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Study Sponsor: Issue D ate: D ocum ent R eferen c e N o.: E L F A T O C H E M S .A . 12-M ar-96 9 6 /S A E 6/04 09 /H T AR226-3040 .... . Biodegradability (OECD 301 B) Author(s): H. Thiebaud A.M. Petit English Translation of R ep o rt S um m ary fo r D uP ont C hem ical S olutions E nterprise ' 27-Jan -03 Company Sanitized. Does not contain TSCA CBI ELF ATOCHEM Levallois Applications Center TECHNICAL SUM MARY The biodegradability study described in this report was effected using the operating procedure described in appendix C .4-C of the Directive 92/69/EEC . This protocol is in agreement with the Directing Outline Ns 301 B of O CDE adopted on 17/7/92. Under the test conditions, the percent biodegradation of (plateau). was 48 % in 28 days During the time interval of 10 days following start of the biodegradation phase, the latter reached a level of 47 %. The substance can be considered to be easily biodegradable according to the Directing Outline 301 of OCDE. The substance did not show an inhibiting effect towards micro-organisms. A sterile abiotic control was effected : it showed that the substance does not disappear due to physical and chemical phenomena under the test conditions. The test validity criteria w ere respected. Company Sanitized. Does not contain TSCA CBI E lf A to ch em S.A. DCRD Centre d'Application de Levaliois Service Analyse Environnement Levaliois, le 12/03/96 R fren c e S q u e n tie l Etude num ro g H ^ /0 4 0 9 ,/H T 6 3 4 9 /9 5 /A cofrac ESSAIS Laboratoire accrdit sous le n*1-0210 Reconnaissance de conformit aux BPL de rOCDE par fe GIPC en date du 8/3/93. reconduite le 30/06/94 RAPPORT D'ETUDE T IT R E : D TER M IN A TIO N DE LA BIODGRADABILIT FACILE ESSAI DE DGAGEMENT DE C 0 2 A U TE U R (S ) : H. THIBAUD ; Coll. A. M. PETIT RESUM E D O C U M EN TA IR E : Dtermination de la biodgradabilit facile de ia substance :l en suivant le m ode opratoire d crit dans l'annexe C .4-C d la directive CEE 92/69, et la Ligne Directrice de l'OCDE 301 B (adopte le 17/7/92). MOTS CLES O C D E/301 B biodgradabilit arobie ultime facile, 92/69/C E E , C.4-C, DESTINATAIRES : M . D EV A U X (DCSF) D O C FIC H IER TECH Copies : C h ef de Service, Auditeur Qualit, Responsable des Archives, Laboratoire d'cotoxicologie,Secrtariat, g< Service cotoxicit et Sret des Produits (D S EP ) / L'accrditation par la Section E ssais du COFRAC atteste uniquement de la comptence technique d e s laboratoires pour les essais ou analyses couverts par l'accrditation. Ce rapport comprend 19 pages et 4 feuillets non pagins. Ce document est notre proprit. Ilne peut tre ni copi, ni communiqu des te s s a n s autorisation p r e s s e dBf Atoctem. ^ La reproduction de ce rapport d'tude n'est autorise que sous fo m ret6 B J^ M y p fw 0 ^ # id iitii ies n o t c o n t a i n T S C A C B I RC4C6349.DOC page 1/19 _________ Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levailois RAPPORT D'ETUDE BIODEGRADABILITE FACILE ESSAI DE DGAGEMENT DE C 02 N D'ETUDE : 6349/95/A SOMMAIRE SOMMAIRE 1. ASSURANCE QUALIT 2. SIGNATURES 3. IDENTIFICATIONS 3.1. Substance d'essai 3.2. Installation d'essais 3.3. Demandeur de l'tude 3.4. Calendrier 3.5. Archivage 4. OBJECTIF DE L'TUDE 5. MTHODE D'ESSAI 5.1. Introduction 5.1.1. Principe 5.1.2. Rfrences 5.1.3. Dviations 5.2. Matriel et produits 5.2.1. Matriel 5.2.2. Produits et ractifs 5.2.3. Substance de rfrence 5.2.4. Inoculum 5.3. Mode opratoire - 5.3.1. Prparation des solutions . 