Document 9Jb1vQOY09Mmrza08dOBg4ZQp
Arrt du gouvernement wallon allouant une subvention au Groupement d'Intrt Scientifique wallon de Rfrence pour la qualit des EAUX (GISREAUX)
RECHERCHE DE PERTURBATEURS ENDOCRINIENS ET D'AUTRES SUBSTANCES D'INTRT RCENT DANS LES EAUX EN VUE DE LA PROTECTION DE LA SANTE PUBLIQUE ET DE L'ENVIRONNEMENT
PROGRAMME DE RECHERCHE BIODIEN
ANNEXE 10 RESULTATS POUR LES TESTS DE SCREENING
ER-CALUX
Rapport N : 2018-01690 Cette annexe contient 2 rapports
Remarque : Ce rapport ne peut tre reproduit, sinon en entier, sauf accord du GISREAUX Rapport 2018-01690
Universit de Lige
Dpartement des Sciences des Denres Alimentaires Analyse des denres alimentaires Marie-Louise Scippo, Professeur
Rapport d'essai n1 (version n2) concernant l'analyse d'chantillons d'eau par la mthode CALUX (ER et AR) dans le cadre du projet BIODIEN la demande de Madame Carole CHALON (ISSeP)
Rfrence : bon de commande numro 151686
Date de rdaction du rapport : 22 janvier 2016
Priode d'analyse des chantillons : 1/12/2015 au 15/12/2015 et 04/01 au 09/01/2016
1. Echantillons soumis l'analyse
Date
de
rception
10/11/2015
Nature de l'chantillon et
rfrence de l'chantillon
-
400 (11/08/15)
-
2280 (11/08/2015)
-
12409 (19/08/2015)
-
3960 (25/08/2015)
-
1670 (01/09/2015)
-
4130 (15/09/2015)
-
3621 (23/09/2015)
-
5720 (29/09/2015)
-
Blanc eau (EDS)
-
Contrle E2 (10 ng/L)
-
Contrle DHT (10 g/L)
Analyses demandes
Analyse CALUX (ER et AR) pour les activits agonistes et antagonistes
Informations fournies par le demandeur : 2 litres d'eau ont t concentrs dans 100 1_, de DMSO. Nous avons reu 50 L de cet extrait.
2. Mthodologie
Les chantillons ont t analyss au moyen du test cellulaire CALUX-ER et CALUX-AR (cellules MCF7 et T47-D, respectivement, gntiquement modifies avec le gne de lucifrase de luciole comme gne rapporteur, sous le contrle d'un lment de rponse au rcepteur des hormones oestrognes et andrognes, respectivement). Test de l'activit agoniste : les cellules ont t exposes durant 24h (ER) ou 48h (AR) 5 dilutions de chaque chantillon (extrait non dilu et 4 dilutions semi-logarithmiques). Test de l'activit antagoniste : les cellules ont t exposes durant 24h (ER) ou 48h (AR) ces mmes dilutions de chaque chantillon en prsence d'une concentration en E2 (17(3-oestradiol) ou en DHT (dihydrotestostrone) correspondant PEC50. Dans les deux cas, la concentration finale en DMSO dans le milieu de culture tait de 0,4%. Le contrle positif E2 a t test dilu 160 fois et 320 fois, et le contrle positif DHT a t test dilu 1000 fois et 2000 fois. Le blanc de procdure a t test non dilu. Chaque solution a t teste en triple (test ralis en plaques 96 puits). Une courbe de calibration en E2 ou DHT (pour les tests d'activit agoniste) ou en ICI (fluvestrant) ou flutamide (pour les tests d'activit antagoniste) a t ralise sur chaque plaque.
Quartier Valle 2, Avenue de Cureghem 10 (Bt B43b), 4000 LIEGE
Tl. : 32 4 366 40 46 - Fax : 32 4 366 40 44
Email :
@ulcbac.be - Website : http://www.dda.ulg.ac.be
Page 1 sur 14
Rsultats
Les cellules exposes aux extraits d'chantillons d'eau non dilus, dilus 3 fois et dilus 10 fois ont montr de la cytotoxicit observable au microscope. Dans le test ER-CALUX, l'extrait dilu 30 fois n'a pas montr de cytotoxicit observable au microscope, mais la concentration mesure (ramene en ng eq. E2 / litre d'eau) avec cette dilution tait infrieure la concentration mesure la dilution 100 fois, ce qui semble indiquer une lgre cytotoxicit cette dilution galement.
Le tableau ci-dessous reprend les conclusions concernant les activits agonistes et antagonistes des extraits d'chantillon d'eau vis--vis du rcepteur ER. Pour l'activit agoniste vis--vis du rcepteur ER, le tableau reprend une estimation du contenu en quivalents E2 (en ng/litre d'eau) calcul partir du rsultat obtenu pour la dilution 100 fois de l'extrait. Pour l'activit agoniste vis--vis du rcepteur AR, le tableau reprend une estimation du contenu en quivalents DHT (en ng/litre d'eau) calcul partir du rsultat obtenu pour la plus grande dilution (indique entre parenthse) donnant une rponse calculable. Cette concentration en quivalents DHT est donne titre indicatif tant donn la cytotoxicit des extraits non dilus et dilus 3 fois et 10 fois.
