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Arrt du gouvernement wallon allouant une subvention au Groupement d'Intrt Scientifique wallon de Rfrence pour la qualit des EAUX (GISREAUX)
RECHERCHE DE PERTURBATEURS ENDOCRINIENS ET D'AUTRES SUBSTANCES D'INTRT RCENT DANS LES EAUX EN VUE DE LA PROTECTION DE LA SANTE PUBLIQUE ET DE L'ENVIRONNEMENT
PROGRAMME DE RECHERCHE BIODIEN
ANNEXE 3 VALIDATION DES MTHODES D'ANALYSE MODIFIES DANS LE CADRE DU PROJET
Rapport N : 2018-01690 Cette annexe contient 2 rapports
Remarque : Ce rapport ne peut tre reproduit, sinon en entier, sauf accord du GISREAUX Rapport 2018-01690
Analyse des phtalates
1. Analyse par GC/MS/MS (Quattro micro GC de WATERS) Les phtalates analyss sont au nombre de 9. Chaque phtalate possde son talon interne. Tableau reprenant les paramtres de masse:
Composs
dimthyl phtalate-d4 dimthyl phtalate dithyl phtalate-d4 dithyl phtalate dipropyl phtalate-d4 dipropyl phtalate dibutyl phtalate-d4 dibutyl phtalate dipentyl phtalate-d4 benzyl butyl phtalate-d4 benzyl butyl phtalate di-2-thylhexyl phtalate-d4 di-2-thylhexyl phtalate dicyclohexyl phtalate-d4 dicyclohexyl phtalate di-n-octyl phtalate-d4 di-n-octyl phtalate didcyl phtalate-d4 didcyl phtalate
Abrviations
DMP-d4 DMP DEP-d4 DEP DPP-d4 DPP DBP-d4 DBP DPentylP-d4 BBP-d4 BBP DEHP-d4 DEHP DCHP-d4 DCHP DOP-d4 DOP DDcP-d4 DDcP
RT (min) 15.01 15.05 17.75 17.80 21.12 21.15 23.58 23.61 25.91 29.08 29.12 32.28 32.33 32.68 32.74 35.52 35.55 40.53 40.56
Transition MRM (quantification)
167.065 81.064 163.04 77.039 153.049 69.064 149.024 65.039 153.049 69.064 149.024 65.039 153.049 69.064 149.024 65.039 153.049 69.064 153.049 69.064 149.024 65.039 153.049 69.064 149.024 65.039 153.049 69.064 149.024 65.039 153.049 69.064 149.024 65.039 153.049 69.064 149.024 65.039
Transition MRM (confirmation) 194.058 77.039 177.055 65.039 209.081 149.024 223.097 149.024
206.094 149.024 167.05 65.039 167.05 65.039 279.16 149.024 307.191 149.024
Les conditions GC/MS choisies sont les suivantes :
Colonne Chrompack CP Sil 8 CB-MS Low Bleed 60 m x 0.25mm i.d.x 0.25m Df Temprature de l'injecteur : 300C en mode spiltless Rampe de t du four: 70(3.00) 35.6/155(0.00) 4/208(11.00) 19/270(10.00) 27.5/325 Ion mode : EI+ Electron energy : 65eV Trap : 200A Temprature de la source : 270C Temprature de la ligne de transfert : 280C Multiplier : 650V Volume inject : 2 l
C. Nadin - 22/03/18
- 1 -
2. Partie prparative (extraction)
La mthode d'extraction utilise est la mthode d'extraction solide-liquide (SPE). Les cartouches SPE de type Bond Elut C18 Varian ont t utilises.
Les paramtres d'extraction suivants ont t tests :
1) Conditionnement de la colonne avec 5 ml d'actate d'thyle. 2) Schage l'azote de la colonne pendant 0.5 minute. 3) Conditionnement de la colonne avec 2x5 ml de mthanol. 4) Enrichissement de la colonne avec 500 ml d'chantillon analyser. 5) Schage l'azote de la colonne pendant 20 minutes. 6) Elution des analytes avec 3 ml d'actate d'thyle. 7) Rcolte des 3 ml dans un tube usage unique.
La quantification a t ralise par la mthode d'talonnage interne pour compenser les pertes ventuelles en cours de procdure.
