Document 6b99QBNqOnknvL13LeprvakK1
wu3 , . Form 67447711 A
TTEECCHHNNIICCAALL RREEPPOORRTT SSUUMMMMAARRYY
10: TECHNICAL COMMUNICATIONS GENTER - 1012 TO: TECHNICAL COMMUNICATIONS CENTER - 201-2CN
[I ---- (Important - If report is printed on both sides of paper, send two copies to TCC.)
[aa .1/9/78
or Division
Project
Environmental Laboratory CEE 10) Fate of Pluorachosicais Environmental Laboratory i(nEEth8e PtCa)vizonsent
Dept, Number
oizlzsz [ 0222
IProJect Num~r
Fate of Fluorochomicals in the Environment
Report Title
ome HsiodeEgratsL tion Astudies2of FluoI rocasbons -- 11 + : B~odegradation Studies of Fluorocarbons -. II
To
i be bacon _ Re -- Author(s)
D. L. Bacon
bp. peiner as E, A. Reiner
TNootebook Refehrendee 40671,, Ppp..
54-545-656;;
45727,Pp.. 11--3300;;
4466226699,, pp.. 77,,
1144,,
15,
15,
Te, 21, 25, 291 41947, pe 50, So 551 SAIL, pu 27-38 20 18, 21, 25, 29; 41947, p. 50, 51, 55; 44191, p. 27-32
erry D8 cota 3Bans |rREyCS iam SECURITV
[] Open (Company Confidential)
~ Closed
] 3M CHEMICAL ~=
(Special Authorization)I REGISTRY F
l 9970612613
[ReportN~mber
Employee Number(s[
47F8eo16Trudy Covert No. of Paget Including Coversheet
20
New Chemicals Reported
[] Yes
[] No
ny [omens ober KEYWORDS: Eft, (Sel~ttermsfrom 3M
The~urus, Suggest other
pee To evaluato che susceptibility of PY S432 co biological applica~eterms.) Reompasiion (B(Bioioddeeggraraddaattiioonn)) 3: EE ~ PC-Div. Erbe, assis. Envir. Assess. FGhouaarraoscinensiioensl errr Fluorochemical TR ETmal ee ams [Degradation)
CURRENT OBJECTIVE:
To evaluate the susceptibility of FM 3422 to biological deocommpeosition.
REPORT ABSTRACT: (2~0-250 words) This abstract information is distributed by the Technical Communications Center to alert 3M'ers to Company R&D. It is Company confidential material.
Biodegradation seudies ave described hich allow the evaluation of the Biodegradation studies are described which allow the evaluation of the emeepeETity oF TH 433 co scrobis microoiel dopradarion: biofesrada- susceptibility of FM 5422 to aerobic microbial degradation. BiodegradaThon best procedures used are modifications of common biodsgradetion tion test procedures used are modifications of cormon biodegradation Hook metho: They inchule sonteuntinious aetivaed sluage. snd shake test methods. They include semicontinuous activated sludge and shake Bret Shecavay stoties with sequentiel aiaptive TramsForss Mieraiel flask die-away studies with sequential adaptive transfers. Microbial Eomeeuts vers chtethes Fron seveesl snvisenmencal sources, 300s sources innocula were obtained from several environmental sources. Some sources. Sore Setorred for thelr 1ikeiihood of Containing microvial Populations were selected for their likelihood of containing microbial populations richod In the SababL11ty oF deposi. Th S413 on s1at1os Toate: eccnhheremimiiccchaaelldss.,in AAtnnhaeallyycttaiipccaaabllilppirrtooycceeoddfuurrdeeessgrauudssieenddgiinFnMcclluu3dd4e2e2dd oGGLrLCC,,siTmTLLiCCl,,ar1Mf4ClC-u-soscrcioin-nttiillllaattiioonn Coming ind wmeiyses or solessed Fluoride, Interpretation of Dio cou~ting and analyses for released fluoride. Interpretation of hieGapredetion resuTis: Fron these seudies was hindered by the Tou SolubL11ty degradation results from these studies was hindered by the low solubility on Sides 13s elatiILe and Lt SFEIRLtY For suspends orpemic of FM 3422, its volatility, and its affinity for suspended organic Eitorial, This banding mde 14 i Facult ts quntieacively exirace material. This binding made it difficult to quantitatively extract TACSHES Fron the bioiogieal solids of the test sutures. Nontoxic FH 3422 from the biological solids of the test cultures. Nontoxic Gncorgent Stab T1300 skeLows beno used to. cireumvent problems smised detergent stabilized emulsions were used to circumvent problems caused
by low wwaatteerr ssoolluubbiilliittyy..
) es termi Information von Liaison
anconrpenTAL 3M CONFIDENTIAL
11115533..00000011
Exh1i1b53it Go 3M MN03424083
en
-2-
SUMARY_ AND CONCLUSIONS
SUMMARY AND CONCLUSIONS
FcoFcMoMpontnd3i3di4m4it22utii22moonnwwfssaoasrs ddbeffeoisosoucuclnrnrodiidbgbeiettodcdoalbbiineendetctchghoorimimssapdplaelrretetetieppeoollonyryr.tt.rr. eeFssMiTTisshhtte5eaas4sn2nee2ttccwototoanonsddibbitaiitoiilooosddnnoeessggrfraaoaadudrrnaeeadttiiocotcnoononnhususaninidvdddeeeeerrrre4edtdthshetet0orobbnege
affinity for organic solids. optimum for biologcal degradation.
affinity for organic solids.
FM 3422 was also found to have a strong
eIInnmulaasllllionee,xxppeetrroiimmheeenntttessrogddeeensseceroriuibbseedmdihhceerrroeebiiinna,,l cFFuMMlt35u44r222e2s,wwaassuneedxxopproosaseeedrdobaassicaacsosnuudrrifftaaiccottnaasnn,tt assnttdaabbniielliaizzreedd oonnerremegguuuaatltnnsrriiiaassollmnm,ssppHHwwteeo((rr77eeh..e11oto-7beb7..trt55aoa))igi..nenneeeddoCCuoooosrrnnccdedemenenivtvtcererrlalaoototbpipiieoeoaddnnlssffcroruooolffmmtuFFrssMNeoosii33,ll4422o2o2urrnrdrwwaaeaannrssggtteeaeeddertotffrbrrreieooaacmmttmmc11eeo00nnn00ttd--i55sts00lli00uuoddnmmggsggee,//ssll....andSSMMoiinomccemerraoor-mmtiioccrrfoolbbuiioaarllochsseoonuuirrcccaeelsss.wweerreeLtssweeallseeccttfeeoddltbbeetcchaaatuusseethooosffetthhseoeuiirrrceppsrreevvwiieooruuess looirrkeclcoyonntttiionnuuhooauuvsse deeexxvppeoolssouuprreeed nneettaarxxottappuunoofrrssslfaaeeuellddorllrsyoyttocohoeeebfbnnmoorrittiitchhcchaehhlhheesiiddl.ggohhccuullcI((tett+~luu22lwrr00aee00sss00dem2cncfgasae//pilp1ltata))bbyllteacehaunantldodotffutllrohdodewveeessggerr((aaa+~ldds1Ili00oi00onunrwggcmemeggdff/s/lll1auu))wcooecrrolroccciceeehmhlleealllmstiiiiddkccoeeeaannnlllssyssiit..ttotiioeeFsshMFP..aMMv3e343WW2442e2ed22ee2ekkvtwllwoeaayylssoped pptrrrooaccneeseefdedrsffoorrofssiitxxhemmoolnnottwhhssc..ell density cultures allowed acclimation to FM 3422 to
TwThohiiussldssttauulddlyyowccbaainmonodotetgrrruaudlleaetiooouuntt wthoautldaamlliocwroboriogdaneigsraadcaotiuolnd
otthhfeethppioosssssicibobmiiplloiiuttnyyd,tthhnaatotrccoocnnadndiittiiitoonnessxclccuooduuellddtbbheee pffooosuusnndidbitthlhiaattty covfenthtuisallcyombpeouenndr, inchoerdcatnhatitcoeuxlcdludmeetathbeolpicoaslsliybiallittyer
tttThhheisiassutltaccshhm eeommiifcicrcaotalohlirgswuannnqddiueesirrmtetthhceeoexutccldoeonnndsediivitvteiienootnnsusstauldddlyyeessbsccetrriribobeenendgdrlicyiihnnesdutthghgiithsessatrrteoppctoohoraurttlt.d. Fm MNNee4evt2ave2breotrthlihiescelalelelslissyks,e, layttlhhteeetor
pprIeetesrsrsusoilibstssstteroiinvnfedttthhheeaisffeeqinnnvvuiiiirtrtoeyonnmmefexoenrnttetnorsffgoiovarrenieecxsxstttueednnsdydueegddgsetrsppoteensrrgiiootlyddhssatsuuugFnnMagaleltt3see4trr2e2etdhdarbbotyyleFMam mseeet3tda4ab2b2otololiiiscctheaalittktteaeancclvykki.r. oton-
mmsIeetesndntitnoeibisnsstesrllviikeokedefllyyaaqfuttfoaointiistscyooorrbcfboosryttosootregoomrarsggn.aaicnnisiccTssasbulsgsueugccehh1stsasassumthmtthahaorotisszeeFeMspprr3eet4s2she2eenntretexlpiiennearsissemoodieilnlttosoorrcthioinenndutothhcneetveidron-
in the study sediments of
in the study
of FM 3422 biodegradation. aquatic ecosystems. Table
of FM 3422 biodegradation.
1
summarizes
the
experiments
conducted
11115533..00000022
3M_MND3424084
3M MN03424084
TBALBLEE 11
SSUUMIVMIA~FRRMYY54OO2FF2ELXBXIPPEOERDREIIMGMERENANDTTASSTIPPEOERNRFFOSORTRMUMDEEDYD
IN
IN
FM 3422 BIODEGRADATION STODY
Experiment
Experiment
11)) 11a00c--dtdaaiyyvatsseeedmmiiccsoolnnuttdiignneuuoobuuissodegradatsatiitcooatnnibvialsstittezuudedddyysloFouMffdgs3seu4u2rr2bf.iaaoccdtteaagnnrttada-
stabilized FM 3422.
22)) 66--Snmtoounndttyhhwissthhhaakkeweeeffklllaassykktrddaiinees--faaewwraasyy. study with weekly transfers.
33))exMMpaetareteirrmiieaalnlsst..bbaallaannccee experiment.
4)
43
FFlluuoorriiddee
release
release
55)) AAatctteteetmmaptptetss etxtootrrarecectcoaobvvleeerr nnFooMnne3et4thh2y2yll affrrcooemmtaccteoellllexcctuurallttcuutarreebssl::e FM 3422
A)
A)
HHyyddrroollyyssiiss
8)
B)
BBiinnddiinngg
ttoo
CCoonnttaaiinneerrss
Volatilization from Cells
C) Volatilization from Cells
0) lot ethyl acetate extracts
D) Hot ethyl acetate extracts
E) Reflux with Dioxane
E) Reflux with Dioxane
FFiinnddiinnggss NNinoo eFFMtMhy33l442222acbebtiioaodtdeeeggerrxaatddraaattciiotonsn pbpyrroodTdLuuCccttossrwweGerLrCee. ddeetteecctteedd
in ethyl acetate extracts by TLC or GLC.
AeAgtghaayiilnn nnaoocetddeaegtgreraaddeaxatttiriaoocnntspp,rrooddHuuoccwttessvewwree,rree>5dd0ee%tteeaccnttededd iinn
seesooxthmmtyeretaltiicmmtaeaecsbselte>a>77t5e5F%%Meoo3xf4ft2r2atthhcweetass.iinnmiiiHttisioasawlillenlyvgyereef, trthho>y5ym0ll%exaatcacreneatdtcaatttsee
from 7-day-old extractable FM
from 7-day-old
cultures. 3422 was
cultures.
missing
from
extracts
AAFnln aa34ttt2te2emmppptrtesttoeonmmteeaiasnsuurtreehetthwheaeteffrrr,aacctetitiohonynlss ooacffetM1a4ctC.e-, aTFaMhnnidds34ss2ooa2llpiipddpassrreeppnshhetaalnssyteesswinasooffthdeu77e--wddtaaaoyyt--eFoorNll, dde3cc4thu2uly2lttluuvrroaeelcssaettifaflaatieiizll,eeaddt~:iL.on dcTdheuuilrrsliisnn,ggappssFoaoMlrliie3ddn4sst22lyddrbrywyeiaicnsnaggm..sduneWoWhnhteeeonxntFrmmMaiicxx3tee4ad2d2bwlwieivttohhltoaotggirrlooriwwannzpaitdilyon ttcooellbbsee, eexxFppMllaa3ii4n2n2eeddbbebycyamaaemmneeottnaaebbxootllriiaccctpphahebenlnooemmeetnnoooonn..rapidly
FdFlilueuo-orariwidadeye csctoounndccieeennsttrrwaaitttiihoonncuddliitddurnneoostt aiincncccrlreeiaamssaeeteddduurrtiionngg FFdtNMoie-33t4a8h22ew22a..ypersTfTthhluiidussioersossuuwpggioggtreehtsstitsoscnunlnotooufrmmeooMsddMiiffa3iic4cc2c2aal.ttiiimooanntssedoocctoccuurr
to the perfluoro portion of FM 3422.