Pour l'activit antagoniste (vis--vis de ER ou AR), un + indique une possible lgre activit antagoniste (mais considrer avec prudence tant donn la cytotoxicit des extraits) tandis qu'un - indique que l'extrait n'induit pas d'activit antagoniste.
Echantillon
400 (11/08/15) 2280 (11/08/2015) 12409 (19/08/2015) 3960 (25/08/2015)
ER-CALUX
Activit agoniste ng/L quivalents
E2
Activit antagoniste
1,6
-
1,2
-
0,3
-
-
+
AR-CALUX
Activit agoniste ng/L quivalents
DHT
Activit antagoniste
192
-
(dil 1/10)
19
-
(dil 1/3)
3
-
(dil 1/1)
-
?
1670 (01/09/2015)
0,8
4130 (15/09/2015)
0,4
3621 (23/09/2015)
0,6
-
11
-
(dil 1/3)
-
1
-
(dil 1/1)
-
-
-
5720 (29/09/2015)
- = pas d'activit dtecte ; de la cytotoxicit
1,2
-
15
-
(dil 1/3)
+ = activit dtecte ; ? : interprtation difficile en raison
Les annexes 1 et 2 montrent respectivement le tableau des donnes brutes et calcules et les figures indiquant les courbes de calibration et les rsultats obtenus pour chaque extrait. Le blanc de procdure a t analys sur 4 plaques diffrentes dans les tests d'activits agonistes et 2 plaques diffrentes dans les tests d'activits antagonistes ER. Aucune activit agoniste ou antagoniste n'a t observe pour le blanc de procdure, ainsi qu'aucune cytotoxicit.
Page 2 sur 14
Le rsultat moyen obtenu pour les contrle E2 et DHT, analyss 4 fois, est de 9,1 2,4 ng/L (E2) et 23 8 g/L (DHT : rsultat surestim !). Lige, le 22 janvier 2016 Marie-Louise Scippo Responsable du laboratoire d'analyse des denres alimentaires
Page 3 sur 14
Annexe 1 : tableau de donnes
ER-CALUX
Echantillon/dilution
Plaque 1 Blanc
Contrle dil 1 Controle dil 2
400 1/100 400 1/30 400 1/10 400 1/3 400 1/1
2280 1/100 2280 1/30 2280 1/10 2280 1/3 2280 1/1
Activit agoniste
Rponse relative
(%)
Conc en Eq. E2 (pg/puits)
Conc en Eq. E2 (ng/l)
1,7
0,03
0,002
37,6
0,42
8,3
57,1
0,97
9,7
27,1
0,26
1,6
36,2
0,39
0,7
26,1
0,24
0,2
-6,9
na
na
-26,3
na
na
20,7
0,18
1,2
39,6
0,45
0,8
38,7
0,44
0,3
4,8
0,05
0,01
-23,9
na
na
Activit antagoniste
Rponse relative
(%)
95,2 nd nd 94,3 88,3 33,2 -28,6 -57,1 77,9 96,8 63,2 -8,2 -53,4
AR-CALUX
Activit agoniste
Rponse relative
(%)
Conc en Eq. DHT (pg/puits)
Conc en Eq. DHT (ng/l)
1,0
na
na
34,6
151
18875
46,4
269
16825
0,1
na
na
7,6
na
na
49,3
307
192
nd
nd
nd
35,6
159
10
-1,8
na
na
-0,9
na
na
2,5
na
na
24,3
102
19
44,2
311
19
Activit antagoniste
Rponse relative
(%)
nd nd nd 87,5 144,6 243,2 262,5 76,1 54,6 72,2 83,1 119,7 83,9
Cytotoxicit observable au
microscope
non non non non non oui oui oui non non oui oui oui
Plaque 2
Blanc
3,3
0,03
0,002
Contrle dil 1
22,2
0,27
5,4
Controle dil 2
55,3
1,32
13,2
12409 1/100
5,4
0,05
0,3
12409 1/30
9,4
0,09
0,2
12409 1/10
5,4
0,05
0,03
12409 1/3
-11,3
na
na
12409 1/1
-30,4
na
na
3960 1/100
-1,7
na
na
3960 1/30
-6,0
na
na
3960 1/10
-15,3
na
na
3960 1/3
-25,3
na
na
3960 1/1
-33,4
na
na
Plaque 3
Blanc
1,9
0,03
0,002
Contrle dil 1
37,0
0,47
9,336
Controle dil 2
54,1
0,96
9,595
1670 1/100
13,6
0,13
0,8
1670 1/30
31,2
0,36
0,7
1670 1/10
32,5
0,38
0,2
1670 1/3
5,6
0,06
0,01
1670 1/1
-22,1
na
na
4130 1/100
7,5
0,07
0,4
4130 1/30
11,6
0,11
0,2
4130 1/10
9,7
0,09
0,1
4130 1/3
-13,6
na
na
4130 1/1
-24,6
na
na
88,3 nd nd 88,4 73,5 32,5 -16,4 -52,9 64,5 33,6 -16,3 -43,6 -60,4
nd nd nd 97,8 80,2 49,0 -13,2 -49,3 79,5 79,8 43,8 -21,3 -43,8
-0,4
na
na
34,4
193
24087
45,7
333
20788
0,2
na
na
-0,2
na
na
1,7
na
na
6,7
na
na
19,5
50
3
-0,4
na
na
-1,4
na
na
-0,2
na
na
1,1
na
na
6,5
na
na
0,2
na
na
39,5
133
16564
53,5
246
15396
0,9
na
na
1,1
na
na
4,0
na
na
24,0
56
11
29,1
78
5
-1,0
na
na
-0,3
na
na
0,1
na
na
1,6
na
na
13,1
19
1
88,3
non
nd
non
nd
non
77,1
non
87,7
non
66,1
oui
69,3
oui
50,7
oui
72,0
non
53,7
non
23,4
oui
5,5
oui
14,2
oui
nd
non
nd
non
nd
non
132,5
non
144,0
non
30,9
oui
nd
oui
60,4
oui
144,1
non
115,3
non
121,4
oui
79,8
oui
10,5
oui
Page 5 sur 14
Plaque 4
Blanc Contrle dil 1 Controle dil 2
3621 1/100 3621 1/30 3621 1/10 3621 1/3 3621 1/1
5720 1/100 5720 1/30 5720 1/10 5720 1/3 5720 1/1