Les rendements d'extraction ont t tests sur des eaux dopes environ 1000 ng/l et les rsultats sont repris dans le tableau ci-dessous :
Composs
DMP DEP DPP DBP BBP DEHP DCHP DOP DDcP
Rendement % 113.8 88.8 92.6 53.7 92.6 74.4 84.4 79.4 82.0
Rendement % 117.4 92.3 91.1 76.5 89.1 59.7 85.4 79.5 82.5
Rendement % 116.4 90.9 92.4 68.0 91.5 54.8 82.9 78.7 82.1
Moy rend
116 91 92 66 91 63 84 79 82
Ecart-type
1.8 1.8 0.8 11.5 1.8 10.2 1.3 0.4 0.3
RSD % 1.6 1.9 0.9 17.5 2.0 16.2 1.5 0.5 0.3
Les rendements obtenus sont satisfaisants puisqu'ils se situent entre 80 et 120 % pour la plupart des constituants sauf pour le DBP et le DEHP qui ont des valeurs de blanc plus leves.
C. Nadin - 22/03/18
- 2 -
3. Rsultats obtenus
Les rsultats obtenus dans le cadre des masses d'eau 3450 et 3960 en ng/l
blanc_A blanc_B blanc_C 1007_2_A 1007_2_B 1007_2_C 1007_2_dop_A 1007_2_dop_B 1007_2_dop_C
DMP
73.7 62.1 61.6
66.8
65.6
64.1
3232.5
3236.1
3217.3
DEP
80.4 68.2 74.1 146.5 131.1 100.2
2318.2
2323.1
2308.3
DPP
82.3 71.8 70.2
70.3
69.7
69.7
1829.3
1834.7
1828.6
DBP
515.3 460.8 432.9 438.8 297.9 232.4
2363.5
2340.7
2356.7
BBP
105.7 62.0 57.7 140.0 133.5 146.8
1691.5
1709.9
1698.5
DEHP 147.3 91.8 96.7 171.6 145.4 121.5
1747.8
1724.0
1681.7
DCHP 135.9 83.3 79.5
75.9
74.0
73.3
1786.1
1776.4
1782.3
DOP 204.0 152.9 148.4 149.8 147.6 144.5
2279.9
2249.6
2182.6
DDcP 117.3 73.1 68.5
73.7
71.9
71.0
1760.4
1758.3
1722.3
Moy blc Moy eau Moy eau dop eau-blc eau dop-eau dop th
61.9 65.5
3228.6 3.6
3163.1 2920
71.2 125.9
2316.5 54.8
2190.6 2720
71.0 69.9
1830.9 -1.1
1761.0 2180
446.9 323.0
2353.6 -123.8
2030.6 2860
59.9 140.1
1700.0 80.3
1559.9 1980
94.3 146.2
1717.8 51.9
1571.7 2180
81.4 74.4
1781.6 -7.0
1707.2 2140
150.7 147.3
2237.4 -3.4
2090.1 3020
70.8 72.2
1747.0 1.4
1674.8 2120
% rec 108.3 80.5 80.8 71.0 78.8 72.1 79.8 69.2 79.0
blanc_A blanc_B blanc_C 1007_5_A 1007_5_B 1007_5_C 1007_5_dop_A 1007_5_dop_B 1007_5_dop_C
DMP
73.7 62.1 61.6
67.4
64.6
63.0
3149.2
3189.3
3096.1
DEP
80.4 68.2 74.1 134.5 214.0 114.3
2417.4
2352.4
2458.6
DPP
82.3 71.8 70.2
72.7
69.9
69.4
1791.1
1820.8
1773.6
DBP
515.3 460.8 432.9 227.2 177.4 160.5
2355.7
2346.0
2274.9
BBP
105.7 62.0 57.7
65.5
58.6
58.9
1580.8
1579.6
1543.5
DEHP 147.3 91.8 96.7 213.1 209.8 200.8
1845.0
1908.9
1852.6
DCHP 135.9 83.3 79.5
83.1
76.2
74.4
1709.6
1740.0
1632.5
DOP 204.0 152.9 148.4 156.1 148.0 146.0
2298.2
2348.8
2305.5
DDcP 117.3 73.1 68.5
73.5
70.3
69.3
1784.3
1788.1
2020.9
Moy blc Moy eau Moy eau dop eau-blc eau dop-eau dop th
61.9 65.0
3144.9 3.2
3079.9 2920
71.2 154.3
2409.5 83.1
2255.2 2720
71.0 70.7
1795.2 -0.3
1724.5 2180
446.9 188.4
2325.5 -258.5
2137.2 2860
59.9 61.0
1568.0 1.2
1507.0 1980
94.3 207.9
1868.8 113.7
1660.9 2180
81.4 77.9
1694.0 -3.5
1616.1 2140
150.7 150.0
2317.5 -0.6
2167.5 3020
70.8 71.0
1864.4 0.2
1793.4 2120
% rec 105.5 82.9 79.1 74.7 76.1 76.2 75.5 71.8 84.6
80.3
Les rsultats obtenus dans le cadre de la masse d'eau : STEP Marche-en-Famenne en ng/l. Sur cette eau, un test de conservation de l'chantillon a t effectu J+7.
