn., EE-.WW.:.; LLeettcchheerr., RR.J.J:.;DiDeiteztz., RR.. PPeerrflluuoorrooaallkk.-yyll ccoonnttaammiinnaannttss iinn llivveerrtitissssuuee ffrroomm EEaasstt 3 3 GGrreeeennllaanndd ppoollaarr bbeeaarrss ((UUrrssuuss mmaarrittimiu)s.). EEnnvviirroonn.. TTooxxiiccooll. CChheemrn.. 22000085,, 2244,, 998811--995866.. 4+ ((70)) KKaannnnaann,, KK;.; CCoorrssoolliinnii,, S;.; FFaallannddyysssz,, JJ.:; OOcehhmmee,, GG..; FFooccaarrddii,, SS:.; GGiieessyy,, JJ.PP.. 5s PPeerrfflluuoorrooooccttaanncessuullffoonnaattee aanndd rreellaatteedd fflluuoorriinnaatteedd hhyyddrrooccaarrbboonnss iinn mmaaririnnee. mmaammmmalasls,, 66 ffiisshheess,, aanndd bbiirrddss ffrroomm ccooaassttss ooff tthhee BBaallttiicc aanndd tthhee MMeeddititeerrrraanneeaann sseeaass.. EEmnivriroonn.. SSccii. 7 7 TTeecchhnnool.l. 22000022., 3366., 33112200--33112266.. 88 ((88)) KKananann, KnK.;;aHHaannnsse,enn,, KKJ.J;.; WWaaddee,, TT.LL;.; GGieiessyy,, JJ.PP.. PPeerrfflluuoorrooooccitaanneessuullffoonnaattee iinnooysytseterrss,, 99 CCrraassssoossttrreeaa vviirrggiinniiccaa,, ffrroomm tthhee GGuullff ooff MMeexxiiccoo aanndd tthhee CChheessaappeeaakkee BBaayy., UUSSAA.. AArrcchh.. 1100 EEnnvviirroonn.. CCoomnatamm.. TTooxxiiccool.l. 22000022,, 4422,, 331133--331188.. 1) 11 (9) YYoeuunngg, LL.WW..;SSoo,, MMK.K:.;JiJaianngg,, GG.; TTaanniiyyaasus,u.,S.;; YYamaasmhitaa, NNs;.;SSohonnggi., MMti.;WaWau,,,YY..:;LLii, 1J:.; 212 GGiieessy.y, JJ.PP:.; GGuuuruggee., KKS.S;.; LLaamm, PP.KK. PPeerrfflluuoorrooooccttaanneessuullffoonnaattee aanndd rreellaatteedd =13 fulouroorocchheemmicicaallss iinn hhuummaann bblloooodd ssaammpplleess ffrroomm CChhiinnaa.. EEnnvviirroonn.. SSccii.. TTeecchhnnooll.. 22000066,, 4400,, u14 771155.-772200.. 115S ((1100))DDaaii, JJ.YY;.;LLi,i, MM.; JJiinn,, YY.HH.; SSaaiittoo,, NN;.;XXuu,, MMQ.Q:.: WWeeii,, FF.WW.. PPeerrfflluuoorrooooccttaanneessaullffoonnaattee aanndd. 1166 PPeerrfflluvoorrooooccttaannooaattee iinn RReedd PPaannddaa aanndd GGiiaanntt PPaannddaa ffrroomm CChhiinnaa.. EEnnvviirroonn. SSccii.. TTeecchhnnool!. "17 22000066,, 4400,, 55664477--55665522. 1188 ((lIl))HHeelksstteerr,, FF.MM;.; LLaanaen,e, RR.WW..P.PM.M;d,dee VVooooggtt,, PP.. EEnnvviirroonnmmeennttaall aanndd ttooxxiicciittyy eeffffeeccttss ooff 1199 peprefrfulourooraolaklkyyllaatteeddssuubbssttaanncceess..RReevv.. EEnnvviirroonn.. CCoonnttaamm.. TTooxxiiccooll.. 22000033,, 117799,, 9999--112211.. 