2,9
37,6 67,7
16,0 16,7
14,7 9,0
-12,2 27,1
44,9 41,8
6,2 0,4
0,001
0,33 1,10
0,09 0,10
0,08 0,04
na 0,20
0,44 0,39
0,02 na
0,00004
6,5 11,0
0,6 0,2
0,1 0,01
na 1,2
0,8 0,2
0,004 na
nd
nd nd
94,5 82,7
71,8 14,4
-28,3 75,0
80,5 56,0
-14,7 -24,9
-0,2
na
na
33,2
313
39125
41,8
477
29813
0,0
na
na
-1,1
na
na
-0,4
na
na
0,4
na
na
5,1
na
na
1,0
na
na
0,2
na
na
2,2
na
na
16,3
79
15
nd
nd
nd
Contrles E2/DHT *
Contrle dil 1-1
8,3
Controle dil 2-2
9,7
Contrle dil 1-1
5,4
Controle dil 2-2
13,2
Contrle dil 1-1
9,3
Controle dil 2-2
9,6
Contrle dil 1-1
6,5
Controle dil 2-2
11,0
18875
16825
24087 20788 16564 15396 39125 29813
Moyenne
9,1
22684
SD
2,4
8160
RSD
27%
36%
* Contrles E2 (eau dope avec 10 ng/L de E2) : dilution 1 = dilution 320 fois et dilution 2 = dilution 160 fois
* Contrles DHT (eau dope avec 10 microgrammes/L de DHT): dilution 1 = dilution 2000 fois et dilution 2 = dilution 1000 fois
na = non applicable (non calculable car hors des limites de la courbe de calibration)
nd = non dtermin
nd
non
nd
non
nd
non
89,1
non
125,6
non
76,4
oui
105,9
oui
60,9
oui
64,0
non
128,8
non
131,6
oui
99,4
oui
109,8
oui
Page 6 sur 14
Annexe 2 : figures
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 400 et 2280
110 440000 11//13000
90 440000 11//130
70
400 1/1
E2 Blanc
50
2280 1/100
30
2280 1/30 2280 1/10
10
2280 1/3 2280 1/1
-10
Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
-30
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 400 et 2280
120
ICI
blanc
100
80
60
40 22228800 11//13000
20 2280 1/10
0
2280 1/3 2280 1/1
-20
400 1/100 400 1/30 400 1/10
400 1/3 400 1/1
-40
-60
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 7 sur 14
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 12409 et 3960
12409 1/100
110
12409 1/30
90
12409 1/10 12409 1/3
70
12409 1/1
50 33996600 11//13000
30
3960 1/10
3960 1/3
10
3960 1/1
-10
E2 Blanc
Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
-30
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 12409 et 3960
ICI
110
blanc
90
70
50 3960 1/100
30 3960 1/30
10
3960 1/10 3960 1/30
-10 3960 1/1
-30
12409 1/100 12409 1/30 12409 1/10
12409 1/30 12409 1/1
-50
-70
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 8 sur 14
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 1670 et 4130
4130 1/100
110
4130 1/30
90
4130 1/10 4130 1/3
70
4130 1/1
50 11667700 11//13000
30
1670 1/10
1670 1/3
10
1670 1/1
-10
E2 Blanc
Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
-30
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 1670 et 4130
110
90
ICI
70 44113300 11//13000
50 1670 1/100
4130 1/10
30 1670 1/30
4130 1/3 4130 1/1
10
16701/10 1670 1/3
-10 1670 1/1
-30
-50
-70
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 9 sur 14
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 3621 et 5720
5720 1/100
110
5720 1/30
90
5720 1/10 5720 1/3
70
5720 1/1
50
3621 1/100 3621 1/30
30
3621 1/10 3621 1/3
10
3621 1/1
E2 Blanc
Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
-10
-30
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 3621 et 5720
110
90
ICI
70 55772200 11//13000
50 3621 1/100
5720 1/10
30 3621 1/30
5720 1/3 5720 1/1
10
3621 1/10 3621 1/3
-10 3621 1/1
-30
-50
-70
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 10 sur 14
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 400 et 12409
120 100
80
400 1/100
400 1/30 400 1/10 400 1/3 400 1/1
DHT Blanc
60
12409 1/100
12409 1/30
40
12409 1/10 12409 1/3
124091/1
20
Contrle DHT 1/2000 Controle DHT 1/1000
0
-1
0
1
2
3
4
5
Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 400 et 12469
120 100
80 60 40
12409 1/100 12409 1/30 12409 1/10 12409 1/3 12409 1/1
Flutamide
400 1/100 400 1/30 400 1/10 400 1/3 400 1/1
20
0
0
1
2
3
4
Log (concentration en Flutamide) (pg/puits)
Page 11 sur 14
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 3960 et 2280
120 100
80
3960 1/100
3960 1/30 3960 1/10 3960 1/3 3960 1/1
DHT Blanc
60