J0 blanc_A blanc_B blanc_C 1131_1_A 1131_1_B 1131_1_C 1131_1_dop_A 1131_1_dop_B 1131_1_dop_C
DMP
1678.0
1701.2
1707.9
DEP
35.0
10.4
6.8
1271.4
1275.6
1275.2
DPP
989.6
1003.5
1007.6
DBP
313.8 337.6 370.8 151.0
46.1
37.0
1320.5
1334.6
1331.9
BBP
847.9
853.9
868.0
DEHP
16.4
39.4 27.2 284.9 126.3 128.8
1038.4
1045.2
1235.4
DCHP
947.0
955.9
964.9
DOP
2.4
2.1 1.9
3.2
3.2
2.2
1263.3
1257.4
1312.6
DDcP
0.6
915.6
903.9
935.2
Moy blc Moy eau Moy eau dop eau-blc eau dop-eau dop th
0.0
0.0
1695.7 0.0
1695.7 1460
0.0 17.4
1274.1 17.4
1256.7 1360
0.0
0.0
1000.2 0.0
1000.2 1090
340.7 78.0
1329.0 -262.7
1251.0 1430
0.0
0.0
856.6 0.0
856.6 990
27.7 180.0
1106.3 152.3
926.3 1090
0.0
0.0
955.9 0.0
955.9 1070
2.1
2.9
1277.8 0.7
1274.9 1510
0.0
0.6
918.2 0.6
917.6 1060
% rec 116.1 92.4 91.8 87.5 86.5 85.0 89.3 84.4 86.6
J+7 blanc_A blanc_B blanc_C 1131_1_A 1131_1_B 1131_1_C 1131_1_dop_A 1131_1_dop_B 1131_1_dop_C
DMP
1691.5
1736.6
1705.8
DEP
35.0
10.4
6.8
1269.3
1283.1
1281.1
DPP
1036.7
1048.5
1029.9
DBP
332.9 284.6 280.7 151.0
46.1
37.0
1266.5
1238.2
1212.3
BBP
676.0
701.5
683.7
DEHP
33.2
17.7 33.7 284.9 126.3 128.8
919.7
900.6
1086.7
DCHP
2.3
0.8 0.0
996.9
996.7
1007.2
DOP
3.3
2.0 3.2
3.2
3.2
2.2
1022.6
1047.1
1054.0
DDcP
0.6
901.3
865.4
857.5
Moy blc Moy eau Moy eau dop eau-blc eau dop-eau dop th
0.0
0.0
1711.3 0.0
1711.3 1460
0.0 17.4
1277.8 17.4
1260.4 1360
0.0
0.0
1038.4 0.0
1038.4 1090
299.4 78.0
1239.0 -221.4
1161.0 1430
0.0
0.0
687.1 0.0
687.1 990
28.2 180.0
969.0 151.8
789.0 1090
1.0
0.0
1000.3 -1.0
1000.3 1070
2.8
2.9
1041.2 0.0
1038.4 1510
0.0
0.6
874.7 0.6
874.1 1060
91.1 % rec
117.2 92.7 95.3 81.2 69.4 72.4 93.5 68.8 82.5
85.9
Les rsultats obtenus sont trs satisfaisants compte tenu des rendements obtenus et le test de conservation est concluant au vu des rsultats du quatrime tableau.
C. Nadin - 22/03/18
- 3 -
Rapport de validation
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Validation des Azots et phosphors par HPLC-MSMS en ESI+
Date : 13/3/2015
Rdaction : P. Carbonnelle
Plan de validation de trois pesticides repris dans le projet BIODIEN sur Agilent 6460 par ESI+ HPLC MS/MS : l'Actochlor, la Carbendazim et le Pirimicarb.
Mthode d'essai : MEO-LAB-14
1. HISTORIQUE
Rapport de validation des thermolabiles selon MEO-LAB02 :
5/11/2001 Premire dition du rapport de validation.
5/11/2001 Correction de diverses erreurs.
20/6/2002 Complments au premier rapport de validation, et sparation chromatographique.
2/04/2004 Complments au premier rapport de validation, rvaluation des limites de dtection.
9/9/2009 Complments au premier rapport de validation,
vrification des taux de recouvrement ajout de nouveaux paramtres et validation de l'Agilent 6460.