22112255..00002266 25 33MMAAD011446611338811 I ((1122))KKeennnendeyd,y, GG.LL. JJrr..;BBuutteennhhooTff., JJ.LL..; OOllsseenn,, GGW.W..; OO''CCoonnnnoorr., JJ..CC.;; SSeeaaccaa,t, AAM.M..; PPeerrkkiinnss,, 2 2 RRG.G:.; BBiieeggele.l, LLB.B..; MMuruprhpyh.y, SSR.R:.; FFaarrrraarr,, DD..GG.. TThhee ttooxviiccoollooggyyooffppeerrlfulourooroocoicatannooaattee.. 3 3 CCrriitt. RReevv.. TTooxxiiccooll.. 22000044,, 3344,, 335511--338844.. 4+ ((1133))SSeaecaacta,t, AA.MM;.;TThhoommfoforrdd,, PPJ.;J.; HHaannsesne,KnK,1.J;.; CClleemmeenn,,LL..AA:.; EEllddrriiddggee,, S.RR.;: EEllccoommbbee,, CC.RR.; 5s BBuutteennhhooffl,fJ.LJ.L.. SSuubb--cchhrroonniicc ddiieettaarryy ttooxxiicciittyyooffppoottaassssiiuumm ppeerrfflluuoorrooooccttaanneessuullffoonnaattee iinn rraattss.. 66 TToouxcicoollooggyy 22000033,, 118833,, 111177--113311. 77 ((1144))0O''BBrriieenn., TTMM..;WWalallalaccee,, KK.BB.. MMiittoocchhoonnddririaall ppeerrmmeaebaibliilittyy ttrarnasintisoinatassitothhene ccrriittiiccaall ttaarrggeett 8s ooff NNe-aacceettyyll ppeerrfflluuoorrooooccttaannee ssuullffoonnaammiiddee ttooxxiicciittyy iinn vviittrroo.. TTooxxiiccooll.. SSccii.. 22000044,, 8822,, 9 0 33333-3a40. 1100 ((1155))GGuururuggee,, KKS.S..; YYeeuunngg,, LLW.W.Y.Y..;; YYaammanaankakaa,, NN..;; MMiyaizakiy, $S..;aLLaammz,,PPK.aKS.S..k ; GGieieissyy., , LJ.PP..; 1u1 JJoonneess,, PP.DD;.; YYaammasahsihtiata,, NN.. GGeennee eexxpprreessssiioonn pprrooffiilleess iinn rraatt lliivveerr ttrreeaatteedd wwiitthh 122 ppeerrilluuoorrooooccttaanncoiicc aacciidd ((PPFFOOAA).). TTaorxiiccooll.. SSccii.. 22000066,, 8899,, 9933--110077.. 1133 ((1166))SSeaecaacta,t, AAM.M;.; TThhoommfoforrdd,, PPJ.J..; HHaannsseenn,, KKJ.;J.; OOllsseenn,, GG..WW.:.; CCaassee,, MMT.T;; BBuutteennhhooffff JJ.LL.. 1u4 SSuubbechhrroonniicc ttooxxiicciityy ssttuuddiieess oonn ppeerrfflluuoorrooooccttaanncessuullffoonnaattee ppoottaassssiiuumm ssaalltt iinn ccyynnoommoollgguuss 11s5 mmoonnkkeeyys.s. TTooxxiiccooll.. SSccii.. 22000022,, 6688,, 224499--226644,. 1166 ((1177))HHaannssoonn,, MML.L;.; SSmmaalll,lJ,J:.;SiSbiblleeyy,, PP.KK:.; BBooudrueadu, rTTMMe;.a;BrBuaria,ni,n, RR.AA;.; MMaabbuuryy SS.AA;.; 1"7 SSoolloommoonn,, KKR.R.. MMiiccrrooccoossmm eevvaalluuaattiioonn ooff tthhee ffaattee,, ttooxxiicciittyy,, aanndd rriisskk t1o0 aaqquuaattiicc 1188 mmaaccrroopphhyytteess ffrroomm ppeerrfiliuuoorrooooccttaannooiicc aacciidd ((PPFFOOAA)).. AArrcchh. EEnnvviirroonn.. CCoonntlaamm.. TTooxxiiccooll.. 22000044,, 1w9o 9493, 030773-30166. 