2280 1/100
2280 1/30
40
2280 1/10
2280 1/3
20
2280 1/1
Contrle DHT 1/2000 Contrle DHT 1/1000
0
0
1
2
3
4
5
Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 3960 et 2280
160
Flutamide
140
120 100
80 60 40
2280 1/100 2280 1/30 2280 1/10 2280 1/3 2280 1/1
3960 1/100 3960 1/30 3960 1/10
3960 1/3 3960 1/1
20
0
-20
0
1
2
3
4
Log (concentration en Flutamide) (pg/puits)
Page 12 sur 14
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 4130 et 1670
120 100
80
4130 1/100
4130 1/30 4130 1/10 4130 1/3 4130 1/1
DHT Blanc
60
1670 1/100
1670 1/30
40
1670 1/10
1670 1/3
20
1670 1/1
Contrle DHT 1/2000 Contrle DHT 1/1000
0
0
1
2
3
4
5
Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 4130 et 1670
160
Flutamide
140
120 100
80 60 40
1670 1/100 1670 1/30 1670 1/10 1670 1/3 1670 1/1
4130 1/100 4130 1/30 4130 1/10
4130 1/3 4130 1/1
20
0
-20
0
1
2
3
4
Log (concentration en Flutamide) (pg/puits)
Page 13 sur 14
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 5720 et 3621
Activit antagoniste AR Echantillons 5720 et 3621
120 100
80
5720 1/100
5720 1/30 5720 1/10 5720 1/3
DHT Blanc
60
3621 1/100
3621 1/30
40
3621 1/10
3621 1/3
20
3621 1/1
Contrle DHT 1/2000 Contrle DHT 1/1000
0
0
1
2
3
4
5
Log (concentration en DHT) (pg/puits)
120 100
80 60 40
3621 1/100 3621 1/30 3621 1/10 3621 1/3 3621 1/1
Flutamide
5720 1/100 5720 1/30 5720 1/10 5720 1/3 5720 1/1
0
1
2
3
4
Log (concentration en Flutamide) (pg/puits)
Page 14 sur 14
Universit de Lige
Dpartement des Sciences des Denres Alimentaires Analyse des denres alimentaires Marie-Louise Scippo, Professeur
Rapport d'essai n2 concernant l'analyse d'chantillons d'eau par la mthode CALUX (ER et AR) dans le cadre du projet BIODIEN la demande de Madame Carole CHALON (ISSeP)
! VERSION CORRIGEE du 28/10/2016 !
Rfrence : bon de commande numro 151686
Date de rdaction du rapport : 26 octobre 2016
Priode d'analyse des chantillons : 6/06/2016 au 09/08/2016
1. Echantillons soumis l'analyse
Date
de
rception
06/06/2016
Rfrence de l'chantillon
-
360-P1 (26/01/16)
-
1281-P1 (06/01/16)
-
2280-P1 (26/01/16)
-
3315-P1 (20/01/16)
-
3621-P1 (20/01/16)
-
3780-P1 (05/01/16)
-
4513-P1 (05/01/16)
-
4800-P1 (06/01/16)
-
630-P5 (17/05/16)
-
2280-P5 (17/05/16)
-
3621-P5 (11/05/16)
-
3960-P5 (18/05/16)
-
Blanc eau (EDS)
-
Contrle E2 (10 ng/L)
-
Contrle DHT (10 pg/L)
Analyses demandes
Analyse CALUX (ER et AR) pour les activits agonistes et antagonistes
Informations fournies par le demandeur : 2 litres d'eau ont t concentrs dans 100 pL de DMSO. Nous avons reu 50 pL de cet extrait.
2. Mthodologie
Les chantillons ont t analyss au moyen du test cellulaire CALUX-ER et CALUX-AR
(cellules MCF7 et T47-D, respectivement, gntiquement modifies avec le gne de lucifrase de luciole comme gne rapporteur, sous le contrle d'un lment de rponse au rcepteur des
hormones oestrognes et andrognes, respectivement). Test de l'activit agoniste : les cellules ont t exposes durant 24h (ER) ou 48h (AR) 5 dilutions de chaque chantillon (extrait non dilu et 4 dilutions semi-logarithmiques). Test de l'activit antagoniste : les cellules ont t exposes durant 24h (ER) ou 48h (AR) ces
mmes dilutions de chaque chantillon en prsence d'une concentration en E2 (17(3-oestradiol) ou en DHT (dihydrotestostrone) correspondant PEC50.
Dans les deux cas, la concentration finale en DMSO dans le milieu de culture tait de 0,4%.
Quartier Valle 2, Avenue de Cureghem 10 (Bt B43b), 4000 LIEGE
Tl. : 32 4 366 40 46 - Fax : 32 4 366 40 44
Email :
@ulg.ac.be - Website : http://www.dda.ulg.ac.be
Page 1 sur 19
Les contrles positifs E2 et DHT ont t test dilus 160 fois, 320 fois et 640 fois. Le blanc de procdure a t test non dilu. Chaque solution a t teste en triple (test ralis en plaques 96 puits). Une courbe de calibration en E2 ou DHT (pour les tests d'activit agoniste) ou en ICI (fluvestrant) ou flutamide (pour les tests d'activit antagoniste ER et AR respectivement) a t ralise sur chaque plaque.