07/12/2011 Complments au premier rapport de validation, Remplacement de l'extraction de calibration 500 ng/l par une extraction 150 ng/l en thermolabiles
Rapport de validation selon MEO-LAB14 :
08/1/2014 Plan de transfert des pesticides analysables en Pesticides thermolabiles sur l'Agilent 6460 par ESI+-HPLC MS/MS.
09/3/2015
Plan de validation de trois pesticides repris dans le projet BIODIEN sur Agilent 6460 par ESI+ HPLC MS/MS : l'Actochlor, la Carbendazim et le Pirimicarb.
Participants :
- Saudoyez D.
- P. Carbonnelle
1
Rapport de validation
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Validation des Azots et phosphors par HPLC-MSMS en ESI+
Date : 13/3/2015
Rdaction : P. Carbonnelle
Date de dbut plan de validation : le 5/2/14 Dlai : Projet Biodien ?
2. RAISON
Il serait intressant d'intgrer dans notre routine divers pesticides d'intrt sans pour autant attendre une actualisation de la liste obligatoire par la RW.
Principalement ces nouvelles substances intressantes ont t identifies sur base de listes tablies par la France, Belgaqua (listes Phytophar, SPF et les distributeurs d'eau), la rgion flamande via la VMW et nous-mmes. Certaines molcules sont communes dans ces diffrentes listes ce qui reprsente au total 64 substances diffrentes juges pertinentes dans la domaine de l'eau de distribution.
La SWDE couvre dj en grande partie ces listes avec pas moins de 38 molcules analyses en routine. Il reste donc 26 molcules qui ce jour ne sont pas analyses par la SWDE. Afin d'viter des tests systmatiques, une analyse sur base de la structure a t ralise pour valuer leur ventuelle candidature une incorporation dans nos mthodes de routine. Il en ressort que 18 pesticides sont potentiellement analysables par ESI+ HPLC MS/MS et donc facilement intgrables notre mthode de routine et extraction liquide/liquide.
Dbut 2013, la SWDE a t implique dans le projet BIODIEN s'intressant aux perturbateurs endocriniens pour l'analyse de 32 pesticides repris dans son contrle de routine et de 3 molcules que nous avions juges d'intrt pour la SWDE sur base de l'tude prcdente: l'Actochlor, la Carbendazim et le Pirimicarb. Par ailleurs nous comptions les intgrer dans notre analyse de routine pour fin 2014.
L'objectif est de valider rapidement ces trois paramtres dans le cadre de nos analyses de routine, le projet BIODIEN et de constituer un pr-dossier de validation pour une accrditation ventuelle par Belac.
N
Nom
1 Actochlor
N CAS
Famille
34256-82-1 Chloroactanilide
Formule brutes
C14H20ClNO2
MW lowest Isotope
269,12
Rfrence labo
9-158
2 Carbendazim 10605-21-7 Benzimidazole et Carbamate
C9H9N3O2
191,10
9-148
3 Pirimicarb
23103-98-2 Carbamate
C11H18N4O2 238,14
9-179
3. OPTIMALISATION MS/MS DES 3 MOLCULES
2
Rapport de validation
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Validation des Azots et phosphors par HPLC-MSMS en ESI+
Date : 13/3/2015
Rdaction : P. Carbonnelle
Les optimalisations sont ralises par le logiciel Optimizer et portentnt sur les paramtres
suivants : - slection de l'ion prcurseur M+H+ et M+NH4+ ou un ventuel fragment abondant, - optimalisation du Fragmentor voltage pour l'ion prcurseur,
- slection des ions fragment, - optimalisation de l'nergie de collision pour chaque fragment.
Paramtres
Les paramtres ci-dessous sont dfinis sur base des applications notes Agilent et de notre exprience.
Concentration : 1 mg/l dans le MeOH
Source Agilent Jet Stream, - Sheath gas 400C @ 10 l/min - Drying gas 325C @ 5 l/min - Nebulizer pressure 35 psi - VCap : 3000 V - Nozzle voltage 500 V - EMV voltage 0 V
Phase mobile 400 l/min ; 50/50 v/v - A : 100% H2O 10 mM NH4COOH 0,1% HCOOH - B : 100% MeOH 10mM NH4COOH 0,1%HCOOH
10 l injects Pression de gaz :
- Gaz de collision : 20 psi - Gaz azote Nebulizer et Jet Stream : 90 psi
Rsultats
Les rsultats des optimalisations sont prsents dans le tableau ci-dessous.
