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Study Sponsor: Issue Date: Document Reference No.: ELFATOCHEM IO-Jul-95 95/SAE6/0548/HT AR226-3022 Ready Biodegradability Author(s): H. Thiebaud English Translation of Report Summary for DuPont Chemical Solutions Enterprise 27-Jan-03 Company Sanitized. Does noi contain TSCA CB1 ELF ATOCHEM Levallois Applications Center 1. TECHNICAL SUMMARY The biodegradability study described in this report was effected using the operating procedure described in appendix C.4-C of the Directive 92/69/EEC. This protocol is in agreement with the Directing Outline N |kHft) 301 B of OCDE adopted on 17/7/92. Under the test conditions, the percent biodegradation o|^^^^^^^Hrovas 84 % in 28 days. During the time interval of 10 days following start of the biodegradation phase, the latter reached a level of 68 %. The substance can be considered to be easily biodegradable according to the Directing Outline 301 of OCDE. The substance did not show an inhibiting effect towards micro-organisms. A sterile abiotic control was effected : it showed that the substance does not disappear due to physical and chemical phenomena under the test conditions. .3<Mpany Sanitized, noteotitain TSCA '"R, ELF ATOCHEM S.A. D.C.R.D. Centre d'Appiication de LevaHois Service Analyse EnvEronnement tofrac Levaliois Ie: 10/07/95 Ref. document: 95/SAE6/0548/HT N de Sequential: 814020 ISSJUS Laboratoire accredits sous Ie n-1-0210 Reconnaissance de confonnite aux BPL de roCDE pat Ie effC en date du 813193. racandulte Ie 30(06(94 RAPPORT D'ETUDE N: 2876/95/A TITRE : DETERMINATION DE LA BIODEGRADAB1L1TE FACILE ESSA1 DE DEGAGEMENT DE CC>2 AUTEUR(S): H. THIEBAUD__________ RESUME DOCUMENTAIRE: ______ Determination de la biodegradabilite facile de la substance en suivant Ie mode operatoire decrit dans I'annexe C.4-C de'la directive / 92/69, et la Ligne Directriqe de I'QCDE 301 B (adoptee Ie 17/7/92). J 5' C^e- C^-J . p,^ p./ Os C/- L.f w s.-i^1" . ''' /'-.C'-Q -'. ' 's CEE Z C.-"- MOTS CLES: biodegradabilite aerobie ultime facile, 92/69/CEE, C.4-C, DESTINATAERE : M. DEVAUX (DCFS) Copies : Chef de Service, Auditeur Qualite, Responsable des Archives, Laboratoire d'ecotoxicologie Secretariat, Fichier TECH Service Ecotoxicite et Surete des Produits (DSEP) s^^ "?,R "" asify :"" [.'accreditation COFRAC atteste uniquement de la competence technique des laboratoires pour les essais couverts par ['accreditation. Cs raopor; comprend 1S pages e; 4 rsuilleis non pagines (buitenns d'anslyses). Company Sanitized. Does noi coniain TSCA C Ce aocument est Is propriete d'ELF ATOCHEM. II ne peut etre ni copie, ni communique a des tiers sans autorisation formells La reproduction de ce raoport d'etude n'est autorisee oue sous forms ds fac-simile onomaraDhiaue intearai RC4C2876.DOC Page 1/19 ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois RAPPORT D'ETUDE BIODEGRADABILITE FACILE ESSAI DE DEGAGEMENT DE CC>2 N D'ETUDE : 2876/95/A SOMMAIRE 1. RESUME TECHNIQUE 3 2. ASSURANCE QUALITE 4 3. SIGNATURES 5 4. IDENTIFICATIONS 6 4.1. Substance d'essai 6 4.2. Installation d'essais 6 4.3. Demandeur de I'etude 6 4.4. Calendrier 6 4.5. Archivage 7 5. OBJECTIF DE L'ETUDE 7 6. METHODE D'ESSAI 7 6.1. Introduction 7 6.1.1. Principe 7 6.1.2. References 8 6.1.3. Deviations 8 6.2. Materiel et produits 8 6.2.1. Materiel 8 6.2.2. Produits et reactifs 9 6.2.3. Substance de reference 9 6.2.4. Inoculum 9 6.3. Mode operatoire 9 6.3.1. Preparation des solutions 9 6.3.2. Conduite des essais 10 7. RESULTATS 11 7.1. Calcul 11 7.2. Resultats de I'etude 12 7.3. Clauses de validity de I'etude 12 8. CONCLUSIONS 12 9. ANNEXES 14 9.1. ANNEXE 1 - Schema de montage 14 9.2. ANNEXE 2 - Tableau de resultais et calcuis 15 9.3. ANNEXE 3 - Graphique de la degradation en fonction du temps 17 9.4. ANNEXE 4 - Milieu d'essai 18 9.5. ANNEXE 5 - Bulletins d'analyses 19 . Ce aosumer.' est Is propriecs d'L? ATOCHElv*. 