3. Rsultats Tous les chantillons tests non dilus se sont montrs cytotoxiques.
Pour les extraits dilus 3 fois, 10 fois, 30 fois et 100 fois, la cytotoxicit est variable d'un chantillon l'autre (les chantillons cytotoxiques sont indiqus en rouge dans le tableau dtaill des rsultats exprimentaux repris en annexe 1).
Le tableau ci-dessous reprend les conclusions concernant les activits agonistes et antagonistes des extraits d'chantillon d'eau vis--vis des rcepteurs ER et AR.
Pour les activits agonistes vis--vis des rcepteurs ER et AR, elles sont exprimes respectivement en quivalents E2 (en ng/litre d'eau) et en quivalents DHT (en ng/litre d'eau), calculs partir du rsultat obtenu pour la plus grande dilution (indique entre parenthse) donnant une rponse calculable.
Pour l'activit antagoniste (vis--vis de ER ou AR), un + dans le tableau ci-dessous indique une possible activit antagoniste (mais considrer avec prudence tant donn la cytotoxicit des extraits) tandis qu'un - indique que l'extrait n'induit pas d'activit antagoniste.
Les annexes 1 et 2 montrent respectivement le tableau des donnes brutes et calcules et les figures indiquant les courbes de calibration et les rsultats obtenus pour chaque extrait.
Aucune activit agoniste ou antagoniste n'a t observe pour le blanc de procdure, ainsi qu'aucune cytotoxicit.
Le rsultat moyen obtenu pour le contrle E2 est de 10,1 4,2 ng/L eq. E2 (analys 16 fois en tout) (voir annexe 1). Le rsultat moyen obtenu pour le contrle DHT est de 12,5 1,1 g/L eq. DHT (analys 2 fois) (voir annexe 1).
Page 2 sur 19
Rsultats d'analyse des extraits d'eau :
Echantillon
360-P1 (26/01/16) 1281-P1 (06/01/16) 2280-P1 (26/01/16) 3315-P1 (20/01/16) 3621-P1 (20/01/16) 3780-P1 (05/01/16) 4513-P1 (05/01/16) 4800-P1 (06/01/16) 630-P5 (17/05/16)
ER-CALUX
Activit agoniste ng/L quivalents
E2
3,9
(1/100)
Activit antagoniste
+
2,4
-
(1/100)
5,6
-
(1/100)
2,1
-
(1/30)
0,2
-
(1/10)
0,2
-
(1/10)
0,03
-
(1/3)
0,1
-
(1/10)
AR-CALUX
Activit agoniste ng/L quivalents
DHT
Activit antagoniste
-
-
10
-
(dil 1/10)
55
-
(dil 1/10)
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Cytotoxique toutes les dilutions
2280-P5 (17/05/16)
6,8
-
-
-
(1/100)
3621-P5 (11/05/16)
0,2
-
-
-
(1/10)
3960-P5 (18/05/16)
-
+
1,4
+
(1/3)
- = pas d'activit dtecte ; + = possible activit antagoniste
Lige, le 28 octobre 2016
Marie-Louise Scippo Responsable du laboratoire d'analyse des denres alimentaires
Page 3 sur 19
Annexe 1 : tableau de donnes
ER-CALUX
Echantillon/dilution
Plaque 1
Blanc Controle dil 2 Contrle dil 3
360-P1 1/1 360 P1 1/3 360 P1 1/10 360 P1 1/30 360 P1 1/100 1281-P1 1/1 1281-P1 1/3 1281-P1 1/10 1281-P1 1/30 1281-P1 1/100
Activit agoniste
Rponse relative
(%)
Conc en Eq. E2 Conc en Eq. (pg/puits) E2 (ng/l)
11,4
0,04
0,002
42,1
0,6
12,0
59,5
1,3
13,2
na
na
na
na
na
na
83,3
5,1
3,2
68,1
2,0
3,7
43,0
0,6
3,9
na
na
na
na
na
na
62,8
1,5
1,0
48,1
0,8
1,5
33,5
0,4
2,4
Activit antagoniste
Rponse relative
(%)
nd nd nd na na 50,0 79,0 82,7 na na 73,2 83,1 65,1
AR-CALUX
Activit agoniste
Rponse relative
(%)
Conc en Eq. Conc en Eq. DHT (pg/puits) DHT (ng/l)
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
nd
na
na
na
na
na
na
-1,8
1,8
1,1
0,3
3,7
6,9
-4,3
1,0
6,3
na
na
na
na
na
na
12,9
16,6
10,4
3,1
-
-
-2,5
-
-
Plaque 2
Contrle dil 1
18,2
Controle dil 2
33,3
Contrle dil 3
54,4
2280-P1 1/1
na
2280-P1 1/3
na
2280-P1 1/10
95,9
2280-P1 1/30
96,1
2280-P1 1/100
60,4
3315-P1 1/1
na
3315-P1 1/3
60,3
3315-P1 1/10
36,4
3315-P1 1/30
17,6
3315-P1 1/100
9,8
0,1
4,5
nd
nd
nd
nd
0,9
17,1
nd
nd
nd
nd
1,8
18,3
nd
nd
nd
nd
na
na
na
na
na
na
na
na
na
na
na
na
7,3
4,5
135,1
50,6
87,9
54,9
2,7
5,1
113,7
5,2
-
-
0,9
5,6
111,4
0,4
-
-
na
na
na
na
na
na
0,9
0,2
94,0
2,7
-
-
2,1
1,3
101,7
2,9
-
-
1,1
2,1
96,8
-0,7
-
-
-
-
96,7
1,1
-
-
na = non applicable ; nd = non dtermin ; `-` : pas activit agoniste (rponse relative < 10%)
Activit antagoniste
Rponse relative
