Document 2JgLGLQyvyKkRv1NYRny20O9p

~ COVANCE THE DEt/ELOPMENT SERVICES COMPANY SSppoonnssoorr:: am3M `SStt.. PPaauull,, MMiinnnneessoottaa PPRROOTTOOCCOOLL SSttuuddyy TTiittllee:: 110044--WWeeeekk DDiieettaarryy CChhrroonniicc TTooxxiicciittyy aanndd CCaarrcciinnooggeenniicciittyy SSttuuddyy wwiitthh PPeerrfflluuoorrooooccttaannee. SSuullffoonniicc AAcciidd PPoottaassssiiuumm SSaalltt ((PPFFOOSS;; TT--66229955)) iinn RRaatsts. ~ DaDtaete:: . April 15, 1998 April 15, 1998 PPeerrffoorrmmiinngg LLaabboorraattoorryy:: CCoovvaannccee LLaabboorraattoorriieess IInncc.. 3301 Kinsman Boulevard 3301 Kinsman Boulevard Madison, Wisconsin 53704 Madison, Wisconsin 53704 LLaabboorraattoorryy SSttuuddyy IIddeennttiiffiiccaattiioonn:: PPrrooppoossaall NNoo.. 55335533 CCoovvaannccee 66332299--118833 pe 22880055..00000011 Exhibit 22880055 ~ CoCnom.aentee 6322h99.u-1188a33 Pa~ 2 Study 110044--WWeeeekk DDiieettaarryy CChhrroonniicc TTooxxiicciittyy aanndd CCaarrcciinnooggeenniicciittyy SSttuuddyy wwiitthh PPeerrfflluuoorrooooccttaannee SSuullffoonnilcc AAcciidd PPoottaassssiiuumm SSaalltt ((PPFFOOSS;; TT--66229955)) iinn RRaattss PPuurrppoossee TToo aasssseesssstthhee cchhrroonniicc ttooxxiicciittyy aanndd ccaarrcciinnooggeenniicciittyy ooff tthhee tteesstt mmaatteerriiaall wwhheenn aaddmmiinniis.qtteerreedd iinn ththeeddiieettttoorarattssffoorratatleleaasstt 110044wweeeekkss SSppoonnssoorr 33MM TTooxxiiccoollooggyy SSeerrvviicceess BBuuiillddiinngg 222200--22EE--0022,, 33MM CCeenntteerr SStt.. PPaauull,, MMiinnnneessoottaa 5555114444--11000000 SSttuuddyy M Moonniittoorr AAnnddrreeww MM.. SSeeaaccaatt,, PPhhDD ~ 33MM PPhhoonnee NNoo..:: 661122..557755..33116611 FFaaccssiimmiillee NNoo..:: 661122..773333..11777733 SSttuuddyy LLooccaattiioonn CCoovvaannccee LLaabboorraattoorriieess IInncc.. 33330011 KKiinnssmmaann BBoouulleevvaarrdd MMaaddiissoonn,, WWiissccoonnssiinn 5533770044 MMaaiilliinngg AAddddrreessss:: PO Box 7545 PO Box 7545 MMaaddiissoonn,, W Wisisccoonnssiinn 5533770077 SSttuuddyy DDiirreeccttoorr PPeetteerr J. J. Thomford, Thomford, PAD. PhD CCoovvaannccee LLaabboorraattoorriieess IInncc. PPhhoonnee NNoo..:: 660088..224411..77220077 FFaaccssiimmiillee NNoo..:: 660088..224422.22773366 22880055..00000022 ~ TTooxxiiccoollooggiisstt T`Thhoommaass EE.. RRyyaann,, BBSS Covance Laboratories nc. Covance Laboratories Inc. Covance Covance 663322P99a--g11e883s3 Paso 3 PPrrooppoosseedd SSttuuddyy TTiimmeettaabbllee ITnn--LLiiffee SSttaarrtt DDaattee:: AApprriill 2200,, 11999988 IInn--LLiiffee EEnndd DDaattee:: AApprriill 2244,, 22000000 A`Auuddiitteedd DDrraafftt RReeppoorrtt DDaattee:: TToo bbee ddeetteerrmmiinneedd RReegguullaattoorryy CCoommplpifiaannccee T`Thhee ssttuuddyy wwiilll bbee ccoonndduucctteeddiinn ccoommpplliiaannccee wwiitthh tthhee GGoooodd LLaabboorraattoorryy PPrraaccttiiccee. RReegguullaattiioonnss aass sseett ffoorrtthhiinnTTiiltlee 4400oofftthhee UUSS CCooddeeofofFeFdeedreraall RReegguullaattiioonnss PPaarrtt 779922,, iissssuueedd NNoovveemmbbeerr 2299,, 11998833 ((eeffffeeccttiivvee DDeecceemmbbeerr 2299,, 11998833)),, aanndd wwiitthh aannyy aapppplliiccaabblele. aammeennddmmenetnst.s. AAnniimmaall CCaarree aanndd UUssee SSttaatteemmeenntt ~ AAllllpprroocceedduurreessiinntthhiisspprroottooccooll aarreeiinn ccoommplpiliaanncceewwiitthhtthhee AAnniimmaall WWeleflfaarree AAcctt RReegguulaltiaontsi,9o9CnCFsFR,R 11--44.. IInntthheeooppiinniioonnoofftthhee SSppoonnssoorraannddssttuuddyydidrireeccttoorr,,tthheessttuuddyyddooeess nnoott uunnnneecceessssaarriillyy dduupplliiccaattee aannyy pprreevviioouuss wwoorrkk.. QQuuaalfiittyy AAssssuurraannccee `TThhee pprroottooccooll,, ssttuuddyy ccoonndduucctt,,aannddfifinnaall rreeppoorrtt wwiillllbbeeaauuddiitteeddbbyytthheeCCoovvaannccee QQuuaalliittyy AAssssuurraannccee UUnniitt ((QQAAUU)).. TThhee pprroolliiffeerraattiioonn cceellll nnuucclleeaarr aannttiiggeenn eevvaalluuaattiioonn,, ddaattaa,, aanndd rreeppoorrtt wwiillll bbee aauuddiitteedd bbyy tthhee QQAAUUooff PPaatthhoollooggyy AAssssoocciiaatteess IInntteerrnnaattiioonnala.l LLiivveerraanndd ssecrruumm aannaallyysseess,, ddaattaa,, aanndd rreeppoorrtt wwiillll bbee aauuddiitteedd bbyy tthhee QQAAUUooff 33MM EEnnvviirroonnmmeennttaall TTeecchhnnoollooggyy aanndd SSaaffeettyy SSeerrvviicceess. TTeesstt M Mataeterriiaall IIddeennttiiffiiccaattiioonn PPeerrfflluuoorrooooccttaannee ssuullffoonniicc aacckidl ppoottaassssiiuumm ssaalltt ((PPFFOOSS;; TT--66229955)) LLoott NNuummbbeerr "TThheelloottnnuummbbeerrwwiillll bbeemmaianinttaaiinneeddiinntthhee rraaww ddaattaa.. 