Nom Actochlor
Carbendazim Pirimicarb
Listes
France
France et Belgaquadistributeurs BelgaquaPhytophar et
SPF
Formules C14H20ClNO2
C9H9N3O2
MW
lowest Isotope
269,12
191,10
Prcur seur 224,1
192.1
Type [M+HCH3CH2OH]+ [M+H]+
C11H18N4O2 238,14 239,1
[M+H]+
Ion Ion quant Conf 148,1 133,1
160,0 132,0
182,1 72,0
Les trois composs sont azots et rpondent bien en termes de sensibilit sur base de l'intensit observe en MSScan de l'ion molculaire correspondant.
3
Rapport de validation
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Validation des Azots et phosphors par HPLC-MSMS en ESI+
Date : 13/3/2015
Rdaction : P. Carbonnelle
Les transitions les plus intenses ont t retenues pour la quantification sauf pour le Pirimicarb qui peut donner une lgre interfrence sur la transition MRM 238,1->72,0. Ds lors, pour viter des problmes de faux positif, l'ion 182,1 moins sensible a t prfr pour la quantification.
Les transitions retenues sont bases sur l'ion prcurseur [M+H]+except pour l'Actochlor qui prsente une fragmentation importante au niveau de la source avec perte d'thanol, soit l'ion [M+H-CH3CH2OH]+. Pour l'Actochlor, le choix d'une transition sur un isotope relativement important est galement possible vu la prsence d'un Cl (35 ou 37).
4. SPARATION CHROMATOGRAPHIQUE
Les trois molcules ont t introduites dans notre mthode de routine base sur le gradient donne ci-aprs :
Colonne Zorbax SB-C18 2.1*50 mm 1.8 m de Agilent.
Phase mobile 400 l/min - A : 100% H2O 10 mM NH4COOH 0,1% HCOOH - B : 100% MeOH 10mM NH4COOH 0,1%HCOOH - Temprature colonne : 45C
Temps 0 min 0.5 min 15 min 18 min
% B 20% 20% 100% 100%
Afin d'viter une contre-pression trop leve, nous avons travaill plus haute temprature ce qui permet de diminuer la viscosit. A 45C, la pression maximale n'est pas suprieure 300 bar pour un dbit de 0.4 ml/min.
Actuellement, notre mthode de routine utilise le Monuron_d6, l'Aldicarb_d3 et l'Atrazine_d5 comme standards internes. Sur base des structures chimiques il semble appropri de corriger le Pirimicab et la Carbendazim par l'Aldicarb_d3 et l'Actochlor par le Monuron_d6.
Le gradient permet une bonne sparation des 56 molcules dj prsentes dans la mthode et les trois nouvelles substances, voir figure 1.
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Carbendazim Pirimicarb
Figure 1 : Chromatogramme d'une solution 50 ng/ml.
Actochlor
5. RENDEMENT D'EXTRACTION
Protocole d'extraction :
- Les chantillons sont extraits par une triple extraction liquide/liquide en prsence de 30 g/l de NaCl avec respectivement 2*50 ml et finalement 30 ml de dichloromthane par litre d'chantillon.
- Les phases organiques sont rcoltes et le dichloromthane est limin par vaporation sous flux d'azote en prsence de mthanol et d'eau pour finalement atteindre un volume de 1 ml et un rapport 30/70 v/v H2O/MeOH.
Les rendements d'extraction ont t estims sur base de 6 talons extraits dans la gamme 20-250 ng/l et compars un talon reconstitu non extrait.
Produits
Carbendazim Acetochlor Pirimicarb
Rendement (%)
Moy.
SD
53,8
2,6
81,7
6,5
81,7
5,2
6. LINARIT SUR EXTRACTION
La linarit de la mthode sur talons extraits a t investigue sur 5 points dans la gamme de concentration de 20 ng/l 250 ng/l par calcul du biais chaque niveau de concentration (NF T 90-210). Cette tude a t ralise sur les talons des 42 sries de routine injectes dans la priode couvrant fin octobre 2014 fin fvrier 2015. Sur cette priode, les gammes d'talonnage ont t prpares et extraites 15 reprises, soit plus ou moins une fois par semaine. Chaque gamme est injecte en moyenne trois reprises en fonction de l'arrivage
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des chantillons de la semaine correspondante. Cela reprsente au total pas moins de 170 talons injects.
L'examen visuel des rponses des gammes de concentration ne met pas en vidence de problme d'cart la linarit pour les paramtres tudis (voir reprsentation graphique). L'talonnage retenu est un ajustement linaire avec facteur de pondration 1/x et l'option Blank offset pour l'ordonne. Cet talonnage permet un meilleur ajustement aux basses concentrations et ce malgr l'absence de d'talon aux trs basses concentrations.