NNeexeititrtahhceetrrabaalcceiiddFMoorr3bb42aa2ss.ee hhyyddrroollyyssiiss ffrreeeedd nnoonn--
extractable FM 3422.
nIIorrtrreeveveexrrpssliiabbillneenbboiinnnoddxiitnnrggactttoaoblcceuullttFuuMrree12cc2oo.nnttaaiinneerr ddiidd
not explain nonextractable FM 3422.
N tNioolnnieezxxittnrrgaaccatttaabbl1lee00FfCMM. 3341f22r22omwwacasuslt11u//3r3erresecocolovivdeesrreedadnbdbyy
vola-
vola-
condensing. tilizing at
condensing.
100C.
from culture
solids
and
EErttehhcyyollvearacceeattdaadttieetioeenxxattlrraaccPttYss 5aa42tt2.6600CC.. ddiidd nnoott
recover additional FM 3422.
RrReeefcfloluvuxexirienndgg cacululllttnuuorrneeexsstoorlliaiddcsstawbwilitethhFN11,,3444--2dd2iiooxfxaranonene the srSOoeofllciioFddvMsser3oeo42dff2 alslh77o--nwddosaanyyet--xhootalltrddaccnctouuallbbttliuueorrdeeessFg,,MrCCaoo5dmm4app22tllieeottfneeromrreectchooevveerryy oooccfccuuFrrMrree3dd4..22 shows that no biode~radation
11115533..00000033
3IMM_MMNN0033442244008855
a-4-
INTRODUCTION
INTRODUCTION
hOOauusrr beeeaaerrnllyydwweosorcrkkribeeevvdaalluuianattiianngpgretthvhieeousssuussrcceeepppotrititbbiil(li1it)ty.y ooTffhiFFMsN w33o44r22k22 ittonocm lmiuicdcrerodobbitiawalol sddeeepggarrraaaddtaaettiioonn hW Muaatasrirblbbuiuerzreggantirreoednsseppsbiicryrrooibm sweemedtatrcrieiincclieneaxaxptppeereerdrviimmbioeieunontlstsosgrwiewhcphiaoiclcrhht,s, l(cuc1odo)ng.nveviinTincmhcimiinsengdglwilyayo,t,reklsshyhinoowcwfleeouddldleiiondwncicrnrtwegeaoasasedesdeddipotoaxixryoyagngteeennof uuwFfnntsisl3ttia4az2bba2lltiiizazoe5enddtbheeyem muulsulsonsiliaooecnncssclixmOoofgfaetenuwdopnuupsbruiirocifalfioriesbgddoincaFFMsMlous33rl44uc22de22,.g. eoxiIIm nyngmetthnehedoussiaepotteattlwykwoeofooaelbxxloppoveewerriiinm stgehenentatseds,n,ddiw wotiigoitetnhhnouosf LcFleMeavvreb3elo4ln22aapccocacrsootumitnthoteeneddosofffooletrrhee33%x%mooogolfefencotthuuhleese,oocaxxryybTggoheenenn rsrreoeeqaqusuurociinrreee,ddfooxrttoyogtcehcnioosmmpuprlpeolteamttkaeeilelynysabooxouxinvideedixizzptheeleaitthnheeeendd.hhoyygdedrnrooo-u-s OOcansanerebaoppnorosespsssiuoiblrbittiilloiointtfyyotiihfssethetthemhuaam lttsobbilioieooncddueeflggoerr.raamddaatTabibhloeleenrebffaryrasagosgm nomneenifntcotsasrtiootohffni.sFFMMre33m4422a22insmmaayuynhheaaxvvpeelabbineeeeennd. ffoorrmmeedd
as a result of the emulsion formation by sonication.
AAttthetteemmoppbttssservtteoodiisosoxoyllgaaettnee uFFpMMta33k44e2222weddreeeggrraasdduaacttciieoosnnsppfrruooldd,uuccttasss wfforrrooemm ttthhheeoseWWaarrfbbruuorrmggaffllsaaussbkksssequffeoonlltlloowwiinngg SsstoeehlmemuiitccoioobonnsnttesiirnnvuuoeoofduussoFMxyaag3cce4ttn2ii2vvuaapttiteenaddkeetsshllawuuneddorggleee wu((enSSrsCCouAASSc))caedsbbdsiiefooduddleed,ggirrraaeaddscaatwlttyiieoornnteotsshtttouuhsddeeyy..biforloIIonnmgiattchhaesluSSbCCsrAAeeSSqacutessonttrtuusdd.yy pAAshddoaddlseueetddioaiinnncscttuhhomiiflssaFtmmMiaannn3ngn4ee2rr2o,,n itntthhheeeethFrP]aeM~naoc33lt44o222r2wewrrraeaalppliiasdddlldyyaenddccoodwnniiggrteeehaacltlleetyhdde atanbondidotlhssoeeegppibaacirraoaallttoeegdsdioclffiarrdloosmm.rettahhcTeethowwirsaastt.eerr psSdeheeappgsaraeraradataatiitcooicnnvuemuffrelronaomztmyimnttheghsee.oww naattteherer pprhehaaascseetomrmaaywyalhhlaasvveeammnadaddweeitFFMhM t33h44e2222biuuonnlaaovvgaaiiicllaaalbblleesolttoiodsrr.eeaacctTthw wisiitthh
degradative enzymes.
FIInnM tt3hh4ee22pprtroeesseebnintotderregepprooarrd% ta,tiffouunrrtthhaeerrer aadetttstecemrmippbttessd.ttoo cchhaarraacctteerriizzee tthhee ssuusscceepptitibbiilliittyy ooff
FM 3422 to biodegradation are described.
MMEETTHHOODDSS AANNDD MMAATTEERRIIAALLSS MMmooessttthodmmseetthhaoondddssmaaatrreeeriddaeelsssccrrwiiebbreeedd uiisnnedtthheereeepxxeppaeetrreidimlmeyenntttaahllroussgeehccttoiiuootnn..theTThehexepeffrooillmlleoonwwtii.nngg ssttaannddaarrdd
methods and materials were used repeatedly throughout the experiment.
Extraction Procedure
Extraction Procedure
111000...000 maalll sosaafmmpepltlehesyslwweaercroeetaeetxxett.rraaccTtteheded siinanmppplooellsyyppwrroeorppeyylleetnnheeenccceeannpttprreiifdfuugwgeiethttuubbpeeosslybpbyryopaayddlddeiinnngeg caps maaiinn0nd.du0tiiemnnslvveeroarttteedadebtoh55yu00ltttii1ammc2eee,sst0..a0t0e.xPPhhagarssTaeehveisstseeyapp.maaprrlaaeAttsiioocwnnoerwrwraeaesscttieehonnenssnuuhrrcaeeasddppbbetydyo wbcciooetnnhtmtarrpdiieoffluuyggfpiionrnrgogptyhffleooerrndeei1c00rceaapssed mvVeioxonltluurutanmeceetsioooffant,tthahebeAousfstotolelvrv1ee2nn,stt0h0app0khhiaanxssgeegtrahaavonniddtvyott.lhheeunoAiinnccocorrfreerataeshseceedtdiaovqvnouolelhuouanumsose ooptofhfabstteehheemiwwanaadcettreeearrfsoeprpshhaatsshfeeerodfmfeoocll1rll0eoo.wa0wisinentgdgo 9e11.x110t..r00aalcma.tllioaanTnn.hddorttohAhfefootrevveroo,lluusmshaeeakdiooontffgerttmhthieheneaoettvtihohoyylnllumeoaaccfeeotttaahtetteehneusssooabllqevvureeenonuttosfpphpphahpssaneeseofddeeiccFnrrcMeeraae3ssa4ees2sse2soffrfrriorogmomimn11a010l.0.l0.00yttooto pmp9rr.u0eelssteemilnnp.ttlyiiinnnTghettrhhteeehfeowwraacetto,eenrrcaeppnhhtdaaersstaeeetriwmwohihniinccafhhtoiuoniinssd oeeinxfxttrrtthuhaeeccttneeedutdmhybiilennrttooaocfeeetttphhayyptllem poaahccaeesttFeaaMttebe3y42ii2s0s.9mmo0aar.ddieogibbnyyally
multiplying the concentration found in the ethyl acetate phase by 0.90.
MMeeddiiaa TTchhoeensbbiaassstaaelld sosfaa:llttss mmeeddiiaa uusseedd iinn tthhee sseeamiiccoonnttiinnuuoouuss auccttiivvaatteedd sslluuddggee eexxppeerriimmeenntt
consisted of:
1.0 41 MH,CL 21..00 g9//1l NKHP4COI, 02..205gg/l/1K2HgHSP00,4 7,0 A0Add.2jj5uussttgee/1ddMttgooS0ppl4Hi.777H..2220wwiitthh ssttrroonngg aacciidd
11115533..00000044
3M_MND3424086
3M MN03424086
s-5e-
MThee ssttaannddaarrdd mmeeddiiaa uusseedd iinn ddiiee--aavwaayy aanndd ssuubbsseeqquueenntt ssttuuddiieess ccoonnttaaiinneedd::
113335 ppppmm oof FFMM 53442222 ((eemmuullssiiffiieedd)) 2 8/1 Ko, 22.4g/15/1K21HP0B4roth 283.40 mgg/1/1YMAlcBornootxh. 6830g/m1g/E1tAhylclonaocxetate ~pi6l 27.2 g/1 Ethyl acetate
pH ~7.2
eIIttthwywaalssappcrreoetppaaatrreeeddinbbyy10e0emmuumlllssiiofffyyii1nn2gg.500..g22/1ggAolocffonFFoMMx35s44o222l2utddiiiossnssooltlvhveaedtd hiianndwwbaaetteeenrr--sspaartetupuarrraaettdeedd uueFsstohiirynnlgg30eoattschheeyyctlloantdeaascceeinwttiaatttihee0-0-ssaamalttmuuodrroeaaflttee1ddS2.Dw5FwaattTgeei/rrls,.suAmlicEEzommeuunrllo.ssxiiffsiiTocchlaeautttiiiroooennnsuwwtlaahtssaitnagahccacccdmooummblppeslleiiinossnhhpeewrddaesbpbyayrtmemhidienxxiinngg dfiolrut3e0dseinconadsK,wIiPt0h, saomloudteilonSDwThicThissiunmitzuemr.wasThedilruetseudltiinngaewmeualksiYoMn wbarsoththemnedia.
diluted in a K2HPO4 solution which in turn was diluted in a weak YMbroth media.
bTTyhhee issnuuorrcffuaalccatttaainnnttg cctoohnnetstaeaiinnmiienndggiammeaedndidiaacwwoeemrrpeeariddneegmmoonntsshtetrraadttieesddsolttovoebdbeeonxRoyongMteOonXxLicCcontctooenmmtiricacrtroioooonrrggaanniissmass bdTdyheeeppsllieeenttoiiccooounnmlpaatrrriaainttseegossntshfferrwsooeemmremttheheedmssiaeeadecacuunilldnttiuutcrrioeeamsslplaywwr,iiittnhhgafttttehhheroossoeedniesoosffoholnnuvoorenn,dssuuaorrnxffdyaagccettanaafnntttce--orccnooconnenttneaatidrinaaniytiningogonfccuullttuurreess.. Teehxxeppsooessuurrceeompttaoorittshhoeensssuuwrreffraaeccttmaaanndtte--ccooinnnttiaatiiinanliilnnygg,mmeeaddfiitaae..r one hour, and after one day of
CChheemmiiccaall
Analyses
Analyses
TTLLCC aanndd GGLLCC aannaallyysseess aarree ddeessccrriibbeedd iinn tthhee PPrrooggrreessss RReeppoorrtt bbyy AA.. MMeennddeell ((22))..
Chemicals
Chemicals
TThhee ffoolllloowwiinngg cchheemmiiccaallss wwoerree uusseedd iinn tthhiiss ssttuuddyy::
1)
1)
SSuubblliimnaatteedd FFMM 53442222 ((sseeee rxeoppoorrtt ooff AArrtt MMeennddeell = (2)
22)) RRaaddiiooaaccttiivvee FFMM 33412222 ((sseeee rreeppoorrtt ooff AArrtt MMeennddeell --((22))))
33)) EEtthhyyll aacceettaattee -- MMaalllleenncckkrrooddet,~.AA.RR..
44)) YYMM BBrrootthh -- DBDIaIFcFCtCOoO -Y-oaBBsaatccttooExDtDerehahcyytddrraa-ttee1dd4.3% DDBBIIaaFFccCCttOOoo-YMMPaeaepllatttsotnEEexExtxtrrtaarccattct ---Sa111444s...333i%%% BBBaaaccctttooo---DPDoeexpxtttroronoessee --- 442773...668%%%
5)
EEtthhoerr--
AnhydrousJ,.
Anhydrous,J.
TT..
Baker, Baker,
"Baker
"Baker
AAnnaallyyzzeedd..""
5)
66)) SSiippoonnaattee DDSS--1100 -- AMA eppouurrliiaff,iieeddIncaaollrkkpyyollraaarrtyyelld.-- ssuullffoonnaattee ssuupppplliieedd bbyy Alcolac, Incorporated.
77))
Alconox
Alconox
-
-
AAphmm oisixpxthtauutrreees,oofcaaarltkbkoyynllaaatrreyysllssuuallnfdoonsnayatnteeesrs,g, isllatauiurcryy1lageaanllctcooshhoo-ll ssusupulplflfaaiteteedss,,
bpyhoAslpchoantoexs,, cIanrcboorpnoarteasteda.nd synergistic agents - supplied
by Alconox, Incorporated.
8) 1,4-Dioxane - Reagent grado - repackaged, supplier unknow.