6. RSULTATS 6.1. Calcul 6.2. Rsultats de l'tude 6.3. Clauses de validit de l'tude ' 7. CONCLUSIONS 8. ANNEXES 8.1. ANNEXE 1 - Schma de montage 8.2. ANNEXE 2 - Tableau de rsultats et calcul 8.3. ANNEXE 3 - Graphique de la dgradation en fonction du temps 8.4. ANNEXE 4 - Milieu d'essai 8.5. ANNEXE 5 - Bulletins d'analyses 3 4 5 6 6 6 7 7 7 7 7 7 7 8 8 9 9 9 9 9 10 10 11 11 12 12 13 14 14 15 17 18 19 Ce documsnt est notre proprit. Il ne peut Sre ni copi, ni communiqu des tiers sans aifatsation qpresse(fElfAtochem. La reproduction de ce rapport d'tude n'est autorise que sole formed feo-siri photographique intgral. RC4C6349.DOC page 3/1 Company Sanitized. Does not contain TSCA CBI Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois RESUME TECHNIQUE L'tude de biodgradabilit dcrite dans ce rapport a t ralise selon le mode opratoire dcrit dans l'annexe C.4-C de la Directive 92/69/CEE. Ce protocole est en accord avec la Ligne Directrice de l'OCDE N301 B adopte le 17/7/92. Dans les conditions de l'essai, le pourcentage de biodgradation duj t de 48% en 16jours (plateau). Dans l'intervalle de temps de 10 jours suivant le dbut de la phase de biodgradation, celle ci a atteint un niveau de 47 %. La substance ne peut tre considre comme facilement biodgradable selon les critres noncs dans la ligne directrice 301 de l'OCDE. La substance n'a pas montr d'effet inhibiteur vis--vis des micro-organismes. Un tmoin strile abiotique a t ralis : il a montr que la substance ne subit pas de disparition due des phnomnes physico-chimiques dans les conditions de l'essai. Les critres de validit de l'essai ont t respects. Ce documentest notre proprit IIne peu! tre ni copi, ni commmiqu des fias sans autorisation expresse cfElfAtochem. la reproduction de ce rapport d'tude n'est autorseque sous notcontain TSCA CBI RC4C6349.DOC page 2/19 Eif Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois 1. ASSURANCE QUALIT La prsente tude a t ralise selon les principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de FOCDE. Le Service Analyse-Environnement du Centre d'Application de Levallois dispose d'une reconnaissance de. conformit aux BPL mise par le Groupement Interministriel des Produits Chimiques en date du 8 mars 1993 et reconduite la suite d une inspection ralise par le Comit -Franais d'Accrditation, les 19 et 20 avril 1994, conformment au dcret n90-206 du 7 mars 1990, pour les domaines de comptences suivants : - tudes cotoxicologiques sur les organismes aquatiques et terrestres. - tudes portant sur le comportement dans l 'eau, dans le sol et dans 1air ; bioaccumulation. Le laboratoire est accrdit par le COFRAC pour certains essais du programme 26-2 Essais de dtermination de certaines proprits intrinsques des substances chimiques : essais cotoxicologiques, et est identifi sous le numro d'accrditation : 1-0210. L'Auditeur Qualit du Centre d'Application de Levallois procde des inspections priodiques et des vrifications en vue : - d'tablir la concordance de l'tude avec les Principes de Bonnes Pratiques de Laboratoire de l'OCDE, - de s'assurer que les mthodes, les modes opratoires et les observations sont correctement dcrits dans le rapport d'tude et que les rsultats indiqus refltent avec exactitude les donnes crites de l'tude. Les dates correspondant l'audit de cette tude sont donnes ci-dessous : 28/09/95,17/10/95,11/03/96. . L'Auditeur Qualit : D. TAISNE Date 'i jfii? / 9 Signature Ce document est notre proprit flne peti tre ni copi, ni La reprtxiidion de oe rapport tfiude n'< RC4C6349.DOC page 4/1 riitized. uoes not contain TSCA CBI ) Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois 2. SIGNATURES Nous, soussigns, certifions que les rsultats dcrits dans ce rapport ont bien t obtenus sous notre responsabilit dans le Service Analyse Environnement du Centre d Application de Levallois, et refltent avec exactitude les rsultats obtenus lore de cette tude. Le Chef du Service Analyse Environnement : M. BOURALY Date Signature s ti/'/i* Le Directeur de l'tude : H. TH1BAUD D a te ih / /*>c Signature L Ce documentes! notre proprit IIne peu tre ni copi, ri La reproducton de ce RC4C6349.DOC page 5/19 not contain TSCA CBI Elf Atochem S. A. Centre d'AppHcation de Levallois 3. IDENTIFICATIONS 3.1. Substance d ' essai Dnomination : ] N du lot : N d'enregistrement : 6349/95 Caractristiques principales : - apparence : liquide brun - solubilit : totalement soluble dans l'eau Prcaution d'emploi et de conservation : voir FDS. 3.2. Installation d'essais ELF ATOCHEM CENTRE D'APPLICATION DE LEVALLOIS SERVICE ANALYSE ENVIRONNEMENT 95 rue