Les biais de ces 69 talons ont t calculs et les limites ont t dfinies en fonction de la concentration, soit :
- 20 ng/l 30% - 50 ng/l 25% - de 100 250 ng/l 20%
Seule la Carbendazim dpasse lgrement ces limites quatre reprises. Il faut noter que la Carbendazim est assez sensible la prsence de dichloromthane lors de l'tape d'vaporation et son rendement d'extraction est galement moins bon. Les graphiques sont donns ci-aprs :
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7. LIMITE DE DTECTION ET DE QUANTIFICATION
Les mthodes d'valuation des LOD et LOQ ont t prcises dans les diffrentes directives europennes et arrts wallons d'application. Il est recommand d'estimer la limite de dtection comme un multiple de l'cart-type l'intrieur du lot d'un chantillon naturel contenant une concentration peu leve du paramtre. En pratique nous estimons les limites de dtection et de quantification partir de nos contrles qualit 3 ng/l en condition de fidlit intermdiaire nanmoins ce jour nous ne disposons pas de valeurs pour ces trois paramtres. Une estimation base sur le rapport signal sur bruit a donc t entreprise, i.e un S/N de 3 pour la LOD et 10 pour la LOQ.
Estimation de la LOD et LOQ sur talons 20 ng/l extraits
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Produits
S/N
LOD (ng/l)
LOQ (ng/l)
Carbendazim
194
0.3
1.0
Acetochlor
127
0.4
1.6
Pirimicarb
187
0.3
1,0
Pour des raisons pratiques de rapportage nous fixons ces limites 1 ng/l pour la LOD et 3 ng/l pour la LOQ.
8. ESSAIS INTERLABORATOIRES AQUACHECK
Au total, trois campagnes ont t ralises : la distribution 480 de fvrier 2015, la distribution 476 de novembre 2014 et la distribution 472 de septembre 2014. Seul le Pirimicarb est prsent dans ces distributions de LGCPromochem
Les rsultats obtenus pour le Pirimicarb sont trs bons avec des Z-Score infrieurs 1, voir ci-dessous :
Rsultats interlaboratoire Pirimicarb
Distribution
480 476 472
SWDE ng/l 78,3 47,7 108,8
Median ng/l 77,1 44,4 107,0
Assigned ng/l 74,0 47,0 107,0
Z-Score
+0.58 +0.14 +0.16
9. FIDLIT, JUSTESSE DE LA MTHODE ET INCERTIDUTES DE MESURE
Les dfinitions et critres de performance ont t prciss dans les diffrentes directives europennes et arrts wallons d'application.
- Dans la directive de 98 et l'arrt d'application de 2004, les critres de performance sont donns en termes d'exactitude, la valeur paramtrique, avec 25% pour la justesse et 25% pour la fidlit (k=2). Cette directive est en cours de changement et les derniers textes communiqus ne parlent plus d'exactitude mais directement d'incertitude la valeur paramtrique, soit 100 ng/l. Pour les pesticides, cette incertitude serait fixe 30% et, pour un nombre limit de pesticides, il est tolr 80% d'incertitude.
- La directive 2009/90/EC dfinit les critres minimaux pour l'incertitude de mesure comme infrieure ou gale 50% pour un largissement de 2 (k=2). Cette incertitude doit tre tablie la norme de qualit environnementale. Cette dfinition a t transpose par la RW dans son arrt du 29 septembre 2011. Pour les eaux souterraines, la norme en pesticide est de 100 ng/l (annexe XIV). Pour les eaux de surface (annexe Xbis), la norme de qualit est fonction du pesticide. La Carbendazim, l'Actochlor et le Pirimicarb ne sont pas repris dans cette annexe nanmoins except pour les pesticides chlors, les normes de qualit environnementale en pesticides sont suprieurs 100 ng/l (Chlorfenvinphos).
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En conclusion, la justesse et la fidlit intermdiaire de la mthode peuvent tre estimes sur les contrles qualit 100 ng/l de nos analyses de routine. Sur la priode considre, soit octobre 2014 mars 2015, nous disposons de 55 sries d'chantillons. Les rsultats sont prsents dans le tableau ci-aprs :
Produits
Carbendazim Acetochlor Pirimicarb
N
Moy (ng/l)
55
93,1
55
100,1
55
99,8
S (ng/)
14,1 8,2 11,1
Biais (ng/l)
-6,9 0,1 -0,2
Incertitude (ng/l)
[biais]+2S 35,1 16,5 22,4
Les biais (justesse) sont bons et infrieurs en valeur absolue 5 ng/l except pour la Carbendazim. Les carts-types (fidlit intermdiaire) sont infrieurs 15 ng/l.