22112255..00002277 26 I3MMAAD011446611336822 1 (1(188))LLaauu, CC..; BBuutteennhhooffYf,, JJ.LL.;; RRooggeresr,s, JJ.MM..TThheeddeveveellooppmmenetnatall ttooxxiicciittyyppFfppeerrfflluuoorrooaallkk-yyllaacciiddss 22 aanndd tthheeiirr ddeerriivvaattiivveess.. TTooxxiiccooll.. AApppp.. PPhhaarrmmaacocla,l. 22000044., 119958,, 223311--224411. 35 ((1199)OOaakkeess,, KK.DD:.;SSibiblleeyy,, PP.KK.:; MMaarritnin,, JWJ.W.; SSoolloonm1ono,n,KKR.R.:; MMaabbuuryr,y; S.AA:.; KKrraasakk,, GGL.LV..VD.D.. 4+ IImmppaacctt ooff ppeerrfflluuoorrooooccttaannooiicc aacciidd oonn ffaatthheeaadd mmiinnnnooww ((PPiimmeepphhaalleess pprroommeellaass)) ffaatttyy 5S$ aaccyyll--CCOOAA ooxxiiddaassee aaccttiivviittyy,, cciirrccuullaattiinngg siteerroididss,, aanndd rreepprroodduuccttiioonn iinn oouuttddoooorr mmiiccrrooccosamsss. 66 EEnnvviirroonn.. TTooxxiiccooll.. CChheemrn.. 22000044,, 2253,, 11991122--11991199.. 77 ((200))AAnknlkelesy,, GGT.T;.; KKuueehhll,, DDW.W.:.; KKaahhll,, MMD.D;.; JJeennsseenn,, KKM.M..; LLiinnnuumm AA:; LLeeiinnoo,, RR.LL:.; 88 VViilllleenneeuwvee,, DD.AA RReepprroodduuccttiivvee aanndd ddeevveellooppmmeennttaall ttooxxiicciittyy aanndd bbiiooccoonneczennitrraattiioonn ooff 99 ppeerrfflluuorrooooccttaanneessuullffoonnaatte iinn aa ppaarrttiiaall lliiffee--ccyyccllee tteesstt wwiitthh tthhee ffaatthheeaadd mmiinmnoo:w ((PPiimmeepphhaaileess 1100 pprroommelealas)s.). EEnnvviirroonn.. TTooxxiiccooll. CChheemrn.. 22000085,, 2244,, 22331166--22332244,. 111 @(2D1)) KKlliinng,gC.CM. .M.;BBoowweerrs,sJJ.,LL.;; KKuullaakkoosskkyy,,PP..CC..; KKaammbobjo,j, KKK.K:.;SSwwanasnsoonn,, HH.Ll. TThhee aanryy!l 1122 hhyyddrrooccaarrbboonn rreecceeppttoorr ((AAHHRR)Y/AAHHRR nnuucclleeaarr ttrsaannsslooccaattoorr ((AARRNNTT)) hheetteerrooddiimmeerr iinntteerraaccttss 15 13 wwiitthh nnaattuurraallllyy ooccccuurrrriinngg eessttrrooggeenn rreessppoonnssee eelleemmeennttss.. MMooll.. CCeellll EEnnddooccririnnooll.. 11999999,, 115577,, u14 110055--111199.. 1155 ((2222))GGiillllessbbyy., BBL.EE:.; ZZoacchhaarreewwsskkii,, TTR.R.. EExxooeessttrrooggeennss:: mmeecchhaanniissmm ooffaaccttiioonn aanndd istrraaeteggiieess ffoorr 1166 iidednetifnictatiionfaainnddcaaassssteessissmmoenentn.t. EEmnivriroonn TTooxxiiccooll. CChheermn. 11999988,, 1177,, 33--1144.. 1177 (2(233)) MMoommmmssene, TnTP.,P.., WWaallsshh,, PPJ.J.. VViitetlleoglenleosigsaeannnddoeooscoyciytstee aasssseemmblbyl.y. FFiisshh PPhhiyssiiool.l. 11998888,, 1W8 IA 11A, 334477-440066. 