Danton 92300 LEVALLOIS-PERRET Directeur de l'tude : H. THIBAUD Personnel impliqu dans l'tude : Ingnieur responsable de l'tude : H. .THIBAUD Technicien(s) charg(s) de la ralisation de l'tude ; A.M. PETIT Ingnieur charg des analyses : F. MANTISI ' Technicien(s) charg(s) des analyses : A. COUTY. Ce document est notre proprit.il ne peut tre ni copi, ni communiqu des Sara sans autoiisaton expresse dQf Atochem. U reptodudxxi de ce rapport d'tude n'est aiioriset^je sous f c m T e j^ S S p S ^ S S f lf lf f ilio e s n o t c o n t a i n T S C A C B I RC4C6349.DOC page 6/19 Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levaliois 3.3. Demandeur de l'tude M. DEVAUX (DCSF) Moniteur de l'tude : Mme BUREAU (DSEP). 3.4. C alendrier - Approbation du plan d'tude par le Moniteur de l'tude : 02/10/95 - Dbut de l'tude : 09/10/95 - Fin de l'tude : 09/11/95 - Rapport d'tude : 12/03/96 . 3.5. Archivage Les substances tudies sont conserves dans le Service Analyse Environnement pendant une dure de 5 ans au maximum. L'ensemble des documents de l'tude est conserv au moins 10 ans. 4. O BJECTIF DE L'TUDE L'objectif de cette tude est de dterminer la biodgradabilit arobie ultime dite facile du ^ H H B i B ^ p a r application du mode opratoire dcrit dans l'annexe C.4-C de la Directive 92/69/CEE. qui est compatible avec la mthode dcrite dans la Ligne Directrice de l'OCDE 301 B adopte le 17/7/92. 5. MTHODE D'ESSAI 5.1. Introduction 5.1.1. Principe ' Un volume connu de milieu minral ensemenc, contenant une concentration connue de substance tudier (entre 10 et 20 mg/1 de COD ou de COT) comme unique source nominale de carbone organique, est ar dans l'obscurit par passage d'air exempt de dioxyde de carbone sous dbit contrl. Les substances organiques dissoutes dans leau sont biodgrades par des micro-organismes chimio-organotrophes, qui les utilisent comme seule source de carbone et d'nergie. La dgradation est suivie par l 'analyse du dioxyde de carbone produit pendant une priode de 28 jours et des intervalles de temps Ce document est notre proprit. Ilne peut tre ni copi, ni communiqu des fera sans autorisation presse rfElfAtochem. le reproduction de ce rapport tf u d e ^ a u t e n ^ e ^ not contain TSCA CBI Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois intermdiaires suffisamment courts pour dterminer l'intervalle de 10 jours et le dbut et la fin de la biodgradation. L'activit de l'inoculum est contrle au moyen d'une substance de rfrence. Simultanment, on tudie les effets inhibiteurs ventuels de la substance d'tude vis--vis de l'inoculum avec un mlange de la substance de rfrence et de la substance d tude. Une srie strile permet galement de vrifier si la substance peut subir une dgradation abiotique. 5.1.2. Rfrences -Annexe de la Directive CEE/92/69 ; Partie C: Mthodes de Dtermination de Pcotoxicit - C.4 Dtermination de la Biodgradabilit Facile, partie II : Essai de dgagement de CO2 (mthode C.4-C). JOCE NL 383 A du 29/12/92. - Ligne Directrice de l'OCDE pour les essais de produits chimiques n301 B : Essai de dgagement de CO2, adopte par le conseil le 17 juillet 1992. - Plan d'tude du : 26/09/95 - Plan Qualit n5 : Biodgradabilit Facile : Essai de dgagement de CO2, dition 1, fvrier 1994. 5.1.3. Dviations La mthode prvoit l'limination du CO2 du milieu dans les flacons en dbut d'essai aprs addition de l'inoculum et avant introduction des substances d'essai et de rfrence. Dans le cas prsent, la substance d'essai, peu soluble, tant disperse par mise en mulsion directement dans les flacons d'essai, l'limination du CO2 du milieu est ralise par aration des milieux aprs addition de la substance et avant introduction de l'inoculum. Paralllement, ce dernier est prconditionn pour abaisser le niveau de respiration endogne. Afin d'valuer la conformit la cause de validit dcrite au IV.3.2. de la mthode CEE C.4-C prcisant que la teneur en carbone inorganique (CI) de la suspension de la substance tudier en milieu minral au dbut de l'essai doit tre infrieure 5% du carbone total , le CI est mesur avec