1; ne peu'i are ni capis, ni communiqus a dss tiers sans autorisation fonnella. Ls reoroauciion de ce raDDon d'eiune n'sst autorisee aus sous rorme de fac-simi's photooraohiqus intearai..,tA ^O ' ' RC4C2S76.DOCDaae2/19 . iSew-P.a8w*"v'SSi""' wQ^ CO^ fSC^01 ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 1. RESUME TECHNIQUE L'etude de biodegradabilite decrite dans ce rapport a ete realisee selon Ie mode operatoire dealt dans ('annexe C.4-C de la Directive 92/69/CEE. Ce protocole est en accord avec la Ligne Directrice de I'OCDE ?301 B adoptee Ie 17/7/92. ----^ Dansjes conditions de I'essai, Ie pourcentage de biodegradation du ete de 84% en 28 jours. Dans I'intervalle de temps de 10 jours suivant Ie debut de la phase de biodegradation, celle ci a atteint un niveau de 68 %. La substance peut etre consideree comme facilement biodegradable selon les criteres enonces dans la ligne directrice 301 de I'OCDE. La substance n'a pas montre d'effet inhibiteur vis-a-vis des micro-organismes. Un temoin sterile abiotique a ete realise : il a montre que la substance ne subit pas de disparition due a des phenomenes physico-chimiques dans les conditions de I'essai. ySSi?^^111 TS^^' Ce aocumenrieeDsrioalaucDtrioonpridsetscde'EraLDFpoArTt Od'C6tHuEneMn. 'eIIsnSeaypteountseetsreonuiecosopiues. nfoirTcnoemdmeutnipa-useimaildeepshtoietorsgrsaaDnhsiaauueioirnitsesatrioaln. for-m slTleioSS ^^COini atn -' L " RC4C2876.D6Cpage3/19 ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levailois 2. ASSURANCE QUALITE La presente etude a ete realises selon les principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de I'OCDE. Le Service Analyse-Environnement du Centre d'Applicatipn de Levailois dispose d'une reconnaissance de conformite aux BPL emise par le Groupement Interministeriel des Produits Chimiques en date du 8 mars 1993 et reconduite a la suite d'une inspection realisee par le Comite Francais d'Accreditation, les 19 et 20 avril 1994, confomnement au decret n90-206 du 7 mars 1990, pour les domaines de competences suivants: - Etudes ecotoxicologiques sur les organismes aquatiques et terrestres. - Etudes portant sur le comportement dans I'eau, dans le sol et dans I'air ; bioaccumulation. Le laboratoire est accredite par le COFRAC pour certains essais du programme 262 Essais de determination de certaines proprietes intrinseques des substances chimiques : essais ecotoxicologiques, et est identifie sous le numero d'accreditation : 1-0210. L'Auditeur Qualite du Centre d'Application de Levailois precede a des inspections periodiques et a des verifications en vue: - d'etablir la concordance de I'etude avec tes Principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de I'OCDE, - ds s'assurer que les methodes, les modes operatoires et les observations sont correctement decrits dans le rapport d'etude et que les resultats indiques refletent avec exactitude les donnees ecrites de f'etude. Les dates correspondant a i'audit de cette etude sont donnees ci-dessous : ' '09/05/95 ; 09/06/95 : 04/07/95. L'Auditeur Quafite : D. TAISNE Date -/-f/(??-/9 F Signature ^^----^'^ - g^ C^~ " Cs document est ia prooriete d'ELF ATOCHEM. I! ne peut etre ni copte. ni camtnuniou0 e aes tiers sans autorisacion ronnelie-- rt'oeS^ Ls reoroduction ds ce rapDOrt d'etude n'esi autorises aus sous forme de fac-simlle ohotoaraohiaue mtsar^gf^fffSW " RC4C2B76.DOC page 4/1 S -.--xalWS"" v^9^ 'ft ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levaliois 3. SIGNATURES Nous, soussignes, certifions que les resuftats decrits dans ce rapport ont bien ete obtenus sous notre responsabilite dans Ie Service Analyse Environnement du Centre d'Application de Levallois, et refletent avec exactitude les resuftats obtenus lors de cette etude. Le Chef du Service Analyse Environnement: M. BOURALY Date Signature .^/^ ./ Le Directeur de I'etude : H. THiEBAUD Date A^^ S Signature ...ISO^' C-s nosumen'i es; Is propriet" d'LF ATOCHEM. II ne peut 6trs ni copis. ni communiquE e aes tiers sans auiorisation fcffif@'3' ^ ^ La reproduciion oe ce rapport d'etuas n'est autorises aue sous romis cie fac-simN Dhotoaraphiquwc^fl^ RC4C2876.DOC page 5/15 ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 4. SDENTiRCATiONS 4.1. Substance d'essai N d'enregistrement: 2876/95 Caracteristiques principales: Precaution d'emploi et de conservation : pcohiber Ie contact avec les yeux, la peau et I'inhalation de vapeurs. 