(%)
nd nd nd na na 171,3 130,0 133,1 na na 167,6 117,6 154,6
nd nd nd na na 222,6 145,5 131,3 na 160,8 126,6 112,2 95,7
Cytotoxicit observable au microscope
non non non oui oui non non non oui oui non non non
non non non oui oui non non non oui non non non non
Plaque 3
Contrle dil 1
14,1
Controle dil 2
29,3
Contrle dil 3
44,3
3261-P1 1/1
na
3261-P1 1/3
30,9
3261-P1 1/10
15,2
3261-P1 1/30
11,0
3261-P1 1/100
6,4
3780-P1 1/1
na
3780-P1 1/3
49,2
3780-P1 1/10
21,4
3780-P1 1/30
8,8
3780-P1 1/100
7,6
0,2
7,4
nd
74,6
0,5
10,8
nd
nd
1,1
10,9
nd
nd
na
na
na
na
0,6
0,1
96,2
2,4
0,2
0,1
101,8
0,0
0,1
0,2
105,6
2,5
-
-
104,8
3,3
na
na
na
na
1,4
0,3
104,2
1,5
0,3
0,2
93,4
1,6
-
-
101,4
6,7
-
-
98,5
2,0
Plaque 4
Blanc
7,8
Controle dil 2
20,1
Contrle dil 3
39,0
4513-P1 1/1
na
4513-P1 1/3
10,3
4513-P1 1/10
5,5
4513-P1 1/30
-0,4
4513-P1 1/100
-5,9
4800-P1 1/1
na
4800-P1 1/3
19,1
4800-P1 1/10
12,3
4800-P1 1/30
2,9
4800-P1 1/100
-0,1
-
-
88,3
nd
0,4
7,1
nd
99,7
1,0
9,7
nd
nd
na
na
na
na
0,1
0,03
103,3
-1,5
-
-
98,4
3,7
-
-
93,3
-0,2
-
-
109,2
-2,1
na
na
na
na
0,3
0,06
112,7
1,5
0,2
0,1
106,6
-4,1
-
-
107,1
-1,7
-
-
103,6
-3,1
na = non applicable ; nd = non dtermin ; `-` : pas activit agoniste (rponse relative < 10%)
332,8
13313,9
nd
non
nd
nd
nd
non
nd
nd
nd
non
na
na
na
oui
-
-
98,0
non
-
-
108,3
non
-
-
91,3
non
-
-
103,3
non
na
na
na
oui
-
-
118,4
non
-
-
114,6
non
-
-
89,1
non
-
-
99,2
non
nd
nd
88,6
non
na
na
nd
non
nd
nd
nd
non
na
na
na
oui
-
-
102,7
non
-
-
62,2
non
-
-
70,7
non
-
-
107,0
non
na
na
na
oui
-
-
88,9
non
-
-
91,3
non
-
-
71,1
non
-
-
95,6
non
Page 5 sur 19
Plaque 5
Contrle dil 1
15,5
0,2
7,2
nd
nd
nd
nd
nd
non
Controle dil 2
33,7
0,5
10,6
nd
nd
nd
nd
nd
non
Contrle dil 3
52,2
1,2
11,6
nd
74,1
1172,0
11720,0
nd
non
630-P5 1/1
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
630-P5 1/3
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
630-P5 1/10
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
630-P5 1/30
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
630-P5 1/100
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
2280-P5 1/1
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
2280-P5 1/3
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
2280-P5 1/10
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
2280-P5 1/30
69,7
2,5
4,7
170,6
0,3
-
-
114,5
non
2280-P5 1/100
50,6
1,1
6,8
147,0
-1,2
-
-
62,8
non
Plaque 6
Contrle dil 1
15,1
0,0
4,9
nd
nd
nd
nd
nd
non
Controle dil 2
29,9
0,3
6,8
nd
nd
nd
nd
nd
non
Contrle dil 3
33,6
1,1
4,1
nd
nd
nd
nd
nd
non
3621-P5 1/1
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
3621-P5 1/3
33,8
0,4
0,1
110,8
3,3
-
-
na
oui
3621-P5 1/10
24,5
0,3
0,2
96,3
0,8
-
-
95,5
non
3621-P5 1/30
5,2
-
-
99,2
4,9
-
-
72,7
non
3621-P5 1/100
0,2
-
-
95,3
2,9
-
-
92,1
non
3960-P5 1/1
na
na
na
na
na
na
na
na
oui
3960-P5 1/3
3,7
-
-
31,4
13,8
7,3
1,4
50,2
non
3960-P5 1/10
-4,1
-
-
50,8
-3,4
-
-
75,1
non
3960-P5 1/30
1,5
-
-
80,6
-0,7
-
-
65,4
non
3960-P5 1/100
5,9
-
-
105,9
-1,3
-
-
88,3
non
na = non applicable ; nd = non dtermin ; `-` : pas activit agoniste (rponse relative < 10%)
Page 6 sur 19
Recapitulatif de l'analyse rpte des contrles positifs Contrles E2/DHT * Contrle dil 1- pl. 1 Contrle dil 1- pl. 2 Contrle dil 1- pl. 3 Contrle dil 1- pl. 4 Contrle dil 1- pl. 5 Contrle dil 1- pl. 6 Contrle dil 2- pl. 1 Contrle dil 2- pl. 2 Contrle dil 2- pl. 3 Contrle dil 2- pl. 4 Contrle dil 2- pl. 5 Contrle dil 2- pl. 6 Contrle dil 3- pl. 1 Contrle dil 3- pl. 2 Contrle dil 3- pl. 3 Contrle dil 3- pl. 4 Contrle dil 3- pl. 5 Contrle dil 3- pl. 6
Conc en Eq. E2 (ng/l)
nd 4,5 7,4 nd 7,2 4,9 12,0 17,1 10,8 7,1 10,6 6,8 13,2 18,3 10,9 9,7 11,6 4,1
Conc en Eq. DHT (ng/l)
nd nd 13314,0 nd nd nd nd nd nd na nd nd nd nd nd nd 11720,0 nd
Moyenne
10,1
SD
4,2
RSD (%)
41%
12517,0 1127,1
9%
* Contrles E2 (eau dope avec 10 ng/L de E2). * Contrles DHT (eau dope avec 10 microgrammes/L de DHT).