1199 ((2244)) SSuummpptteerr,, JJ.PP..; JJoobblliinngg., 5S.. VViitteellllooggeenneessiss aass aa bbiioommaarrkkeerr ooffeessttrrooggeenniicc ccoonnttaammiinnaattiioonn ooff 2200 tthheeaqauqauiaiticc eennvviirroonnmmeennt,t. EEnnvviirroonn.. HHeeaalltthh PPeerrssppeecct.t. 11999985,, 110033 ((SSuuppplp77l)),,117733--117758,. 27 22112255..00002288 I3MMAA0011446611338833 I ((2255)) ZZhhoouu,, YYXX:.; CChheenngg., SS.PP.; HHuu,, W W: ; SSoonngg,, MM.J.J.. AA nneeww ttooxxiicciittyy tteesstt oorrggaanniissmm--GGoobbiiooccyypprriiss 2 2 rraarnuss.. ZZooooll. RReess.. 11999955., 1166,,5599-6633. 35 ((2266))ZZhhoouu,, QFQ.F.; JJiiaanngg,, GG.BB:.; YYaann,, JL.YY.. EEffffeeccttss oofsfusbulbeletthhaalllelevveellssooffttrriibbuuttyylltiinn cchhlloorriiddee iinn aa 4' nneewn ttoixciictityy tteesstt oorrggaanniissmm:: tthhee CChihnesierrnaarreeemminsinnnoeowws ((GGoobbloiocycpyrpirsis raarnut)s.). AArrcchh.. EEnnvviirroonn. 5 5 CCoonnttaamm.. Tl'ooxxiiccooll.. 22000022,, 4422,, 333322-333377. 66 ((2277))MMaa,, TT.WW;.; WWaanngg,, ZZ.JJ;.; LLiiuu., JJ.KK.. EEnnddooccrriinnee ddiissrruuppttiinngg eeffffeeccttss oonn CChhiinneessee rraarree mmiinnnnooww 77 ((GGoobbiiooccyypprriiss rraarruuss)) ffeedd wwiitthh ffiieelldd ccoolllleecctteedd LLiimmnnooddrriiluuss sspp.. JJ. EEwnivriroonn.. SSccii.. ((CChhiinnaa)) 22000044,, 8s 1166,,778844-.778877. 99 ((298))ZZhhoonngg XXP.P:.; XXuu., YY.:; LLiiamngg., YY:; LLiinaoo., TT:.; WWaanngg., JJ.WW.. TThhee CChhiinneessee rraarree mmiinnnnooww 1100 ((GGoobbliooccypprriiss rraarnutss)) aass aann iinnvviivvoo mmooddeell ffoorr eennddooecrriinnee ddiissrruuppttiioonn iinn ffrreesshhwwaatteerr tteelleeoossttss:: aa n1u1 fuulll lliiffee--ccyycclleetetesstt wwiitthhddiieetthhyylssttlilbbeessttrrooll. AAgquuaa.. TToaxxiiccooll.. 22000085,, 7711,, 8855--9955.. 1122 (2(299))GGrireierr,, HH.. JJ.. CCeelllluullaarr oorrggaanniizzaattiioonnoofftthhee tteessttiss aanndd ssppeerrmmaattooggeenneessiiss iinn ffiisshheess.. AAmmeerr.. ZZooool!.. 153 11998811,,2211,,334455--335577. 1144 ((3300))WWalalllaaccee,, RR.. AA;.; SSeellmmaann,, KK.. CCeelllluullaarr ddyynnaammiiccasapsepcetcstsooffooooccyyttee ggrroowwtthh iinn tteelleeoossttss.. AAmmeerr:. 1155 ZZooool!. 11998811,,2211,, 332255--334433.. 1166 ((331l))LLiivvaakk,, KKJ;. SJ.;chScnhimtiittggeenn,T,T.. DD.. AAnnalaylysissisooffrreellaattiivveeggeennee eexxpprreessssiioonn ddaattaa uussiinngg rreeaall-t-iimmee 1"7 qquuaannttiittaattiivveePPCCRRaanndd tthhe2e2 ((--DDeellttaa DDeelltatCaC ((TT)))) MMeetthhoodd.. MMeehthooddss2200010,1,2255,, 440022--440088. 