4.2. instailation d'essais ELF ATOCHEM CENTRE D'APPLICATION DE LEVALLOIS SERVICE ANALYSE ENVIRONNEMENT 95 rue Danton 92300 LEVALLOIS-PERRET Directeur de I'etude: H. THIEBAUD Personnel impliaue dans I'etude : Ingenieur responsabie de i'etude : K. THIEBAUD Technicien charge de la realisation de I'etude : C. KAE Ingenieur charge des analyses : F. MANTISI Technicien charge des analyses : A. COUTY 4.3. Demandeur de i'etude M. DEVAUX(DCPS) Moniteur de I'etude : Mme BUREAU (DSEP) 4.4. Caiendrier - Approbation du plan d'etude par Ie. Moniteur de I'etude : 12/05/95 - Debut ds i'etude : 15/05/95 ^ ^ ^ m ^ 6 ^ ^ Ce ctocumen; est la oropriste d'ELF ATOCHEM. li ne peut 6tre ni copte. ni communiou" a des tiers sans autorisation iormeiie. LS reDroauEtiQn os ce raDpori d'stuae n'est autorisee oue sous tonne tie fac-simile DhotoorsDhiaus intearal RC4C2876.DOC page 6/1 S - a onfitalfi TSCA., .'-rafiftt ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois - Pin de 1'etude : 15/06/95 - Rapport d'etude : 10/07/95 4.5. Archivage Les substances etudiees sent conservees dans Ie Service Analyse Environnement pendant une duree de 5 ans au maximum. L'ensemble des documents de I'etude est conserve au moins 10 ans. 5. OBJECTIF DE L'ETUDE dL||BBJfHllpar L'objectif derotteetude^st de determiner la biodegradabifite aerobie ultime dite facile application du mode operatoire decrit dans I'annexe C.4-C de lmirective92w97CEE, qui est compatible avec la methode decrite dans [a Ligne Directrice de I'OCDE 301 B adoptee Ie 17/7/92. 6. METHODE D'ESSAI 6.1. Introduction 6.1.1. Principe Un volume connu de milieu mineral ensemence, contenant une concentration connue de substance a etudier (entre 10 et 20 mg/l de COD ou de COT) comme unique source nominate de carbone organique, est aere dans I'obscurite par passage d'air exempt de dioxyde de carbone sous debit controle. Les substances organiques dissoutes dans I'eau sont biodegradees par des micro-organismes chimio-organotrophes, qui les utilisent comme seule source de carbone et d'energie. La degradation est suivie par f'anaiyse du dioxyde de carbone produit pendant une periode de 28 jours et a des intervalles de temps intermediaires suffisamment courts pour determiner I'intervalle de 10 jours et Ie debut et la fin de la biodegradation.. L'activite de i'inoculum est controlee au moyen d'une substance de reference. Simultanement, on etudie les effets inhibiteurs eventuels de !a substance d'stude vis-a-vis de I'inoculum avec un melange de la substance de reference et de la substance d'etude. Une serie sterile permet egalement de verifier si la substance peut subir une degradation abiotique. pompany Sanitized. Does not coniain TSCA CBT C.s documsni est la p.'oprit d'ELF ATOCHEI/i. !i ns psui 6ire ni cooie. ni communiqus s aes tisrs sans amorisation iomislis. La reoroauction de ce raopori d'esuds r.'esi autorises aue sous tonns ds tas-simiie pnotoaraoniaue intears! RC4C2B76.DOC page 7/19 ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 6.1.2. References -Annexe de la Directive CEE/92/69 ; Partie C: Methodes de Determination de I'Ecotoxicite - C.4 Determination de la Biodegradabilite Facile, partie II : Essai de degagement de CC>2 (methode C.4-C). JOCE NT 383 A du 29/12/92. - Ligne Directrice de I'OCDE pour les essais de produits chimiques n301 B : Essai de degagement de CC2, adoptee par Ie conseil Ie 17 juillet 1992. - Plan d'etude du : 05/05/95 -Plan Qualite n5 : Biodegradabilite Facile : Essai de degagement de C02, edition 1, fevrier 1994. 6.1.3. Deviations La methode prevoit I'elimination du C02 du milieu dans les flacons en debut d'essai apres addition de I'inoculum et avant introduction des substances d'essai et de reference. Dans Ie cas present, la substance est diluee dans les flacons d'essai puis ('elimination du C02 du milieu est realisee par aeration des milieux apres addition de la substance et avant introduction de I'inoculum. En raison de I'incompatibilite entre les composes fluores, presents dans la preparation testee, et I'analyseur de carbone, II n'est pas precede a la verification experimentale du niveau de carbone inorganique en debut d'essai dans les flacons Ft. Cette analyse n'est realisee que dans les flacons Pb. La clause de validite decrite au IV.3.2 de la methode CEE C.4-C, precisant que la teneur en carbone inorganique (CI) de la suspension de la substance a etudier en milieu mineral au debut de I'essai doit etre inferieure a 5 % du carbone total, n'est pas verifiee. 