22880055..00000033 ~ _-- PPuurriittyy W`Wiillll bbee pprroovviiddeedd bbyy tthhee SSppoonnssoorr CoCvoavanncceee 66332299m --118833 SSttaabbiilliittyy RReessppoonsnisbibililiittyy ooff tthhee SSppoonnssoorr SSttoorraaggee CCoonnddititiioonnss RRoooomm tteemmppeerraattuurree CChhaararactceterriissttiiccss IInnffoorrmmaattiioonn oonn ssyynntthheessiiss mmeetthhooddss,, ccoommpposoistitiioonn,, oorr ootthheerr cchhaarraacctteerriissttiiccss tthhaatt ddeeffiinnee tthhee: tteesstt mmaatteerriiaall iiss oonn fiillee wwiitthh tthhee SSppoonnssoorr.. RReesseerrvvee ((AArrcchhiivvee)) SSaammpplleess AAeresseerrvveessaammppllee ((aapppprrooxxiimmaatteellyy 55 gg))ooffeeaacchh lloott wwiillllbbeettaakkeenn aanndd ssttoorreedd aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree.. `TThheessee ssaammpplleesswwililll bbee ttrraannssffeerrrreeddttooththee SSpopnsoorafatfnteerrccsoommplopelteitroionnoofftthhee: r~ ini-nl-iliffeepphhaasseettoobbeerreettaaiinneeddiinnaaccccoorrddaanncceewwiitthh4400CCFFRR79729.21.19955.. DDiissppoossiittiioonnooff TTeesstt M Maateterriiaall AAfftteerr aauutthhoorriizzaattiioonn ffrroomm tthhee SSppoonnssoorr,, aannyy rreemmaaiinniinngg tteesstt mmaateterriiaall wwiilll bbee rreettuurrnneedd ttoo:: AA3nMnddrreeww MM.. SSeeaaccaatt,, PPhhDD. TT3oMoxxiiccoollooggyy SSeerrvviicceess BSBtuu.iillPddaiiunnlgg, 22M2i20n0-n-22eEEs-o-00t2a2,, 5335MM14CC4e-enn1tt0ee0rr0 Phone No.: 6125753161 St. Paul, Minnesota 55144-1000 Phone No.: 612.575.3161 FFaaccssiimmiillee NNoo..:: 661122..773333..11773333 AAnniimmaallss SSppeecciieess RRaatt 22880055..00000044 ~ -_-- SSttrraaiinn CCrrl::CCDD((SSDD)) IIGGSS BBRR Covance6329-183 Covance aes 6329-183 - Page 5 SSoouurrccee CChhaarrlleess RRiivveerr LLaabboorraattoorriieess,, IInncc..,, RRaalleeiigghh,, NNoorrtthh CCaarroolliinnaa AAggee aatt IInniittiiaattiioonnooffTTrreeaattmmeenntt PPrreeffeerrabalbyly66 wweeeekkss ooff aaggee,, bbuutt nnoott mmoorreetthhaann 88 wweeeekkssooffaaggee: W `Weeiigghhtt aatt IInniittiiaattiioonnooffTTrreeaattmmeenntt 11103001to0330000 gg NNuummbbeerraanndd SSeexx 336600 mmaalleess aanndd 336600 ffeemmaalleess IIddeennttiiffiiccaattiioonn ~- IImmppllaannttaabbllee mmiiccrroocchhiipp iiddeennttiiffiiccaattiioonn ddeevviiccee Husbandry HHoouussiinngg IInnddiivviidduuaall ((mmaayy bbee ggrroouupp--hhoouusseedd dduurriinngg aacccclliimmaattiioonn)) DDiieett CCeerrttiiffiieedd RRooddeenntt DDiieett ##55000022,, mmeeaall ((PPMMII NNuuttrriittiioonn IInntteerrnnaattiioonnaall)) aadd lliibbiittuumm.. TThhee ddiicett iis rroouuttiinneellyy aannaallyyzzeed bbyy tthhee mmaannuuffaaccttuurreerr ffoorr nnuuttrriittiioonnaall ccoommppoonneennttss aanndd eennvviirroonnmmeennttaall ccoonnttaammininaantnsts.. SSppeecciiffiieedd nnuuttrriieenntt aanndd ccoonnttaammiinnaanntt aannaallyysseess aarrec oonn ffiillee aatt CCoovvaannccee--MMaaddiissoonn.. W Waatteerr AAdd lliibbiittuumm.. SSaammpplleess ooftf thhee wwaatteerr aarree rroouuttiinneellyy aannaallyyzzeedd ffoorr ssppeecciiffiieedd mmiiccrroooorrggaaxntiissmmss aanndd eennvviirroonnmmeennttaall ccoonnttaammiinnaannttss.. TThhee rreessuullttss aarree oonn ffiille aatt CCoovvaannccee-MMaaddisisoonn.. - 22880055..00000055 ~ _-- Covance6329-183 Covance 637,9-183 Ps Pa~:e 6 CCoonnttaammiinnaannttss T`Thheerree aarree nnookknnoowwnn ccoonnttaammiinnaannttssiinntthhee ddiieettoorr wwaatteeraartt lleevveellss tthhaatt mmiigghhtt iinntteerrffeerree: wwiitthh thhiiss ssttuuddyy.. EEnnvviirroonnmmeenntt EnEvnivrioronnmmenetnatallccoonnttrroollssffoorrtthheeaanniimmaall rroooommwwililllbbeesseett ttoommaianinttaaiinn 1188 ttoo 2266CC,a,a rreellaattiivvee hhuummididiittyy ooff 3300 ttoo 7700%%,, aanndd aa 1122--hhoouurr lliigghhtt//1122--hhoouurr ddaarrkk ccyyccllee.. `TThhee lliigghhtt//ddaarrkk ccyyccllee mmaayy bbee iinntteerrrruupptteedd ttoo aaccccoommmmooddaattee ssttuuddyy--rreellaatteedd aaccttiivviittiicess.. AAcccclliimmaattiioonn AAttlleeaasstt 11 wweeeekk RRaannddoommizizaattiioonn SSeelleeccttiioonnooffaanniimmaallssffoorrtthheeststuuddyy wwiillll bbee bbaasseedd oonn cclliinniiccaall oobbsseervravtaiotnisaoanndsd ootthheerr ddaattaa. aass aapppprroopprriiaattee.. AAnniimmaallss wwiillll bbee aassssiiggnneedd ttoo ttrreeaattmmeenntt ggrroouuppss uussiinngg aa ccoommppuuteterriizzeedd bblloocckkiinnggpprroocceedduurreeddesesiiggnneedd 1to0 aacchhiieevveebbooddyywweeiigghhtt bbaallaannccee wwiitthh rreessppeecctt t(o0 ttrreeaattmmeenntt - ggrroouupps.s. AAtttthheettiimmee ooff rranadonmidTaotiomn,tithheezwweaeiigtghhtitvvaoarriianattii,oonnoofftthheeaannimailsomoffeaeaacclhhssseexx uusseeddwwililllnnoott eexxcceeeedd ++2_2 ssttaannddaarrdddedveivaiattiioonnssoofftthheemmeeaannwweiegighhtt,,aannddtthheemmeeaannbbooddyy `wweeiigghhtt ffoorr eeaacchh ggrroouupp ooffeeaacchh sseexx wwiillll nnoott bbee ssttaattiissttiiccaallllyy ddiiffffeerreennttaat tthhee 55..00%% pprroobbaabbiilliittyy lleevveell.. JJuussttiiffiiccaattiioonn RRaattss hhiissttoorriiccaallllyy hhaavvee bbeeeenn uusseeddiinn ssaaffeettyy eevvaalluuaattiioonn ssttuuddiieessaannddaarree rreeccoommmmeennddeedd bbyy aapppprroopprriiaattee rreegguullaattoorryy aaggeenncciieess.. 