l'analyseur MAHAK TOCOR 100 et sa concentration est compare la somme du (COT) introduit dans le milieu minral par ajout de la substance. Cette opration diffre de 'celle prconise dans le plan qualit n 5 dition I rdig avant que la mesure directe du CI ne soit ralisable. II tait alors procd la double mesure directe du (CT) et du COT et la diffrence de ces concentrations donnait une estimation en CI. En raison de l'incompatibilit entre les composs fluors, prsents dans la prparation teste, et l'analyseur de carbone, il n'est pas procd la vrification exprimentale du niveau de carbone inorganique en dbut d'essai dans les flacons Ft. cette analyse n'est ralise que dans les flacons Fb. La clause de validit dcrite au IV.3.2 de la mthode Ce document est notre proprit. Ilne peuttre ni copi, ni communiqu des lias sans autorisationexpresse cfElfAtochem. La reproductai de ce rapport d'tude n'est autorise que sous f|^J S !S ft(^i^fP S H S S S .int& 8 b s n o t c o n t a i n T S C A C B I Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois prcisant que "l teneur en carbone inorganique (CI) de la suspension de la substance tudir en milieu minral au dbut de l'essai doit tre infrieure 5% du carbone total", n'est pas vrifie. 5.2. M atriel et produits 5.2.1. Matriel Appareillage courant de laboratoire d'cotoxicologie et, notamment : - Centrifugeuse thermostate : JOUAN CT 4-22 ; - Oxymtre, conductimtre, pH-mtre : combin multifonctions Jenway 3410 ; - Le schma de montage est reprsent en annexe 1. Pour chaque unit d'essai, il est constitu, d'amont en aval de : - pompe pristaltique GILSON 4 canaux , - 3 flacons pour le pigeage du CO2 avec tube plongeur en verre fritt, successivement NaOH 5 M. NaOH 5 M et Ba(OH)2 0,0125 M - rcipients pour essais : flacons en verre de 3 litres, - agitateurs magntiques pour les flacons d'essais, - 3 flacons pour le pigeage du C 0 2. partir des piges amont jusqu'aux piges aval, les gaz circulent dans des tubes en lastomre fluor faiblement permable au C 0 2 : Viton, Norprne. - Burette de prcision de 50 ml pour titration du Ba(OH)2. . L'analyse du carbone organique et inorganique en solution au dbut de l'essai est ralise au moyen d'un appareil MAHAK. TOCOR 100. 5.2.2. Produits et ractifs Tous les ractifs utiliss pour la prparation du milieu sont de qualit "pour analyse". L'eau provient d'un appareil de production d'eau ultra-pure (ultrafiltration, change d'ions, charbon actif) muni d'un dispositif de mesure de la rsistivit. 5.2.3. Substance de rfrence Benzoate de sodium de qualit "pour analyse". 5.2.4. Inoculum L'inoculum provient d'effluent secondaire de la station d'puration biologique urbaine de Versailles. L'effluent est prlev le 9/10/95 puis ar jusqu'au jour de l'ensemencement des flacons, o il est centrifug environ 20C pendant 20 mn 4000 g ; le culot est repris dans un volume de milieu d'essai tel que l'on ait un facteur de concentration d'environ 125 par rapport l'chantillon prlev. Une numration sur chantillonneur Ce document est notre proprit floe peu Sre ni copi, ni communiqu des fieoesans autorisationexpresse <f3fAtochem. not contain TSCA CBI Elf Atochem S. A. Centre (l'Application de Levallois pour bactries totales Totalcount Millipore montre que pour la prsente tude, 1 inoculum concentr prsentait une concentration de : 7,5 x 106 bact/ml, ce qui donne 7,5 x 104 bact/ml Hans le milieu ensemenc final (1% d'inoculum dans le milieu d'incubation). 5.3. Mode opratoire 5.3.1. Prparation des solutions Le milieu d'essai est prpar selon les indications de l'annexe 4. Solutions de pigeage et de dosage : Soude 5 M, hydroxyde de baryum 0,0125 M, acide chlorhydrique 0,05 M. Substances d 'essai et de rfrence : Le pourcentage de carbone dans la substance d'essai analyse lmentaire (bulletin d'analyse en annexe 5), est de : 9,96%. dtermin par La concentration de la solution mre est calcule pour que le volume de transfert apporte une concentration en carbone dans l'erlen fixe, entre 10 et 20 mg COT/l. La solution de dans le milieu d'essai 150,7 mg/1 correspond 15 