6.2. Rftst6riel et prodmts 6.2.1. Materiel Appareillage courant de laboratoire d'ecotoxicologie et, notamment: - Centrifugeuse thermostatee : JOUAN CT 4-22 ; - Oxymetre, conductimetre, pH-metre : combine muitifonctions Jenway 3410 ; - Le schema de montage est represente en annexe 1. Pour chaque unite d'essai, il est constitue, d'amont en aval de : - pompe peristaltique GILSON a 4 canaux, -3 flacons pour le piegeage du C02 avec tube plongeur en verre fritte, successivement NaOH 5 M, NaOH 5 M et Ba(OH)2 0,0125 M - recipients pour essais : flacons en verre de 3 litres, - aoitsteurs maanetioues pour ies flacons d'essais. ^ ^ ^^^ - Sfiacons pouNe piegsage du COs. ^ Ce documen; ess is oropriete d'ELF ATOCHEIi/i. li ne peut 6tre ni copie. ni comrnunique a des tiers sans autorisation rorn'sliE LB reorodustiDn cis ce rapport d'Muoe n'sst auiorisee que sous rarme de fac-simlie phoioarapnique intenra;. RC4C2876.DOC page 8/19 ^ ^,n TSCA. Cl ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois A partir des pieges amont jusqu'aux pieges aval, les gaz circulent dans -des tubes en elastomere fluore faiblement permeable au CC>2: Viton, Norprene. - Burette de precision de 50 ml pour titration du Ba(OH)2. Afin de determiner Ie pourcentage de carbone de la substance (calcul du CC>2 theorique), 11a ete precede a une analyse elementaire (CHNOS) sur un appareil CARLO ERBA avec echantillonneur automatique et micro-balance SARTORIUS a lug. L'analyse du carbone organique et inorganique en solution au debut de I'essai est realisee au moyen d'un appareil MAIHAK TOCOR 100. 6.2.2. Produits et reactifs Tous les reactifs utilises pour la preparation du milieu sont de qualite "pour analyse". L'eau provient d'un appareil de production d'eau ultra-pure (ultrafiltration, echange d'ions, charbon actif) muni d'un dispositif de mesure de la resistivite. 6.2.3. Substance de reference Benzoate de sodium de qualite "pour analyse". 6.2.4. Inoculum L' inoculum provient d'effluent secondaire de la station d'epuration biologique urbaine de Versailles. L'effluent, preleve la veille de I'ensemencement des flacons, est centrifuge a environ 20C pendant 20 mn a 4000 g ; Ie culot est repris dans un volume de milieu d'essai tel que I'on ait un facteur de concentration d'environ 100 par rapport a Cechantiilon preleve. Cet inoculum est preconditionne (aeration) jusqu'a ensemencement des flacons. Une numeration sur echantilfonneur pour bacteries totales Totalcount Millipore montre que pour la presente etude, I'inoculum concentre presentait une concentration de 1,7 x 105 bact/ml, ce qui donne 1,7 x 103 bact/ml dans Ie milieu ensemence final (1% d'inoculum dans Ie milieu d'incubation). ' 6.3. Mode operatoire 6.3.1. Preparation des solutions Le milieu d'essai est prepare selon les indications de ('annexe 4. Solutions de piegeage et de dosage : Soude 5 M, hydroxyde de baryum 0,0125 M, acide chlorhydrique 0,05 M. Substances d'essai ef de reference: Le pourcentsge de carbone dans ia substance d'essalJI^lHHI--M determine Ce document esi is proprit ri'ELF ATOCHEM. I! ne peut Stre ni copie. D; communique a aes tiers sans auiorisation fonnslie. La reoroauciion de CE raoport delude rrest sutorises aue snus forms ae {ac-simile onotograDhiaue intearal. RC4C2S76.DOC page s/is RanpaMyS'anlBzea. TOesTOl-eoWaIn TS-CA-CBI ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois par analyse elementaire (bulletin d'analyse en annexe 5), est de 33,25 %. La concentration de ia solution mere est calculee pour que Ie volume de Iran ;fe-i apporte une concentration en carbone dans I'erlen fixee, entre 10 et 20 mg COT/. Dispersion de /a substance : Des essais preliminaires ont montre que la substance pouvait etre diluee de fag sn homogene dans I'eau. Une