22880055..00000066 ~ -_ GGrroouupp DDeessiigngantaiotnisaoanndsd DDiieettaarryy LLeevveellss Covance Covance 6633e229w9--e1188r33 Pai[e 7 Group MN`aNulumembbeerrooffAAnFnieimmmaaalllsse DD(iipeettmaarrTyy6LL2eev0vee5llss G1 r(oCuopntrohTM>* M7a0le 70 Female 0 (ppm T-6295) 2231 @(((CLMoooiwwndt))rbol)"b'c 76&00 6676000 0os 02.05 434 (((MMMiiiddd)-b-HHigihg)hb 5 (High 60 660 25.00 600 060 250.00 65 ((HHiigghh)~R'eccovery)' 6 (High Recovery)d Er7400] 470 40 200 20.0 20.0 aba TFThihveeecacoonnntrtiroolmlaaannilimmiasalnls/sGwrwsiolileullprrxseeccee1iivtveehtrthhoeeubbagash5sawailldldiliebetetosonnllyay.. craitWfeeiksc4eandd14for b Fhheeivppaeattaoocnceiemllllauulllsaa/rsreppxrrooilnliiffGeerrraoattuiioponsn rr1aatttheermmoeueagashsuur5reewmmeielnlntbtsse,, sbbaiicoorccihfhieecmmeidiccaaatllWaanneaalelyyksssee4ss and 14 for (T(ppeaanllammiinttooiyylml-C-aCooAlAisoonxx/iGiddrasaottiueioopnnxs)),,1a.annaddndhhii5sswttoiopplaabtthehodoellosogigyygn((aWWteeeedeakks1i144ntooennlrlyiy)m.)s. acrificeanimals. C `ATTThheenenssaeeiananiminiminmamlaGasalr/lsssoelwuwxipliislnl6lbbGweeirosslaauccbprresiiffi1ircceeaeadndatdeafdf5etferworarialaltltbleleeaeasdastste5ts52i2g5w2nweaweeteeekedksksaosso,fiftnrthtreeeearnaittmtmmreseenanatctt..rmiefinctewialnlimbeals. ~ ddAdieinsslcicamooynnaettldiisnnoiuunceecdGdu,,rrroaaenunnddpcett6hhoeewfaialtnnloiibxmmieacaletlsrsefwwaiftilellledbbfcfeeoortrooabbastssteellrreevvaaeessdtdt 5f5f2oo2rrwwrreeeevveeekekrrssss,iibpbtihoillseiittntyyu,,rtreppeaeeatrrtmssmeiinssetttne.etnnccwDeeui,,lrlooibrrneg rdreeecclaooyvveeerdryyo,,cttchhueeraarennniimmcaeallossfwwtioillxllirrceecceeeffiivevceetsbbaafssoaarlladdtiieltetaoosnntlly5y.2. weeks posttreatment. During DDoossiinngg PPrroocceedduurreess MMeetthhooddooff AAddmminiinsitsrtraattiioonn DDiieettaarryy.. AAnniimmaallssiinnGGrroouuppss 11 tthhrroouugghh 55 wwiillll rreececieveittveesestt ddiicett fforaoattlleeraasstt 110044 wweeeekkss.. AAnniimmaallssiinn GGrroouupp 66wwiilllrreecceeiivveetteessttddieiettffoorr 5522 wweeeekkss oonnllyy.. RReeaassoonn ffoorr DDoossiinngg RRoouuttee `TThhee ppootteennttiiaall hhuummaann eexxppoossuurree iiss bbyy tthheeoorraallrroouuttee.. DDoossee PPrreeppaarraattiioonn BBeeffoorree iinniittiiaattiioonn ooff ttrreeaattmmeenntt,, ddoossee pprreeppaarraattiioonnss ooff 00..55 ppppmm,, 1| ppppmm,, 22 ppppmm,, aanndd 2200 ppppmm wwiillll bbee mmiixxeedd.. 22880055..00000077 --~ Conance 6329-183 --_-- Covance Pua 6329-18 Page AAttlleeaasstt eevveerryy 44 wweeeekkss dduurriinngg tthhee iinn--lliiffee pphhaassee,, aallll ddoossee pprreeppaarraattiioonnss wwiillll bbee mmiixxeedd aaccccoorrddiinngg t1o0 tthhee ssttuuddsy.--ssppeecciiffiicc mmiixxiinngg pprroocceedduurree ddeevveellooppeedd bbyy CCoovvaannccee.. DDoossee `ccoonncceennttrraattiioonnss wwiillll bbee bbaasseedd oonn tthhee TT--66229955 ccoonntteenntt ooff tthhe tteesstt mmaateterriiaall aass ssuupppplilieedd.. AAllllddoossee pprreeppaarraattiioonnss wwiillll bbee ssttoorreeddaatt rroooomm tteemmppeerarattuurree.. RReetteennttiioonn SSaammpplleess `SSaammpplleess ((aapppprrooxxiimmaatteellyy 110000 gg)) wwiillll bbee ttaakkeenn ffrroomm eeaacchh ddoossee pprreeppaarraattiioonn dduurriinngg tthhee iinne-lliiffee pphhaassee aanndd ssttoorreedd aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree.. UUnnlleessss uusseedd ffoorr aannaallyysseess,, tthheessee ssaammppleless. wwililll bbeeddiissccaarrddeedd aattlleeaasstt 11 mmoonntthhaatfeterr ccomoplmetiopnooflftthheeeiitnn--lliiiffeeppohhaasnsee.. DDoossee AAnnaallyysseess BByy CCoovvaannccee uusinsgaaimmenetthhgoodd ssuupppplliieeddbbyytthhee SSppoonnssoorraanndd vvaalliiddaatteeddbbyyCCoovvaannccee HHoommogoegneneeiittyy SSaammpplleess ((aapppprrooxxiimmaatteellyy 110000 ggeeaacchh)) wwillibbeetltaakkleenn ffrroomm tthhee pprreeppaarraattiioonnss mmiixxeedd pprreetteesstt - aanndd ffrroomm pprreeppaarraattiioonnssmmixixeedd ffoorr tthhee ffiirrsstt inn--lliffee iinntteerrvvaall.. OOnneessaammpplleeeeaacchh ffrroomm tthhee. ttoopp,, mmiiddddllee,, aanndd bboottttoommoofftthhee ddoossee pprreeppaarraattiioonnss wwiillll bbee ccoolllleecctteedd,, ddiivviiddeedd iinnttoo tthhrreeee ssuubbssaarmnpplleess ffoorr eexxttrraaccttiioonn aanndd aannaallyyssiiss,, aanndd aannaallyyzzeedd ffoorr tteesstt mmaatteerriiaall ccoonntteennt.t. AAllll ssaammpplleesswwililll bbee ssttoorreedd aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree uunnttiillaannaallyyzzeeddwwitithhiinn 77 ddaayyssooffmmixixiinngg.. `HHoommooggeenneeiittyy aannaallyyssiiss wwiillll bbee rreeppeeaatteeddiiff abattcchh ssiizzee cchhaannggeess bbyy mmoorree tthhaann 3300%%.. SSttaabbiilliittyy OOnnee sseett ooff ssaammpplleess ((aapppprrooxxiimmaatteellyy 110000 ggeeaacchh)) wwiilll bbee ttaakkeennffrroommtthhee pprreeppaarraattiioonnss mmiixxeedd pprreetteesstt,, ssttoorreedd aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree ffoorr aat lleeaasstt 2288 ddaayyss,, tthheenn aannaallyyzzeedd.. HHoommoogegneneeiittyy ssaammpplleess ccoolllleecctteedd ffrroomm tthhee mmiiddddllee ooff tthhee pprreetteesstt ddoossee pprreeppaarraattiioonnss wwiillll bbeeaannaallyyzzeeddwwitithhiinn 22 ddaayyssooffmmixixiinnggaanndduusseeddaasstthheebbaasscelliinneevvalaluuee.. `AAnnaaddddititiioonnaall sseett ooff ssaammpplleess ((aapppprrooxxiimmaatteellyy 110000 ggeeaacchh)) wwiillll bbee ttaakkeenn ffrroomm tthhee `pprreeppaarraattiioonnss mmiixxeedd ffoorr tthhee ffiirrsstt iinn-lliffee iinntteerrvvaall,, ssttoorreedd aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree ffoorr aatt lleeaasstt 3322 ddaayyss,, tthheenn aannaallyyzzeedd.. HHoommogoegneneeiittyy ssaammpplleess ccoolllleecctteedd ffrroommtthhee mmiiddddlleeoofftthheeddoossee pprreeppaarraattiioonnss ffoorrtthheeffiirrsstt iinn--lilffe iinntteerrvvaall wwiilllbblee aannaallyyzzeedd oonn tthhee ddaayyooffmmixixiinngg aanndd uusseedd aass tthhee bbaasseelliinnee vvaalluuee.. 