mg COT/l, soit, pour un volume de 1500 ml par flacon, une masse thorique de CO2 de : 82.5 mgCCbTh. Une solution mre de benzoate de sodium trihydrat (57,7%C) dans le milieu d'essai 3,9 mg/ml. est utilise raison de 10 ml pour 1500 ml de milieu, soit 39 mgCOD, soit une masse thorique de CO2 de : 2,5 mgCCbTh. Dans le flacon de contrle d'inhibition, des quantits quivalentes de substance d essai et de rfrence sont introduites. Pour ce flacon, la masse thorique de CO2 est de : 165 m gC 02Th. 5.3.1.1. Conduite des essais Les essais sont raliss dans des flacons de 3000 ml, raison de : Srie Flacons Essai Blanc Contrle inoculum Blanc systme Strile Inhibition F tl. Ft2 F b l. Fb2 Fcl Fbs Fs Fi inoculum 15 ml 15 ntl 15 ml 15 ml mg substance d 'essai 226 Solution m re substance de rfrence 10 ml Solution chlorure m e rc u riq u e lg/1 M ilieu d 'essai q.s.p. 1500 ml q.s.p. 1500 ml q.s.p. 1500 ml 10 ml 226 10 ml 226 10 ml q.s.p. 1500 ml Ce document est notre proprit IIne peut tre rcopi, ni conunuiiqu des fias sans aUnrisafion expresse tfBfAtoctem. u refXDdud.cndece^ not contain TSCA CBI Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois La substance d'essai est pese sur un support inerte (lamelle de microscope) et 1ensemble est dpos dans les flacons Ft, Fs et Fi. 10ml de la solution mre de la substance de rfrence sont ajouts dans les flacons Fc et Fi. L'aration de ces mlanges par de l'air exempt de CO2 est dmarre afin de purger le CO2, pendant une nuit. L'inoculum prconditionn est ajout ; un prlvement est ralis dan< les flacons ET) pour mesure du CI et les piges de CO2 en aval des flacons d'essais sont branchs. Ces piges contiennent 50 ml de solution d'hydroxyde de baryum 0,0125 M. L'incubation a lieu dans une salle thermostate 22 2C. Le dbit d air travers les flacons d'essai est mesur en dbut d'essai et en cas de changement de tuyau ou de pige amont. Le dosage du CO2 dgag et pig est ralis des intervalles dtermins par la vitesse d'avancement de la raction. Le dioxyde de carbone ragit avec l'hydroxyde de baryum pour donner du carbonate de baryum insoluble. Lorsque le prcipit blanc de carbonate de baryum apparat dans le second pige (aprs le flacon d'essai), les 3 piges sont remplacs par des piges de solution frache d'hydroxyde de baryum. Les piges retirs sont doss. Au dernier jour de l'essai, aprs renouvellement des piges, les flacons d'essai sont acidifis au moyen de 1 ml d'acide chlorhydrique concentr pour dgager le CO2 dissous. Au bout de 24 heures celui-ci est mesur. La titration de l'hydroxyde de baryum restant est faite par neutralisation au moyen d'une solution d'acide chlorhydrique, en prsence de phnolphtaline. 6. RSULTATS 6.1. Calcul Les rsultats obtenus sont rassembls dans les tableaux en annexe 2. Sur la premire page sont ports les volumes V d'HCl de neutralisation du Ba(OH)2 restant dans les piges. Le nombre m de mg de CCb capt est donn par l'quation : m = 1,1 x (50 - V) La masse de CCb produit par la dgradation de la substance est calcule partir du CO2 issu des flacons Ft dduction faite du CCb produit par l'inoculum. II en est fait de mme pour les flacons Fc et Fi Les quantits de CCb chaque dosage et cumules sont indiques sur la seconde page de l'annexe 2. ainsi que les pourcentages de dgradation. partir du cumul du CO2, la dgradation est calcule selon l'quation gnrale suivante : Ce document est noire proprit. Ilne peut tre ni copi, ri communiqu des Sets sans atiurisaon expresse cfElfAtochem. La reproduction de ce RC4C6349.DOC page 11/19 ies not contain TSCA CB I Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois ______ mg CO, produit % dgradation = mg COT ajout dans l'essai x 100 Le dnominateur de l'quation exprime le CO2 thorique pouvant se former partir de la quantit de carbone organique introduite. . CO, produit par le flacon strile aprs 28 jours (mg) x J0Q % de dgradation abiotique = ---- = CO,Th (mg) " Le graphique en annexe 3 montre le pourcentage de dgradation en fonction du temps pour les sries Ft, Fc et Fi (fioles d'essai, de rfrence et d'inhibition). 