8) 1,4-Dioxane - Reagent grade - repackaged, supplier unknown.
9)
9)
Aquasol
Aquasol
-
-
NXXuyycllleeennaeer--.bbaasseedd
scintillation
scintillation
solution
solution
-
-
supplied
supplied
by
by
New
New
England
England
Nuclear.
11115533..00000055
33MM_MMNND033442244006877
-
-6-
EXRERDENTA
EXPERIMENTAL
SSeemmiiccoonnttiinnuuoouuss AAccttiivvaatteedd SSlluuddggee SSttuuddyy
oIIFnn GaannLeeiaanrrlliieersremssittuucddoyyn,,tinnnuooouddseeggrraaacddtaaittviiaootnnedpprsrooldduuudccgttess (ooSfCfASFP)MM s334t42u22d2ywweeirrneewhddieecttheeccttFeeMdd3bb4y2y2TTLwLaCCs osasriinmmdppGllLsyyCepaaianrddaddteeadeddstetomofircottohnhneettimmhneeeuddoiwiuaaasteaarssacpatahnniavsoeaettthheaad(nn1oo)s.llludssgooIletluutwt(iiaSoosCnnA,,Sp)oaasnnstdtduuldaFFyMtied3i5n4422t22whhaitrrcaahbppiiioddFldlMyyeg5r4cca2oo2dnnaggwteeaiaasollneedd maBFaanWyyd3nn4soo2ett2pahrhmaoaalvtveeeecdubbleefeeersnno.moobbtSssheieenrrwcvvaeeetddeebbrmeeuccplaahsuuaissoseneesee(nonIz)fz.yymmweeasstIetrccw-ooaiuusnllsddopnnlooousttbtlue"l"aaamtttottelaadecckckt"u"hlaetttshhebehiaoccvdooeeaagggbruuealldeaaanttteeiddon FssShMthouowdw3nyn422ottofombboPeeliecmm3uoo4lr2tee2es.wssauusssScciecenppocttneiidbbullceeemtueldttsooiuoeesnnniszznyygmmoeefemwaauattltttseaairccfkk-iiend((s33o))F,,liuba3al42ess2ee.cmcoaon~ndedcuSSlCCeAAsSS hddaeevggerraabddeaatetinioonn
study of FM 3422 was conducted using emulsified FM 3422.
PParbriiiolorirtyttoottothheestaiibnniiilttiiizaaettiiooFnnM oo3ff422tthhiiessmulsssttiuuoddnyys,,. sseevvTeehroraalltwossuurrBffoaascctttaasnnatttssiswwfeearrceetorttyeesswtteeerddeffoAorlrctotnhhoeexiirr aaabnniddlSSiitipypoonntaaotteestaIDSSb--i11l00i..ze TTFhhMeess3ee42ww2eerreeemublbsooittohhnsuu.sseeddThiienn ttthwheoe mSSoCCsAAtSS sssttauutddiyys..factory were Alconox
ToTthhhoeyleem muaulclesstiioaotnness. ffooPrrortththiiissonsssttuoudfdyytwhwieesrreesmomlaauddteeiobbnyy wddeiirsssesooltlvhvieinnnggadS3dgegdooftfoFFMM g33/44l2222soiinlnut33iommnllsooofff eATAhtllheccyoocnlnooonaxxcceooenrrttarSSteaiit.ppiooonnPnaastoteeroti0Dfo5Sn-c-s1h10e0,om, ifcaaatnnhlddsiseemm isnuoullstlusihiteffiiioeeenddmlwbbsyyeiroem mniistxxhiientnnghgusaffdoodrfreod0r30mteosdseecSwcoeognrne/dd1ss 5swwoiit/ltuhh1ti@Aaolncttsioisnssoosufuxmmioizrzeerr.. DaTDn5hSd-e-1I0Oco,no, en22c.o.e77fnttggrh//a1e3tioeetntuthhsoyylosl uaracfccheaetcetatm atateinec,t,aslsaanwndedinre33thugge/s/1LeFdem FMaHusl33s4c4io2o22nn~,ts.-rothlEEsumm.suullsfsoiiroomnnssedw wwiittehhreoonn5llyyg/1eetthhAyyllclonaaoccxeettaaomttee
and one of the two surfactants were used as controls.
SSiirxxoshsseemmaiiccctooinnvttaiitnneuudoouusssludaagccettiivvtoaatteeedadchssllumuddiggtee. uwniiTtthssiswweesrrleeudsgseeettwauuspp bbcyyolaaldeddcditinengdg 2f2rolliimtteearrnss aooeffration bbwfaaarssseiisnnhsetaaatttclteittdhvheeaatmmneuuddnniitscchliieuppdaabglleotwwttaaoosstteeea5c0h0ttrrenuelnaa,itttmm.eecnnottnTtphpaillisaannnittnsgliuinndalglePPiiwggo'a'fsss tEEhcyyeoeel,,SloeMMtciittnnlennedeedssfoocrtteoaalm..lsa,nTThhwaaeeesrssalltuuidodgngee wrTraeeostatacaitisnoneerotd,dt..leadnOOdnnaeoniddellntiithtteieecrrabloootfftmmmoeeemdddiiiu5uum00smrwwmealaa,ssddettcdhhoeennntataiaandtdidhdneeegddbetatgoollintthnoheeifngtssheoetottftslleecetaddcthslsleluudtddeggsceetellciisynn,cleeowaa.accshh TrTihenheaecsstteehoermm,beeaddsiiaaaanldwweosirradeeletnstmmiaacdmdaeeeldbbiyymuemdddiidiluelusumtctriirinnebggaeddppdooerrdittniiaoottnnhssethomeoefftbhettoghhdeeisnnaaaibbnnoodgvveem-o-adfdteeesserccairrcaihilbbesetddessteeecmmtuucillyocssnlii.eoo.nnss
in the basal salts medium described in the methods and materials section.
TTFaaMbbll3ee42222 spshhrooewwsssenttthheeinccoo1nn.cc5eennttrrcaaottniitooennnsstsooofffeettehhayycllh aarcceeeattcaatttoeer,, aAAtllcctoohnneooxxb,,egiSSniinppioonnngaatteeofDDSSt--hI1eO0,,Firaasnntdd FtteMesstt342cc2yyccllpeer..esent in 1.5 Z contents of each meactor at the beginning of the first
BLE TABLE 22
SEMICCOCONONTNCICENENUNTOTRURASATTIIAOOCNNTIOOVFPATOOERRDGGAASNNLIIUCCDGCECOOMMRPPEOOAUUCNNTDDOSSRSIIANNT THE
BEGINNING OF THE FIRST TEST CYCLE SEMICONTINUOUS ACTIVATED SLUDGE REACTORS BEGINNING OF THE FIRST TEST CYCLE
AT
THE
IInniittiiaall CCoonncceennttrraattiioonn
sSRCeaAasSctor
Reactor
AceEEttthhayytlle
Acetate
AAllccoonnooxx
DbSs--1I0O '~" FM 33412222
21 1
565566000
8855000
83000
000
32 3 5
164156660000
88300300
88303o00
5551101000
564
469990000
m170000
803o700
511I10000000
6
90
0
170
I00
11115533..00000066
33MM_MMNND033442244008888
7
-7-
TT)hhe,e sseeanmnid/ccooinnsttiibnnruuiooeuufslsyaacoctutiitvvlaaittneeeddd
ssillnuuddFggieegupprreroocc1.eedduurree
was
was
described
described
in
in
a
a
provious
previous
report
report
(1), and is briefly outlined in Figure i.
T~ehniidss oefexxptphoeerriinmfeeinnrttstwwaaassndccoolnnadsdtuuccttteeoddstffcooyrrcli1e00. ddaayyAssftwweiirtthhthsesaamsmpaplmlepesslesttaawkkoeernneaatttakttehhnee,bbeetgghiiennynniiwnneggreaanndd ecccneeednnntttrroriififffuuutgghgeeesddt..efiwrTasTthsheeeasnsxdootllriialddcasststedaanntddetsutocceecnntytitcmrrleiiesff.,uuggaafttAieefrstwwteeerrraetotheeetxxhtestrarmaapipcclltteeeosddf wstseeehprpeaaerrsaaatttmaeekpllelyyne.., (tpThTHheh?eMe)wearned caeaegxganatiitrnnraicftaauoffgdttaeetorrenlaawyddajjsuuossnttceieixnntggartacttpotoleippdiH7.tw11owTwiihttteihhmeestcc,hooynnlccfieerannscttterrtaaattatteeeddtssheueuxlltffpruuaHrcritiocscf awtacehciierdde,.satmhTpTehlhneeoeccv(eea~llpplloHs7sr)atwweeeadrrn,eed errxeetssruuasscppteeenndddeedodnliiynn mmoeenttchheaannaootllpHaanndd7. sseeTpphaaerraatetteehddylbbyyaTcTLLeCCt..ate extracts were .then evaporated,
PTPhrrioosbblleefmnossamwiwiinttghhcaffuoosauemndiinnggtheddeevvleeosllsooppoeefdd iisnnoneaallllsusrrepeaaeccnttdooerrdsssoddluuirrdiisnnggittnhheyeeaffciitrrossrttsttee1,sstt2,ccyycc3ll,ee..and 4. wTLLehiirittsottlleeflooosoatrrminnnfogoroscmsooalluriisoddeassdctwwtoeehrrreee6.lollsoosssIttnoffaflrrloosnmomserurebesaaseccuqttsuooperrennt5d5,,edteaasnnsotddl.mBcioyodcssaltteisoon,ff.rtftahhoceeatmsoisrunusgssppeeaI,nnndddee2,ddlosss3s,oolliioaddfnssds4o.lids wWwTeeehrrirseee calcoloosnsnttotrroofillrnlloceemrddearbbseyyeadcbbtlltooohrwwoii6.nnrggatoaaInossftatlrrleeeavaamsmpuoboorsffaetqaaiuiioerrnn,toonntaetntshhdteerwwecaaaytctclteeeorrsr,sSsuurwrffofoaraaccemeeibnorgooffuagenehdaatcchhlborarsseecaakccotttfooorrs..olids Ttthhhieesiiraoolrrsiioggiiinnnaacllreavvsooellduumsetehwewiittrhhateddeeoiifoonniiezzveeadpdowwraaatttieeorrn,pprriiaoonrdr rtteooacddtrroaariisnniinwngegreoorrbrssoaaummgpllhiitnnggb..ack to
TdThheeegrrreeadwwaeotrrieeonnnopornnoedeuwwctssppoootftssFtMthhaa$tt122ddeewvvaeeslloopapecedcdumoonunlaTTtLLiCCngpp.llaatteeTsshistthhwaaattswwootuurluledd biionntddhiiccaaittneethttehhaatt aa deexxettgrrraaaccdttasstiooonff pttrhhoeedusscuutssppoeonnfddeeFddM ss3oo4ll2ii2ddssw-asaannddacciinunmuttlhheaetieenxxgtt.rraaccttTsshisooffwattshheetccreeunenttrbriiofftuuhggaaittneesst..he
TTchhoeeurrreseewweoorrfeetiihnnoddiifcciaanttaiiloonntssesttthhaacttycblbeii.ooddeeggSrrpaaotddsaatthiiooinnchooffcttohhueeldssuburorffaaaccttttaarnnittbuttteooodokktppollaaAccleeconddouuxrriinnoggr tthhee DcDrSoSe-u-p1r1l0s0aecwweeodorrfebeytpphrnreeeesswfeeinnsnttpaoltiisnntestftthhreeomcyeecxxllttaerrt.aaeccrttssSspaomootpffslettswhhheeiacinihnndiitttciihoaaeullsledssbanaemmeppwllaeetssstp..ortisbTuTwhhteeeessrdeeetscosppooAomttlpsscleowwtneoeorrlxeeyor grgooennpeelac((eeedxxccboeyppttneiiwnn srrpeeoaatccsttoorrfr4o4))m aalttat2e244r hhsooauumrrpssl..es and these new spots were completely
tIIthteasapepppoecaaorrnssditttihhoaanttsFFwHMit33h4422h22ighhhaaddcnonololtt dddoeeggnrrsaaiddteeidde,,s aaattndlleaeaass1tt0-dttoaoayaacddceelttieemccatttaaibbollnee plleeervvieeolld,,. uunnddeerr tTThhheeessseee caaorrneedicctooinnossniisddeewrrieetddhtthooigbbheo cooepplttliimmduuemmnscciootnniddeiisttiiooannnssd affoorr10bb-iidooaddyeeggarrcaacddlaaittmiiaootnni..on period.