1188 ((3322))ZZhhoonngg XXP.P:.; XXuu, Y:; LLiiaanngg,, YV-: ; LLiisaoo,, TT;.; WWaanngg,, JJ.WW.. VViitteellllooggeenniinn iinn rraarree mmiinnnnooww 1199 ((GGoobbiiooccyypprriiss rraarruuss)):: iiddeennttiiffiiccaattiioonn aanndd iinndduuccttiioonn bbyy wwaatteerrbboormnee ddiieetthhyyllssttlilbbesetsrtrool.l. CCoommpp.. 2200 BBiioocchheemm. PPhhyyssiiooll.. CCTToxoixcicool.l. PPhhaarrmmaacocal.l. 22000044,, 113377,,229911--229958,. 28 22112255..00002299 I3MMAAO01144B611338844. 1 ((G333L)Liiaaoo, T,T:.; JJiinn,, SSW.W;.; YYaanngg., FFX.X;.; HHuuii,, Y 5; aanndd XXuu., YY. AAnn eennszyymmee--lliinnkkeedd iimmmmuunnoossoorrbbeenntt 2 2 aassssaayy ffoorr rraarree mmiinnnnooww ((GGoobbiiooccyypprriiss rraarriuss)) vviitteellllooggeenniinn aanndd ccoommppaarriissoonnooffvvititeellllooggeenniinn 33 rreessppoonnsseess iinn rraarree mmiinnnnooww aanndd zzeebbrraaffiisshh ((DDaanniiao rreerriioo)).. SSccii.. TToottaall EEnnvviirroonn.. 22000066,, 336644,, 4 4 228844.-229944,. 55 G(344))BBrraaddffoorrdd,, MMM.M.. AA rraappiidd aanndd sseennssiittiivvee mmeetthhoodd ffoorr tthhee qquuaannttittaatiioonn ooff mmiiccrrooggrraamm 66 qquuaannttiittiieess ooff pprrootteeiinn wuitillilziinngg tthhee pprriinncciippllee ooff pprrootteeiinn--ddyyee bbiinnddiinngg.. AAnnaall.. BBiioocchheemm. 11997766,, 7 ? 7722,.224488-225522. 88 ((3355))ZZhhaa, IJ.MM;.; WWaanngg,, ZZ.J;.; WWaanngg,, NN..;; IInnggeerrssoollll,, CC.. HHiissttoollooggiiccaall aalltteerrnaattiioonn aanndd vviitteellllooggeenniinn 9 iinndduuccttiioonn iinn aadduulltt rraarree mmiinnnnooww ((GGoobbiiooccyypprriiss rraarruuss)) aaffteerr eexxppoossuurree ttoo eetthhyynnyylleessttrraaddiiooll 1100 aanndd nnoonnyyllpphheennolo.l. CChheemmoosspphheerree 22000066,,AAvvaaiillaabbllee oonnlliinnee 1177.JJuullyy. 111 ((3366)) GGrraayy,, MM.AA.;MeMtectaclaflfee,, CC..DD.. IInndduuccttiioonn ooff tteessttiiss--oovvaa iinn JJaappaanneessee mmeeddaakkaa ((OOrryyzziiaass llaattiippeess)) 122 eexxppoosseeddttoop-pn-onnoynlyplphheennlo.l. EEnnvviirroonn.. TTooxxiiccooll,. CChheemm.. 11999977,, 1166,, 11008822--11008866,. 1135 ((3377))LLaanngeg,e, RR: ; HHuuitcchhiinnssoonn,, TTH.H:.; CCrroouuddaaccee,, CCP.P..; SSiieeggmmuunndd., FF.;.; SScchhwweienifnufrutrhth,, HH..; HHaammppee,, u14 PP..;; PPaanntteerr,, GG.HH:.; SSuummptpetre,r, JJ.PP.. EEffffeeccttss ooff tthhee ssyynntthheettiicc eessttrrooggeenn 1177oac-eetthhiinngylleessttrraaddiiooll oonn 11s5 tthhee lliiffee--ccyycclleeofotf hthee ffaatthheeaadd mmiinnnnooww ((PPiinnecpphhaalleess pprroommelealas)s.). EEnnrviornon.. TTooxxiiccooll.. CChheernn. 