6.2. Rsultats de l'tude Le niveau maximal de dgradation du 4 H H H V est de : 48 % en 16 jours. La phase de latence pour la dgradation de la substance (temps coul entre le dbut de Fessai et 10% de dgradation) est d'environ 1 jour et le pourcentage de dgradation au bout de l'intervalle de temps de 10jours suivant cette phase de latence est de 47 %. 6.3. Clauses de validit de l'tude La diffrence entre les valeurs extrmes obtenues pour Ftl et Ft2 est infrieure 20 %. Le pourcentage de dgradation de la substance de rfrence (Fc) est suprieur 60 % en 14 jours. Dans la fiole Fi. la dgradation de la substance de rfrence est suprieure 25 % au cours des 14 premiers jours : la dgradation de la substance de rfrence n a donc pas t inhibe par la prsence de la substance d'essai. La quantit cumule de C 0 2 dgage par les flacons Fb est infrieure 40 mg/1 de milieu, soit 60 mg. La teneur en carbone inorganique dans la suspension de la substance tudier en milieu minral (flacons Ft) au dbut de l'essai n'a pu tre dtermine (cf. 5.1.3); le critre mentionnant que cette teneur doit tre infrieure 5 % n'a pas t vrifi. La concentration en Cl dans les flacons Fb est de : 0,22 mg/1 (annexe 5). Ce docximent est notre proprit IIne peut tre ni copi, ni communiqu des t e s La reproduction decerapport d'tude n'est autorise quesous RC4C6349.DOC page 12/19 F not contain TSCA CBI Elf Atochem S. A. Centre d'Application de Levallois 7. CONCLUSIONS L'tude de la biodgradabilit arobie ultime facile du selon la mthode de l'annexe C.4-C de la Directive 92/69/CEE, montre que cette substance prsente un niveau maximum de biodgradation de 48%. Le pourcentage de dgradation au bout de l'intervalle de temps de 10 jours suivant la phase de latence est de 47%. La substance d'essai n'a pas inhib l'activit de l'inoculum bactrien. Selon les indications de la Ligne Directrice de l'OCDE 301, une substance est considre comme facilement biodgradable selon cette mthode si un niveau de 60% de dgradation est atteint dans les 10 jours suivant le dbut de la phase de dgradation (laquelle dbute lorsque 10% du COT a t biodgrad). Ces 60 % doivent tre atteints dans la priode d'essai de 28 jours. Selon ces critres, le nest Pas considr comme facilement dgradable. En raison du caractre rigoureux de cette mthode, une valeur peu leve ne signifie pas ncessairement que la substance soumise l'essai'n'est pas biodgradable dans les conditions de l'environnement mais elle indique que des tudes complmentaires seront ncessaires pour valuer sa biodgradabilit. Ce docunent est notre proprit. line peut tre ni copi, ni communiqu des ets sans autorisationexpresse dElf Atochem. la reproductionde ce RC4C6349.DOC page 13/19 >es not contain TSCA CBI En S. A, Centre d'Application de Levallois 8. ANNEXES 8,1, ANNEXE 1 - Schma de montage Pompe pristaltique NaOH 5M Ba(OH)2 0,0125 M Agitateur magntique Ba(OH)2 Ba(OH)2 Ba(OH)2 0,0125 M 0,0125 M 0,0125 M Mlange ractionnel Company Sanitized. Does not contain TSCA Ce documert est proprit.Il ne peu Sre ni copi, ni communiqu des Bas sans autorisalionexpresse dElfAtochem tareproduction de ce rapport (fau te n'est autoriseque sous ferme de feosM photographiqueMgral. RC4C6349.DOC page 14/19 o03 (..li m u u i t o i i j . n . Centre d*Application de Levallois 8.2. ANNEXF. 2 - Tableau de rsultats et calcul BIODGRADABILIT FACILE Essai de dgagement de C 0 2 92/69/CEE : C.4-C N* d'tude : I6349/95/A I Substance tudie ..................... Il Substance de rfrence : IBenzoate de sodium I Substance tudie : Substance de rfrence : Srie inhibition : mg %C mg carbone 226 10,0 22,5 39 57,7 22,5 45.0 mg C 0 2 th. 82,5 82,5 165,0 VOLUME HCL {ml) Vba Bande nombre de piges Vb Fb1 pige 1 pige 2 TOTAL Fb2 pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Moyenne Fb Vt Ft1 pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Ft2 pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Moyenne Ft Vc Fc1 pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Fc2 pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Moyenne Fc Vi Fi pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Vbs Fbs pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Vs Fs pige 1 pige 2 pige 3 TOTAL Jour 0 25 9 13 16 20 26 28 29 25,8 24,3 24,7 24,4 24,9 24,6 25,0 25,2 26,1 34 3 33 33 33 24,5 35,9 23,5 23,9 24,2 23,9 23,7 24,7 25,8 25,8 33,1 24,4 24,3 24.8 24,4 24,8 25,0 26,0 25.5 24,3 24,6 24,4 24,7 24,5 24,9 25,0 26,0 "### .... 