solution mere a 6,77 g/l est preparee puis 10 ml de ce :te solution sont ajoutes a 1,5 litre de milieu mineral dans les flacons d'essai, s< .us agitation. deSUmU&dans La solution Ie milieu d'essai a 45,1 mg/l correspor.j a 15 mg COT/I, sfeit,pour un volume de 1500 ml par flacon, une masse theoriqu de C02 de 82,7 mgCOzTh. Une solution mere de benzoate de sodium (57,7 %C) dans Ie milieu d'essai c 3,9 mg/ml, est utilisee a raison de 10 ml pour 1500 ml de milieu, soit 39 mgCOD. soit une masse theorique de COg de 62,5 rngCOgTh. Dans Ie flacon de controle d'inhibition, des quantites equivalentes de substance d'essai et de reference sont introduites. Pour ce flacon, la masse theorique de 303 est de 165,2 mgC02Th. 6.3.2. Conduite des essais Les essais sont realises dans des flacons de 3000 ml, a raison de : Essai Blanc Controle inoculum Blanc Systeme Sterile Ft1. Ft2 Fb1,Fb2 Fc Fbs Fs 15ml 15m! 15ml 10ml 10ml 10ml 10ml 10ml Q.S.P. 1500 ml q.s.p. 150C ml q.s.p. 150C ml q.s.p. 1500 ml q.s.p. 1500 ml | Q.s.p. 150C m! La solution mere de substance est versee goutte a goutte dans Ie milieu mineral contenu dans les flacons d'essai Ft et Pi, sous agitation. La substance de reference est ajoutee dans les flacons PC et Pi. L'aeration de ces melanges par de I'air exempt de C02 est demarree afin de purger Ie COs, pendant une nuit. L'inoculum preconditionne est ajoute et les pieges de COg en aval des flacons d'essais sont branches. Ces pieges contiennent 50 m! de solution d'hydroxyde de baryum 0,0125 M. Ce document es: is oropriere d'=-L? ATOCi-EIVi. II ns peut Sire ni copie. ni eornmunioue a ass tiers sans auiorisation fQrmeli6._ ., ..,.., Ls reoroduciior. ae ce raDDon d'etude ness eutonsee aus sous tonne de isc-similE pnotoaraDhiaue imenES;, --.,"""""?(! it eor1^^^ ^" DR--i-'4<^^2oc8T/oa!.~Di'O-\?C--rp>a^g,er,.1<0n/M1f5- rf.c--iSa^W-~_t-t--^'-.?MTM.iw"SfSKQ., U^B-'1" ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois L'incubation a lieu dans une salle thermostatee a 22 2C. Le debit d'air a travers les flacons d'essai est mesure en debut d'essai et en cas de changement de tuyau ou de piege amont. Le dosage du COz degage et piege est realise a des intervalles determines par la vitesse d'avancement de la reaction. Le dioxyde de carbone reagit avec I'hydroxyde de baryum pour donner du carbonate de baryum insoluble. Lorsque le precipite blanc de carbonate de baryum apparaft dans le second piege (apres le flacon d'essai), les 3 pieges sont remplaces par des pieges de solution fraTche d'hydroxyde de baryum. Les pieges retires sont doses. Au dernier jour de I'essai, apres renouvellement des pieges, les flacons d'essai sont acidifies au moyen de 1 ml d'acide chlorhydrique concentre pour degager le COg dissous. Au bout de 24 heures celui-ci est mesure. La titration de I'hydroxyde de baryum restart est faite par neutralisation au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique, en presence de phenolphtaleine. 7. RESULTATS 7.1. Calcul Les resultats obtenus sont rassembles dans les tableaux en annexe 2. Sur la premiere page sont portes les volumes V d'HCI de neutralisation du Ba(OH)2 restart dans les pieges. Le nombre m de mg de COs capte est donne par I'equation : m=1,1x(50-V) La masse de C0>2 produit par la degradation de la substance est calculee a partir du CO;? issu des flacons Ft deduction faite du C02 produit par I'inoculum. II en est fait de meme pour les flacons Fc st Fi Les quantites de CC>2a chaque dosage et cumulees sort indiquees sur la seconde page de I'annexe 2, ainsi que les pourcertages de degradation. A partir du cumul du C02, la degradation est calculee selon I'equation generale suivante: % d, e, s r a d, a t . i o n = ^ me CO, produit ----------^-----l--------------- v- ,10--0 j^^ me COT ajoute dans I'essai x-- Le denominateur de I'equation exprime le COg theorique pouvant se former a partir de la quantite de carbone organique introduite. La fiole de. degradation abiotique (sterile) Fs permet de determiner si une degradation due a des phenomenes physiques ou chimiques a lieu. EHe permet ainsi de verifier les hypotheses de depart quart a la stabilite de la