Shake Flask Die-fway Studies with Adaptive Transfers
flhake Flask Die-Away Studies with Adaptive Transfers
GFGrNrooww3tt4hh22oofwfitaahhheestteeeqrruooeggneetnnieeaooluussadaccpeetlllilveppoopptuurllaaanttsiifooennrsiiwnnansnuuttirrniiieetnnittatmemdeeddiifaaorccootnnwtotaaiirnneiaisnnoggnsee.mmuullssFiiirffsiitee,dd SFiittMtudww5iaa4ess2s2.vvweeirrytyThhddisiisffewffqaiiuscceuunltldittuaelttotooaqqduauFapaMtnnitt3vii4ett22aa'tttsiirvvaeenvlsloyfyreyrmm5eelaaowsswauusrrweeatienttrhhieetisaorrtleeemumoodbvviaalflliotryoofftawnoFFdMMre33iat44ss22o22nasfff.frrioonmmiFtiSSryCCsAAtSS, sffctooouurrdlidcceeeslel,lalusulilqala~ryrnibsmmeaatwteaeesrrxiitaardllua..ectetOoOdnnePlMttihheem3i4on2o2tat'hthseiernrgvhheaartnnyhddi,,slowtpthhrweeoabteelennerttniirrsoeeoflucncboooinnntltheeionntmttyossgeaonnoedffouiddstiisee-s-aaaamwxfpauflyyiinniccgtuu.yllttuurreess TpTchhroeeoucledssdeeucecraooesnndidliysrreebaaaesnsoonnaecxcftfeororpratcestsedttdaamrrettetiilnhnigogmdinssoahhfatakikeneegnrffltliahacisshskkinpgSsrttuuooddrbiigloeaessnmisoiiessfsnttohhfnaarhttoommttohnhgiiasestnueraaoedduaasptpthtaiistvvaeempalrttierrnaagnn.ssffeerr pcCraaoppcaaebbldleuereooffisggrrooawwntthhacoocnnepxxteeenndoobbmiieoottthiioccdssooforrernrararirecehlliyyn--gooccccouurrrgrraiinningsgmsoorrggfaarnnoiimccnammtaautterereriiatllhssa..t are
oIInnbtaaannineaadtttteefmmrppottm attoonuoosbbbtteaairinnooofrrggsaaonnuiirscsemmsss. ccaaTpphaaebbslleee soooffurggcrreooswvtthhinoocnnludFFeMMd3344t22h22r,,eeiisnnoooiccluullasaawwmeeprlreees
obffberrteooamnnin3e3eMx'd'pssofsDreDeeodccmaatttaouurrnf,,ulmubAAoellraraobcbahaonemfnaaiscppoallulaarscnne,tts,,.bittoaalTkkoehegnneisceffarrlosoommusrlaacurredeesagases itnfthcrhaoaltntudwweteedhrreeethDrolleciieakkteeulslyroyilpttlooasnhhatama,pvvleeeasnd
bssSleelupueaddnrggaeeetxeffprrosooshmmeadkttehhteeofMlMfaeelsttukrrooorpocpcouohllleitimtutiaracennaslWWswaa,essrttbeeeioTsTlrtroeaegaraitttcemmadeelnnttfsrlPPoullmdaagnntteth
esfaaottroPvmPaiirggt'i'hsoseusEEDyyeeeci,,antoMcMuuiirlnnanpn,elesasonobtttuaa,t..
and
they
WwSeeerrpeearaeetvveeennttsuuhaaalkllelyyfclcoaosmmkbbiincneuedldtuiirnnettsoo waaersseiinnggsllteearmtmeaadsstteefrrromccuullttthuuerrseee.. various inocula, but they
11115533..00000077
33MM_MMNND033442244008899
-8-
oe 1 en comnts STBP I: Add test compound, ESLnE media, and
microorganisms
og 7 oll 7 %o
P|
fzK
3 pers ziin STHP 2: Aerate and mix for 23 hours
STEP 5: Re-add/
w/ test compotmd/
and media. ~
Repeat ~
cycle ./
magnetic stirring bar
~
01
air sparger
=
>
|
bP
- ssuuppeerrnnaattaanntt
drain
sludge:
lm
ie "4
7 GS
ST~P 4: Drain supernatant.
STEP 5: Stop aeration and mixing. Let sludge settle.
FIGURE I Test cycle or semicontinuous activated sludge reactor. 11115533..00000088
A 3M MN03424090
-o-
-9-
cIIonnniitttiaiaailnllliyyn,,g t5th0heealaaddaoapfptticivvueeltuttrrraoannssnffoeedirrsusa,wwoerreeTheccootnnoddtuuaccltteeddconiinntenggtllsaassssofEEtrrlhleeennmfmleeayyseekrr wfflloaarssekkss aecacxocitnidrdtiaaiffciniiteeiendddgw wtiw5ito0thhmtisslnuuelolsfff,uurcriiauccnldtuaacrcteihiddemttieoondsipupHmdie. 11,O, Tfsshuutephpepptolleotfmamlelaensntkcteeoddwnatww seihnitetthhsd woaaitsshtaahttueusrroaalflttvaeeesddnktNNawtaCCwelo1resstioomlleuustt.iioonn,, wTTeeoxortttearaallccptpoehmhdabasiseentwedosseeppptiraamirroaaerttsii,ootnnoanwdwGaLasCtsheaaanccaccinlooymm sspidpilsleii.sshhoeefddActhbbiyeydifcfclieeacnnsattktrriiiffowuunaggsaaahtnetiiddoonnw s..ailthtEExsaxtodtrdlrvuiactectintssotnwtawwndeodrwewtiam aslsheahitsinn.eggrss wbeeeellrniieommfiiinnctaaottmeeabddnindeffdrrsooupnmlrfuittrohhieerc eetoxaxcttiGrrdLaaCccttaiidaoodnnnialtypipsrorioonsccc.eeadduuusrrAeeecd.,idtihfSSeiaallcttaftoiaaroddmnddaiitttiaiiononodnnsoappflrrtoo4vvneeaedddvdittotouinbboieendewonoefftrinenfooieldater pbpeoeexsnatkekrfaiciitnntabttaihhnledeitGsGyLLuCClofufaarnniaaBcllYyyssa3ii1css2i..2d, aAAdcTcdiihidditsioaannddeddwiiclttaiyiuoo-snnfedoww'raatmssheedaalplfsesoooarkmoaoftfaipnonponoarovveaanflltuulaeyenweiiwannsuiinmamippdrcrehoonevvmtiiiinncgfgailettdhhee pmmelooxaddttiireffasiic.cctaaattbSiiiioolnnnicteyooffoitfFFMMwFaM53s4422522p4,,r22e.saaennnddtThiiibttsowwtaanhssewicnlcoyon-nevfvxoeetrrrramttceeetdddsbbpaaetcacakkkkenattooppiFFnaMMirtein35at44ll222ly2ywooannasndttahhiaitnnch--eltlhmaaeiyyceearerlnd of pttlhhaeeteggsrr.oowwtthhSipnpoecrreiiooiddt,, waiistt wwpaarsseseoonbbtvviibooouutsshllyyinnnoottextaarmamceetttsaabbootllaiikccenpprrioonddiuutccitta..lly and at the end of TTLhhaeeteprprreeippmaaprrraaottviieoodnnaonofdf sttthheaendmmaeerdddiiaapruuossceeeddduiirnnecedaarerllsyycrisshbhaaekkdeeinffllaatsshkke mcceuutllhttouudrrseessandddiifffmfeaertreeerddiafflrrsoommsttehhceetion onolonnatlltyyeruiisnneidmpttrhhianaottveiwwdtsaattapeenrrrde--psssaaatrttaauuntrrdiaaaotrtndee.ddpreeottAschhyyelldauraraeeccseeuttdlaaettts,eec,,rhioabawnneedddveoeirtnt,hhyytllthheeasmcceeeFtttMhaaott3dee4s--2ss2aaatktnuaudrsraamtntaeoetdtedrwwiasaaalttseecrromswwpeelecrorteteieo-n nalInoyydteemnmuouustllessdiiiffinniiceeldduitdseiidnnprttienhhpiisastrhaemmteeiddcoiiunaal...tureATTshheemeadnniooranne,seeumaluutlTl,hssuiishff,oiiweeeddtvheeFFrNM,in35t4i42h2t2e2iawwlFaaMssFM3i4i2nn$2t4te2ew2nnattsiicooonnnnoaactllellnyytasrssaceteoippmoaapnrrlaaewtttaeeesddvuavaanasrdriianatbobhltleee ciaonannncdcdleundiitettssrdactciionoonnnccteehnenttthrracaatuttliiwtooounnrueldkknmneohodwaminvae.oonbnelleyTynhuttspoo,rbbeeestehnesstoommieehnttaihhdtiiinnaalggll FlltMeesshsse342ttF2hhMaann3c4o2n1125c33e3bnpoptperpmna,,tiewwomhhunili-ccwhhas wbssaeiisffinieeotddnh..teoxciAAocSsncwwetiinottthmhraitcttihhroeeonossrtttgaahananntddiaaswrrsoddulmbmdyeeddiihtaaah,,vettfbhhaeiicssetnitipnhnraiietttsiieacanelltllllyyh--aurudsseeesddpaillrmmaeetddtiiihoeaanwwFaaoMsscc5ud4dr2ee2rmmeoodbnnessnettonrrraamtteaeemluddll-yttoo biienn niiottssntpoprrxeeissceenntccoee..microorganisms by the fact that cell respiration occurred normally IeInvnieitrtiyiaall8llyyd,,ayscc.uullttuuTrrreeassnsvwfeeerrreetssihhneaaskkeennveraaett olraoootnmertteecmhmpapenergraeatdtuurrteeo 7((22d00a--y22s55~CCf..o))r caaonanddvettnrriaaennnsscffeee.rrss mmaaddee pCCeouvarlelitrtouyudrr.ee8ssdwwaeyesrr.ee eexTxtrtraranacsctfteeedrd bbtooitmtehhs aattwerttehheelbbaeetggeiirnnnnciihnnaggn,geaadnnddtoeenndd7 odofafyseeaaccfhhorccucuollnttvuuerrneeieggnrrcooeww.tthh
period.
TFThhieegurrreeessuu2.llttss Iwwneerrmeoestqquuiicttaeesesvv,aarriitaahbbelleeamoffurrnootmm totrfraanFnssMffee3rr422ttoothttarrtaannsscffooeurrl,.d beTThhiiessxtcrcaaannctbbeeed wssieeteehnn iinn eeFetxtihhtgyyurllraectaaa2cc.beeltteaattIeneimmamaottesdtittahheetcealseeeynnsdd,fooofftlhleotthwheeianmgoiiunnnccctuuulbbtoaautftriieooFnnMipnp3oee4c2rr2uiilooaddtthiwwaoaatnss,collueesUlssssduabttlehhlaaynne,xttt5rhh0aaa3ttctwwoehhxdiicwcmhihotrhwweaassof cettuhhxleettruaiircnnetiisatt.biilaaellNlloyyi--mdeemexxegttdrrriaaaadccteattleteydidonmmfaaottpleerlrrooiidwaauillcntgwswaacsswuelrnnteoouttredrireseiccncoooocvvvueeelrrraaaetbbdilloeebny.fferriootUmnhsuettarhhleelTywwL,eCeeekko5--0r%oollGddLoCrggomrrfooorwwnetheof ceweuttnlhhrytye]ulcroevaasecc.reeettdaaNttoeeFicdcuue3llg42ttr2uuarrdeweaetrieeeoxxnttbrraeapccirttonssdg..ucctosAAmttpwleettrthhieiesslydpipoosdiiecnngottrv,,aedreeiiddtt,wbwaaymsseetnnaioobtttohleirkkcnnaooTlwwLnlnCywwohhmreeottdGhhiLeCofrrieodftthheettohe mmutaaonttreeetrrhciieoaavllbessiroemwdwahhsiiFsccMhho3cfc4o2o2uutllhwddeernnceoouttlbtebbuieernegeexxcttocrrnoaatmccapttileeneddet,,re.lyoorrdwwehhgereattdhheeedrr, iittmetooarrboiilttsiscammleetltayabboomlloiidttieefssiewwdeerrteeo bboouunndd
to the biomass of the culture container.
AAponnrutusimbobenerroooffftheeexxppeFerrMiimm5ee4nn2tt2ss twwoeerrheeocossmuusbbssneeoqqnuueeenxntttllryyactccaoobnnlddeuuccbttyeeddottthooylddeettaeecrrenmtiaitnneee.wwhhaatt ccaauusseedd aa
portion of the FM 3422 to become nonextractable by ethyl acetate.
11115533..00000099
33MM_MMNN0033442244009911
- 13-
0.9
E07
% 0o.s3
4g 0.0.22
0ol
23 4
8
12
16
20
Weekly Transfer #
*Initial concentrations were not measured in the second a~d third weekly adaptive transfer periods.
FI GUt~_~ 2.
Ratio of final to i.nitial FM 3422 concentration in equal volume ethyl acetate extracts of week.~old shake flask cultures from adaptive transfer experiment
11115533..00001100
3M MN03424092
ue
-ll-
TLC and GLC Analysis of Extracts from Shake Flask Studies
TLC and GLC Analysis of Extracts from Shake Flask Studies
aIInnmaeotnneeeriTTaLLlCC weehxxippceehrriimmperenontdt,u,ceoetdthhyyvlolrayaccedetitasattteeinceetxxttrsraapcoctttsss owofifth33 ccauulslttmuuarrleelsserwwoRerereethffoaoununnddFNttoo$42cc2oo.nnttaaiinn TTaThHhoOm e aToTtLfLeCCrtihvaveilisswucuuaahllliticizuhzirinepngsgrodppprurrooocccededeuddcuivurneere.grysstudhuoggisgsgeeteissntstecepddottsstthphaacotottsnttthwhaeeiinthnneeedwwa1ss3spm 5pooaPttlssplaeccrooofnRnttfaaPiiNtnhneae$dnd122FffMllupuoro3rir4ooo2crc2ai.rstbbooonnss.. eTxwtoraocftithone. cultures producing these spots contained 155 ppm of FM 3422 ~rior to
extraction.