22880055..00000088 ~ Connce 329-183 Covance 6329-183 Pied Pa[~e 9 DDoossee CCoonnffiirrmmaattiioonn SSaammpplleess ((aapppprrooxxiirmnaatteellyy 110000 ggeeaacchh)) wwiillll bbeeccoolllleecctteedd ffrroommaallllddoossee pprreeppaarraattiioonnss aanndd aannaallyyzzeedd iinn dduupplliiccaattee.. HHoommogoegaeneeiittyy ssaammpplleess ccoolllleecctteedd ffrroomm tthhee rmniJddddlleeooff tthhee ddoossee pprreeppaarraattiioonnss ffoorr tthhee ffiirrsstt iinn--lliiffee iinntteerrvvaall wwiillll bbee uusseeddffoorrddoossee ccoonnffiirrmmaattiioonn rreessuulst.s. AAllll `ssaammpplleess wwiillll bbee ssttoorreedd aatt rroooomm tteemmppeerraattuurree uunnitill aannaallyyzzeedd.. OObbsseerrvvaattiioonnooffAAnniimmaallss CClliinniiccaall OObbsseerrvvaattiioonnss EEaacchhaanniimmaall wwiillll bbee oobbsseerrvveedd ttwwiiccee ddaaiillyy ((aa.mm.. aanndd pp..mm..)) ffoorrmmorotratlailtityyaanndd m`moorriibbuunnddiittyy;; ffiinnddiinnggsswwiilllbbee rreeccoorrddeedd aasstthheeyyaarree oobbsseerrvveedd.. `OOnnccee pprriioorr ttoottrreeaattmmeennttaanndd wweeeekkllyy tthheerreeaafftteerr,, eeaacchhaanniimmaallwwililll bbee rreemmoovveeddffrroommititss ccaaggee aanndd eexxaammiinneedd;; aabbnnoorrmmaall ffiinnddiinnggss oorr aann iinnddiiccaattiioonn ooff nnoorrmmaall wwiillll bbee rreeccoorrddeedd.. TThhee ffoolllloowwiinngg iinnffoorrmmaattiioonn oonn eeaacchh ggrroossssllyy vviissiibbllee oorr ppaallppaabbllee mmaassss wwiillll bbee rreeccoorrddeedd.. ~ ttlioimcmaeeotoifofononsneste.t lsasoiipzczpeeaet((aisosrmmnaanalcllleoorr llaarrggee)) paprproopggerraeerssassniicooenn BBooddyy W Weeiigghhttss PPrriioorr ttoo ttrreeaattmmeenntt ((aatt rraannddoommizizaattiioonn)),, wweeeekkllyy ffoorr WWeeeekkss 11 tthhrroouugghh 1177,, oonnccee eevveerryy 44 wweeeekkss tthheerreeaafftteerr,, aanndd aatt W Weeeekk 110055 FFoooodd CCoonnssuummppttiioonn WWeeekleyffookrrWWleeeekykss 11 tthhrroouugghh 1166aannddoonncceeeevveerryy 44 wweeeekkss tthheerreeaafftteerr CClliinniiccaall PPaatthhoollooggyy FFrreeqquueennccyy aanndd NNuummbbeerrooffAAnniimmaallss UUnnsscchheedduulleedd CCoolllleeccttiioonn -- W`Whheenn ppoossssiibbllee,, a& bblloooodd ffiillmm wwiillll bbee mmaaddee aanndd hheelldd oforr ppoossssiibblee ffuuttuurree eexxaammiinnaattiioonn ffrroomm aanniimmaallss ssaaccrriiffiicceedd aatt aann uunnsscchheedduulleedd iinntteerrvvaall.. 22880055..00000099 -~ Conace 6329-183 _-- Ccvance Pael0 6329-183 Pa[~e 10 SScchheedduulleedd CCoolllleeccttiioonnss. HHeemmataotollooggyy,, sseerruumm cchheemmiisstrty,, uurriinnaallyyssiiss,, aanndd uurriinnee cchheemmiissttrryy wwiilll bbee ddoonnee ffoorr 1100aanniimmalasls//sseexx//ggrroouupp IInn GGrroouuppss 11 tthhrroouugghh 5 aatt WWeeeekkss 44,, 1144,, 2277,, aanndd 5533.. AAbbllooooddfifillmmwwililllbbeemmaaddeeffrroomm aanniimmaallssaattsscchheedduulleeddssaaccririffiicceessaaffttcerr 5522aanndd 110044 wweeeekkss ooff ttrreeaattmmeenntt aanndd hheelldd ffoorr ppoossssiibbllee ffuuttuurree eexxaammiinnaattiioonn.. MMeetthhooddooff CCoolllleeccttiioonn HHeemmataotollooggyy,, SSeerruumm CChheemmisisttrryy,, UUrriinnaallyysseess,, aanndd UUrriinnee CChheemmisisttrryy AnAinmimalalsswwililll bbeeffaasstteedd oovveerrnniigghhtt;;bbllooooddwwililll bbee ccoolllleactteeddffrroomm aa jjuugguullaarrvveciinm. TThhee aannttiiccooaaggauldaanntt wwiillll bbee ppoottaassssiiuumm EEDDTTAA ffoorr hheemmaattoollooggyy tteessttss.. UUrriinnee wwiillll bbee ccoolllleecctteedd cchhiilllleedd oovveerrnniigghhtt ((aapppprrooxxiimmaatteellyy 1166 hhoouursrs).). BBlloooodd FFiillmmss BBlloooodd ffiillmmss wwiilll bbee ttaakkeenn aass ppaarrtt ooff tthhee nneeccrrooppssyy pprroocceedduurree.. TTeessttss `HHeemmaattoollooggyy hrreeemddobbglllooooobddiccneellll ((eerryytthhrrooccyyttee)) ccoouunntt hhheeemmmatoaotgcolrcoirbititn m``mmeeeaaannn cccooorrrpppuuussscccuuulllaaarrr vvhoeolmluuommgele:obin m`mmeeeaaannn cccooorrrpppuuussscccuuulllaaarrr hhheeemmmoooggglllooobbbiiinnn ccoonncceennttrraattiioonn ppllaatteelleett ccoouunntt wwdihhfifiteteerebbntlloioaoolddbccleeololld((llceeeululkkoocccoyyutnteet)) ccoouunntt dbbrleilfotofiooecddruelccnoeetclilylaltlmmebosolromrppoehhdaoorlcleoo(lggmlayycdoeu,nbtut not reeteixxcaaummloiicnnyeetdde))smear (made, but not ggulrluueccaoonssieetrogen ucctorrrteeeaaaalttiinpnniriitonrntoeee:gienn altaolbbtuaulmmpiirnnotein `cgghllooolbbeuuslltiinenrol ctoohttoaalllebbsitilleiirrrouulbbiinn CClliinniiccaall CChheemmisisttrryy a`allgaaannmiinmneea aagmmliuintnoaotmrtyraahnnrsasffenersrafasesere.ase acgasasapplmacarmirttuaaamttegelaaummtaiinmnooyttlrrtaranansnsfsfefeerrraaassseee icinnaoolcrrigguaamnniicc pphhoosspphhoorruuss spsoootddaiiusumsmium cphoitoarsisdiuem chloride 22880055..00001100 _ r= --_--_-- apappepaeraarannccee vsvopolelcuuimmfeiec.gravity, PHspecific pH gravity prpuorrootbteeiiilnninogen urobilinogen UUrriinnaallyyssiiss Covance 