substance tors de I'essai. La formule de catcul de ia "degradation abiotique est la suivante : Ce flocumsns esi is oroDriete d'ELF ATOC-iEh/;. II ne peut are ni copie, ni cornrnunjqu6 s des tiers sans autorisaiion formslie Le reDroouciion ds ce rasiBort d'tuae n'es; autorisBS oue sous tonne a'e RC4C2876.DOCpage11/19 tac-simile phoioaraohigus inteare!. _^---- - s----^,.rfti^ea;IS6esTOtWnw^ rSf&'RBi ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois ... CO, produit par Ie flacon sterile apres 28 jours (mg) % de degradation abiotique = ----2J-------'--------------------r-------J------S^ x 100 CO,Th(mg) Le graphique en annexe 3 montre Ie pourcentage de degradation en fonction du temps pour les series Ft, Fc et Pi (fioles d'essai, de reference et d'inhibition). 7.2. Resultats de i'etude ^^^^^^9 Le niveau maximal de degradation de^^^^^^^^U^t de 84 % en 28 jours. ^^^^^^^^^^^^^^^f La phase de latence pour la degradation de la substance (temps ecoule entre le debut de I'essai et 10% de degradation) est d'environ 3 jours et le pourcentage de degradation au bout de f'intervalle de temps de 10 jours suivant cette phase de latence est de 68 %. La fiole Fs (sterile) montre qu'aucune degradation, due a des phenomenes physiques ou chimiques, n'a eu lieu. 7.3. Clauses de validite de I'etude La difference entre les valeurs extremes obtenues pour Ft1 et Ft2 est inferieure a 20 %. Le pourcentage de degradation de la substance de reference (Fc) est superieur a 60 %en 14 jours. Dans la fiole Fi, la degradation de la substance de reference est superieure a 25 % au cours des 14 premiers jours : la degradation de la substance de reference n'a done pas ete inhibee par la presence de la substance d'essai. Ls quantite cumulee de CO^ degagee par les flacons Fb est inferieure a 40 ma/l de milieu, soit 60 mg. La teneur en carbone inorganique (Cl) dans la suspension de la substance a etudier en milieu mineral (flacons Ft) au debut de I'essai n'a pas pu etre determinee. Le critere me'ntionnant que cette teneur dojt etre inferieure a 5 % du carbone organique total n'a pas ete verifie. La teneur en Cl dans les flacons Fb est de 0.27 mg/! (annexe 5). 8. CONCLUSIONS L'etude de la biodegradabilite aerobic ultime facile duj|||BBjBMB|5elon la methode de I'annexe C.4-C de la Directive 92/69/CEE, rrrontrequecettesubstance presente un niveau maximum de biodegradation de 84 % en 28 jours. Le pourcentage de degradation au bout de I'intervalie de temps de 10 jours suivant la phase de latence est de 68 %. Ce document est !a propriete d'E_? ATOGHEM. I! ne peut @tre ni copie. ni communique s aes tiers sans autorisaiion formellE ^..^^-^^iST^i^^Oo^'fto^0^^ yv' i-a reDroauctior, oe ce raDDort d'eiuae nest amoris6e oue sous fonne de fac-similE pnotoaraphiaus inieorel .__^------ , >-^ RC4C2876.DOCpage12/19 fS'SSSStSin^ SiSWw-^' '" tea-' -fq^fc ^l?i' ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois Selon les indications de la Ligne Directrice de I'OCDE 301, une substance est consideree comme facilement biodegradable selon cette methode si un niveau de 60 % de degradation est atteint dans les 10 jours suivant Ie debut de la phase de degradation (laquelle debute lorsque 10% du COT a ete biodegrade). Ces 60 % doivent etre atteints dans la periode d'essai de 28 jours. Selon ces criteres, IeJ|HBBBH||peut etre considere comme facilement degradable. ^ J liiaBPWy^81"111* Cs aosumsnt est is Drooriete tfEL? AT03HEM. II ne peut Sirs ni copie, ni communiqu0 a des tisrs sans auiorissron formelie. Ls reorQDuciiDn oe cs raooort d'etude n'est suionsee aue sous fonne as fac-simile pnotonraDhlsue intaarai. vsxastWiAVO^ RC4C2876.DOC page 13/19 ^BfcT' ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois 9_ANNEXES 9.1.ANNEXE 1 - Sch6ma de montage Pompe peristaltique -\. Ba(OH)2 0,0125 M Agitateur magnetique <- ^ 0 Ba(OH)2 0,0125 M Melange reactionnel Ba(OH)2 0,0125 M Ce dociiment est la proprtete d'ELF AlOCHEM. II ne peut 6tre nl copte, nl communlqu6 & des tiers sans autorlsatlon formelle. Ln reproduction de ce rapport d:auda n'est autorlste que sous forme de fac-slmite photographlquaIntegral RC4C2876.DOC page 14/19 ELF ATOCHEM Centre d'Appiication de Levallois 9.2. ANNEXE 2 - Tableau de resultats et caicuis BIODEGRADAB1LITE FACILE Essal de degagement de C02 92/69/CEE: C.4-C N' d'etude ^87a8gA > Substance eludiee ^^^^^^^WJ Substance de reference eenzoate de sodium Substance etudiee Substance de reference S6rie inhibition mg %C rngcarbone 67,7 33,3 22,5 38 57.7 22,5 45,0 mgC02th. 82,7 82,5 1652 VOLUME HCL (ml) Joinr 0 2 E S 12 16 2C3 233 2!S 29 Vba Baryte 0 25,0 25,0 24.E 25.C 25.C 25.C 25.C 24.E3 24,7! 