TTFhMhee3t4t2hh2iirrddaccccuulllittmuuarrteeedccooinnnottcaauiilnnaee)dd. lleesDsssespttihhtaaenn 3t5hpipsppmmgoorffeatFFNMdi53f4422f22ere((niicnnettrrooidnduuccieendditwiwaiiltthhcottnhheceentrataFtiipMoopnnr3,,o42x2tithmhoeaatc"e"cnllneyiewmw"eaqtuessapdploottissnionctffuerrlnooasnm)i.tttyhh,eeDebeeuxsxttptrirataFeccfttsst3h0i2oos2ff wgttahrhseeeattdthehdrrtieeefeecfteeccrduuellbtntucuyrreeeTssLiCnpprroioonnvvlieeytddiailnttooctbboheeencoeoenffxttrraa-ct oaoffpptrthoheeximttawwotoel11y3355eppqppuammlccuuillntttuuerrneesssi..ty, but FM 3422 was detected by TLC only in the extract nTTehhwee esepxxotttrraacictstssolooaftfedtthhebeysseeprtthehprreaeeeratcciuulvltetuurTreeLssC wawneedrroeaccgooammibnbiinrneeedpd.u. riTTfhiheeedm mabatyteertrihiaialnl-lccaaayuuessriinnggchrtthohimissatognTiraenawpphhoyyus.pr. o1tAAabtitstteoeommnlaplpttytessdyvwiebeerlyredeepdmmreaadapdoeamrattaototeivrcceihhaaalTrrLaaCwccitttoaenhrrdiizzGeoLaCgttahchinhiisasrrm aemcapattueetrerririifiasiaeltl.di.csbyGGLLitCCdheiononftfi-lcttahahyliissertnm oacathFtoNreorrmi$ia0aal2lt2o,gMmmMCiaenaehtataaesesroruruauirircraaeetllmmeleerannibssttshhsstoooinwwwcwleeeeyddrroeyofiiittennaoolttttdoofelhhdmmuaaaaovvddareeeeomcaoaoaatffrecbcraoattirrnhhabebeloocnnoaaywymmmllipootouuhnnuaattnbbdssGooLoobCfrrfepptmmttcwaaiihetotoaeenenrnrraiicsaaatttlle%roai6niius~dnnntjjmieeucccaamttsnn.eeddddi..daaennBnatnIaaIdiRRbbscssassoolpsprreipepcmttcttiioitrloornaanaFrMofoffafta3o4ii2rtrt2hllh.iyiyss FccFNoMhmapr334al422ce22tx,,ewribibtusuhtttincnaoottmoafotoovvareeirrfallllaauppoppr1iio1ncnkogagrwwbuiirotetnahh.coFFlMmMpa5o3s44us22n22d,,Spbwwee~ectrrtweoreaenaallossb8ootaalppilrrndeoess9dee~nnmft.to..llBoTavThnhidiinsssg dsssiiuuzmggeiggcleetassrtteeiddntosearctatioinoomdnnplBeooNxff3w4tt2ihh2teo.h" uunnakkTnnmhooaewwtnnerreiliiaannltttooivlettihkheceeoumnmraacesseassn.trssappMteeaiccsottsnrrooospppfhheooctPttioornma3se4tt2oee2rbrtasstiohhnooewwodeetddhefroaanlm~mmlnoaoontwnieiiarna,,giaClCd00si,2'r,,cecotuggllldyyiccneesnrreoiirtnn-,,be dsadeepnttodeecrrtFmnrMiiann5eow4ddo2..2r.k TTtohhTehoevpoprlrreaeestsleieanlntciciezeveeooaffctouunrrcaoeehdanitwgwraihassetrinnooonTtteomnnfpooettFreeMaddt..u54r2e2FF}Mt4thoa33n4422o22tphueraareppppeemFaaaltrreeo$rdd4i22aii;lnns ttthhhceeiosummlamadsasssynot be hhamaapavveieencltbybroeaoegnwnloyrcddkouuereitnottooavsoiilttssaitdibbelenotiiiiznneggFiccacdtoommbppallyeehxxiteeghddoh.,ermaGsGtisCe--mnmpsaapesosrcssa.tussrppeee(ccIntoohffafnactttphh,ueeremuwonkrkFnenMoow5twn4h2a2mmn;aattoeentrrohiiiaasplloamykayiyiweeallsddeedd nmiioaddtieennnldttyoiitffoiigceeltdydecdbeb,yyrinmmaaassalsssthoissupdpegeechcntiatassfheieggdllsyyabccmoeoyrriit1nnh1..eq))umiadsUUsnpnhllaiisskpkeeee,c.tthhCeoar(wwbIooonrrwkkafxaciintn2',04oo,umurorraellsaabbt,,uhsaneFFdHMon$a3et412222paewhwaaaikssgwhaesr nttoeo0tmmbpooedrreaatatteuucmrrtaeeej..do,r| TdThheaiiglssrtahppdorrauoot~d*diuuoccnttthperhhoaasdssaumcnnetoo.ttlibbqeeueeinnd pffhuuarrsttehh,eerrCcachrhaabrroaawccatt~eerr2ii0zzMee,dd..was IIuttsedddooeessatnnooatthiaagpphppeoerasrr
to be a major degradation product.
FFlluuoorriiddee RReelleoaassee DDeetteorrnmiinnaattiioonnss MnNeooaasscuuhrraeonmngeeonnttissn ocoffitIhF"-orccoocnnoccneetnnrttorrlaattciiuoolnntssu,,resttaakokerennc.uiilnntiiuttriieaasllllyyth.aaatnnddsahafoftvteeerdr 577:0dd%aayyssd,,ocrhheaanvvsoeessshhooiwwnnn nteothhycylhanaagcceoettaaittnoeeieetxxhtterrraaccttcaaobbnllteerolPFMHcu33l442t222ureccsoonnccoeernnttcrruaaltttiiuoornne..s that showed ~50% decreases in oIInfn ttahhhiiessteeerxxoppgeoernrieimoeeunnstt",, cnnuiilnnteeureccuullttthuuatrreesshawwdeerrboeoopnprrmeeappiaanrrteeaddinaaennddd iffnnooorccu6ul-la5atteetddrawwniisttfhhersaa assnmpaallTllM aa$mm1oo2uu2nn-tt cnCooofdnnttaaaehiixentntirieannrcggtoegmmdeee,nddieiaaot,.uhsreoqTc~hurwrleoetereureeoofgfrtohttwahhnteesseehiandccuutbllhetteeuurrnpeerssemsawewienenrcrteeoainoggfreroodwwennfmourilinnsi6=ftt8ihheesdtradabbFnsisseefnn3ecc4re2e2sooffoanndFFMHFeMx33t443r224a222c2t-ed, aaaadnnndddditettixhhotrrnere.oaectwweeeTdrrh,eee esettxhxhtrtyerrleaaccwttaeeecrddeetppartrgeiirooowrrpnhattosoienccweotallhslle pggrrrreeoonswwoettvnhhecdeaanfndodrfoimi~emanmmleueldldisiaicautftleietleluydyreFaasMff.ttee5rr42F2FiFHfMtayn$3-d44o22n22ecx,tracted, basSodiidxxittetyyxi--tooornnna.eec,,teTdaahnneddfreofFtmiihffytttlyhye--ssaicitxexhtrppaeoetererccceepunnhlttatsureooeffswattshhteeharteiimnnhoiiavttdeiidaablllelfyeyrnoeemxxgttarlrrolawanccttcaauilbbntllueetrheeFFsMH.pr53e44s22F22einfcctceyoo-uuollonddfe,nnRooltt3422. bnLLegeonssessexxctttrhhraaaacnncttae00b..dl1ei'fpprppoPammH oto3ff4h2e2FF*-tbhwewraeaessne ppdcrreueeglsstreeuannrdtetesdiinntinh'aaatnntyyhheaoodffcubttlehhteeounrnneiignnrgeeorwonwccnuullittwnuuirrtteehhsse..FpirfeH$asa4d2ed2ncaawellilltohoofffFctMtohhmeep34l2e2t.e nFFt*-ohnaetil,xootnnraasrrceetlleaeexbaaplsseeeectetFtdooM, t3th4hte2eh2emmbeepdedoiieraanf,,ivd1~oe44rg00irnappadptpeemmddwwioopnuoulrltdtdhieohhnaacvvueeolftbbueerteeehnnegrfFfoooMuwunnnSdd4,.3w2ithTTmhoheleFsesMeceu3l4rre2eos2ssuulwlLttisssthnoiitnncddoiimccpaaltteeete mmteehatttaa,bboollasiiccaaellxlpleyyctaaettdtt,iacckkteehdde.. perfluorinated portion of the FM 3422 molecules is not
1115533..00001111
3M_MN03424003
3M MN03424093
12-
-12 -
~ttetmemppttss ttoo FFrreeee NNoonneexxttrraaccttaabbllee FFMM 53442222 bbyy HHyyddrrqollyyssiiss AAxptporosasscsitibablbleleeeexxFipptllaa3nn4a2a2ttiioofnnroqffuooerrntttlhhyee oocbbassnoenrorvtvaattbiieoonnextttrhhaaattcte550d0%% ioonrrtommoocrrteehylooffacttehhteeatiienniitatiifaatllellryy-oeiirxnntccpruuaobbaclattytiamiobeonlrneiwwziieFttdMhhf5ao4a2crcc2mclilinfirgrameataqteuednedonnmtmeilixcyctrrroocbbaaiicnaatnllaobtlccebuuellttmuuaerrtxeeetssrriaaciilsts.edtthhaaTitthnetoiitotbehhjtaaehssycltbbieevaeeecnneotafcctooetnnhjjiuausfggtaaettereexpdderimRaoneernnttpeoxwwltaayrssamcetrttaioobzleddedeetteeffrroormmrmiim,nnieengiifaf naaoccniidedxtoorrrabcbatasasebelehhyydmdrartooellryyisseiilss. ccoo~uu1ll1dde cocoobnnjvveeecrrtttiveFFMMof34422t22hisbbaaccekkxpettrooi-
an extractable fol~.
FIInMn tt3hh4ii2ss2 eoexnxppeetrrhiienmeesnnttta,,ndaccruuldlttuumrreeedssiawwwhheiiccrhhe hheaaxddtrbbaeeceetnnedggwrriootwwhn ieinnthyttlhheeacpperrteeassteeenn,ccee ToohffeeecmmouunllcsseiinfftiireeaddFtttiMihooennn342oeo2ffxtFroFnMaMctt33e4h422de22asgtiiananinndttahhreaodfctemtetherlyd]lhiyadaarwccoeeelrttyeaasttieeesxtecrxxatattcrrata80cec~dgC.wwwaaisstahndddeeetttaetehrrypmmliiilnnaeec1dde..toarteTp~i.nhlee1cT3cuhuellfttouurcrroeenvsscaerniwwtoeerurraseetLehnegntietsxtorfactteimde,agaiCnoncaefntetrrahtyeddrHolPyOsiswaast u80sveCd. faonrdacatidpiHfic1aotriopnHan1d3 2f0ormovlarairous NnNlaeaeOuOnHtHgtrwwhasaalssizofueusdsectdidamnedtt.ooaidiCnnjoccurrnseectaaeessndeetrtoattthheeeedqppuiHHae.3lPOv.of~loouwlln~llssooswwiiubnnseggefdohhryyfddeorrrooellaxyyctssiriidassic,,ftiicoaalalnlltiaotssnaammrppaollnoeedmsst2ww0eeemrrpmeeeorlaatrure.
neutralized and adjusted zo equal volumes before extraction at room temperature.
TTFhhMee 3rr4eo22ssuuwlltatsss oeofxftrttahhiicsstabeelxxeppeebrroiifmmoeernnett acarreeellssuhlhoaowrmngriionnwtTThaa,bblleeVe55..ry AAlnnitaatvvleeorraoagfgeotooheff 2r26o8..m44t%5inioonffgtthheo FFFlMMoMng355e444r222222ewcxcaoposuoullsdduerxbboteeratecoextxtattrbrhalaecesctotebedhedyfdoeerrvveoeelnnycsaaeifflsttleeucrrloanhhrydyddigrrtrooiollowyytnsshsi.issd..eVcerreIIynnaselffdaiaccttttt,,lheeiittaomfoaaupptnpphteeeaarrorssfemattFihhMnaatti$n4g22 tTlhhoaanttgerccoouuellxddpobbseeurerreecctooovveetrrheeedsdeiihnnydaarossleeyccsooinnsdd eecxxottnrrdaaicctttiiiooonnns.. decreased the amount of FM 5422
Tab 3 "FABLE 3 FOLLRROEEWCCIOONVVGEERRYAYCIOODFF G""RNNOONBNEAEXSXTETRRAHACYCTDTARABOBLLLEYE"SISFiMfAT3344228220,C
FOLLOWING ACID OR BASE HYDROLYSIS AT 80C
TTiimmee aatt
ppiH
J 80C
7 7
0 0
1 1
0
0
1 1
00..2255 hhrr..
1 1
22..55 hhrr..
1 1
2255 hher,.
1153
0onher..
1153
22..55 hhrr.,
1135
2255 hhrr..