6325-183 Covance Pen 6329-183 Pa~e 11 kggellutucoconosesese kbbieilltiiorrunubbeiisnn mbbillocoorooddscopic examination of sediment microscopic examination of sediment posstooaddsiiusumimum potassium UUrriinnee CChheemmisisttrryy 1166 hshoooudurirueemxxccrreettiioonn ooff:: pspoootdtaaiusssmsiiuumm SSeerruumm PPFROOSS AAnnaallyysseess FFrreeqquueennccyy aanndd NNumubemroofbfAAneniimmarallss FFiivvee aannimiamls/aselxisinnG/Grsrooueuppxss 1| t throuhgh55rdduurro iinnggWu Weeeekgkss44h aanndd 1144 ((aanniimmaallss sseelleecctteedd ffoorr hheeppaattoocceellllunllaarr pprroolliiffeerraattiioonn aanndd bbiioocchheemmiiccaall aannaallyysseess)),, ffiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp ffrroommGGrroouuppss 11aanndd 55aaffeterraattllaeasstt 5522wweeeekkssooffttrreeaattmmeenntt((ffrroommaanniimmaals sseelleecctteedd ffoorr iinntteerriimm ssaaccrriiffiiccee)),, aanndd ffiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp ffrroomm GGrroouuppss 11 tthhrroouugghh 55 aatt tteerrmmiinnaall ssaaccrriiffiiccee M Meetthhoodd ooff CCoolllleeccttiioonn AAnniimmaallss wwiillll bbee ffaasstteedd oovveerrnniigghhtt;; bblloooodd ((aapppprrooxximimaatteleyl2y2 mmLL)) wwililblel bceolclolelcectteedd ffrroomm aa jjuugguullaarr vveeiinn.. SSaammpplleess wwiillllbbee ccoolllleecctteedd wwiitthhoouutt aannttiiccooaagguullaanntt.. `SSaammppllee HHaannddlliinngg BBlloooodd ssaammpplleesswwiilllbbee aalllloowweedd ttoo cclloott aatt rroooomm tteemmppeerraattuurreeaannddcecnetnrtriiffuuggeedd.. SSeerruumm ssaammpplleess wwiillll bbeehharavrveesstteeddaanndd ssttoorreedd iinna farfereeezzeerr sseett ttoo mmaaiinnttaaiinn 6-600 0to --8800CC.. `SSaammpplleesswwililllbbee ppacakecdokonneddrdryy iiccec aanndd sshhiippppeedd ttoo: 3KKrMriissEJJn..vHHiaranonsnsemenen,n,tPPahhlDDTechnology and Safety Services 99333M55 EBBnuuvssihhroAAnvvmeenennuuteeal Technology and Safety Services BBuuiiklldiinngg 22--33E6--0099 TSStet..lePPpaauhulol,,neMMiNinnon.ne:essoo6tt1aa2.55755711833.336--03313383311 TFFaaecclsesipimmhioillneeeNNoNo.o..:.: 66161212.2.77.777788.8.66.6110771668 22880055..00001111 --~ CCoovvaanncce6623P22a99g--e11881332 Pa[~ 12 SSeerruumm ssaammpplleess wwiillllbbee aannaallyyzzeedd ffoorr PPFFOOSS aanndd mmeettaabboolliitteessbbyytthhee SSppoonnssoorr.. RReessuullttss wwiilll bbee pprroovviiddeedd ffoorr iinnclcusliounismniotthhnee ffiinnaall rreeppoorrtt. TTeerrmmiinnaattiioonn UUnnsscchheedduulleedd SSaaccrriiffiicceess aanndd DDeeaatthhss NNeeccrrooppssiieess wwillibbeelddoonlnee.. AAnniimmaallss ttoobbee ssaaccrriiffiicceedd wwiillll bbee aanneesstthheettiizzeeddwwitithhssooddiiuumm ppeennttoobbaarrbbititaall,, wweeiigghheedd,, aanndd eexxssaanngguuininaatteedd.. AA bbllooooddffiillmm wwiilllbbeettaakkeenn aass ppaarrtt ooff tthhee. nneeccrrooppssyy pprroocceedduurree ffoorr ssaaccrriiffiicceedd aanniimmaallss.. SScchheedduulleedd SSaaccrriiffiicceess IInntteerriimm SSaaccrriiffiicceess DDuurriinngg WWeeeekk 44,, ffiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp ffrroomm GGrroouuppss 11 tthhrroouugghh 55wwililllbbee ffaasstteedd oovveerrnniigghhtt,, bblleedd ffoorr sseerruumm ssaammpplleess,, aanneesstthheettiizzeedd wwiitthh ssooddiiuumm ppeennttoobbaarrbbititaall,, w`weeiigghheedd,, aanndd eexxssaanngguuiinnaatteedd.. TThhee aabbddoommiinnaall ccaavviittyyooffeeaacchh aanniimmaallwwililllbbee ooppeenneedd,, - tthheelilivveerrwwililllbbeerreemmoovveeddaannddwweiegighheedd,,aannddlliivveerrssaammplpelesswwililllbbeeccoolllleecctteedd.. AAnniimmaallss wwiillll bbee ddiissccaarrddeedd aafftterr lliivveerr ccoolllleeccttiioonn.. DDuurriinngg WWeeeekk 1144,, fiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp ffrroomm GGrroouuppss 11 tthhrroouugghh 55 wwiillll bbee ffaasstteedd oovveerrnniigghhtt,, bblleedd ffoorr sseerruumm ssaammpplleess,, aanneesstthheettiizzeedd wwiitthh ssooddiiuumm ppeennttoobbaarrbbititaall,, `wweeiigghheedd,, eexxssaanngguuiinnaatteedd,, aanndd npeeccrrooppssiieedd.. AAfftteerr aa t lleeaasstt 5522 wweeeekkss ooff ttrreeaattmmeenmt,, 1100 aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp ffrroomm GGrroouuppss 1| aanndd 55 wwiilll bbee ffaasstteedd oovveerrnniigghhtt,, bblleedd ffoorrsseerruumm ssaammppleless ((ffiivvee aanniimmaallsg/sseexx//ggrroouupp)) aanneesstthheettiizzeedd wwiitthh ssooddiiuumm ppeennttoobbaarrbbititaall,, wweeiigghheedd,, eexxssaanngguuiinnaatteedd,, aanndd nneeccrrooppssiieedd.. "TThheelilivveerrwwililllbbeewweeiighgehdaeannddffrroozzeennlliivveerrssaammpplleesswwiilllbbeeccoolllleecctteedd.. AA bbllooooddffiillmm wwiillll bbee ttaakkeenn aass ppaarrttoofftthhee nneeccrrooppssyy pprroocceedduurree,. TTeerrmmiinnaall SSaaccrriiffiiccee AAfftteerr aatt lleeaasstt 110044 wweeeekkss ooff ttrreeaattmmeenntt,, tthhee rreemm~aiainniinngg aanniimmaallss wwillibbeeflfaasstlteedd oovveerrnniigghhtt,, bblleeddffoorrsseerruumm ssaammpplleess ((ffiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp)),, aanneesstthheettiizzeedd wwiitthh ssooddiiuumm ppeennttoobbaarrbbiittaall,, wweeiigghheedd,, eexxssaanngguuiinnaatteedd,, aanndd nneeccrrooppssiieedd.. AAbblloooodd ffiilmlm wwiillll bbeettaakkeennaass ppaarrtt oofftthhee nneeccrrooppssyy pprroocceedduurree.. 