24,63 24,8 nombre de pieges : t t 4 3 3 3 3 : 3 3 Vb Fb1 piegel 0,0 36,1 23.8 34,4 36,< 36,-! 36,5 W 23.7T 23,1 235 24,6 piege2 0,0 36,8 24.3 36,0 37.1 37,1 37,1 24,5 24.4 24.0 242 24.6 ffS?3.,,,, TOTAL .A0 24.5 24.6 24,4 24.8 24.G 24,7 24.7 24.6S 24.4 245 24,7 0,0 97,4 72,7 94,8 98,3 98,3 38,3 72,6 72,77 71.5 72,2 73.9 Fb2 piegel 0,0 35,2 23,9 33,2 34.1 36,4 34,1 23,2 23,6 23,5 23.1 24.5 piege2 0.0 38,0 24.5 37,1 395 37,1 385 24.5 24,2 242 24.1 24,7 MoyenneFb piege3 '0,0 24,7 24,7 24,3 24,8 24,8 24,7 24,7 TOTAL"'" 0.0 97.9 73.1 94,6 98,4 983 97,7 72,4 0.0 97.7 72,9 94,7 98,4 98,3 98,0 725 24,8 72,6 72,7 24,3 72.0 71,8 24,5 71,7 72.0 24.8 74,0 74,0 Vt Ft1 piegel piege2 0,0 35.4 21,6 17.6 30,6 33,9 33,9 21.3 21,6 225 21,6 24,0 0.0 36.5 23.7 285 34.7 36,0 36.0 23,6 23.7 24,0 23,6 24.4 "^SS3 TOTAL 0.0 24,4 24,4 21,3 23,8 24,4 24,4 24,4 24.6 24.0 24,4 24,6 "0:0 '"'93,3 69,7 67,4 89.1 94,3 943 69,3 69.9 70,5 ""ra;6 73,0 Ft2 piegel 0,0 3S.4 21,6 17,3 302 33,3 32.8 19.6 21.8 21,5 20.0 23,7 piege2 Oft 35,4 23,5 28.7 34.7 35,9 35,9 23.1 23,4 23,4 23.0 24,5 piege3 TOTAL""""" 0,0 243 24,5 21,3 23,8 243 24.4 243 24.4 24.4 24,1 24,5 "0;0 """96,3 ""6',6 ""673 ""'68.7 ""'58,5 93.1 67,0 69,6 """69,3 '67,1 '""723 MoyenneFt 0,0 963 69,7 67,4 88,9 93,9 93,7 682 69,8 eas 68,4 72,9 Vc Fc1 piegel 0,0 24,4 16,2 23.0 33,6 34,9 34,6 222 22,7 23,4 22.3 23,6 piege2 0,0 31,0 20.5 31,1 35.9 36.5 36,4 24.0 24.0 24,3 23.6 24.3 piege3 TOTAL 0,0 22,4 """77;8 " 0,0 22,7 22,5 24,1 59.4 ""'76,6 '""93,6 24,6 96,0 24,3 95,3 24.6 703 242 70,9 24,4 72.1 24,4 24,7 70,5 '""72.6 Fc2 piegel 0,0 plage 2 0,0 piege3 TOTAL 0,0 "o;6 "awA" i)N/A N/A M/A SN/A #N/A N/A ffN/A N/A N/A W/A MoyennePc 0.0' 77.8 59.4 75,6 33,6 95.0 95.3 70.8 70,9 72,1 705 72,6 Vi PI piegel O.UI 22.9 13.9 10,0 339 335 33.6 20.8 21.1 223 22.6 24.2 piege2 . piege3 TOTAL"""" 0.0 30.5 20,4 22,8 34,3 35,8 36.0 23,4 23,5 23,8 24,0 24,6 o.o[ 21.8 23,0 18.3 23,6 24,3 24,4 24.3 24.3 243 24,5 24,6 ,%>! 75.2 573T--51-1 87,8 93,6 94.0 685 ""68:9 70,9 '71;? 73,4 Vte Us =t!S . PS piegel piege2 T"MOT6A-3L............ piege 1 U.U 36,7 0,0 37,1 0,0 24.6 "Ofl" --96,4 0,0 36,7 24,6 24.8 24.8 743 24,4 35.9 S7.1 24,6 98.6 34.1 37,5 375 24.9 99.9 372 373 37,3 24,9 ' 995 37.1 37,4 37.4 25.0 99,8 37,4 243 24.7 24.6 24.9 24.8 24.9 '74,4 ""74,5 24.3 24.1 24.5 24.5 24.6] 24.6 24,el 24.6 -737 ""73,7 23,5 242 24.6 24.7 24.8 ""74.T 24,7 piege2 ilege 3 0.0 37.1 24.7 39,7 37i4 37,5 37,4 24,5 24,7 24,6 24.5 24.7 op 24.5 2431 24,5 24,9 245 24,8 24,7 24,8 24,7^ 24,6 24.7 TOTAL"""' 0,0 98,3 73,91 98.4 99.5 99,5 99.6T 735r 73,6| "723I733 74,1'| aocumsni est la Droorieie d'ELF ATOCHEM. ISne peut are ni copie, ni communique s des tiers sans auiorisaiion rormelie cN La reDrDduciior. ae ce raopon d'etuae n'sst auiorisee cue sous forms ds iac simil0 ohotoaraohiaue in .SsBWr^'' RC4.C2876.DOC page 15/19 a.i3t)e8Wol<;ania5nT5CA ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levallois BIODEGRADAB1UTE FACILE Essai de degagement de C02 92/69/CEE: C.4-C |C02 H" ifetude WSSSA Substance audtee |------------ Substance de reference: Benzoatede sodium (mg) /jour Jour 0 1 2 1,r(Vba-Vb) 1,1"(Vba-Vb) 1,1-(Vba-Vb) 1,r(Vb-Vt) Pb1 Fb2 MoyenneFb Ft1 0 2,9 2,5 0 2,3 2,1 0 2,6 29 0 1,5 3.5 1. "(Vb-Vt) 1, "(Vb-Vt) Ft2 Moyenne Ft 0 1.5 3.6 0 1.5 3,6 1, "(Vb-Vc) Fe1 1, (Vb-Ve) Fc2 0 21,8 14,9 0 ftNIA N/A 1. (Vb-Ve) 1, (Vb-Vi) 1,1-(Vbs-Vs) itoyenneFc n Fs 0 21.8 14.9 0 24,7 17,2 0 0,1 0,3 5 4.8 5,1 4,9 30.0 30.1 30,1 19,9 HEN/A 19,9 48,0 0,2 7 1.9 1,8 1,8 102 10,6 10,4 53. SNIA 5,2 11,6 0,4 9 1,9 1,9 4,4 53 4,8 2,5 N/A 2,5 5.2 0,0 12 15 2,5 22 4,1 5,4 4,7 3,0 #N/A 3,0 4,4 03 16 2,6 2,9 2ft 3.5 6,1 4,8 1,9 #WA 