%% ooff M"Noonneexxttrraaccttaabbllee""
FRFMM 3e344c2222oRvecoeverreded
22..77 122
35.99
1L.s5 00..88 58..22 35..22 00.s4
11115533..00001122
33MM_MMNNO033442244000944
1
-15-
Materials Balance Exporiments
Materials Balance Experiments
BOBifioodtdehegegrsreaaddaeatxtiipooennrimssettunutddsiieesswaswweertreeo cdcooentndedurucactiteendde uuthsseiinnggre1l'4aYCtC-i-FvPMeM p35o44r222t2,i.onsTThhoeefppFrriMimmaa3r4ryy22oopbbrjjeeesccettniivtvee
iioinnnf
in
ttttthhhhheeeeesepaparqqrueeueessexoeeopunnuesccsr,,eeimssooooelfflnvvteseeenmmntwuut,ll,asssiiaafnfntoiddieeddssdoeo-tlfei-ddrCCmss--PFinpMpMehha3a3s44sth2ee22s2es.. oorefflaeextxittvrreaacctpteeoddrticcouunllsttuurroeefss FMaafft3tee42rr2ggrproorwwetsthhent
FIInnM 3tthh4ii2ss2 ee(xx1pp0ee0rriippmmnee)nn.tt",, hFaMd3b4e2e2n (m1a0i0ntppami)n.ed
TTtthhhhiieessssmtmteaeadndniddiaaaarrdwdwsasassmmeeiiddnniiooaaccuuwlwlaaaasstteepdpdrrweweipipttaahhrreedda4 bbhheooottttehohrroowwggiieettnnhheeooaauunnssdd wwcciiuutltlhthtuoouruurette tt1h4hicCaa-tt for approximately 20 transfers at weekly igjorvals on th
hessatxtadatnnrdbdaaeacrertdndedmFFmaMMien53dt44i22aa22intmmeeeedlddyiifaao..rafatTpTehhprrrreeoieenxoicomouaffltaetttlhhiyeeonnn2,ee0wwtanrccdauunlltsttufuhrerreeressso
extracted iIamediately after inoculation, and three
cciaiotdodnenetwnntatetaiiieiccknnaaliillynnggcciuu~lletLtCr'uu-Cvrr-FaFeeMMlsss33ww44ee22orr22neewwteehrreee
eaelxxsttorraaccgttreeddoaafffttoeerrronooenneewewweeekee.kk
also grown for one week.
OoAAffttggrrttoohhwwiittsshh..ppooiinnTTtthh,,rreeg~,4c1cC'uu-CllF-PttMMuurr33ee44ss2222nnooeottmmuulclcsosoininototnanaiiwnnwaaiissnnggaaddFFddMieedd334422tt2o2o
wwtteehhrreeeessee
scchuuallktteuunrreessf,,orbbrraiinnnggaiidnndggitittohhneeaiilrr
shaken for an additional
ccffoioinfnfctcteeeeeennnnttrraammittinniiuuoottnneessttooaann11dd0000eexppxppttmmrr..aacctteeTTddhh..ee
ccTTuuhhllrrtteueuere~essoonnweeo--ernmrelle
ssttaahhmmeoppnnlleess
efrxrootnmractththeeedaaqcquuueleootuuussresaa,nnddasdedttheyydlltaoacccAetqtauacateseolppU~i)eessinwweesrrceeintttiaalkkleeanntifForrnoommviecaaalccshh, oofafntdthheceonnuiinnnteeed
wTTeehhxreeterssaootcrlltaiiendddsssfcouffrlrrrtoooumndrettshht,eeo
were transferred to
agcgcrrdoooodmmwwebbnnduusstctctiuiuololotntAnuuqrrucceeauussspposs,l,((~eessr~dssreeiiinnoenttddiisaacliilnnillynytaannnnioololovavsseteoonnillioiddnaasstt vwwi110aeo03lrr50sg~, CpCp..rraeen~fssdpoeernnrcttouttnwwiitoonneiidhhtt.oioiuauarllrlslsyy))
caaonnmddbuccsootmmibbouunssttweeadds uusstiirnangpgpAeAgdgrriiiccnhheeanm''sssciPn~atacicklkalarardtdioccnoommbbfuulssuttiidioonncoeenqqtuuaiiippnmmieennngtt..an
combustion was trapped in a scintillation fluid containing an
ooTTrrhhggeeaaXnn~iilCcc'C00,d2Niminnffeerrooaammnndd
ccttoohhuueepnii.trrteedrrd.aa.dd.miSSooaaaammccppttlli~eevvssiittwyyweerrcceooommppccaaoorruueennddtteedtdtoowwiikkttnnhhoowwnnaannvvoioilnlnututmeneerernnaassllaammppsslltteeaassnnddaoaorfrfdd,lq~~uU'CeVe-CnnF-ccMFhh55cc44o22o22rrrreeeoccmmttuuiilloossnnii,,oonnaanndd
aaddddeedd ddiirreeccttllyy ttoo AAqquuaassooll..
oTThhniiusslsieegxxyppeewrraiisnmoennittnawdwavasesrtcceoonnntddluuyccttneeoddtttwswotoabttiiinlmeeissz..ed wIIinnthtthheAelcffoiinrrossxtt, auttattneodmmppLttt,, brttohhekee1M4rCaC-p-miFydMly54.42222 bAbbAerelesmosffuokoool,e,rrsnee.i-~I-FMNTCCw--a3F3Ps44MN2222i334n42a2aa22ddddvdeiieemttrmuiiutloolensnsniitbooblnneeyccwwaanaauuossstseennsoottttthhaeebiaawwlddeeiddeezeekkeddd--oottwloloiddttthuhwheensAstlctcacuaubolblinttilouulixrri,zeezesseddanttdhheeaammttuuillthsshibaiaoddronnobkbeehheeaaenddnrapapgailrlrdrorolweewynaa.ddyy
broken.
TThhee rreessuullttss ooff tthhee ffiirrsstt aatttteemmpptt aatt tthhiiss eexxppeerriimmeenntt aarree sshhoowwnn iinn TTaabblleess 44 aanndd 55..
EEtthhyyll aacceettaattee W~aatteorr SSoolliiddss. TToottaall RReeccoovveerreedd
CEuxClturltatucurtreeed EIIxnntiirttaiicaatllelldZy 1013038%211118% 00..00444%:!00..000088%%
=-1100338%211118%
ECxCutulrlttaucurtreeed AAffttEeexrrtra11 cWWteeeeedkk 1100228%266%8 00..00224%:00,.0022%% o0.3s%.t4% 110022%8466..44
. TTaabblleed4.. PPieenrrccfeeinnrttst#o1f1 SS2ttaaMnnadtdaearrrdidalDDseevviiBaaattliiaoonnnceoofefxpiiennriiittmiieaanlltllsyy. aaddddeedd 1"4CC--FFMM 53442222 rreeccoovveerreedd
in first of 2 Materials Balance experiments.
11115533..00001133
33MM_MMNN0033442244009955
ue
-14-
CECurultltrtuuarcreetod EInxittraiaclteldy
Initially
CfCuuullettuuurrreee| AEAMffxttteemrrracted
i Week
ECExoxentrcraeacnctetration MC%aotnoecfreinAadtldreaEBRTdtion MAAacctcceooruuinnattleedd FFoorr.. EBCxoRtnArcaeCcnEttration MFC%aootnoeFcfreinNAatidlrddaeetddion MAAacctcceooruuinnattleedd FFoorr..
MMEeleettchhtoorddonooffCaDDpeetttueerrremmiinnGiiLnnCgg FFMM S33c442i222ntCiColonlncacetenintotrnraatCtiiooownnting.
Electron Capture GLC Scintillation Countin~
99)1 ppgme!+p4pn.td2.2 ppppmm =82%
H1111S55 pppim!1lp a2t12 ippnmp m o10x5%
8835 ppppm!sS..00 ppppmm "75%
i11135 pppumt?7 ppopmn 110022%8
TTaabbllee 55.. CdCoeonvnciceaentntitroranattiifoornnomooftfheFFMMf3i54r42s22t2 MiiannteeerttihhayylllsaaccBeaetltaaanttceeeeexextxtrpraaeccrttissment11asssttadannoddtaaerrrddassined bbdyyevssiccaiitnnittoiinllllfaarttoiimoonntheccooutfnmittrisintnggMaaatnneddribbayylseelleeBccattlrraoonncneccaaeppxttpuuerrreeimGeGLLnCCt.. as determined
TTihhneeTrareebssluuellsttss6ooaffndtthh7ee. sseeccoonndd rruunn ooff
in Tables 6 and 7.
cEuCxluttlrtauucrtreeed EIInxnititrtiaiacaltllleyyd
EBtehyyl aacceottaatteo
889..774!53..66
WWaatteerr
4a.o0a!t.3
Solids
Solids
-
--
TToottaall RReeccoovveerreedd 9953..778!44..99 TTaabbllee 66.. rPPoeerrcccoeevnnettred+ ooinnnoesesscttoaannndddaaorrddf
recovered in second of
tthhee MMaatteerriiaallss BBaallaannccee eexxppeerriimmeenntt aarree sshhoowmn
ECxutClrualtctuturroeed After E11xWWteereeakkcted After
GEGxrrotowrmnacCCtuuelldttuuArrfeetsser EFFxiitfftrteaeeecnnteMdMiinnAuufttteeessr
399..9999..88
3535..66435..00
0.04.4200..53
11..00~00..14
5.94.6 3.9!6.6
0.120.05
0.I0.05
4.42.021166..77
s34a.7ss3..4
dtdneeovviiaMatatitioeonrnioaolffsiiBnnaiilttaiinaacllellyycxaapddeddreeiddne1"n4ctCs--.FPM 35442222
two Materials Balance experiments.
Culture Extracted Initially CCuullttuurree EExxttrraacctteedd AIfntietrial1lyWk.
Culture Extracted After 1Wk.
AGGfrrotowemnr CC1uu5llMttiuunrrueeteEEsxxttrraacctteedd
After 15 Minutes
MYeott`lhheoocddeeooonffCaDDpeettteuerrrmmeiinnGiiLnnCgg~FFNSM e55i4422n22tCCioonnTccieennattCtrroaaimttoiitooninnng
Electron Capture GLC Scintillation Countin~
9999..88 ppppmmi!00..77 ppppmm
$999..66 ppppmm!s4d..00 ppppmm
4444..00 ppppnmi!SS..77 pnppm
4444..33 ppppma!tll00..8S ppppmm
S31L.1Ippppmm2!2..77 ppppmm 5377..53 pppwm!s3..3 ppppmm
TTaabbllee 77.. CCMooanntcceerenintatrlrasattiiBooinnlaonocffeFFMoMxp33a442r22i2seiinnntoettahshyylldetaaeccreemttiaantteeedoexbxtytrraascccttissntifflrrlooammtittohhnee scseeoccmootnniddng MaaanntdderbbiyyaleeslleeccBttarrlooannnceccaappettxuuprreeerimGGLLeCCn..t as determined by scintillation counting
11115533..00001144
3SMM_MMNN003344224400%966
-15-
-15-
TeThcheeovrreeerssiuuellsttss oofoffFMtthheo3ss4ee22eewxxeppreeorriimnmoeetnnttssobwwteaerirneeedvv,aalluuaaIbnblleetheddeesfspipiritsteet atththeteemffpaatcc,tt ttihthaatt ccoommpplleettee
wwtraeoascsoexffvotoeururnnaiddcetstthhotaahftitsFwMwhmhaee3tnn4e2rPF2MiMawl35e44r2w2e22asnwwoanatosstoaabddltddoaeesinddteaadasf. taeannrInwu7stnhdtsaeatyabsfbiiilroliisfzzteesddhaatkteeeimmm nugulp.lssti,ioonWni,et, htthaheveeaabobibilsleiitrtyvyed
ttitohhtaaattetixuowtnnnrasstoctaaftbbicitlhloiaizszgeeudm dlaateetmm eeudrulilscasillioounnmwspsassbbnroreofoaatkkFMlowwi3sit4tt2hh2iia.nnfteaaTrhffeio7wsudhphaoryouesursrssuomfoaonnbshlyssaikithtitntaiipgnnp.ggenweWwideitthhhianvtthehteehiosppbrrseeeccrviippe-d-
Weeitixxatpptheeirroiiam nnevenointaftblacaessoaw wbgeiuelollllal,o,tgeidaacnnaddclluiimnncupltsththuioisrsfe.FffoMormmI3,t4, 2iii2tst. prreoeTmsmhsaaiiisinbnsplsereoesxxtuthtmrarataaccbtstlayaubbrhlfleeaapcdtpdeaeensnsptepdiitfteeaincicclotohinnttitsaaatcctets
wttthhhieeethunupuaptmtaabvkkeiaeerbG~ol[efff bFFFMiMio3l53o44422g2222i.c. amolHlllecoocuwwueleltvveueesrrr,e, .coiittntIatiissctismimonorgpreeoasnllsdiiik,bkeelellsyyutbhstthehaqaatuttesnueetmm rlufyalu,sclsitiafbfniiicnctadatiftiinaoogcnniwliiiinttnahcctrreeesaasseess
microbial solids. the number of FM
microbial solds.