22880055..00001122 ~ CCoonvnanccee 6633P2299a--e1188s33 Pase 13 RReeccoovveerryy SSaaccrriiffiiccee AAfftteerr aatt lleeaasstt 5522 wweeeekkssooffttrreeaattmmeennttaanndd 5522wweeeekksswwitithhoouutt ttrreeaattmmeenntt,, tthhee rreemmaaiinniinnggaanniimmaallssiinnGGrroouupp 66wwililllbbeefafasstteeddovoeverrnniigghht,,tthheennanaensetshtheettiizzeeddwwiitthh ssooddiiuumm ppeennttoobbaarrbbititaall,, wweeiigghheedd,, eexxssaanngguuinianteadt,aeandnd,d nneeccrrooppssiieedd.. `PPoosstm tmoorrtteemm PPrroocceedduurreess NNeeccrrooppssyy `TThheenneecrocpsrywwiolilllpiinnscclluuyddeeaanneexxamainmatiiononofftathheteeexixtteoemrnanall ffeeaattuurreessoofftthhee ccaarrccasass;sla;lll eexxtteermnaall bbooddyy oorriiffiicceess;; tthhee aabbddoommininaall,, tthhoorraacciicc,, aanndd ccrraanniiaall ccaavviittiieess;; oorrggaannss;; aanndd. ttiissssuueess.. CCeellll PPrroolliiffeerraattiioonn TTiissssuuee CCoolllleeccttiioonn aanndd IImmmmunuonhoihsisttoocchheemmiiccaall EEvvaalluuaattiioonn AAtthte tWheeWeeekk44 aanndd1144iinntteerriimm ssaaccrriiffiicceess,, rreepprreesseennttaattiivveessaammpplleessoofftthheelleefftt llaatteerraall lloobbee. oofftthhee lliivveerr aanndd aannyy mmaaccrroossccooppiicc lleessiioonnssoofftthheelliivveerrwwililllbbeeccoolllleecctteeddaanndd pprreesseerrvveedd iinn zziinncc ffoorrmmaalliinn.. AAfftteerr ffiixxaattiioonn,, eeaacchh ssaammpplleeoofflliivveerr wwiillll bbee eemmbbeeddddeeddiinn ppaarraaffffiinn,, aanndd tthhee ppaarraaffffiinn bblloocckkss wwiillll bbee sshhiippppeedd ttoo:: PSSaaatnnhddorrlaaoRRg.y. EEAlslddsroriicddiggaeet,,esPPhhIinD)ternational PF11r55aetdWW heoororliormcmgaky,nan'AM'sassrsMMyoilclilaillanCCtdeoosuu2rItr1nt,7t,e0SSr1unuiaittteeioIInal TFTereelldeepeprhhioocnnkee, MNNooa.r.::yla33n00d11..662661337..0111664444,, eexxtt.. 22220011 FFaaccssiimmiillee NNoo:: 330011..666633..88999944 PPrroolliiffeerraattiioonn cceellll nnuucclleeaarr aannttiiggeenn ((PPCCNNAA)) eevvaalluuaattiioonn wwilll bbee ddoonnee oonn tthhee ssaammppleless.. IInn aaddddiittiioonn,, lliivveerr sseeccttiioonnss wwiillll bbee ssttaaiinneedd wwiitthh hheemmaattooxxyylliinn aanndd ecoossiinn aanndd eexxaammiinneedd mmiiccrroossccooppicicaallllyy.. RReessuullttss wwiillll bbee pprroovviiddeedd ffoorr iinncclluussiioonn iinntthhee ffiinnaall rreeppoorrtt.. PPaallmmiittooyyll--CCooAA OOxxiiddaassee TTiissssuuee CCoolllleeccttiioonn aanndd AAnnaallyysseess AAtt tthhee W Weeeekk 44 aanndd1144iinntteerriimmsascarcirfifiicceess,, a ssaammppllee ((aapppprrooxxiimmaatteellyy 550000 rmagg))ofotf thhee rriigghhtt lalatteerraalllloobbee oofftthheelliivveerrwwililllaaslsoobbeecoclollleecctteeddffrroommeeaacchhaanniimmaallaannddffllaasshh--ffrroozzeenniinn lliiqquuiidd nniittrrooggeenn.. TThheelilviverertitissssuueewwililllbbeessttoorreeddiinn aaffrreeeezzeerrsseett ttoommaianinttaaiinn --6600 ttoo --8800"CC -- uunnttiill aannaallyyzzeedd bbyy CCoovvaannccee ffoorr ppaallmmiittooyyll--CCooAA ooxxiiddaassee aaccttiivviittyy.. 22880055..00001133 - Covance6329-183 _--m-- Pent Covance 6329-183 Pa~e 14 OOrrggaann WWeeiigghhttss At the scheduled sacrifices, th following organs (when present) willbe weighed; : Appaatiirrteheded soocrrghgaeandn.~sulwwediilllsabbceeriwwfeieciieggshh,eethddesseefoppalalrroaawtteeillnyyg:: organs (when present) will be weighed; aabrddarrieennnaall ((22)) likbkviirdaedinnrneeyy ((22)) llluiuvnneggr soopvvlaaerreyyn2(2)) ttsteephssylttereeeossnid (2) with parathyroid tuuhttyeerrruoussidww(ii2tt)hhwcceeirtrhvviipxxarathyroid OOrrggaann--ttoo--bbooddyy wweeiigshhtt ppeerrcceennttaaggeess aanndd oorrggaann--ttoo--bbrraaiinn wweeiigghhtt rraattiiooss wwiillll bbee ccaallccuullaatteedd.. BBoonnee MMaarrrrooww SSmmeeaarr FFrroomm tthhee ffeemmuurrooffeeaacchh aanniimmaallaat sscchheedduulleedd ssaaccrriiffiicceess oonnllyy;; mmaaddee bbuutt nnoott eexxaammiinneedd LLiivveerr PPFFOOSS AAnnaallyyssiiss AA ppoorrttiioonn ooff tthhee lliivveerr wwiilll bbee ccoolllleecctteedd ffrroomm ffiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp ffrroomm GGrroouuppss |1 - tthrouhgh5r 5aatttothheeWu Weeeeg kk44ahanndd 1144iinntteerriimmsascarcirfifiicceess,,ffrroommffiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouupp ffrroomm `GGrroouuppss 11 aanndd 55 aatt tthhee W Weeeekk 7799inintteerriimm ssaacrcirfifiiccee,, aanndd ffrroomm ffiivvee aanniimmaallss//sseexx//ggrroouuppss ffrroomm GGrroouuppss 11 tthhroruoguhgh5 aatttthhee tteerrmmiinnaallssaaccrriiffiicceeaannddffllaasshh--frroozzeenn iinn lliiqquuiidd nniittrrooggeenn aannddssttoorreeddiinnaafrfreeeezzeerrsstet t(o0 mmaianinttaaiinn -6600 t0o --8800CC.. SSampaleswm wililllbbpeeppaalcckkeede doonns ddrryy iiccee aannddsshhiippppeeddttoo ~ Kris JJ.. HHaannsseenn,, PPhDD,, 33MM EEnnvviirroonnmmeennttaall TTeecchhnnoollooggyy aanndd SSaaffeettyy SSeerrvviicceess.. LLiivveerr ssaammpplleess wwiillllbbee aannaallyyzzeedd ffoorr PPFFOOSS aanndd mmeettaabboolilitteessbbyytthhee SSppoonnssoorr.. RReessuullttss wwiillll bbee pprroovviiddeedd ffoorr iinncclluussiioonn iinn