753 .....93,3 72,5 72,6 .....73,7 72,8 73,4 74,7 77,8 24.7 34,5 22,9 22,8 23,7 22,8 22,0 21,9 24,0 25,3 35,0 24,2 24,0 24,2 23,5 22,8 23,8 25,3 25,6 24,2 24,5 24,4 24,5 24,1 23,9 24,8 25,8 ### 75.6 93,7 71,6 71.2 72,4 ' 70,4 68,7 70,5 75,1 ### 75.7 93.5 72.1 71,9 73,1 71,6 71,1 72,6 76,5 14.0 22,1 18,1 23,3 23,6 23,0 23,7 24,8 25,8 21.8 34,0 23,9 24,0 24,1 24,2 24,7 25,1 26,0 24.4 23,6 24,5 24,2 24,8 24,3 25,0 25,2 26,0 ### 60.2 79,7 66,5 71.5 72,5 71,5 73,4 75,1 77,8 16.1 20,9 20,8 22,8 23,7 22,6 23,7 24,7 25,8 23.6 32,1 22,4 23,9 24,6 24,3 24,8 25,0 25,9 24,5 23,0 24,4 24.2 24,7 24,0 24,9 25,0 26.0 ### 64.2 76,0 67.6 70.9 73,0 70,9 73.4 74,7 77,7 ### 62.2 77,9 67,1 71,2 72,8 71,2 73,4 74,9 77,8 2.1 22.1 20,2 22,3 23,8 23,5 23,4 24.8 25,7 17.0 28.0 23,1 23,9 24,4 23,6 24,5 24,8 25,8 22.2 21,9 24,0 24,4 24,5 24,5 24,9 25,1 25.8 ### 41.3 72.I 67,3 70,6 72.7 . 71.6 72,8 7 4 7 77,3 ### #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A ### 41.3 72,0 67,3 70,6 72,7 71,6 72,8 74,7 77.3 0.9 5,7 16.1 21,4 23,3 22,4 23,2 24,6 25,8 1,3 27,1 22,5 24,2 24,5 23,9 24,7 25,0 26,0 18.5 23.2 24.2 24,4 24,6 24,3 25,0 25.1 26,1 ### 20.7 56.0 62,8 70,0 72,4 70,6 72,9 74,7 77,9 25.1 35.6 24.7 24,4 24.6 24,2 24,7 25,0 26,0 25.0 35.5 24,6 24,4 24,8 24,5 24,9 25,1 26,1 24.9 24,1 24,7 24,4 24,8 24,6 24,9 25,1 26,1 ### 75.0 95.2 74,0 73,2 74,2 73,3 74,5 75,2 78,2 25.6 35,7 24,6 23,9 24,5 24,1 24,4 25,0 25,9 25.8 35,6 24,7 24,3 24,6 24,2 24,9 25.1 26,0 25.6 24.2 24,7 24,4 24,9 24,1 24,9 25,2 26,1 mm 77,0 95,5 74,0 72,6 74,2 75.3 78,0 Cedocument est noire proprit lire peut trenirap. nicommuniqu desSerssare autorisationeiqx^dHfAtachem. Lareproduction dece rapport detude n'est autorisequesous formede fac-simil photographiqueintgral. RC4C6349.DOC page 15/1Company Sanitized. Does not contain TSCA CBi Centre d'Application de Levallois BIODGRADABILIT FACILE Essai de dgagement de C 0 2 92/69/CEE : C.4-C N d'tude : 6349/95/A Substance tudie : Substance de rfrence : Benzoate de sodium /jour 1,1 "(Vba-Vb) 1,1*{Vba-Vb) 1,1*(Vba-Vb) 1.1 "(Vb-Vt) 1,1*{Vb-Vt) t.r(V b -V t) 1,1*(Vb-Vc) 1,1 *{Vb-Vc) l.f(V b -V c) 1.1*(Vb-Vi) 1.1 "(Vhs-Vs) Jour Fb1 Fb2 Moyenne Fb Ft1 Ft2 Moyenne Ft Fc1 Fc2 Moyenne Fc Fi Fs 0 2 . 5 9 13 16 20 26 28 29 0 1.8 4,3 1.8 0,7 1.1 1.1 1,8 1.0 0,6 0 2.0 3.9 2,8 2,2 2,5 3.7 6,9 5,6 3.5 0 1.9 4,1 2.3 1,4 1,8 2.4 4,3 3,3 2,0 0 17.1 15.2 6,1 0,4 0,6 0,1 -2,6 -2.8 -1.5 0 12,7 19,3 4.9 1.1 0,1 0,8 -2,6 -2,3 -1,4 0 14,9 17.2 5,5 0,8 0,3 0,4 -2,6 -2,5 -1.4 0 37,8 23,7 5.2 1,4 0,4 0,0 -1,9 -2.3 -0,9 0 #N/A #N/A #N/A #N/A ntilK #N/A #N/A #N/A #N/A 0 37.8 23,7 5.2 1,4 0.4 0,0 -1,9 -2,3 -0,9 0 60.5 41,3 10,2 2,1 0,7 1,1 -2,0 -2,3 -1,6 0 -2.2 -0.3 0,0 0,7 0,2 1,0 0,3 -0.1 0,2 |C 0 2 cumul (mg) Jour Fb1 Fb2 Moyenne Fb Ft1 Ft2 Moyenne Ft Fcl Fc2 Moyenne Fc Fi Fs 0 2 5 9 13 16 0.0 1.8 6.1 7,8 8.5 9,6 0,0 2.0 5.8 8.6 10,8 13,3 0,0 1.9 5.9 8,2 9,6 11,4 0.0 17.1 3 Z 2 38,3 38,8 39,4 0.0 12.7 31,9 36,8 37,9 38,0 0.0 14.9 32,1 37,6 38,3 38,7 0.0 37.8 61,5 66,7 68,1 68,5 0.0 #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A 0.0 37.8 61,5 66,7 68,1 68,5 0.0 60.5 101,8 111,9 114,0 114,7 0.0 -2.2 -2.5 -2,5 -1.9 -1,7 20 10,7 17,1 13,9 39,5 38,7 39,1 68,5 #N/A 68,5 115,8 -0,7 26 12,4 24,0 18,2 36,9 36,1 36,5 66,6 #N/A 66,6 113,8 -0,3 28 29 13,4 14,0 29,6 33,1 21.5 23,5 34,2 32,7 33,8 32,4 34,0 32,6 64,3 63.4 #N/A #N/A 64,3 63,4 111,5 109,9 -0.4 -0.2 (DEGRADATION (%) Jour Ftl Ft2 Moyenne Ft Fc1 Fc2 Moyenne Fc Ft Fs 0 2 5 9 13 16 20 26 28 29 0 21 39 46 47 48 48 45 41 40 0 15 39 45 46 46 47 44 41 39 0 18 39 46 46 47 47 44 41 39 0 46 75 81 83 83 83 81 78 77 0 #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A #N/A fiN/A 0 