Dilution 1 = dilution 640 fois, dilution 2 = dilution 320 fois, dilution 3 = dilution 160 fois nd = non dtermin
Page 7 sur 19
Annexe 2 : figures
Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 360P1 et 1281P1
100 80 60 40 20
360_P1 1/1
360_P1 1/3 360_P1 1/10 360_P1 1/30 360_P1 1/100
1281_P1 1/1 1281_P1 1/3 1281_P1 1/10 1281_P1 1/30 1281_P1 1/100
E2 Blanc
Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
0
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Page 8 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 2280P1 et 3315P1
100 80 60 40 20
2280_P1 1/1
2280_P1 1/3 2280_P1 1/10 2280_P1 1/30 2280_P1 1/100
3315_P1 1/1 3315_P1 1/3 3315_P1 1/10 3315_P1 1/30 3315_P1 1/100
E2 Blanc
Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
0
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 2280-P1 et 3315-P1
120
ICI
100
80
60
40 33331155__PP11 11//13
20 3315_P1 1/10
0
3315_P1 1/30 3315_P1 1/100
-20
2280_P1 1/1 2280_P1 1/3 2280_P1 1/10
2280_P1 1/30 2280_P1 1/100
-40
-60
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 9 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 3261P1 et 3780P1
100
3261_P1 1/1
E2
3261_P1 1/3
80 33226611__PP11 11//1300
3261_P1 1/100
60
3780_P1 1/1
40
3780_P1 1/3 3780_P1 1/10
3780_P1 1/30
20
3780_P1 1/100
Contrle E2 1/640 Contrle E2 1/320
Controle E2 1/160
0
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 3621-P1 et 3780-P1
120 ICI 100
80
60 3780_P1 1/1
3780_P1 1/3
40
3780_P1 1/10 3780_P1 1/30
20
3780_P1 1/100
3261_P1 1/1 3261_P1 1/3 3261_P1 1/10
3261_P1 1/30 3261_P1 1/100
0
-20
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 10 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 4513P1 et 4800P1
100 80 60 40 20 0
4513_P1 1/1
4513_P1 1/3 4513_P1 1/10 4513_P1 1/30 4513_P1 1/100
4800_P1 1/1 4800_P1 1/3 4800_P1 1/10 4800_P1 1/30 4800_P1 1/100
E2 Blanc
Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 4513-P1 et 4800-P1
120
Blanc
100
ICI
80
60
40 44880000__PP11 11//13
20 4800_P1 1/10
0
4800_P1 1/30 4800_P1 1/100
-20
4513_P1 1/1 4513_P1 1/3 4513_P1 1/10
4513_P1 1/30 4513_P1 1/100
-40
-60
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 11 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 630P5 et 2280P5
100 80 60 40 20 0
630_P5 1/1
630_P5 1/3 630_P5 1/10 630_P5 1/30 630_P5 1/100
2280_P5 1/1 2280_P5 1/3 2280_P5 1/10 2280_P5 1/30 2280_P5 1/100
E2
Contrle E2 1/640 Contrle E2 1/320 Controle E2 1/160
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 630-P5 et 2280-P5
120
100
ICI
80
60 2280_P5 1/1
40
2280_P5 1/3 2280_P5 1/10
20
2280_P5 1/30 2280_P5 1/100
0
-20
630_P5 1/1 630_P5 1/3 630_P5 1/10
630_P5 1/30 630_P5 1/100
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 12 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste ER Echantillons 3621P5 et 3960P5
100
3621_P5 1/1
E2
3621_P5 1/3
80
3621_P5 1/10
3621_P5 1/30
60
3621_P5 1/100
3960_P5 1/1
40
3960_P5 1/3
3960_P5 1/10
20
3960_P5 1/30 3960_P5 1/100
Controle E2 1/640 Contrle E2 1/320
0
Controle E2 1/160
-4 -3 -2 -1
0
1
2
Log (concentration en E2) (pg/puits)
Activit antagoniste ER Echantillons 3621-P5 et 3960-P5
120
100
80
ICI
60
40 33996600__PP55 11//13
20 3960_P5 1/10
0
3960_P5 1/30 3960_P5 1/100
-20
3621_P5 1/1 3621_P5 1/3 3621_P5 1/10
3621_P5 1/30 3621_P5 1/100
-40
-60
0
2
4
Log (concentration en ICI) (pg/puits)