616 22000001,,2200,,11221166--11222277. 1177 ((3388)) MMiilleess--RRiicchhaarrddssoonn,, SS.RR.;; KKrraammeerr,, VVJ..J.;FiFtiztzggeerraalldd,, $S..DD..;; RReennddeerr,J,J.AA;.; YYaammininii,, BB;.; BBaarrbbeeee,, 1188 SS.JJ.; GGiieessyy,, JL.PP.. EEffffeeccttss ooff wwaatteerrbboormnee eexxppoossuurree ooff 1177 fPe-setstrraaddiiooll oonn sseeccoonnddaarryy sseexx 119 cchhaarraacctteerriissttiiccss aanndd ggoonnaaddss ooff ffaatthheeaadd mmiinnnnoowwss ((PPiimmeepphhaalleess pprroommelealas)s.). AAqquuaatt.. TTooxxiiccooll.. 020 11999999,, 4477,, 112299--114455,. 29 22112255..00003300 33MMAAO011446611338855. 1 ((3399))VVaann ddeenn BBeeltl,t, KK;.; WWesetsetre,r, PPA.WV..;VVaann ddeerrVVeenn,, LLT.TM..M;.; VVeerrhheeyyeenn,, RR.;.; WWitittteerrss,, HH.. EEffffeeccttss 2 2 ooff eetthhyynnyylleessttrraaddiiooll oonn tthhee rreepprroodduucctiivvee pphhyyssiioollooggyy iinn zzeebbrraaffiisshh ((DDaanniiao rreerriioo)):: ttiimmee 3 3 ddeeppeennddeennccyy aanndd rreevveersrisbiibliiltiyty. . EEnnvviirroonn.. TToaxxiiccool.l. CChheemrn.. 22000022,, 2211,, 776677--777755.. 4+ (4(400))HHaarrrriieess,, JJ.EE;.; RRuunnnnaalllsl,sTT,:;.; HHiillll,, EE;.; HHaarrirsi,s, CC.AA;.; MMaadddidxix,, SS;.; SSuummppetrer,, JJ.PP;.; TTyylleer;rC;.RCR. 5s DDeevveellooppmmeennttooff aa RReepprroodduuccttiivvee PPeerrffoorrmmaannccee TTeesstt ffoorr EEnnddooccrriinnee DDiissrruuppltiinngg CChheemmicicaallss 66 UUssiinngg PPaaiirr--BBrreeeeddiinngg FFaatthheeaadd MMiinnnnoowwss ((PPiirmneepphhaalleess pprroormneellaass)). EEnnvviirroonn.. SSccii.. TTeecchhnnoo!l. 7 7 22000000,, 3344., 33000033--33001111. 8 ((411))PPaawwlolowwsksik,i, SS;.; vvaann AAeerrllee,, RR.;.; TTyylleerr,, CC.R..R;.; BBrraauunnbbeecckk,, TT.. EEffffeeccttss ooff 1177cax-t-ehtihnignlyelsetsrtraaddiiooll 9 9 iinnaa ffaatthheeaadd mmiinnnnooww ((PPimrenpehpahalleess pprroormneellaass)) ggoonnaaddaall rreeccrruuddeesscceennccee aassssaayy.. EEccoottooxxiiccooll. 1100 EEnnvviirroonn. SSoaff 22000044, 5577., 333300--334455. 111 @(422))KKaanngg,, l1.0J:.; YYookkoottaa,, HH:.; OOsshhiimmaa,, YY.:.; TTssuurduad,a, Y..:; HHaannoo,, TT.:; MMaaeeddaa,, MM.. lImmaaddaa,, NN..:; 1122 TTaaddookkoororo,, HH..; HHoonnjojo,, TT.. EEffffeeccttss ooff4-4n-onnoynyllpphheennooll oonn rreepprroodduuccttiioonnooff JJaappaanneessee mmeeddaakkaa., 513 OOrryyzziiaass llaatnippeess.. EEnnvviirroonn.. TTooxxiiccooll,. CClheemrn.. 