tthhee ffiinnaall rreeppoortr,t. TTiissssuuee PPrreesseerrvvaattiioonn TT1hh0ee%ffoonlellluootwwriainln-ggbuttfiisfssesurueeesds (f(wowrhhmeeannlippnr:reesseenntt))ffrroommeeaacchh aanniimmaall wwiillll bbee pprreesseerrvveedd iinn 10% neutral-buffered formalin'~ baarddarrieennnaall ((22)) cbcereacciunumm ccecorelvrvoiinxx dcduouolooddneennuumm eeppiiddiiddyymmiiss ((22)) --- eseosopphhaagguuss eefyeyemeu(r2))with bone marrow (articular fssHeuuamrrrffduaaecrcreewoiaofintfthtghhbleeaonndddieisstmtaallareernnoddw)) (articular heart Harderian heart gland iilleeuumm Jjeejjuunnuumm kkiiddnneeyy ((22)) 22880055..00001144 ~ CoCvoavannccee6633P22a99r--e11l88s33 Page 15 lleilesvsieioornnss llliuuvnneggr wwiitthh mmaaiiansstteemm bbrroonncchhii llmyyammmppmhhannrooyddeegl((ammnedesse(enfntetemerarilicce))s only) moovvaaamrryym2(a2)r)y gland (females only) pppiaatnnuccirrteeaaarssy prreppocirstouttsaiutttaametre.y srseaalcliitvuvaamrryy ggllaanndd [[mmaannddiibbuullaarr ((22))]] ssscceiimaaittniiccalnneveerrsvvieecle (2) sssekkemelleienttaaalll vmmueusssicccllleee (((2tth)hiigghh)) ssspkkiiinnnalcord (cervical, thoracic, and spTinuamlbcao)rd (cervical, thoracic, and ssspptllleueermeennnbuamrw)ith bone marrow ssstttoeormmnaauccmhh with bone marrow ttteehssyttiimssu(s(22)) tttthhhryyyarmcroohuieiddsa ((22)) wwiitthh ppaarraatthhyyrrooiidd tuurrraiicnnhaareryya bbllaaddddeerr uuvtateegrriuunssa vagina HHiissttooppaatthhoollooggyy `TTiissssuueess ((aa5saappproppriarte)fofrroommpeeaarcchhaianniimmaaallitinnGGerroou)uppss11,, 55,,aanndd 66 ssaacrcifriciefdaiatcttethhdee `WWeeeekk 5533inintteerriimm ssaacrcirfifiicceeaannddtteerrmmiinnaall ssaaccrriiffiicceeaannddffrroommeeaacchhaanniimmaalltthhaattddiieessoorriiss ~~ ssacarificcedraatitaannfuunins.c~chcheededuuldleeddinintteerrvvaallwwiilllbbee eemmbebddeedidinnpapdraarefafffidinn,, sseeccttiioonneedd,, ssttaaiinneedd `wwiitthh hheemmaattooxxyylliinn aanndd ceoossiinn,, aanndd eexxaammiinneedd mmiiccrroossccooppiiccaallllyy.. AAddrreennaallss,, bbrraaiinn,, eeyyeess,, kKiiddnneeyyss,, lliivveerr,, mmeesseenntteerriicc llyymmpphh nnooddee,, ppaannccrreeaass,, sspplleeeenn,, tteesstteess,, aanndd oovvaarriieess ffrroomm tthhee. `aanniimmaallss nneeccrrooppssiieedd aatttthhee WWeeeekk 1144iinntteerriimmsascarcirfifiicceewwililll aallssoobbeeeemmbbeeddddeeddiinnpparaaraffffiinn,, sseeccttiioonneedd,, ssttaaiinneedd wwiitthh hheemmaattooxxyylliinn aanndd eeoossiinn,,aannddeexxaammiinneedd mmiiccrroossccoopipcicalalllyy.. MMaaccrroossccooppiicclleessiioonnsswwililll aallssoobbeeeexxaammiinneedd mmiiccrroossccooppiiccaallllyy ffrroomm eeaacchhaanniimmaalliinn GGrroouuppss 22,, 33,, aanndd 44 ssaaccrriiffiicceedd aatt tteerrmmiinnaall nneeccrrooppssyy.. RReeppoorrttss OOnnee ccooppyy ooff tthhee ddrraafftt rreeppoorrtt wwiillll bbee sseenntt ttoo tthhee SSppoonnssoorr.. TThhee rreeppoorrtt wwiillll iinncclluuddee tthhee ffoolllloowwiinngg iinnffoorrmmaattiioonn:: ~Exxppeerriimmeennttaall DDeessiiggnn aanndd M Meetthhooddss dRRoeessseuullattnssalyses dmmooorstretaalalinittayylyses - ccblloiindniiyccaawlleooibbgshseetrrsvvaattiioonnss body weights 22880055..00001155 -~ Covance 6329-183 _-- Covanc hme 6329-183 Pa~e 16 bfboooodddyycwwoeeniisgguhhtmtpccthhiaaonnnggeess ftctoeleissonttdimmcaaclatotenperasriutiaahmlloccplootoinngossynuurmmepsptutliitoosnn pcpalaillnmmiicitatoolyypllaCCthoooAAlogooyxxiirddeaasssueeltaasccttiivviittieess sseerruumm PPFFOOSS aanndd mmeettaabboolliittee vvaalluueess ((pprroovviiddeeddbbyytthheeSSppoonnssoorr)) lmliiavvceerrroPPsFFcOOopSSicaannoddbsmmeeretvtaaabtboiololinittsee vvaalluueess ((pprroovviiddeedd bbyy tthhee SSppoonnssoorr)) mmmiaicccrrrooossscccooopppiiiccc ooobbbssseeerrrvvvaaatttiiiooonnnsss cceellll pprroolliiffeerraattiioonn aasssseessssmmeennttss ((pprroovviiddeedd bbyy tthhee SSppoonnssoorr''ss ddeessiiggnneeee)) SSttaattiisstliiccaall EEvvaalluuaattiioonn LeLveevneen'es'stteessttwwililll bbeeddoonnee ttootetesstt ffoorrvvaarriiaanncceehhoommogoegneenietiyty..IInntthhee ccaasseeooff hheetteerrooggeenneeiittyy ooff vvaarriiaanncceeaatt pp =s 00..0055,, ttrraannssffoorrmmaattiioonnss wwiillll bbee uusseedd ttoo ssttaabbiilliizzee tthhee vvaarriiaannccee.. CCoommpparariissoonn tteessttss wwiillll ttaakkee vvaarriiaannccee hheetteerrooggeenneeiittyy iinnttoo ccoonnssiiddeerraattiioonn.. `OOnnee--wwaayy aannaallyyssiissooffvvaarriiaannccee ((AANNOOVVAA)) wwiillll bbee uusseedd G(iffaappppliliccaabbllee)) ttoo aannaallyyzzee bbooddyy _ wweeiigghhttss,, bbooddyy wweeiigghhtt cchhaannggeess,, ffoooodd ccoonnssuummppttiioonn,, ccoonnttiinnuuoouuss cclliinniiccaall ppaatthhoollooggyy vvaalluueess,, ppaallmmiittooyy]l CCooAA ooxxiiddaassee aaccttiivviittieess,, aanndd oorrggaann wweeiigghhtt ddaattaa..Iffftthhee AANNOOVVAA iiss ssiiggnniiffiiccaanntt,, DDuunnnneetttt''s tt--tteessttwwililllbbeeuusseeddffoorr ccoonnttrrooll vveerrssuuss ttrreeaatteedd ggrroouupp ccoommppaarriissoonnss. 