46 75 81 83 83 83 81 78 77 0 37 62 68 69 70 70 69 68 67 0 -3 -3 -3 -2 -2 -1 0 -1 0 Cedocumentest noire propret Hne peu tre ni copi,ni commmiqu destiers sansautorisationexpresse cfEtfAtochem. Lareproduction de ce rapport d'tude n'estautorisequesousfairede (ac-sirite phriographicpje Mgral. RC4C6349.do c page 16/tompany Sanitized. Does not contain TSCA CBI Elf A'torehem S. A. Centre d'Application de Levallois 8.3. ANNEXE 3 - Graphique de la dgradation en fonction du temps Company Sanitized. Does not contain TSCA CBI l i FI1 ------- A---- -- Fc2 Temps (Jours) FI2 " " " " Moyenne Fc ------ y;------- Fi -------0------- Fc1 -------0 -------Fs Ce document est noire proprit. Ilne peut are ni copi, ni communiqu des S as sens autorisationeqxesse rfBfAtochem. t a reproductionde ce rapport d'tude n'est autoriseque sous fam de feosiml photographique intgral. RC4C6349.DOC page 17/19 UT Miocnem a. h . Centre d'Application de Levailois 8.4. ANNEXE 4 - Milieu d 'essai Le milieu d'essai est ralis partir des solutions suivantes: Solution a Dihydrognophosphate de potassium anhydre (KH2PO4) 8,5 Monohydrognophosphate de potassium anhydre (K2HPO4) 21,75 Monohydrognophosphate de sodium dihydrat (Na2HP04,2H20) 33,4 Chlorure d'ammonium (NH4CI) . 0,5 Eau ultra-pure, q.s.p. 1000 g g g g ml Le pH de ce mlange est de 7,4 Solution h 22.5 g de sulfate de magnsium heptahydrat (M gS04,7H20) dans 1000 ml d'eau ultra pure. Solution c 27.5 g de chlorure de calcium anhydre (CaCl2) dans 1000 ml d'eau ultra-pure . Solution cl 0.25 g de chlorure de fer(III) hexahydrat (FeCl3,6H20) dans 1000 ml d'eau ultra-pure. Cette solution est prpare le jour du dbut de l'essai Pour 1 1 de milieu, ajouter 800 ml d'eau ultra-pure : 10 ml de solution a, 1 ml de. chacune des solutions b cl et complter 1000 ml avec de l'eau ultra-pure. Ce documentest noire proprit. Il nepeut lre nicopi, ni communiqudesfias sans autorisationadresse (fElfAtochem. la reproduction de ce rapport d'tuden'esiautorisequesous (dunede feo-sjrt phctogaphique htgraL RC4C6349.DOC page 18/Oompany Sanitized. Does not contain TSCA CBI tir Atocnem s. a. C entre (l'A pplication de L evallo is 8.5. ANNEXE 5 - Bulletins d 'analyses Cette annexe est constitue de 4 feuillets non pagins la suite de la prsente page. Ce document est notre proprit. Ilne peut tre ni copi, nie . La reproduction de ce rapport tftude n'estautorise que sous fotmedefeK>sirr p RC4C6349.DOC page 19/t9omPany joes not contain TSCA CBI elf atochem CENTRE D'APPLICATION DE LEVALLOIS Levallois Perret le : 06/10/95 BULLETIN D 'ANALYSE ~ | Rfrence AGILAN : Rfrence document : 95/SAEf/I020/AC Rfrence demande : Votre demande Du : 02/10/95 Squentiel : Etude BPL: _____________Destinataire TBOEBAUD HERVE SAE CA LEVALLOIS Dtermination du taux de Carbone d'un chantillon de Analyse faite sur CHN/OS CARLO ERBA n42701 Coll A Couty Copie AM Petit Responsable d'analyse : FREDERICK MANTIS! Company Sanitized. Does not contain TSCA CEI Rfrence Analyse :j D estinataire: THEEBAUD HERVE Page : 2/2 Echantillon : C o n s titu a n t CARBONE CARBONE Teneur 10.18 9.75 U n it -% % ; Remarque Company Sanitized, Does not contain t s p a np; elf atochem CENTRE D'APPLICATION DE LEVALLOIS LevaDois Perret le : 12/10/95 BULLETIN D'ANALYSE | Rfrence AGILAN : Rfrence document : 95/SAEf/l054/AC Rfrence demande, _____________Destinataire THEEBAUD HERVE SAE CA LEVALLOIS I otre demande BIODEGRADABILITE C4C DU CID Du: 11/10/95 Squentiel : Etude BPL: Dtermination C 1 D sur essais biodgradabilit C4C du Analyse faite sur TOCOR 100 MAIHAK n CA 000112 Coll A Couty Copie AM Petit Responsable d'analyse : FREDERICK MANTISI {Isa : Company Sanitized. Does not contain TSCA CBI Rfrence Analyse : D estinataire : BAUD HERVE Echantillon : TEMOIN C o n s titu a n t CID Teneur <0.1 Echantillon : BLANC 1 C o n s titu a n t CID Teneur . <01 Echantillon : BLANC 2 C o n stitu an t C ID C ID C ID Teneur 021 023 024 U n it mg/l U n it mg/l U n it mg/l mg/l ' mg/l Page : 2/2 R em arqu e R em arqu e - R em arque Company Sanitized. Does not contain TSCA c ri