22000033,, 2222,, 22443388--22444455.. 1144 ((4433))TTaabbaattaa,, AA;; MMiiyyaammootto,oNN,..;; OOhhninsihsih,i, ;Y.; KKaammeeii,T,T.:; MMaaggaraara,, Y.. TThheeeeffffeeccttooff cchhlloorriinnaattiioonn 11s5 ooffeessttrrooggeenniicccchheemmicicaallss oonn tthhee lleevveellssooffsseerruumm vviitteellllooggeenniinn ooffJJaappaanneessee mmeeddaaklma ((OOrryyzziiaass 1166 llaotrippeess)). WWaatteerr SSccii,, TTeecchhnnooll.22000033,, 4477,, 5511--5577. 1177 ((4444))KKaanngg,.l.J1);.;YYokooktoata,, H.;.;OOshshiimmaa,, YY..:; TTssuurruuddaa,, YY.;.; OOce,, TT.;; lImmaaddaa,, NN..;; TTaaddookkoorroo,, HH..;; HHoonnjjoo., 1188 TT. EEffffeeccttssooffbbiisshheennooll AA oonn rreepprroodduuccttiioonn ooff JJaappaanneessee mmeeddaakkaa ((OOrryyzziiaass llaattiippeess)).. EEnnvviirroonn. 919 TTooxxiiccooll. CChheermn. 220020,22110,, 223399244--224.40000,. 22112255..00003311 30 33MMAAO011446611338866. 1 ((4455)) MMaarraass,, MMi;.; VVaannpparayrys,s, CC.:.; MMauyyllele,, FF.:.; RRoobbbbeenns,s, J1:.; BBeerrggeer,r, UU.. BBaarrbbeer,r, JJ.; BBlluutst,, RR.;.; CCooeenn 2 2 WWD.D.. EEssttrrooggeenn--lliikkee pprrooppeerrtiieess ooff fflluuoorrootteelloommeerr aallccoohhoollss aass rreevveeaalleedd bbyy MMCCFF--77 bbrreeaasstt 33 ccaanncceerr cceellll pprroolliiffeerraattiioonn.. EEnnvviirroonn.. HHeeaalltthh PPeerrssppeecct.t. 22000066,, 111144,, 110000--110055,. 41 ((4466))BBiieeggeell,, LLB.B;.; HHuutrttt,, MME.E;.; FFrraammee,, SS.RR;.; OO''CCoonnnnoro,r, JJ.CC;.; CCooookk,, JJ.CC.. MMeecchhaanniissmmss ooff 5 s eexxttrraahheeppaattiicc ttuummoorr iinndduuccttiioonn bbyy ppeerrooxxiissoommee pprroolliffeerraattoorrss iinn mmaallee CCDD rraattss.. 1o'xoixcicooll.. 5Sci. 66 22000011, 6600,4444-5555. 77 ((4477))GGasaozuoluil.i, MM:.;; YYaaoo., ZZ;.; BBouojraud,NiN..:;rCCoorarotondn,,J,J..CC:.;CCululltyy,, MML.;; PPaappaaddooppoouluolos,s, VV.. EEffffeecctt ooff 8 8 ppeerrooxxiissoommee pprroolliiffeerraattoorrss oonn LLeeyyddiigg cceellll ppeerriipphheerraall--ttyyppee bbeennszooddiiaaszeeppiinnee rreecceeppttoorr ggeennee 99 eexxpprreessssiioonn,, hhoorrmmoonnee--ssitimmuullaatteedd cchhoolleesstteerrooll ttrraannssppoorrtt,, aanndd sstteerrooiiddooggeenneesissis:: rroollee ooff tthhee 1100 peprerooxxiissoommeepprroolliiffeerrattoorrss--aaccttivvaattoorr rreecceepptoiroara.. EEnnddooccrriinnoollooggyy22000022,, 114433,, 22557711--22558833. 22112255..00003322 31 33MMAAO011446611336877