Les incertitudes de mesure, |biais| + 2S, sont infrieures aux 30 ng/l fixs par les Directive europennes ou les arrts de transposition wallons except pour la Carbendazim. Il est signaler que ce produit est moins bien extrait et lue assez rapidement en chromatographie.
10. UTILISATION EN ROUTINE DE LA MTHODE
Les trois nouveaux paramtres ont t introduits dans notre mthode de routine depuis octobre 2014. A ce jour pas moins de 1500 chantillons ont t analyses et seule la Carbendazim a t dtecte des concentrations suprieures la LOD (1 ng/l). Sur base de l'volution de la contamination et la constance de la pollution des sites, la fiabilit de l'analyse semble trs bonne.
Les sites contamins sont repris dans le tableau ci-aprs :
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Marche les Dames
Date
P2
P1
P3
23/10/14
9,3
6,2
4,1
20/11/14
5,5
6,8
3,9
11/12/14
7,8
5,6
3,2
5/02/15
5,6
5,2
3,2
Beez
Date
Prechloration
SP Total
P7
P8
23/10/14
2,4
3,7
1,4
1,5
20/11/14
3,3
3,4
3,6
1,5
11/12/14
3,3
3,6
3,8
1,5
5/02/15
2,8
3
3,6
2
Dinant- Prieur
Date
P2
P1
25/11/14
6
4,9
jambes Velaines
Date
P9
30/10/14
3,5
25/11/14
5,3
8/01/15
4,1
Eaux de surface
Date Namur Sambre
21/11/14
< 1
11/12/14
1,6
5/02/15
< 1
Beez meuse <1 1,7 <1
Nous avons galement analys un chantillon de sortie de STEP (Godinne) pour valuer nos mthodes sur ce type de matrice :
- GC-MS pour les PAH et pesticides chlors. - HPLC MS/MS mode ngatif pour les pesticides acides (phnoxyacides). - HPLC MS/MS mode positif pour les pesticides azots et phosphors.
Le traitement de l'chantillon n'a pas pos de problme et les 9 standards internes utiliss sont peu affects en surface par la matrice. Les chromatogrammes n'ont pas montr une augmentation de la ligne de base par rapport des chantillons d'eaux de surface ou d'eaux souterraines. Divers pesticides ont t dtects, les rsultats sont donns dans le rapport en annexe I.
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11. EFFET DU CHLORE
Raison :
Suite aux analyses de routine et notre exprience nous avons observ que le chlore pouvait dgrader certains pesticides comme l'Aldicarb, la Bromacil...
Comme action corrective, l'ajout de thiosulfate est impos aux chantillons qu'ils soient chlors ou non. En cas de dveloppement de nouveaux pesticides un test d'effet du chlore est gnralement ralis suivant le protocole suivant :
Etapes
10 ml H2O +10 l Cl2 1,5g/l +10 l Thiosulfafe 80g/l 10 minutes 20C +100 l Sol Pesticide 2ng/l 1 heure 20C +10 ml MeOH
Etalon
ok ok ok ok ok
Thiosulfate (80 mg/l)
Chlore (1,5 mg/l)
Thiosulfate (80 mg/l) + Chlore (1,5
mg/l)
ok
ok
ok
-
ok
ok
ok
-
ok
ok
ok
ok
ok
ok
ok
ok
ok
ok
ok
ok
ok
Rsultats :
Les rsultats montrent que la prsence de chlore 1,5 mg/l dgrade significativement certains pesticides et que l'ajout de thiosulfate permet de stopper cette dgradation.
D'autre part en l'absence de chlore l'ajout d'un excs de thiosulfate 80 mg/l d'chantillon n'a pas d'incidence, voir chromatogramme et tableau ci-dessous.
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Si on regarde la littrature et notamment les normes de rfrence : - dans les normes amricaines (CFR 40 part 136), l'ajout de thiosulfate n'est pas impos
en prsence de chlore pour un prlvement pesticide en gnral. Il l'est par contre pour les PAH, les volatils aromatiques, les phnols chlors. - l'ISO 5667-3 de 2012 impose seulement l'ajout de thiosulfate pour les pesticides de type carbamates et les herbicides phnoxyacides. Aux rubriques pesticides organochlors en gnral, organophosphors et organoazots il n'est fait mention d'aucun ajout de thiosulfate. Au regard de nos rsultats, l'effet du chlore n'est pas trs bien connu du moins pour certains pesticides azots et les organophosphors en gnral.