5422
molecules
contacting and,
subsequently,
binding with
AAaststnneomotpteteddataabbootvhveie,s, eaaxlllplerooiffmetthnhtee. 1M4CCA-s-FFMNis 5344s22e22enwwaiasns nnToaotbtleaacc6cc,oouumnnottseetdd fofoofrrtihinnistthhmeeatesserecicoaolnnddcould bsbaeeottleirrmdeesccpoothvvaeeadrrteeddtahcciiisunnmiituteilixaaapltlelelrydyim,., ebbn,iT't,th.te iiAmttoswskautissspnnrseoooettbnabrrleeineccooTevvxeeaprrbleeleaddna6aatff,ittomeenrrosssftiioggornnfiitffhthiiisccisaannlttmosabbsitieooorllfiooaggrliiaccdcaaiollou-ld sasaocctlttriiiodvvnseeglyhFFafMdth33a44a2t2c22cuimitisuslcaotttuhhelaadtdt. niiotttTwwhabaessomoaeasbbxtsstoorprarrbcboetebdedadbbbylbyeytthheeeetxhpyclcloaenllallatuuciellotaanarrtemmf.aaottreerrHtiihoaaiosllveaalrnno,dsdsbbiootouufnnaddrpapdssaooiroe-ntly wwsmaaatsstreonnrnooigttallyssbootyhasstthtreroaoitntngiglnlcygyoubbltoodouunnn10odd3t~gbhheaaC.tteixitttLorsaccscootuutleloddd bnnvoyoottlaebbtteeihlylivvzooallatacaietttoiianlltiiezzi.soeddtHhffoerrwooemmmvoesttrthh,eeprcicoteebllaallbpuullpleaaarrrently meeaxxtppellraainnaaalttiiobonny hffeooarrtitthnheeg tlloooww1r0r3eevccoovvC.eerriiecLsso..ss tO volatilization is the most probable
wT]]ahlsiissacelxxspopeenrrioimtmeennettxtraaallcssotoabssluueggggeefssrttossm ttthhhaaettpraabebsgsorororpwptntiioocnnultiiussreaaspphhtyyhssaiitccaawllerepphheesnnhooammkeeennnoonnw..ithFFMM 55442222 weetammosuubllessaiilfsfeoiixeepnddloatiFFMnieedx33t442b2r2y2actaffaoobmrrleeotonanlblfyyorloim115c5tmphmiiehnneuunpttoreemesseg..nroonw,nTThhiipcssaurlttrriuaacrttueeelsaoorfftlhyarrteemmswooivvenaarcllee sitisshhaekttoeoonroogwarrinaatipphsiindds hed nnwtoohottebtebhbeeeeorennxoprlaaaccicnconllteiitdmmhaabtetyeeFddMattmoo3e4t2FM2aMNbwo33hl44i22ic22ch,. pihseIInttopmrcceaeannsno''unttm,abbbelepyarddbteeoittuceeunrrldnmaiirnntleeoyddthsffeirrnoocmmceelttlhhtsiihsseisoeexrxpegpevaerenriniimstmemuensantlt.lhyad wmmFheeMetttaa$hbb4eoo2lr2liizzoaeerndddnoctttooontfaahinneroomttFahhMteerir5o4n2cc2hhbeeywmmhiiicca~aahllm:eitffshoorrommpd..resuscuTThhhmiiassbaslwywooGbuuLollCuddntdhrraeetqqtuouiitrrhteeehe rrreceeeccclooolvvvseeerrryyeisdoomfefavtettehnhreetiuabhalooltmlryn1odsd ssFttMiill5ll422FAMnan34d42222c,.onfirmation by a method such as GLC that the recovered material is
AAdd~s.oorrppttiioonn oonn CCuullttuurree CCoonnttaaiinneerrss AAisppootsshssaiitbbllteeheeexxmpaptlleaarnniaaattliioonnwasffoobrreittnhhgee dsdeteccrrroeenaagssleey biionnuenedxxttrrtaoacctttaahebblleepolFFyNMpr33o44p22y22leiinnneggrtroeowwsnnt cccuuullltttuuurrreeess Wccieoosrnnttetaahiioannbteetrratssih..needmTTahhitiniessrbioppatoolhsssswiiagsbblaiisllbsiiettiyyanngdwwaasssptorloccynoopngnrslsoiyipddyebelroreeeunddnedrrecetommonoottttaeehienssepiirnnosccl,eeyprssNoiiepmmvyiielllreaatrnrheorrleetossesuussllt,ttssciutltwuarse wiiennrvveeessttoiibggtaaattieenddediinninttbhhoeethffoolgllllaooswwsiinngganpdprropococeleddyuuprrreeossp;:ylene containers. NeVertheless, it was
AAonlmmyeeddiiinaa wwtaahssatpprrioetppaadrrieedddnottthhaattcoddniitffafifneerreetddheffnrruootnmrittehhenetssYttaMannbddraaorrtddh1133n33ecmmeggs//slLaryFFMMas334422a22nieemtmurulolsgsieiononn mmeeddiiaa ossTnoaolruuyerrecceeiwneffrooterrhatcceeexllitlltradgcgrirtoodewwdttnhhom..tedciTToaeenntntaeimmlllny,ootffhtehttnrhheuiiesstrimvmeeeenddrtieiaaYcwwMaaapssbpreodaatddhwddieetnddhecttepoooslseeyaaaprcchrhyopoaoysfflnenaininneneietcarttpouusbgb,eeessn.. wTmaehn~rdrdeee~tshrwhreeeaeerkeewvneeerrxfeetorrpapcloltnuueeggdggweeeddiemkwwmiiettdahhinadtffeoeolaxayntm,rsasttctoothppreppedeeerrasswn..edreaTTnhhaceeal.pycpczeaaedppdppweebidydthaGaLnnCdpdolssuyttspooirppnoppgpeeyrrtlheeeeddnetstutubbaceeansspdsa,rd wpperroroceceeddsuuhrraeeksse..n for one week and extracted and analyzed by GLC using the standard
11115533..00001155
33MM_MMNN0033442244009977
-16-
-16-
suple
Sampl?
II#1 1I 9#22 1I 5#53 PPH#i PP i#z2 PPS#3 FEa#I FFe#2 FE8#55
Tfaabbllee 88..
Cop
~
PPoollyypprrooppyylleennee PPoollyypprrooppyylleennee PPoollyypprrooppyylleonnee PPoollyypprrooppyylleennee PPoollyypprrooppyylleennee PPoollyypprrooppyylleennee FFooaamm
FFooaamm FFooaunm
TTiinmeePriinnioPProolltyyopprrEooxpptyyrllaeecnnteeioTnTuubbee Prior to Extraction 1155 rmaiinn,. 1155 mraiinn.. 1155 mmiinn.. 77 DDaayyss 77 bDaayyss 77 Dbaayyss 77 Dbaayyss 77, DDaayyss 77 DDaayyss
3I%MII3nn4ii2tt2iiaallRlleyycoAAvddeddreeeddd
FM 5422 Recovered
7E9d 79 "78 "75 "78 884 9922 0933 9922
PPeerrcceenntt ooff iinniittiiaallllyy aaddddeedd FFNM 33442222 eexxttrraacctteedd ffrroomm ppoollyypprrooppyylleennee ttuubbeess..
TThhee rreessuullttss ooff tthhiiss eexxppeerriimneenntt aarree sshhoowwnn iinn TTaabbllee 88,. TKThnhoeewnrr.eeaassooTnnhssereffoorarltsthoheeislloonwwoFFMeNxp33l4422a22natrrieeoccnoovveefrroiireesstheoobbtgtaraieinanetededriinnrecttohhivisserieeexxsppeeorriibmmteeannittnedaarreewintnohott pcctkterehnhddoeoeuupwrrnyttee.lui,,ebbneeessttThhheceettahrhpaeaccttooonnarwwttleeeesnrrnotteethsseissshhofoaanfofkkoaeetmtnnhheeesxwwtpiiolttpttuauphhbbneeearsstff.ioonnoaaeonmnvvAleessfsrrttoooor,ppccppaateemmthrreehesse..iignnfroecacaIIomnnotnnettstrtaathhcoceertptepwwceweweoriieevsttkkehh--rlhileoaoeesndniiggttnhhooeessbtrrhhtaaabkkittoiihhnoeennenggdppopopwullrrisyyoote----dh bbpeerffoooprryeeleniienn aacnnaypy eoexxrppeetrrhiiemmeefnnottassm.. stopper. Also, the foam stoppers had not been used DpDehessepnpioitmteeenottnhheeriiennpcceooammtppelldeelttyeeserreeenccoovvienerryyoaoroflfieFFrMM e53x44p222e2,,rimttehhneetsssee. rxeessInuullttessardldoyo mneooxttpereeixxmppellnaatiisnn, tthhheiegh pdrrheeeeccvonoevvoleemorrepiineeedossnanorodffepFFelMMaotwe55d44r2l2e22ycowwvseeeerrreeeincsooinbbtotaefaiainrPnelYedide34rii2nn2ieixttwpiieeaarrlliellmyyeonbbbteetsfaf.oiornreeedIntthhieenearcecotlelhlyllylecxcpauuecllrettituumarretoenethhsaae,ddxthriagchts dnddoeeonnvgeeelliogaapiffebttdleeerranttmdhhieeclrooccwbuuillarttleuucrroeepvoehphrauaidldeastggirroooonfwwsnn,FMffootr3rh4e2ss2eeivvnweeienntrieaddlaayyossbF.,tfai3n4IIe2nnd2 ttihhrniiessceotveohexxyrpplieoerrsaiicmmweoeetnnarttteewwiittehhxtracts nnanoopettpgelassiriigsgginnbtiilhffeaiitccmaainntctthrlleoyybiiadndlicirffeffpaeeorsrpeieunnnltgtatiflfoorrnsoossmn,ottfhhteehaerbroieiclcnoioivvtteeyirraiilteoossFeMxaatff3rtt4aee2crr2t 77rPefddcaaoyy3vss4e..2r2iesfIIttr,,ownertttehhheeerreeffoorree,, accpuupllettauurrrsee wwtiihttahht tttihimeneeinrreecqqruueiiarrseeissngtthhleeosspprreeossfeennaccbeeiliootffybbiitooollooeggxiitccraaallctssooFllMiidd5ss4..22 from the
Recovery
Recover[
oof
FFMM
33442222
FFrroomm
CCeollllss
BByZ
VVoollaattiilliizzaattiioonn
aanndd
CCoonnddeennssaattiioonn
AAtsshepprrMeeavvtiieooruiusaslllysy nnBooattleeaddn,,cetthheeexpmemorosisttmenpptrroobbiaasbbllteehateexxppitllaanvnaoatltiaiotoninliffzooerrdt~hfeeromlloosstssheoofsfolFFiMMds3544p22h22asiienn ddtBhuuierrgiihnnMtggatbetetrhhieepaolttsswwsooiBbhhalooleuuarrntsscoeddqrreuyyxaiipnnnetggriitppmaeeetrrniiitvooeddli,.sy trhFFeaooctrrovtietthhriissvsoolrrreeabaatessidoolnniF,,izledii5tt4f2wwr2aaossmbybbteehvlleoiileesavvoteeliddildisttzhhiaapntthgas1iett miittighfftrroobmmecceepllollssssibaalnnedd cctooollllqeeuccattniitnniggtatiititvbebyylyccoornendcdoeevnnessraattiisooonnrboeonnd FaaM,"cc5oo4ll22dd bffyiinnggveeorrl..a""tilizing
11115533..00001166
33MM_MMNND033442244008988
-17-
A a
7
5
>
casCold
Water
iInput
Tube
|
i
|
he
Ie
!|
|
i
|
|
d
i
py
pieaos Tite Aspirator Tube
Test Te Test Tube
Cold Finger
wo FBMM 33442222--CCoonnttaatinniinngg Sample
Steam Bath
nn Figure B. Apparatus used to recover FM 3422 from cells by volatilization and condensation
11115533..00001177
mss 3M MN03424099
:
"18
wTwfTohhhhseeiitcchhffetewuwaabaassossii,bbiTriuullnniAittysyiienncooodffdnuudppttllhhiiiisccssmaaattalaeeplp..peprrrooaaFtFcceHMhhst33ww44aa22ts2s2ubeee((1vivwaairmllasguug))aatptwevleadaadsscbebydyppllaatitcchhneeeesddidffeiononllltlohttoehwhieionnfgbBgiaarssseeetexx,rppoeeofrrafiinmmudaeenwnTltataasrrggoe
bbpeetaaleffssasffoetceeeccdttaatiinunbdvdvieeen.llaayysasppmmAsiiaarrtddaaeseettaeiimcnnoiiggbnnnadtttooiihttsmaaaff(rrlFccoooilonlmlgeddurrttehhtffeeeiis3nn)ttgtg.ooeepprrt..ubbAbyfyetT]lhewcciaerooesnnbbtt1aa5piisslnneeauumioocnOuueoufssdftlleyyttishhn,iirsrssiuudntnehnnSaeippippnntaaghgcrerowawaltadtafuuttisseerfsrritwwn,aagiissennrttaoenstwdhheeeiiswnnteasss
pooarTdlffeodammecoeoodtetvvhhdeeyydTdllHianana3na4dcdca2ee2tttstaahhtttneeeeeaa..ssmsuubbbsalGlGutLLiibhCCmzlaaittana(eneanFaddatillegyyFdFussNMriieassn3$d413)22ii.2c3nnoddwwliiaalcAcsseafahhcttteeteeededdrddttfF1hh5rrineaoottmmmitnw3i3iuo2t2tts%%setsaarss,ninuaaddrrlffts4aa4h.2c2ce%%eecoooiifflnnttdootthhfeeaainookgnrrneooiriwggwwniiannsaavviloolllluyyumseo
added FM 3422 was sublimated and collected in two trials.