1.9 4,4 1.0 22 2,3 2.3 3,0 3,4 32 1,9 1S>1/A 1,9 4,1 1.0 23 2,9 2,3 2,6 1.4 2,7 2,0 -0,4 SN/A -0,4 0,9 1.0 28 2,4 3,0 2,7 2.6 5.3 4,0 1.6 ifN/A 1,6 0,9 0,4 29 0,6 0.4 0,5 1,0 1,3 1,2 1,5 N/A 1,5 0,6 0,0 |C02 cumute (mg) Jour U 2 7 9 12 16 20 23 28 29 Fbl Fb2 Moyenne Fb Ft1 Ft2 Moyenne Ft u.u 29 5,4 10.2 12,1 14,0 15.8 185 20.7 23,5 26.0 26.5 Off 2,3 4,4 9,5 11,2 13,1 15,6 18,5 20,8 23,1 26,1 265 0.0 2,6 4,9 9,8 11,7 13,5 15,7 18.5 20,7 23,3 26,0 26,5 .0,0 1,5 5,0 35,0 452 49.6 53,7 572 60,2 61,5 642 65,2 0,0 1.5 5.1 35.3 45.9 51,2 56,5 62,6 65,9 68.6 74.0 752 0,0 1,5 5,1 35,1 455 50,4 55,1 59,9 63,1 65,1 69,1 702 Fe1 0,0 21,8 36.7 56,6 61,8 64.4 673 69,2 71,1 70,7 72,3 73,6 Fc2 0,0 <WA tWA N/A SNIh #N/A 1/A ffWA #N/A N/A SN/A SN/A Moyenne Fc 0,0 21,8 36.7 56,6 61,8 64,4 67.3 692 71.1 70,7 723 73,8 ;! 0,0 24.7 41,9 89,8 101,4 106,6 111,0 115,4 119,5 120,5 121,4 122.0 ^ 0,0 0.1 0.4 0.7 1.1 1,1 1,3 2,3 3,3 4,3 4.7 4.7 [DEGRADATION (%) Jour Ft1 Ft2 Moyenne Ft Fe1 Fc2 Moyenne Fc R Fs 0 1 2 5 7 9 12 16 20 23 28 29 0 2 6 42 55 60 65 69 73 75 78 79 0 2 6 43 55 62 68 76 80 83 89 91 0 2 6 43 55 61 67 72 76 79 84 85 0 26 44 69 75 78 82 84 86 86 88 89 0 1/A SWA 1?N/A #N/A SN/A #N/A WI/A #N/A SN/A <?N/A W/A 0 26 44 69 75 78 82 84 86 86 88 8S 0 15 25 54 61 65 67 70 72 73 73 74 0 0 1 -' 1 1 2 3 4 5 6 S 3= documsn: ss; ia oropriet' d'ELF ATOCHEM. li ns pBirt Stre n; copis, ru cornmuniaus s ass tiers sans auionsatian formelie. i-s reproBietion de cs raooor; d'etuas n'es; autonse gue sous forms de lac-simite Dhotoaraohiaus inteora'. RC4C2876 .DOC page 16/18 D.o_es""'', ^f^ag?^""-- <^_ "^ ^ ELF ATOCHEW1 Centre d'Application de Levallois -93^AjNNEXEALGra^hjI:lue.de la ^gi^M0!! ^Tgp'^^gQ.^.'jjgi'LPg. -----..--------------------------------------------------:-------- Biodegradabiiit6 "facile" : Essai de degagement de C02 Forafac 1203 100- r1 -- 90- --| --I 2 6 0'7CStti?o/r* 80 - S? 70- 60- 50- --'X tl- -"' --.-X ....-- ^-^4 ^ .,,.- ^c~-- -..,-.: ^.- ^" 1 40. ' ill 0 30- ------ <--ri ^ 20- / -- ^ 10- "../ ^ -^ 0 --- 0 5 1 0 ^ tes; "--X 1 5 ---X -- --x ---.. 5J. -- 20 r?5 Te mp s(jours) << m 1 Bb 0 0 8 1 0 S 1 0 S ......Q..... pf] ....e>......Ft2 --------MoyenneR ....x...-Fc1 --D--Fi ----Fs Ce docinnenl est la proprias d'ELF ATOCHEM. 11ne peut are nl copte, nl communlquS a des tiers sans autorteatlon formelle. La reproduction de ce rappoit d'6tude n'est autorlsee que sous forme de fac-slmlte photographlqueIntegral. RC4C2876.DOCpage17/19 .",,,,< i^ ^ - ^ ELF ATOCHEM Centre d'Application de Levaliois 9.4.ANNEXE 4 - Miiieu d'essai Le milieu d'essai est realise a partir des solutions suivantes: Solution a Dihydrogenophosphate de potassium anhydre (KH2P04) Monohydrogenophosphate de potassium anhydre (K2HPC4) 8,5 g 21,75 g Monohydrogenophosphate de sodium dihydrate (Na2HP04,2H20) 33,4 g Chlorure d'ammonium (NH4CI) 0,5 g Eau ultra-pure, q.s.p. 1000 ml Le pH de ce melange est de 7,4 Solution b 22,5 g de sulfate de magnesium heptahydrate (MgS04,7H20) dans 1000 ml d'eau ultra-pure. Solution c 27,5 g de chlorure de calcium anhydre (CaCl2) dans 1000 ml d'eau ultra-pure . Solution d 0,25 g de chlorure de fer(lll) hexahydrate (FeCl3,6H20) dans 1000 ml d'eau ultrapure. Cette solution est preparee le jour du debut de I'essai Pour 1 I de milieu, ajouter a 800 ml d'eau ultra-pure : 10 ml de solution a, 1 ml de chacune des solutions b a d et completer a 1000 ml avec de I'eau ultra-pure. ;e Do=ijment es; IE croDriete tf'ELF A7GCH51'/,. I; ns oeut Stre ni copis, n; communiaue a des tiers sans sutorisauori fonnelie. s-s renroauctbn oe cs raooort d'etude n es; amonsee aue sous forme dE isc-simii" Bhoiogranniausji^ea RC4C2S76.DOCpase18/19 ^^St'S81" ELF ATOCHEM Centre d'AppIication de Levallois 3.5.ANNEXE 5 - Bulletins d'analyses Cette annexe est constituee de 4 feuillets non pagines a la suite de la presente page. ------. Cs nocumeni es; is proDrist d'ELF ATOCHEti'.. II ne peut 6tre ni copie. ni communiaue s des tiers sans autorisation formejig--^;... -..-;?;>.,, Ls reprodusiiori de ce rapDort d'6tuae n'esi sutonsee aue sous Tonne ds ias-simile pnotographiaue.iriSagrei--'- '-' ';'' "; ' RC4C2876.DOCpage19/19