Page 13 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 360-P1 et 1281-P1
120
360_P1 1/1
DHT
100 80
360_P1 1/3
360_P1 1/10 360_P1 1/30 360_P1 1/100
60
1281_P1 1/1
1281_P1 1/3
40
1281_P1 1/10
1281_P1 1/30
20
1281_P1 1/100
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 360-P1 et 1281-P1
120 100
80 60 40 20
0
1281_P1 1/1 1281_P1 1/3 1281_P1 1/10 1281_P1 1/30
1281_P1 1/100
Flutamide
360_P1 1/1 360_P1 1/3 360_P1 1/10 360_P1 1/30 360_P1 1/100
-20
0
2
4
Log (concentration en flutamide) (pg/puits)
Page 14 sur 19
Rponse relative (%)
Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 2280-P1 et 3315-P1
120
2280_P1 1/1
DHT
100 80
2280_P1 1/3
2280_P1 1/10 2280_P1 1/30 2280_P1 1/100
60
3315_P1 1/1
3315_P1 1/3
40
3315_P1 1/10
3315_P1 1/30
20
3315_P1 1/100
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 2280-P1 et 3315-P1
120
100 80 60 40 20
Flutamide
3315_P1 1/1 3315_P1 1/3 3315_P1 1/10 3315_P1 1/30 3315_P1 1/100
2280_P1 1/1 2280_P1 1/3 2280_P1 1/10
2280_P1 1/30 2280_P1 1/100
0
0
2
4
Log (concentration en flutamide) (pg/puits)
Page 15 sur 19
Rponse relative (%)
Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 3621-P1 et 3780-P1
120
3261_P1 1/1
DHT
100 80
3261_P1 1/3
3261_P1 1/10 3261_P1 1/30 3261_P1 1/100
60
3780_P1 1/1
3780_P1 1/3
40
3780_P1 1/10
3780_P1 1/30
20
3780_P1 1/100
CTRL DHT 1
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 3621-P1 et 3780-P1
120
Flutamide
100
80
60 3780_P1 1/1
3780_P1 1/3
40
3780_P1 1/10 3780_P1 1/30
20
3780_P1 1/100
3261_P1 1/1 3261_P1 1/3 3261_P1 1/10 3261_P1 1/30 3261_P1 1/100
0
-20
0
2
4
Log (concentration en flutamide) (pg/puits)
Page 16 sur 19
Rponse relative (%)
Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 4513-P1 et 4800-P1
120
4513_P1 1/1
DHT
100 80
4513_P1 1/3
4513_P1 1/10 4513_P1 1/30 4513_P1 1/100
60
4800_P1 1/1
4800_P1 1/3
40
4800_P1 1/10
4800_P1 1/30
20
4800_P1 1/100
CTR DHT-2
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 4513-P1 et 4800-P1
120 100
80 60 40 20
4800_P1 1/1 4800_P1 1/3 4800_P1 1/10 4800_P1 1/30 4800_P1 1/100
Flutamide Blanc
4513_P1 1/1 4513_P1 1/3 4513_P1 1/10 4513_P1 1/30 4513_P1 1/100
0
0
2
4
Log (concentration en flutamide) (pg/puits)
Page 17 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 630-P5 et 2280-P5
120
630_P5 1/1
DHT
100 80
630_P5 1/3
630_P5 1/10 630_P5 1/30 630_P5 1/100
60
2280_P5 1/1
2280_P5 1/3
40
2280_P5 1/10
2280_P5 1/30
20
2280_P5 1/100
CTR DHT-3
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 630-P5 et 2280-P5
120 100
80 60 40 20
0 -20
2280_P5 1/1 2280_P5 1/3 2280_P5 1/10 2280_P5 1/30 2280_P5 1/100
Flutamide
630_P5 1/1 630_P5 1/3 630_P5 1/10 630_P5 1/30 630_P5 1/100
0
2
4
Log (concentration en flutamide) (pg/puits)
Page 18 sur 19
Rponse relative (%) Rponse relative (%)
Activit agoniste AR Echantillons 3621-P5 et 3960-P5
120
3621_P5 1/1
DHT
100 80
3621_P5 1/3
3621_P5 1/10 3621_P5 1/30 3621_P5 1/100
60
3960_P5 1/1
3960_P5 1/3
40
3960_P5 1/10
3960_P5 1/30
20
3960_P5 1/100
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log (concentration en DHT) (pg/puits)
Activit antagoniste AR Echantillons 3621-P5 et 3960-P5
120 100
80 60 40 20
3960_P5 1/1 3960_P5 1/3 3960_P5 1/10 3960_P5 1/30 3960_P5 1/100
Flutamide
3621_P5 1/1 3621_P5 1/3 3621_P5 1/10 3621_P5 1/30 3621_P5 1/100
0
0
2
4
Log (concentration en flutamide) (pg/puits)
Page 19 sur 19