1Ifftthhee AANNOOVVAA sshhoowwss ssiiggnniiffiiccaannccee ffoorr bbooddyy wweeiigghhttss aatt WWeeeekk 11,, oonnee--wwaayy aannaallyyssiiss ooff ccoovvaarriiaannccee ((AANNCCOOVVAA)) wwiillll bbee uusseedd ttoo aannaallyyzzee bbooddyy wweeiigghhttss,, wwiitthh iinniittiaall bbooddyy wweeiigghhttss aass tthhee ccoovvaarriiaattee.. IIfftthhee AANNCCOOVVAA iiss ssiiggnniiffiiccaanntt,, ccoovvaarriiattee--aaddjjuusstteedd mmeeaannsswwililllbbee uusseedd ffoorr ccoonnttrrooll vveerrssuuss ttrreeaatteedd ggrroouupp ccoommpaprairsisoonns.s. `GGrroouupp ccoommppaarriissoonnss ((GGrroouuppss 22 tthhrrouoguhg6ht5 vveerrssuuss GGrroouupp 11)) wwilillbel beevaevlaulautateeddaatttthhee 55..00%% ttwwoo--ttaaiilleedd pprroobbaabbililiittyy lleevveel.l. OOnnllyy ddaattaa ccoolllleecctteedd oonnoorraaffeterrtthhee ffiirrsst ddaayy ooff ttrreeaatummeenntt wwiillll bbee aannaallyyzzeedd ssttaattiissttiiccaallllyy.. AAddjjuusstteedd ssuurrvviivvaall ddaattaa aarree aannaallyyzzeedd bbyy tthhee NNaattiioonnaall CCaanncceerr IInnssttiittuuttee ((NNCCII) lliiffeettaabbllee: ppaacckkaaggee.. TThhee tteessttss iinncclluuddee:: GGrraapphhiiccaall ((KKaappllaann--MMeeiieerr pprroodduucctt-lliimmiitt eessttiimmaattiioonn ccuurrvveess)),, CCooxx--TTaarroonnee bbiinnaarryy rreeggrreessssiioonn mmeetthhooddss ffoorr ttrreenndd aanndd hheetteerrooggeenneeiittyy,, aanndd GGeehhaann--BBrreessllooww nnoonnppaarraammetertriicc mmeetthhooddssfoforrttrreenndd aanndd hheetteerrooggeenneietityy.. NNoonn--nneeooplpalassttiicc lleessiioonnss aarree aannaallyyzzeedd bbyy tthheeCCoocchhrraann-AArrmmititaaggee tteesstt ffoorr ttrreenndd aanndd tthhee ~ FFiisshheerr--ITrrwwiinn eexxaacctt tteesstt ffoorr hheetteerrooggeenneeiittyy.. 22880055..00001166 ~ Covance6329-183 Covaxtce 6329-183 Bt) Pa~ 17 IInncciiddeennttaall ttuummoorrss aarree aannaallyyzzeedd bbyy DDiinnssee--LLaaggaakkooss llooggiissttiicc pprreevvaalleennccee mmeetthhooddss ffoorr ttrreenndd aanndd hheetteerrooggeenneeitityy.. RRaappiiddllyy lleetthhaallaanndd ppaallppaabbllee ttuummoorrss aarree aannaallyyzzeeddiinntthhee ssaammee mmaannnneerr aass ssuurrvviivvaall IInntthhee ccaasseess wwhheerreetthheessttuuddyyppaatthhoolologgisistt ccaannaassssiiggnnppaartrtiiccuullaarr ooccccuullttnneeooppllaassttiicclleessiioonnss aasstthhee ccaauusseeooffddeeaathtihinntthheeaanniimmalasls,, ssuucchh iinnffoorrmmaattiioonnwwiilllbbeettaakkeenn iinnttoo aapppprrooprpiraiatete: aannaallyyssiiss.. AAtttthheeeennddooff 11yyeeaarraaffeterrisisssuuaanncceeofoftthheeaauuddititeeddddrraafftt rreeppoortr,t,iiff nn0o rreeqquueesstteeddrreevviissiioonnssoorr iinnssttrruuccttiioonnss ttooffiinnaalliiz7eehhaavveebbeeeenn ccoommmmunuincicaatteedd bbyy tthhee SSppoonnssoorr,,tthheenntthheeaauuddiitteeddddrraafftt rreeppoorrttwwililllbbeeccoonnssiiddeerreedd f'fiinnaall'aannddiissssuueeddaasstthheffiinnaall rreeppoortr,t, ssiiggnneeddbbyy tthheessttuuddyyddirireeccttoorr,, aanndd ssuubbmmiitttteedd ttoo tthhee SSppoonnssoor.r. AAnnyy mmoodidfifiiccaattiioonnss oorr cchhaannggeess ttoo tthhee aauuddiitteedd ddrraafftt rreeppoorrtt rreeqquueesstteedd 11yyeeaarraafftteerr iissssuuaannccee: wwiillll bbee ppeerrffoorrmmeedd aatt aaddddiittiioonnaall ccoosstt ttoo tthhee SSppoonnssoorr.. ~ "TTwwoo ccooppiieessoofftthheesisiggnneeddfifinnaall rreeppoorrtt ((oonneeuunnbboouunnddaannddoorneebboouunndd))wwililllbbeesseenntt t1o0tthhee SSppoonnssoor.r. RReeccoorrdd RReetteennttiioonn AAllll rraasw ddaattaa,, ddooccuummenetnatattiioonn,, rreeccoorrddss,, pprroottooccooll,, ssppeecciimmeennss,, aanndd ffiinnaall rreeppoorrtt ggeenneerraatteedd aass aa rreessuulltt ooff tthhiiss ssttuuddyy wwiillll bbee aarrcchhiivveedd iinn tthhee ssttoorraaggee ffaacciilliittiieessooffCCoovvaannccee--MMaaddiissoonn ffoorr aa ppeerriioodd ooff 11yyeeaarrffoolllloowwiinngg ssuubbmmiissssiioonn oofftthheffiinnaall rreeppoorrtt ttootthhee SSppoonnssoorr.. OOnnee yyeeaarr aafftteerr ssuubbmmiissssiioonn oofftthheefifninaall rreeppoorrtt,, aalllloofftthhee ~affoorreemmeennttiioonneeddmmataetreiriaallsswwililll bbeesseenntt ttoo tthhee `SSppoonnssoorr,, aanndd aarerettuurrnnffeeeewwililllbbee cchhaarrggeedd..TThheeSSppoonnssoorrmmaayyeleleecctt ttoohhaavveetthhee mmaatteerriiaallss erettaaiinneeddiinntthheeCCoovvaanncceeaarrcchhiivveessffoorraannaaddddititiioonnaallppeerriiooddooffttiimmee,, aannddCCoovanvceawwilinlllcchchaarrgegee: aassttoorraaggee ffeeee.. IIfftthhee SSppoonnssoorr cchhoooosseess ttoo hhaavvee CCoovvaannccee ddiissppoosseeoofftthhee mmaateterriiaallss,, adidsisppoossaall ffeeeewwililllbbeecchhaarrggeedd..AAllll rraawwddaattaassttoorreeddoonnmmagangenteiticcmmeeddiiaawwililllbbee rreettaaiinneedd bbyy CCoovvaannccee.. PPCCNNAA eevvaalluuaattiioonn ddaattaa aanndd ppaarraaffffiinn bblloocckkss aannddtitissssuueeslsiliddeess ffoorr PPCCNNAAwwiilllbbee rreettaaiinneedd bbyy PPaatthhoollooggyy AAssssoocciiaatteess IInntteerrnnaattiioonnaall.. LiLviveerraannddsseerruummssaammplepsslseeaenttsototthhee SSppoonnssoorrwwililllbbeerreettaaiinneeddbbyy tthhee SSppoonnssoorr.. ~~ 22880055..00001177 ~~ CCovoavanncceo 66332299--118833 mnPage 18 PROTOCOLAPPROVAL PROTOCOL APPROVAL (Tdeiisseindosso Andrew M. Seacat, PhD Fh Study Monitor 33MM {=ules Se ris ae SSttuuddyyDi PhD r Covance Laboratories Inc. DatdI I ~ ~ 22880055..00001188