hc211~a00aeneemal1aabbfcocorovevolelenll ssacucuHuubbelllltttiieuumsrrraaoeettsgsiieoonnniiennoppurrttsoohhcceeeeMddlssuuttrra5aeen4n2dd2wawaararssdsdcmcptteelhhddieeiinnnsaa..trreeedppeTeThhacaeeuttleetddssummraaiiellnn,ll dduiiiTppnnhloloeicicscuuceallatuutecmmeulfuuftoossurriirnneggttshheevwwsseeeeeesrkk-ec-couuolllldttd.uurreess
ceTeaxxemttmrrevaaeccfdttr.eeoddm dreesmocvreidb.ed
wTwTaaihihptteohphhaertuuaenneetrddqquourrusgaiaielleenddaenvvobbdoouiillsoouuommmmxaaeepFssssoMsssoeo3wwdff4aa2ss2eetotthhttayyrtrcllhaacennlssiaafsfmcceetaeerrttetrraeaaetetdmdeedbcautt((tloo1iht00uttrmh5hfe1leeo.))r,~oou4uta5tTaneenhdrmrdoisnettttuuhhuteebbceeouslll.t0iiou%qfqruueiTitthsdhhdeee.ppwohheastaarbhhsseooyeevvlsese-
aOadaocFncfeedesttcttaaahrhtegtieeaebinnenwowodanansseeoahhxxxpiipttpnnroraggasarssaccetttdueeffsddrrinooFmnFaiMntlhdttehh33ee44e22sx22Ccpcoooonwllsaaaddenssdbffarrititeeonnhccggooetovvhrrfeeeorrwwreeeesddrrat.,eeneaaaamdnTTnbdhahaaielelttyyihzzccoeeeendldlfallolssbrbyywwt4eerG5GLorLrCCeme,,hiondduubbrrrtuuiisettee.sdd.vvueeunrrndyydTehererl1iinneteiittrtthllrryesoolggeenn
and again exposed in the steam bath for an additional two hours.
qeTTeuxhhxaetetnrrtararicecettstsaauautlbbltilltsveoseloioiyfnfnttoortthheiiceesstothvhyyeeellrxxeppdeeaarcrcbieieymtmteaeantnsttetueblaaaairnvnzededatppssirrhhoeeoonsswwnuusmaaaniibbndnllyyTcToaanbbbbdloloeeeuunnnsdd99a..tttioooTTnhhtt.eehheeFFPcMcMeeelrl3$lhl44ssa22,,p22swwttaachhssoaattmnnpwwoloaatesstennoott qrfrftoeuhoearrcactonoavatvseieorrtllmyyaooetnnwwiggoooveeufurerlllpdpydteehrrehhriiaaeoovvbcddeeoo..uvbbneeedreAeAenlnldFttNhbpphooooy3uuss1ggs2ss2hhiiubbblltnltoeahhiyiimsshhaaahteddaievxoxepnptteehhbrereaeiinemmccdneeeenllncllttcosshndeddbbimeienedidseecannnnatoolittlesoyxmnprrpn.uuooollssdeeeeiddPeoofurutitthoeodapttttsbhhhhyeeeecppsbosoeotmtstspeesaslaabieimmobtblibeibilalastitiehhtt,yy iittthatddiiddsomiiennddoiicfcaattteehettbhhoaattund4a FllMaarrgg5ee422ffrrmaaaccyttiiohonanveooffbettehhnee bbcoohuuennmddicaFP~ll4ly5344m2223odwwiaafssiedunncbchhyaannmggeeetdda..bolism,
Cutture 11
Culture #I
cCuurletuurree #122
EExxttrraacctteedd iinnttoo EEtthhyyll AAccoettaattee
1155..66%8
ov
VVoollaattiilliizzeodd ffrroomn ""Weett!" CCeellllss
0.58
21.0%
0.3
0.5%
Volatilized from N, Dried Cells 25.6%
0.3%
we
Volatilized from N2 Dried Cells
25.6%
TToottaall PFtM 33442222 RReeccoovveerreedd
wn
21.8%
asa
TTaibblleo 99.. PPbyeerrccoeetnnhtytlooffaceiitnnaiittteiiaallellxyytraaaddcddteeiddoneemmfuuolllssliio4fwf1ie.ied7ed%dbyFBMMvo334l42a222tilrrieezccaootvveieror4ene3dd.s1%nffdrroomm cceollllss
bccyoonneddteehnnysslaattiiaoocnnetoaoftferreeemxmatairinanicintngigonFFMHfo3$44l22l22o..wed by volatilization and
HHoott BEutbhyyl) AAcceettaattee EExxterraaccttss
bIIinnomaaannssaa,tttteeemmxpptttracttotoioiinnnsccrrweeoaarsseoe tdthhoeenerrueesccioonvvgeerryhyotooffettthhhyeelFFMMace33t44a22t22e.ssoorrbTbheeiddsttpoorottchheeeduccruuellttuuirrneevolved
bagvgairdadroodtdomwioiawnttrsiisoooso,nnannmpnnoeoluufxfetctsrrr22.iia..e55centntimtnTlolhnmomseeooddfrfiiweaaesFF..rMuNelt33i44TdFbn22oM42g2ne5344ee12u2mm222su.u5illnsseegiimmmlouounlnlhsosstiitatoooomnnpevlwteoewwhsceaay,kkssl--oowaaallhlclddsies,,tocoahtaai1ec0dd0.oddneemAlddtlaTihctctionuuosllettdttuupwuroror1,,eeo3ssc3ei1p0d0ttuphhamraemlltteEhhddNiaaeenddiiv3oo4obb2nnl2eeiiv,eezsenneeddd
wWwtoteoahhrrreeteeeabrbtiissoho1hsammaa0kagmkesapenCssln:.,,esff.aoaoonrnrrdd~611055eo0ex~mmttiirCrr.nnaaeuuccsttttueeoelPssddthianwwsooginientthha3s12e.rerep5qqooauuttraamaaalllrrtyyiovsvnoasoSlmhlhpuwaualemkmkseeeeesssrr,ionottwfsofohuiaeraectletlhhhldlyyoo)lwbwcyonsasatoccocareereipctpntatanttiiteroooedinnfaau1tootg33faftrrpiootspoohoeenmmm
FPtFMeMMmp453e443r22322a,tubbryye taetmp1e2r,a0t0u0rexpa
aCaohnnrrddoamtttahhtee4o0gccrooaCnnp.ccheeynon.trtrra6a0ttiioonnC.
of FN S122 in the Phase separation
o FM 3422 in the
eewttahhsyyll
insasccueetrtaeatdteebypphhaacssoeentawraissfugddaeetttioeorrnmmiinnaetedd
by gas 12,000
by gas
rpm
chromatography.
11115533..00001188
3IMM_MMNNO033442244110000
.
-19-
-19-
TThhee rreessuullttss ooff tthhiiss eexxttrraaccttiioonn pprroocceedduurree aarree sshhoowwnn iinn TTaabbllee I100..
samle AAqqCuuoeemoopuuosssiPtPhihaoasnsee
sample composition
TEEoxxmtterrraaacctttuiirooenn (0)
Temperature (C~,
PpP`pARmceFFtMMate334422E22xtirinnacEEttthhyyll
Acetate Extract
11 DDeeiioonniizzeedd WWaatteerr
2zn7
1u1s5
22 DDoeiioonniizzeedd WWaatteerr
222
1135553
33 mMiiccrroobbiiaall CCuullttuurree
222
5522
4 a
" "
""
222
s5s5
s
" fl
"0
5
5
"
"
40
55
36
" "
n" e~
040
5a1
77
" "
""
60
551
8 5
" "
"
660
5566
TTaabbllee i100.. HH1oo5ttmieenttuhhytylles aaccoeefttaasttheeakeiexnxtgtrraawccitttssh oeofmfuwwlaasttieefirredoorrFbbMiioo3ll4oo2gg2iicc(aa1ll33ccpuupllmtt)uu.rreess aafftteerr 15 minutes of shaking with emulsified FM 3422 (153 ppm).
TeThxheetssreeagtrraeebssuiulllttisstyiinondfdiiccFaaMttee342tt2hhaattfrhhooontttheeotthhyybllioaamccseestt.aatteeTeheexxttrraaamccotutniitoonnodfdooeeFssM nn3oo4tt22iiemmxpprrtoorvvaeectetthhdee aceattoxnt6cr600eancCCtt..raabtiiisisloinnntooy.ohohfifiggFhhFHeeMrr34524tt22hh2aanninftrthhotaahmtte theo4e0xxtpCbrr,iaaoccmettaxeestddsr.aaacttt 2T222hiesoCC..naomtoTTuhhnketenowrornefe.aassFooMnnTh5e4ff2oo2rrresettuhhxeelttrslalocowtwaeeelrdsro cWccoioontnnhffciiienrrnmmtr1a5ttthheimeionnppurrteeoevvfsii.ooFuuMssT5Gho4bi2b2ssseerrrivvnaaapttitiidhooennlo4s0ttsuhhCaa.ttfreoecnxmatuurllaassnciitoffniiaecicsddclnFFoiMMtna33tk44n22eo22dwnici.ssultaaubTbrhsseeoorrbbsreeueddsguglbebtysystscceealllallssso wppihhtyyhssiiinccaall1//5cchhmeeinmnuiitcceaasll. aabbTsshooirrsppttiirooannpippdrroolccoesesssssfrrroaamtthheearrnottnhhaaacnncblhiiiomolalotogegiidccaacllultddueerggerraaddsaauttgiigooenns..ts a DDiiooxxaannee EExxttrraaccttiioonn ooff FFMM 33442222 ffrroomm CCuullttuurree SSoolliiddss bIIynn oaathppyrrleelliiammciionntaaarrtyyo eecxxoppueelrrdiimmbeeennttr,,ecoiittvewwraaossd bffyoouunnrddeftlthhuaaxttingaalllltheooffctuthhleeturFFeMM 3s344o22l22idsnnoottwiteehxxttrr1aa,ccdtt-eedddioxane. bAAoyttltteeoecmmttpphrttyossln tcatooacpettrruaeertppeeeeaattdcoottuthehliidcsstboeroobbssoreeferrcvvooaavutteriirooegndnasbwweyecrrheerroemfiialnntuiioxttgiiirnaaagllpllhyyt.hhehiinnTcdhduoeelsrtreueerddepbbryysoobpllpirerdosossbblleewwmmiesstrhewwiia1ttp,hh4p-adrttiehhoenextalnye. cpecalraueuocssbteelrddeonnbbyyancttdahhpeettuhpreperreeessdxeeepnnteccereecitmoooerfntdodiwifooaxxsoaaunnrreee..pgeaastCCeeecdnnh,ttrrroaamllaTthoeRRgeerssraeeepaashrru.cclhhts~oo,vv(eeeTsrraeccbaalmmepeero1bt1t)lhheiismsdseamawnoneaanrllsyeytttriiaaccptaapellarqeunittley pCCcrouonlonctbclulluruesesmisivvaeentlldhyyatthttehhhaaattveexpFFbeMforoi33nm442e222nmtaiiiwssnatsnnaooittrneempmdeeeawtttiaaetbbdhoo.llwiieccoaTalhklelllyyyreaatsrlluattlneetsrrsfeeeddr(siiTnnaobnlsseeevvFeeMinni)3dd1aad2yye2ssm-ocbbnoyysnttrsasahihtanaekikenegqufFzlltaaesskk mmceeudlditiuaareffsoorrthooavvteerrhassviiexx bmmeoonenttnhhssm..aintained with weekly transfers on FM 3422-containing
11115533..00001199
33MM_MMNN0033442244110011
ire Culture Bite Extracted Deinn with Ethyl
Acetate at:
5 win. 15 min. 15wn. 15 min. 2 ain. 15 min. 7 ays 7 days Tas 7 days 7 ars7 days
Tas 7 days 7s 7 days
Norm % o FM 3422 bm Extracted mes By Ethyl
mows Procedure RIL for Extracting ofn n Culture
vmso % FM 3422 WEE Recovered TeFrom
Acetate
23 soles prone 99.3 9.5 to slitsprose + 99.3 BL Nesols presene 101.3 54 (efi ibiome 7.9 25.8 EN LCye aa 27.1 Bi Gnesolswin 750 31.1 04 Gptpi a sions 755 30.4 I CTpeoesnloersiaoon TM 29.6
Solids
Solids
No solids present
--
No solids present
--
No solids present
--
(Refluxed in Dioxane 77.9 for 2 hrs.)
"
"
80.1
(Dried solids with
75.0
NDo~[fooxx~aannreeeflffuoorxred22 hhirnss..))
(Refluxed in Dioxane 73.5 for 1 min.)
(Extracted with
68
Dioxane at Room
Temperature)
Total % Recovery
wwe of FM 5422 P99.3 ws99.3 os101.3 pe103.7 wz107.2 1001106.1
ws103.9 on97.6
Tie 1. Table ii.
LRReeccoovveeerryy nooff PFHM
4223422
from
from
ccuullttuurree
sobs solids
bbyy
eexxttrraaccttiinngg
oorr
rseefFlLuuxiinngg
with Dioxane.
J-- REFERENCES 0) tine B. 4. Biodegradation Sodies of Flsosocarhens, St Technical Reports (I) Reiner, E. A., Biodegradation Studios of Fluorocarbons, 3M Technical Report,
frond August 12, 1976. Mende, A, Anayciens Nethedlogy on 1 5422, 9 Tecknical port (2) Mendel, A., Analytical Methodology on FM 3422, 3M Technical Report,
ove en: November 15, 1977. 5 Dickson, L. 5. Lu, tse. PhD. British Golmbia), "iategrdaticn bn (3) Dickson, L. S. Liu, M. Sc., Ph.D. (.British Columbia), "Biodegradation, An
miele ss Toh Shp Cotto rrantien Environmental Solution to Some Toxic Organic Compounds," Environmental nimi! Solem i Jom Tork oe Conservation, Vol. 3, No. 2, Summer 1976.
foe em
em EAR/cen
11115533..00002200
awwossznce 3M MN03424102