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Evaluation du recouvrement (%) suite la prsence de chlore 1,5 mg/l sur une solution 20 g/l
Molcules affectes (< 90%)
Molcules non affectes (>90%)
Molcules
80 mg/l Na2S2O3
1,5 mg/l Cl2
80 mg/l Na2S2O3 + 1,5 mg/l
Cl2
Molcules
80 mg/l Na2S2O3
1,5 mg/l Cl2
80 mg/l Na2S2O3 + 1,5 mg/l
Cl2
Dimethoate Aldicarb Sulcotrione Bromacil Lenacil Ametryn Methidation Azinphos methyl Prometryn Terbutryn Malathion Azinphos ethyl Fenthion Diazinon Prosulfocarb Carbendazim Pirimicarb Flazasulfuron Amidosulfuron Methomyl Aldicarb sulfoxide Metribuzin Pyridate Metsulfuron methyl Metamitron
101,6
0,0
98,5
103,5
0,0
100,7
101,6
0,0
100,2
103,2
0,0
100,0
104,6
0,0
97,8
102,9
0,0
99,7
102,0
0,0
97,5
101,2
0,0
97,2
103,2
0,0
101,0
102,9
0,0
102,0
102,9
0,0
99,2
104,7
0,0
97,7
98,3
0,0
97,7
101,0
0,0
98,2
102,6
0,0
100,4
103,4
0,6
100,0
103,3
9,2
101,6
104,4
16,0
100,6
106,5
25,5
98,9
102,9
50,7
98,7
105,7
61,0
102,4
105,8
80,4
101,8
102,7
86,7
99,0
101,9
87,3
99,4
105,3
89,4
99,0
Dimethenamid
101,4
90,5
100,0
Pendimethalin
101,8
93,1
98,3
Prometon
102,4
93,6
99,7
Metoxuron
103,4
94,7
100,8
Triadimephon
103,1
94,8
100,4
Atrazine deiso
104,6
95,2
98,0
2,6_Dichlorobenzamide 105,4
95,4
102,1
Propazine
100,4
95,5
98,6
Oxadiazon
102,2
96,2
97,9
Simazine
102,3
96,2
98,1
Chlortoluron
104,0
96,3
99,6
Isoproturon
102,4
96,4
100,0
Imidacloprid
99,7
96,4
98,7
Atrazine desethyl
103,6
96,5
98,6
Monuron
102,1
96,9
99,6
Carbetamide
102,2
97,0
98,5
Linuron
103,0
97,1
97,4
Prochloraz
101,9
97,1
100,7
Chlorfenvinphos
103,5
97,2
98,8
Diuron
102,8
97,2
99,2
Metobromuron
103,0
97,3
98,7
Chloridazon
103,1
97,5
98,9
Terbutylazine
101,7
97,6
99,9
Alachlor 238
102,2
97,6
101,0
Acetochlor 224
102,4
98,0
99,9
Atrazine
102,4
98,1
99,3
Metolachlor
102,2
98,3
99,8
Cyanazine
101,5
98,6
98,6
Carbofuran
103,1
98,7
99,8
Dichlorvos
101,8
99,0
99,4
Oxamyl
104,6
99,1
100,7
Aldicarb sulfone_NH4
104,5
99,3
100,8
Diflufenican
113,0
99,3
104,2
Ethofumesate_NH4
104,8
99,4
101,3
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Rdaction : P. Carbonnelle
12. SPCIFICIT
1. La spcificit est assure par la transition MRM de quantification et par l'ajout d'une transition de confirmation.
2. Les analyses de routine ralises sur la priode fin octobre 2014 fin fvrier 2015 et couvrant environ 1500 chantillons n'ont pas montr une augmentation du bruit de fond ou de la ligne de base de manire significative.
3. Sur ces 1500 analyses, un seul chantillon (Hastire P2) a montr en Pirimicarb la prsence d'un signal de l'ordre de 15 ng/l sur l'ion de confirmation du (239,172) alors que le produit n'tait pas dtect sur la transition de quantification (239,1182,1).
4. Les chantillons ne sont que rarement positifs et en cas de doute ou si la transition de confirmation n'est pas suffisante, un Product Ion Scan peut tre ralis afin de confirmer la prsence de la substance suivant notre procdure de confirmation (ITOLAB 11).
13. CONCLUSION
Les performances analytiques de la mthode sont adquates.
Afin de complter le dossier, Il y aurait lieu de poursuivre la validation sur les points suivants :
1. Estimation des LOD et LOQ comme un multiple de l'cart-type d'un chantillon contenant une concentration peu leve du paramtre.
2. Evaluation des effets de matrice par dopage d'chantillon rels et plus particulirement sur des chantillons de sortie de STEP.
Dr. P. Carbonnelle
12/3/2015
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